專利名稱：：沙眼衣原體抗體唾液快速檢測(cè)試紙條的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及生物診斷
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種沙眼衣原體抗體唾液快速才企測(cè)試紙條。
背景技術(shù)：
：《伯氏系統(tǒng)手冊(cè)》(1984)的記載，將沙眼衣原體Chlamydiatrachomatis分為3個(gè)生物型，即小鼠生物型(biovarmouse)、沙眼生物型(biovartrachoma)和性病淋巴肉芽胂生物型。后二者與人類疾病有關(guān)。用間接微量免疫熒光試'險(xiǎn)，沙眼生物型又分A、B、Ba、C、D、Da、E、F、G、H、I、Ia、J、K14個(gè)血清型，LGV生物型又有U、L2、L2a、L34個(gè)血清型。泌尿生殖道感染經(jīng)性接觸傳播，由沙眼生物變種D~K血清型引起。男性多表現(xiàn)為尿道炎，不經(jīng)治療可緩解，但多數(shù)轉(zhuǎn)變成慢性，周期性加重，并可合并副睪炎、直腸炎等。女性能引起尿道炎、宮頸炎等，輸卯管炎是較嚴(yán)重并發(fā)癥。該血清型有時(shí)也能引起沙眼衣原體性肺炎。性病淋巴肉芽腫由沙眼衣原體LGV生物變種弓I起。LGV要通過(guò)兩性接觸傳播，是一種性病。男性侵犯腹股溝淋巴結(jié)，引起化膿性淋巴結(jié)炎和慢性淋巴肉芽腫。女性可侵犯會(huì)陰、肛門、直腸，出現(xiàn)會(huì)陰~肛門~直腸組織狹窄。目前，；險(xiǎn)測(cè)上述傳染病最常用的方法是免疫4企測(cè)，此方法以抗原一抗體的特異性識(shí)別為基礎(chǔ)，包括傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和近來(lái)興起的膠體金法兩種。膠體金法分為免疫層析和免疫滲濾兩種方式，其中以免疫層析法最為方便、快捷。免疫層析膠體金技術(shù)是新型的診斷技術(shù)，已得到較為廣泛的應(yīng)用，基本原理如下利用膠體金標(biāo)記一種抗原或抗體，在試紙條的硝酸纖維素膜上包被相應(yīng)的配對(duì)抗原或抗體，檢測(cè)時(shí)當(dāng)樣品中含有相應(yīng)的特異性抗體或抗原時(shí)，膠體金標(biāo)記顆粒和樣品中配體相結(jié)合形成復(fù)合物，然后在硝酸纖維素膜上層析，再被包被的抗原或抗體捕獲，形成肉眼可見(jiàn)的檢測(cè)線(T線)，通過(guò)檢測(cè)線的有無(wú)實(shí)現(xiàn)對(duì)結(jié)果的判定。但現(xiàn)有的試紙條大多以血液為樣品，不適合現(xiàn)場(chǎng)4企測(cè)和自檢，檢測(cè)成本4交高。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了一種沙眼衣原體抗體唾液快速4企測(cè)試紙條，該試紙條可以用唾液作為樣品，解決了現(xiàn)有試紙條不適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，檢測(cè)成本較高的問(wèn)題。一種沙眼衣原體抗體唾液快速檢測(cè)試紙條，包括底板，底板上依次粘貼有樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜以及吸樣墊，所述的膠體金墊上附著有膠體金標(biāo)記的可與沙眼衣原體抗體特異性結(jié)合的鼠抗人IgG抗體，所述的硝酸纖維素膜上包被有由沙眼衣原體抗原構(gòu)成的檢測(cè)線以及由可與鼠抗人IgG抗體特異性結(jié)合的羊抗鼠二抗抗體構(gòu)成的質(zhì)控線。所述的沙眼衣原體抗體有3個(gè)生物型，醫(yī)學(xué)上4企測(cè)性病的主要是淋巴肉芽腫生物型(biovarlymphogranulomavenereum，LGV)，LGV生物型又有Ll、L2、L2a、L3四個(gè)血清型，沙眼衣原體抗體有4個(gè)不同類型，是醫(yī)學(xué)上檢測(cè)是否感染沙眼衣原體的標(biāo)記物，該標(biāo)記物大量存在于人體血液中，在人唾液中也有少量存在。沙眼衣原體具有共同抗原存在于衣原包膜中，并存在于衣原體的整個(gè)生活周期中，所述的沙眼衣原體抗原就是該共同抗原，且是一種人重組抗原，可以與LGV生物型所有血清型沙眼衣原體抗體結(jié)合。所述的鼠抗人IgG抗體、沙眼衣原體抗原以及鼠抗人IgG抗體均是市售產(chǎn)品，也可以通過(guò)現(xiàn)有方法制備得到。所述的膠體金墊上附著有0.18~0.30昭/cm2的可與沙眼衣原體抗體特異性結(jié)合的鼠抗人IgG抗體。該范圍滿足本發(fā)明試紙條以唾液為樣品進(jìn)行檢測(cè)的靈敏度要求。所述的膠體金墊制備方法如下取膠體直徑為1535nm的膠體金溶液，調(diào)節(jié)pH值至8.0~8.2,以每100ml膠體金溶液計(jì)，加入0.75~1.3mg的可與沙眼衣原體抗體特異性結(jié)合的鼠抗人IgG抗體，攪拌后用牛血清蛋白封閉，離心去上清液，加入相同體積的膠體金溶液復(fù)溶，將每毫升溶液均勻鋪在40cmh皮璃纖維膜上，干燥后制得膠體金墊。5所述的4全測(cè)線中沙眼衣原體抗原的含量為0.08~1.4pg/cm;所述的質(zhì)控線中可與所述的鼠抗人IgG抗體特異性結(jié)合的羊抗鼠二抗抗體含量為0.08~1.4pg/cm。該范圍滿足本發(fā)明試紙條以唾液為樣品進(jìn)行;險(xiǎn)測(cè)的靈敏度要求。所述的4企測(cè)線包^皮方法如下將所述的沙眼衣原體抗原溶解在磷酸緩沖溶液中制得濃度為0.08~1.0mg/ml溶液，用該溶液以1~1.5pl/cm的用量在硝酸纖維素膜的一端劃線，干燥后即得私、測(cè)線；所述的質(zhì)控線包^^皮方法如下將可與所述的鼠抗人IgG抗體特異性結(jié)合的羊抗鼠二抗抗體溶解在磷酸緩沖溶液中制得濃度為0.08~1.0mg/ml溶液，用該溶液1~1.5pl/cm的用量在硝酸纖維素膜的另一端劃線，干燥后即得質(zhì)控線。本發(fā)明還提供了一秤上述沙眼衣原體抗體唾液快速檢測(cè)試紙條的檢測(cè)方法，包括以下步驟取人唾液，用磷酸緩沖溶液稀釋，取50100nl稀釋后的唾液滴在樣品墊上，根據(jù)檢測(cè)線(T線)和質(zhì)控線(C線)的顯色狀態(tài)，判斷檢測(cè)結(jié)果。如C、T線均出現(xiàn)，判定樣品為陽(yáng)性；C線出現(xiàn)，T線不出現(xiàn)，判定樣品為陰性；C、T線都不出現(xiàn)或者C線不出現(xiàn)T線出現(xiàn)，均判定試紙無(wú)效。本發(fā)明試紙條采用膠體金標(biāo)記技術(shù)，檢測(cè)唾液中的沙眼衣原體抗體，從而判斷是否感染沙眼衣原體，具有操作簡(jiǎn)單、反應(yīng)快速、敏感性高、特異性強(qiáng)、適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和自檢、經(jīng)濟(jì)實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)。具體實(shí)施方式實(shí)施例1膠體金墊的制備以氯金酸-檸檬酸三鈉還原法制備直徑15nm的膠體金溶液，制備完成后取100ml月交體金溶液于燒杯內(nèi)，用0.1MK2CO3調(diào)至pH8.0，加入0.75mg可與沙眼衣原體抗體特異性結(jié)合的鼠抗人IgG抗體(上海領(lǐng)潮生物科技有限公司)，室溫?cái)嚢?小時(shí)，加入重量百分比為5%的牛血清白蛋白(BSA)封閉1小時(shí)，12000rpm、4"C離心30分鐘，棄上清，用月交體金溶液復(fù)溶至100ml,按lml溶液鋪400112的比例，將溶液均勻地鋪在玻璃纖維膜上，37匸干燥30分鐘，制成膠體金墊?？萍加邢薰?溶解在O.OIM、pH8.0磷酸緩沖液(PBS)配制成0.08mg/ml的溶液，用噴膜儀在硝酸纖維素膜一端以1W/cm的參數(shù)進(jìn)行劃線。將可與上述鼠抗人IgG抗體特異性結(jié)合的羊抗鼠二抗抗體(上海領(lǐng)潮生物科4支有限公司)溶解在O.OIM、pH8.0磷酸緩沖液(PBS)配制成0.08mg/ml的溶液，用噴膜儀在硝酸纖維素膜另一端以lpl/cm的參數(shù)進(jìn)行劃線。劃線后在室溫下干燥8小時(shí)，分別得到4企測(cè)線和質(zhì)控線。檢測(cè)試紙的組裝在干燥室內(nèi)，溫度20~25°C，濕度小于30%,將樣品墊(玻璃纖維膜)、膠體金墊、硝酸纖維素膜以及吸樣墊(吸水試紙)粘貼在底板上，其中硝酸纖維素膜位于底板中部，硝酸纖維素膜包被有T線的一端與膠體金墊的1/3搭接，包^皮有C線的一端與吸樣墊的1/10搭接，樣品墊與膠體金墊的1/5搭接。最后切成寬度為2.5mm的試紙條，也可將試紙條裝入一個(gè)塑料卡中制成4企測(cè)卡。實(shí)施例2膠體金墊的制備以氯金酸-檸檬酸三鈉還原法制備直徑35nm的膠體金溶液，制備完成后取100ml膠體金溶液于燒杯內(nèi)，用0.1MK2CO3調(diào)至pH8.2，加入1.3mg限公司)，室溫?cái)嚢?小時(shí)，加入重量百分比為5%的牛血清白蛋白(BSA)封閉1小時(shí)，12000rpm、4。C離心30分鐘，棄上清，用膠體金溶液復(fù)溶至100ml，按lml溶液鋪40cn^的比例，將溶液均勻地鋪在玻璃纖維膜上，37""C干燥30分鐘，制成膠體金墊。硝酸纖維素膜的包被將可與沙眼衣原體抗體特異性結(jié)合的沙眼衣原體抗原(上海領(lǐng)潮生物科技有限公司)溶解在0.01M、pH8.0磷酸緩沖液(PBS)配制成1.0mg/ml的溶液，用噴膜儀在硝酸纖維素膜一端以1.5pl/cm的參數(shù)進(jìn)行劃線。將可與上述鼠抗人igG抗體特異性結(jié)合的羊抗鼠二抗抗體(上海領(lǐng)潮生物科技有限公司)溶解在0.01M、pH8.0磷酸緩沖液(PBS)配制成1.0mg/ml的溶液，用噴膜儀在硝酸纖維素膜另一端以1.5pl/cm的參數(shù)進(jìn)行劃線。劃線后在室溫下干燥8小時(shí)，分別得到^r測(cè)線和質(zhì)控線。檢測(cè)試紙的組裝在干燥室內(nèi)，溫度20~25°C，濕度小于30%,將樣品墊(玻璃纖維膜)、膠體金墊、硝酸纖維素膜以及吸樣墊(吸水試紙)粘貼在底板上，其中硝酸纖維素膜位于底板中部，硝酸纖維素膜包被有T線的一端與膠體金墊的1/3搭接，包被有C線的一端與吸樣墊的1/10招"接，樣品墊與膠體金墊的1/5搭接。最后切成寬度為2.5mm的試紙條，也可將試紙條裝入一個(gè)塑料卡中制成檢測(cè)卡。臨床樣品試驗(yàn)待檢人在采集唾液樣品前30分鐘禁食，取每位待檢人唾液0.5ml于紙杯中，用吸管取兩滴滴加到濃度0.02M、pH8.0的磷酸緩沖溶液中稀釋，取稀釋的唾液100pl加到樣品墊中，肉目艮觀測(cè)30分鐘，記錄T線和C線的顯色狀態(tài)。同時(shí)將唾液樣品用沙眼衣原體抗體ELISA試劑盒檢測(cè)，若兩者檢測(cè)檢測(cè)結(jié)果不一致，再以另外兩種沙眼衣原體抗體ELISA試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，若兩種或以上的ELISA試劑為陽(yáng)性，判定結(jié)果為陽(yáng)性，兩種或以上的ELISA試劑為陰性，判定結(jié)果為陰性。收集唾液樣品163份，其中ELISA試劑盒;f企測(cè)出陽(yáng)性樣品43份，本發(fā)明試紙條(實(shí)施例1)檢測(cè)出陽(yáng)性樣品44份，具體結(jié)果如下表1所示表1本發(fā)明試紙條對(duì)臨床樣品沙眼衣原體抗體的檢測(cè)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>靈敏度=48/48=100%;特異性-116/117=99.1%。權(quán)利要求1、一種沙眼衣原體抗體唾液快速檢測(cè)試紙條，包括底板，底板上依次粘貼有樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜以及吸樣墊，其特征在于所述的膠體金墊上附著有膠體金標(biāo)記的可與沙眼衣原體抗體特異性結(jié)合的鼠抗人IgG抗體，所述的硝酸纖維素膜上包被有由沙眼衣原體抗原構(gòu)成的檢測(cè)線以及由可與鼠抗人IgG抗體特異性結(jié)合的羊抗鼠二抗抗體構(gòu)成的質(zhì)控線。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的沙眼衣原體抗體唾液快速檢測(cè)試紙條，其特征在于所述的月交體金墊上附著有0.18~0.30pg/cm2的可與沙眼衣原體抗體特異性結(jié)合的鼠抗人igG抗體。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的沙眼衣原體抗體唾液快速檢測(cè)試紙條，其特征在于，所述的膠體金墊制備方法如下取膠體直徑為1535nm的膠體金溶液，調(diào)節(jié)pH值至8.0~8.2，以每100ml膠體金溶液計(jì)，加入0.75~1.3mg的可與沙眼衣原體抗體特異性結(jié)合的鼠抗人IgG抗體，攪拌后用牛血清蛋白封閉，離心去上清液，加入相同體積的膠體金溶液復(fù)溶，將每毫升溶液均勻鋪在40ci^玻璃纖維膜上，干燥后制得膠體金墊。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的沙眼衣原體抗體唾液快速檢測(cè)試紙條，其特征在于所述的檢測(cè)線中沙眼衣原體抗原的含量為0.08~1.4pg/cm;所述的質(zhì)控線中可與所述的鼠抗人IgG抗體特異性結(jié)合的羊抗鼠二抗抗體含量為0.08~1.4ng/cm。5、根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的沙眼衣原體抗體唾液快速檢測(cè)試紙條，其特征在于，所述的;^測(cè)線包^皮方法如下將所述的沙眼衣原體抗原溶解在磷酸緩沖溶液中制得濃度為0.08~1.0mg/ml溶液，用該溶液以11.5nl/cm的用量在硝酸纖維素膜的一端劃線，干燥后即得檢測(cè)線；所述的質(zhì)控線包被方法如下將可與所述的鼠抗人IgG抗體特異性結(jié)合的羊抗鼠二抗抗體溶解在磷酸緩沖溶液中制得濃度為0.08~1.0mg/ml溶液，用該溶液1~1.5nl/cm的用量在硝酸纖維素膜的另一端劃線，干燥后即得質(zhì)控線。6、一種權(quán)利要求1所述的沙眼衣原體抗體唾液快速檢測(cè)試紙條的檢測(cè)方法，包括以下步驟取人唾液，用磷酸緩沖溶液稀釋，取50~lOOpl稀釋后的唾液滴在樣品墊上，根據(jù)檢測(cè)線和質(zhì)控線的顯色狀態(tài)，判斷檢測(cè)結(jié)果。全文摘要本發(fā)明公開了一種沙眼衣原體抗體唾液快速檢測(cè)試紙條，包括底板，底板上依次粘貼有樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜以及吸樣墊，所述的膠體金墊上附著有膠體金標(biāo)記的可與沙眼衣原體抗體特異性結(jié)合的鼠抗人IgG抗體，所述的硝酸纖維素膜上包被有由沙眼衣原體抗原構(gòu)成的檢測(cè)線以及由可與鼠抗人IgG抗體特異性結(jié)合的羊抗鼠二抗抗體構(gòu)成的質(zhì)控線。本發(fā)明試紙條采用膠體金標(biāo)記技術(shù)，檢測(cè)唾液中的沙眼衣原體抗體，從而判斷是否感染沙眼衣原體，具有操作簡(jiǎn)單、反應(yīng)快速、敏感性高、特異性強(qiáng)、適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和自檢、經(jīng)濟(jì)實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)。文檔編號(hào)G01N33/569GK101661037SQ20091015261公開日2010年3月3日申請(qǐng)日期2009年9月10日優(yōu)先權(quán)日2009年9月10日發(fā)明者李洪江,鄭隆泗申請(qǐng)人:杭州艾力康醫(yī)藥科技有限公司