專利名稱：：一種檢測(cè)雙烯雌酚的間接競(jìng)爭(zhēng)法酶聯(lián)免疫試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于酶聯(lián)免疫和獸藥殘留檢測(cè)
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體而言，本發(fā)明涉及一種用于檢測(cè)雙烯雌酚的間接競(jìng)爭(zhēng)法酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
：雙烯雌酚(dienestrol，DE)是一種人工合成的非甾體類雌激素，其化學(xué)名為3，4-雙(對(duì)羥基苯基)-2，4-己二烯，含有酚羥基，是一種弱酸性化合物，主要應(yīng)用于提高奶牛產(chǎn)奶量和畜禽動(dòng)物的生長(zhǎng)催肥。相對(duì)于天然雌激素，人工合成雌激素通常比較穩(wěn)定，在體內(nèi)滯留時(shí)間長(zhǎng)，易在人和動(dòng)物的脂肪及其他組織中殘留，因此，可以通過食物鏈危害人類健康。具體表現(xiàn)為女性幼兒提前發(fā)育，男性兒童乳腺發(fā)育成女性化；男性生殖發(fā)育異常與病變及女性乳腺癌和子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生率上升，同時(shí)具有致癌作用。目前，世界上許多國家禁止其應(yīng)用?，F(xiàn)有的雙烯雌酚檢測(cè)方法為色譜法(參見，例如，中國食品衛(wèi)生雜志，2006，18(5)，第420-422頁)，但是這些方法需要有完善的實(shí)驗(yàn)室，有經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)人員及昂貴的儀器設(shè)備，且檢測(cè)過程繁瑣，不適應(yīng)現(xiàn)場(chǎng)大量樣本的篩查?；诳乖贵w免疫反應(yīng)的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)為小分子殘留物的分析檢測(cè)提供了一個(gè)新的途徑?；诖嗽斫⒌拈g接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定技術(shù)具有便捷，快速，靈敏等特點(diǎn)。該技術(shù)的關(guān)鍵是人工抗原的合成和抗體的制備。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種快速檢測(cè)雙烯雌酚(dienestrol，DE)的酶聯(lián)免疫試劑本發(fā)明所述試劑盒的檢測(cè)原理為將雙烯雌酚抗原吸附于固相載體上，加入樣本或雙烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液并加入雙烯雌酚抗體工作液，待測(cè)樣品中雙烯雌酚和固相載體上包被的雙烯雌酚抗原競(jìng)爭(zhēng)雙烯雌酚抗體，再加入酶標(biāo)記抗抗體進(jìn)行酶活性的放大作用，顯色后終止，測(cè)定樣品的吸光度值，該值與樣品中雙烯雌酚的量呈負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出雙烯雌酚濃度范圍。本發(fā)明提供了一種快速檢測(cè)雙烯雌酚的酶聯(lián)免疫試劑盒，該試劑盒包括雙烯雌酚特異性抗體、雙烯雌酚-載體蛋白偶聯(lián)物和酶標(biāo)二抗。其中所述雙烯雌酚特異性抗體為兔抗雙烯雌酚的多克隆抗體，所述多克隆抗體用雙烯雌酚與載體蛋白偶聯(lián)物作為免疫原通過免疫動(dòng)物(例如兔)制得。所述的載體蛋白為牛血清白蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白(OVA)或匙孔銅蘭蛋白(KLH)。所述的雙烯雌酚-載體蛋白偶聯(lián)物采用化學(xué)方法偶聯(lián)得到。所述酶標(biāo)二抗的標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶，所述酶標(biāo)二抗可以用商品化的辣根過氧化物酶酶標(biāo)二抗，也可以通過過碘酸鈉法或戊二醛法將辣根過氧化物酶與二抗偶聯(lián)制得。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述酶標(biāo)二抗為酶標(biāo)羊抗兔IgG抗體。用于制備所述酶標(biāo)板的固相材料，包括但不限于，例如，聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯。載體的形式是微量反應(yīng)板凹孔。為方便現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和大量樣本篩查，所述試劑盒還可以進(jìn)一步包括包被有雙烯雌酚抗原的酶標(biāo)板、雙烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)溶液、顯色劑、濃縮洗滌液、終止液和濃縮樣品稀釋液。所述的濃縮洗滌液為0.5%吐溫-2010倍磷酸鹽緩沖液。所述的顯色劑由顯色劑A液和顯色劑B液組成(例如，使用體積比為l:1)，顯色劑A液為過氧化氫或過氧化脲，顯色劑B液為四甲基聯(lián)苯胺或鄰苯二胺。所述的濃縮樣品稀釋液為含0.1%吐溫-20的io倍磷酸鹽緩沖液。另一方面，本發(fā)明還提供了一種檢測(cè)飼料、水產(chǎn)品或食品樣品中雙烯雌酚含量的方法，包括步驟(l)樣品前處理；(2)用本發(fā)明所述試劑盒實(shí)施檢測(cè)，向包被有雙烯雌酚抗原的酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，再加入抗雙烯雌酚多克隆抗體，孵育后洗滌拍干，加入酶標(biāo)記二抗，孵育后洗滌拍干，顯色、終止，用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度值；(3)分析檢測(cè)結(jié)果。有益效果本發(fā)明檢測(cè)雙烯雌酚的試劑盒主要采用間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法定性或定量測(cè)定樣品中雙烯雌酚含量；對(duì)樣品的前處理要求低，樣品前處理過程簡(jiǎn)單，能同時(shí)快速檢測(cè)大批樣品。本發(fā)明中，該試劑盒采用高特異性的雙烯雌酚多克隆抗體，主要試劑以工作液形式提供，可以減少試劑盒的操作步驟，為使用者節(jié)省時(shí)間并降低因操作步驟冗繁造成的誤差，本發(fā)明具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、高精確度、高準(zhǔn)確度、對(duì)儀器設(shè)備要求低、試劑保存時(shí)間長(zhǎng)、自動(dòng)化程度高、無放射性同位素污染的等優(yōu)點(diǎn)，可在飼料及動(dòng)物源性產(chǎn)品檢測(cè)中發(fā)揮重要作用。圖l為雙烯雌酚抑制曲線。其中橫坐標(biāo)為抑制濃度(ng/ml)，縱坐標(biāo)為吸光度(OD)，系列1是1yg/ml-l:40000組合，系列2是0.5yg/ml-l:20000組合，系列3是0.25iig/ml-l:10000組合。實(shí)施例提供下述實(shí)施例是為了更好地進(jìn)一步理解本發(fā)明，而決不對(duì)本發(fā)明的內(nèi)容和保護(hù)范圍構(gòu)成任何限制。實(shí)施例1免疫原的合成及免疫血清的制備1.1試劑與儀器雙烯雌酚(德國Dr)，琥珀酸酐(Sigma公司)，吡啶(Sigma公司)，EDC(上海共價(jià)化學(xué)試劑公司)，牛血清白蛋白(BSA)、匙鑰孔血藍(lán)蛋白(KLH，Sigma公司)，辣根過4氧化物酶(HRP)(上?？笊锛夹g(shù)有限公司)，其它試劑均為分析純。雙光束紫外可見分光光度儀(TU-1909，北京普析通用儀器有限公司)，層析裝置(3057型便攜式記錄儀，重慶川儀四廠；SBS系列數(shù)控計(jì)滴器，恒流泵，自動(dòng)部分收集器，層析柱，上海滬西分析儀器廠)，磁力攪拌器(上海東榮豐科學(xué)儀器有限公司)，臺(tái)式離心機(jī)(Minispin最大轉(zhuǎn)速13400rpm最大離心力12100rcf，2mlX12)。1.2雙烯雌酚人工抗原的合成1.2.1免疫原的合成稱取26.6毫克(O.lmmol)雙烯雌酚溶于lmlDMSO中，充分?jǐn)嚢枋蛊渫耆芙猓尤?1.7毫克氯乙酸鈉，室溫?cái)嚢?小時(shí)；稱取50毫克KLH，以O(shè).lmol/L的PBS溶解，緩慢滴加DMSO充分?jǐn)嚢?，使其占總?cè)芤旱?0%，將氯乙酸鈉活化的雙烯雌酚加入到KLH溶液中，以10M氫氧化鈉調(diào)溶液pH值至ll，加入EDC0.2-0.3M(約100mg)，攪拌反應(yīng)過夜，即得雙烯雌酚-KLH偶聯(lián)物。然后，將偶聯(lián)物過SephadexG-25M凝膠層析純化，用0.01MpH7.4PBS三倍柱床體積平衡，調(diào)節(jié)流速至3ml/min，樣品濃縮至5ml加入到平衡好的層析柱中層析提純偶聯(lián)物，洗脫液用pH7.40.01MPBS。提純后的免疫原分裝后-201:凍存。1.2.2包被抗原的合成稱取26.6毫克(O.lmmol)的雙烯雌酚溶于lml無水吡啶中，加入10毫克琥珀酸酐，室溫下攪拌4小時(shí)，W吹干，以一定體積DMSO復(fù)溶。稱取40毫克卵清蛋白(OVA)，以O(shè).lmol/L的PBS溶解，緩慢滴加DMSO充分?jǐn)嚢?，使其占總?cè)芤旱?0%，將琥珀酸酐活化的雙烯雌酚加入到OVA溶液中，以10M氫氧化鈉調(diào)溶液pH值至ll，加入EDC0.2-0.3M(約100-150mg)，攪拌反應(yīng)過夜，即得雙烯雌酚-卵清蛋白偶聯(lián)物(DE-OVA)。然后，將上述DE-OVA過SephadexG-25M凝膠層析純化，用0.01MpH7.4PBS三倍柱床體積平衡，調(diào)節(jié)流速至3ml/min，樣品濃縮至5ml加入到平衡好的層析柱中層析提純偶聯(lián)物，洗脫液用pH7.40.01MPBS。提純后的包被抗原DE-OVA加等量甘油，分裝后-20°〇保存。1.3免疫原及特異性多克隆抗體的制備將1.2.1中制備的雙烯雌酚-KLH偶聯(lián)物用生理鹽水稀釋成lmg/ml溶液備用。選取5只體重22.5Kg健康雄性新西蘭大白兔。將偶聯(lián)物與等量弗氏完全佐劑通過注射器對(duì)抽法混合成油包水的乳濁液，按lmg/Kg體重的量進(jìn)行首次免疫，采取背部皮下多點(diǎn)注射。每隔兩周加強(qiáng)免疫一次，用弗氏不完全佐劑代替弗氏完全佐劑，劑量及方法同首次免疫。從第三次免疫開始，每次免疫后10天，耳緣靜脈取血lml，進(jìn)行抗體效價(jià)檢測(cè)，當(dāng)抗體效價(jià)不再升高時(shí)，不加佐劑進(jìn)行最后一次(第7次)免疫，大腿肌肉注射，7天后頸動(dòng)脈放血，室溫凝固2h后4t:過夜，8000r/min離心IO分鐘，除去血塊，血清部分用50%飽和硫酸銨溶液沉淀，離心去上清液，沉淀用磷酸鹽緩沖液重懸，再用33%飽和硫酸銨溶液沉淀兩次，沉淀物用盡可能少的磷酸緩沖液溶解，經(jīng)透析后用SephadexG-25M層析，即得多克隆抗體。51.4多克隆抗體效價(jià)和特異性測(cè)定1.4.1間接ELISA檢測(cè)多克隆抗體效價(jià)以10iig/ml的DE-BSA按每孔100y1包被酶標(biāo)板，4"包被24h，洗滌5次，拍干，每孔加入200iU2X的牛血清白蛋白磷酸鹽緩沖液(封閉液)，fC下封閉12h，洗滌3次，拍干。加入不同稀釋倍數(shù)的多克隆抗體100iU，37t:孵育2h，洗滌三次，立即加入100iU酶標(biāo)羊抗兔抗體，37t:孵育30min，洗滌三次，加50y1顯色劑A液和50y1顯色劑B液，室溫避光作用15min，加50y1終止液終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀檢測(cè)OD值(450nm)。同時(shí)設(shè)置陰性血清對(duì)照孔和平行重復(fù)孔。多克隆抗體以1000倍、5000倍、10000倍、50000倍、100000倍、1000000倍稀釋。以兩倍于陰性血清OD值的多克隆抗體OD值對(duì)應(yīng)的多克隆抗體稀釋度為多克隆抗體效價(jià)。檢測(cè)結(jié)果見表-1表-1多克隆抗體效價(jià)檢測(cè)結(jié)果(平均OD值)血清稀1000'5000IOO聽500001000001000000隨性愈清空白釋倍數(shù)__—_OD值3.5822,8672,3741J751,3390,389(U370,048從表-l可知，多克隆抗體效價(jià)為1000000以上，滿足實(shí)驗(yàn)要求。1.4.2間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)多克隆抗體特異性ELISA操作方法同1.4.1。每孔加入100ii1不同濃度的游離雙烯雌酚與包被物競(jìng)爭(zhēng)隨后加入多克隆抗體，得出不同的OD值。根據(jù)1.4.1的結(jié)果，所用多克隆抗體最佳濃度為l:50000。雙烯雌酚系列濃度和試驗(yàn)孔的排列順序見表-2，同時(shí)設(shè)置平行重復(fù)孔和空白對(duì)照孔。以0抑制孔的OD值為最大值B。，其它抑制濃度孔OD值為B，B/B。=50%時(shí)對(duì)應(yīng)的雙烯雌酚濃度為此抗體的IC5。值。檢測(cè)結(jié)果見表-2表-2多克隆抗體特異性檢測(cè)結(jié)果(OD平均值)仰制濃,度Mg01392781/1L雙烯雌酚3.5471,3841.0450.7280.4320.2040-053己烯雌酚i.51S1.5091.4671,4551,4281.4750.06己烷雌酚1.4031.3681.3141.3161.4151.3560.047由表-2數(shù)據(jù)可知，雙烯雌酚多克隆抗體IQ。值在9yg/L左右，其它幾個(gè)類似物的IQ。值在所試驗(yàn)的濃度范圍內(nèi)未見明顯抑制，此范圍內(nèi)，幾乎沒有交叉反應(yīng)性，表明本發(fā)明制備的多克隆抗體特異性較好。實(shí)施例2間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的建立2.1ELISA棋盤法確定包被抗原和多克隆抗體最佳工作濃度將100iig/ml、10iig/ml、1iig/ml、0.5iig/ml、0.25iig/ml、0.125iig/ml系列濃度的DE-OVA按每孔100iU包被酶標(biāo)板，4t:包被24h，用洗液洗滌4次，在吸水紙上拍干，每孔用200iU封閉液4t:下封閉12h，洗滌3次，在吸水紙上拍干。加入l:5000，i:ioooo，i:20000，i:40000，1:80000，1:100000稀釋的多克隆抗體100y1，室溫作用lh，洗滌4次，立即加入100iU酶標(biāo)羊抗兔抗體，室溫作用30min，洗滌三次，加50iU顯色劑A液和50iU顯色劑B液，室溫避光作用10min，每孔加入50y1終止液終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀檢測(cè)A值(450nm)。同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照孔和平行重復(fù)孔，取0D值為1.8左右時(shí)對(duì)應(yīng)的包被抗原和多克隆抗體濃度組合做抑制曲線，選取最佳曲線的濃度組合。試驗(yàn)數(shù)據(jù)列于表-3。表-3<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>取包被濃度分別為1yg/ml，0.5yg/ml，0.25yg/ml對(duì)應(yīng)的多克隆抗體稀釋度為i:40000，i:20000，i:ioooo做抑制曲線，抑制濃度分別為oyg/L、lyg/L、3yg/L、9iig/L、27iig/L、81iig/L，得抑制曲線圖如附圖1。附圖1中0.25yg/ml-l:10000為系歹lj1;0.5iig/ml-l:20000為系歹lj2，1yg/ml-l:40000為系歹lj3。結(jié)果表明，系列2(即0.5iig/ml-l:20000組合)所得的曲線為最佳曲線。實(shí)施例3雙烯雌酚間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫試劑盒的組建組建檢測(cè)雙烯雌酚的酶聯(lián)免疫試劑盒，使其包含下述組分(1)包被雙烯雌酚抗原的酶標(biāo)板；(2)抗雙烯雌酚多克隆抗體工作液；(3)用辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔抗體；(4)雙烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液6瓶，濃度分別為0iig/L、1yg/L、3iig/L、9iig/L、27iig/L、81iig/L;(5)底物顯色液A液為過氧化脲或過氧化氫，底物顯色液B液為四甲基聯(lián)苯胺或鄰苯二胺；(6)濃縮洗滌液為含0.5%吐溫20的10倍磷酸鹽緩沖液；(7)濃縮樣品稀釋液為0.1%吐溫-20的10倍磷酸鹽緩沖液；[ooee](8)終止液為2mol/L的硫酸溶液。實(shí)施例4試劑盒精密度試驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)例為標(biāo)準(zhǔn)可重復(fù)性試驗(yàn)。具體操作為從每批實(shí)施例2或3中的方法制備的酶標(biāo)板中，各抽取10個(gè)孔，測(cè)定9iig/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值(OD)，重復(fù)3次，計(jì)算變異系數(shù)CVX。結(jié)果表明變異系數(shù)范圍在4.8-7.6%之間，符合了變異系數(shù)小于20%的規(guī)定，說明本試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品精密度達(dá)到了要求。實(shí)施例5試劑盒的回收率試驗(yàn)取兩個(gè)濃度的雙烯雌酚標(biāo)樣，對(duì)樣品進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，每個(gè)濃度做4個(gè)平行，分別計(jì)算回收率。結(jié)果表明飼料中的添加回收率為60%-85%。實(shí)施例6試劑盒保存期試驗(yàn)試劑盒保存條件為2-8°C，經(jīng)過6個(gè)月的測(cè)定，試劑盒的最大吸光度值(零添加)、50%抑制濃度、雙烯雌酚添加實(shí)際測(cè)定值均在正常范圍之內(nèi)。考慮在運(yùn)輸和使用過程中，會(huì)有非正常保存條件出現(xiàn)，將試劑盒在37t:保存條件下放置兩周，進(jìn)行加速老化實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明該試劑盒各項(xiàng)指標(biāo)完全符合要求?？紤]到試劑盒冷凍情況發(fā)生，將試劑盒放入-2(TC冰箱冷凍5天，測(cè)定結(jié)果表明試劑盒各項(xiàng)指標(biāo)完全正常。從以上結(jié)果可得出試劑盒可以在2-8t:保存12個(gè)月以上。實(shí)施例7樣品中雙烯雌酚殘留的檢測(cè)7.1樣品前處理準(zhǔn)確稱取5g魚肉樣品于40ml離心管中。加入20mlDMSO，充分振蕩10分鐘，4000rpm離心10min，取上清5ml。7.2用試劑盒進(jìn)行檢測(cè)向雙烯雌酚-OVA偶聯(lián)物包被的酶標(biāo)板微孔中加系列標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液100ii1，再加入抗體工作液50iU，室溫反應(yīng)l小時(shí)。倒出孔中液體，每孔加入250ii1經(jīng)10倍稀釋了的洗滌液，30秒后倒出孔中液體，如此重復(fù)操作共洗板4次，在吸水紙上拍干。每孔加入酶標(biāo)記羊抗兔抗體100iU，避光室溫孵育30min。倒出孔中液體，每孔加入250iU經(jīng)10倍稀釋了的洗滌液，30秒后倒出孔中液體，如此重復(fù)操作共洗板4次，在吸水紙上拍干。加入底物顯色液A液50iU，B液50iU，輕輕振蕩混勻，室溫避光顯色10min，每孔加入終止液(2mol/L鹽酸)50iU，輕輕振蕩混勻，用酶標(biāo)儀測(cè)定每孔吸光度值(OD值)。結(jié)果分析計(jì)算百分吸光度值并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，相對(duì)應(yīng)每一個(gè)樣品中雙烯雌酚的濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出，也可以用回歸方程法計(jì)算出在樣本中雙烯雌酚的含量。利用專業(yè)電腦軟件更便于大量的樣本的快速分析。根據(jù)酶標(biāo)板上的樣本顏色的深淺與系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液顏色的比較，可以判斷出樣本中雙烯雌酚的濃度范圍。8權(quán)利要求一種檢測(cè)雙烯雌酚的酶聯(lián)免疫試劑盒，其中包括雙烯雌酚特異性抗體、雙烯雌酚-載體蛋白偶聯(lián)物和酶標(biāo)二抗。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述試劑盒還包括包被了雙烯雌酚抗原或抗雙烯雌酚特異性抗體的酶標(biāo)板、雙烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)溶液、底物顯色劑、洗滌液、終止液和濃縮樣品稀釋液。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述雙烯雌酚特異性抗體為多克隆抗體。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述的載體蛋白為牛血清白蛋白、卵清蛋白或鑰孔銅蘭蛋白(KLH)。5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述的酶標(biāo)二抗的酶為辣根過氧化物酶。6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述的酶標(biāo)二抗為羊抗兔IgG抗體。7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述的洗滌液為含有0.05%-0.5%吐溫-20磷酸鹽緩沖液。8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述的顯色劑由顯色劑A和顯色劑B組成，顯色劑A為過氧化氫或過氧化脲，顯色劑B為鄰苯二胺或四甲基聯(lián)苯胺。9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述的濃縮樣品稀釋液為含0.1%吐溫-20的磷酸鹽緩沖液。10.—種檢測(cè)樣品中雙烯雌酚含量的方法，包括步驟(1)樣品前處理；(2)用權(quán)利要求1-9任一所述的試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，向包被有雙烯雌酚抗原的酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，再加入抗雙烯雌酚多克隆抗體，孵育后洗滌拍干，加入酶標(biāo)記二抗，孵育后洗滌拍干，顯色、終上，用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度值；(3)分析檢測(cè)結(jié)果。全文摘要本發(fā)明公開了一種檢測(cè)雙烯雌酚的酶聯(lián)免疫試劑盒。本發(fā)明所提供的雙烯雌酚的酶聯(lián)免疫試劑盒包括雙烯雌酚特異性抗體、雙烯雌酚與載體蛋白的偶聯(lián)物、酶標(biāo)二抗。本發(fā)明的檢測(cè)雙烯雌酚的酶聯(lián)免疫試劑盒靈敏、快速、準(zhǔn)確，主要用于大批樣品的篩查；盒中的主要試劑均以工作液的形式提供，使用方便，具有高特異性、高靈敏性、高精確性、高準(zhǔn)確性等特點(diǎn)，可快速檢測(cè)飼料及畜產(chǎn)品及食品中殘留的雙烯雌酚。文檔編號(hào)G01N33/52GK101692086SQ20091017791公開日2010年4月7日申請(qǐng)日期2009年10月19日優(yōu)先權(quán)日2009年10月19日發(fā)明者于洪俠,張薇薇,李平,楊曙明,邱靜,陳剛申請(qǐng)人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所