專利名稱：一種血紅素含量的測定方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種血紅素含量的方法。
(二)
背景技術：
血紅素是從動物血中提取的、原卟啉IX的Fe2+復合物——金屬卟啉配位化合 物，是各種血紅素蛋白的輔基，它與不同的蛋白結合，可形成血紅蛋白、肌紅蛋白、細胞色素 C、過氧化氫酶和過氧化物酶等。血紅素，由卟啉和一分子亞鐵構成鐵卟啉化合物，分子式 C34H30FeN404，相對分子質(zhì)量614. 48，結構式為
6Hj
o 血紅素是現(xiàn)代醫(yī)學公認的防治缺鐵性貧血吸收率高、效果好的生物鐵源，無鐵腥 味，不剌激胃腸；血紅素還是抗腫瘤藥物的重要原料，現(xiàn)已被用于治療肝癌、膀胱癌、黑色素 瘤、視網(wǎng)膜瘤等病；在食品行業(yè)，血紅素可代替熟肉制品危及人體健康的發(fā)色劑亞硝酸鹽及 人工合成色素，使肉制品更加美觀誘人，減少亞硝酸鹽致癌作用。因此，近幾年來，血紅素在 食品、醫(yī)藥和精細化工方面均得到了應用，并越來越受到重視。近期我國正在積極從事這一 領域的研究，相繼研制和開發(fā)出具有補血功能的血紅素糖果、飲料、食品、藥物等產(chǎn)品。
有關血紅素的測定方法有多種，如熒光法、血紅素的吡啶血色原吸收測定法、紫外 光譜法、極譜法和電極法，這些測定方法各自有各自的特點，但是也有一定的缺點，這些方 法的使用成本都很高，許多實驗室也沒有這些設備。目前由于可見光分光光度法具有操作 簡便、快速易行，設備簡單而被廣大研究者所接受，是在血紅素測定中使用較廣泛的一種方 法。但容易受其它成分干擾，測定值一般有偏離。測定過程中的主要干擾因素是氧化，血紅 素顏色不穩(wěn)定，容易被氧化而褐變。本發(fā)明旨在解決可見光分光光度法測定血紅素時氧化 的干擾，從而為精確測定血紅素含量提供了保證。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于準確的測定出血紅素的含量。
本發(fā)明的目的通過如下技術方案得以實現(xiàn) (1)血紅素標準供試溶液的制備精密稱取105t:干燥至恒重的粉末狀血紅素標 準品20. Omg，再稱取異抗壞血酸鈉10mg，用0. Imol/LNaOH溶液定容于lOOmL棕色容量瓶 中，搖勻，得血紅素標準供試溶液。 (2)血紅素標準曲線的制作精密量取血紅素標準供試溶液lmL、2mL、3mL、4mL、 5mL(相當于200、400、600、800、1000ii g血紅素)，用0. lmol/L NaOH溶液定容于100ml棕 色容量瓶中，搖勻，以0. lmol/LNaOH溶液為空白，在400nm處測定其吸光值，以血紅素的濃 度為橫坐標，吸光值為縱坐標，作回歸處理，得回歸方程A = aC+b(A為吸光值，C為血紅素 濃度)。 (3)含血紅素的樣品溶液的制備精密稱取105t:干燥至恒重的20mg的含血紅素
的樣品放入燒杯中，再稱取異抗壞血酸鈉10mg，加入50mL 0. lmol/L NaOH溶液溶解，然后
轉(zhuǎn)移到lOOmL棕色容量瓶中，定容至刻度。用漏斗過濾溶液，棄去初濾液。 (4)樣品液血紅素含量的測定濾液在400nm處測定吸光值。將吸光值代入標準
曲線公式求出樣品液中血紅素的濃度(C)，然后按下面的公式計算樣品中血紅素的含量。
血紅素含量(％) =Wxl06
式中C-為供試樣品液中血紅素濃度，y g/mL ;
W-為供試樣品的重量，g。
(四)


附圖血紅素標準曲線
(五) 具體實施方案
實施例一 (1)血紅素標準供試溶液的制備精密稱取105t:干燥至恒重的粉末狀血紅素標 準品20. Omg，再稱取異抗壞血酸鈉10mg，用0. lmol/L NaOH溶液定容于100mL棕色容量瓶 中，搖勻，得血紅素標準供試溶液； (2)血紅素標準曲線的制作精密量取血紅素標準供試溶液lmL、2mL、3mL、4mL、 5mL (相當于2 、 4、 6 、 8 、 10 ii g血紅素)，用0. lmo 1/LNaOH溶液定容于100ml棕色容量瓶中，搖 勻，以O. lmol/L NaOH溶液為空白，在400nm處測定其吸光值，以血紅素的濃度為橫坐標，吸 光值為縱坐標，作回歸處理，得回歸方程A = 0. 0775C-0. 0026， R2 = 0. 9998 (A為吸光值， C為血紅素濃度)； (3)含血紅素的樣品溶液的制備精密稱取105t:干燥至恒重的20mg的含血紅素 的樣品放入燒杯中，再稱取異抗壞血酸鈉10mg，加入50mL 0. lmol/LNaOH溶液溶解，然后轉(zhuǎn) 移到lOOmL棕色容量瓶中，定容至刻度。用漏斗過濾溶液，棄去初濾液；
(4)樣品液血紅素含量的測定濾液在400nm處測定吸光值。將吸光值代入標準曲 線公式求出樣品液中血紅素的濃度(C)，然后按下面的公式計算樣品中血紅素的含量。(結 果見表1)
4血紅素含量(％) =Wxl06
式中C-為供試樣品液中血紅素濃度，y g/mL ;
W-為供試樣品的重量，g。
表1血紅蛋白粉中血紅素含量的測定
樣品號吸光值(A)血紅素濃度血紅素濃度平均 (ng/mL )血紅素含量 (%)
10.4986.46
20.5046.546.532.66
30.5076.58 實施例二 (1)血紅素標準供試溶液的制備精密稱取105t:干燥至恒重的粉末狀血紅素標 準品20. Omg，再稱取異抗壞血酸鈉10mg，用0. lmol/L NaOH溶液定容于lOOmL棕色容量瓶 中，搖勻，得血紅素標準供試溶液； (2)血紅素標準曲線的制作精密量取血紅素標準供試溶液lmL、2mL、3mL、4mL、 5mL (相當于2 、 4、 6 、 8 、 10 ii g血紅素)，用0. lmo 1/LNaOH溶液定容于100ml棕色容量瓶中，搖 勻，以O. lmol/L NaOH溶液為空白，在400nm處測定其吸光值，以血紅素的濃度為橫坐標，吸 光值為縱坐標，作回歸處理，得回歸方程A = 0. 0775C-0. 0026， R2 = 0. 9998 (A為吸光值， C為血紅素濃度)； (3)含血紅素的樣品溶液的制備精密稱取105t:干燥至恒重的20mg的粗制血紅
素樣品放入燒杯中，再稱取異抗壞血酸鈉10mg，加入50mL 0. lmol/L NaOH溶液溶解，然后
轉(zhuǎn)移到lOOmL棕色容量瓶中，定容至刻度。用漏斗過濾溶液，棄去初濾液； (4)樣品液血紅素含量的測定濾液在400nm處測定吸光值。將吸光值代入標準曲
線公式求出樣品液中血紅素的濃度(C)，然后按下面的公式計算樣品中血紅素的含量。(結
果見表2)
CX100:DX100 血紅素含量(％) = WxlO6 式中C-為供試樣品液中血紅素濃度，y g/mL ; D-為稀釋倍數(shù)，實施例中D = 3 ; W-為供試樣品的重量，g。 表二粗制血紅素樣品中血紅素含量的測定
樣品號吸光值(A)血紅素濃度 (|xg/mL)血紅素濃度平均血紅素含量 (%)
10.3774.89
20.3754.874.886.29
30.3774.89
權利要求
一種血紅素含量的測定方法，其特征在于包括以下步驟(1)血紅素標準供試溶液的制備精密稱取105℃干燥至恒重的粉末狀血紅素標準品20.0mg，再稱取異抗壞血酸鈉10mg，用0.1mol/L NaOH溶液定容于100mL棕色容量瓶中，搖勻，得血紅素標準供試溶液。(2)血紅素標準曲線的制作精密量取血紅素標準供試溶液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL(相當于200、400、600、800、1000μg血紅素)，用0.1mol/L NaOH溶液定容于100ml棕色容量瓶中，搖勻，以0.1mol/L NaOH溶液為空白，在400nm處測定其吸光值，以血紅素的濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標，作回歸處理，得回歸方程A＝aC+b(A為吸光值，C為血紅素濃度)。(3)含血紅素的樣品溶液的制備精密稱取105℃干燥至恒重的20mg的含血紅素的樣品放入燒杯中，再稱取異抗壞血酸鈉10mg，加入50mL 0.1mol/L NaOH溶液溶解，然后轉(zhuǎn)移到100mL棕色容量瓶中，定容至刻度。用漏斗過濾溶液，棄去初濾液。(4)樣品液血紅素含量的測定濾液在400nm處測定吸光值。將吸光值代入標準曲線公式求出樣品液中血紅素的濃度(C)，然后按下面的公式計算樣品中血紅素的含量。式中C-為供試樣品液中血紅素濃度，μg/mL；W-為供試樣品的重量，g。F2009101852807C0000011.tif
2. 根據(jù)權利要求l所述的一種血紅素含量的測定方法，其特征在于步驟(1)中加入 10mg的異抗壞血酸鈉。
3. 根據(jù)權利要求l所述的一種血紅素含量的測定方法，其特征在于步驟(1)中選用棕 色的容量瓶定容。
4. 根據(jù)權利要求l所述的一種血紅素含量的測定方法，其特征在于步驟(1)中用 0. lmol/LNaOH溶液溶解血紅素標準品。
5. 根據(jù)權利要求l所述的一種血紅素含量的測定方法，其特征在于步驟(2)中在 400nm處測定吸光值。
6. 根據(jù)權利要求l所述的一種血紅素含量的測定方法，其特征在于步驟(2)中用各濃 度標準溶液產(chǎn)生的吸光度對標準溶液中血紅素濃度作回歸處理，可以得到一個回歸方程。
7. 根據(jù)權利要求l所述的一種血紅素含量的測定方法，其特征在于步驟(3)中用漏斗 過濾樣品溶液，棄去初濾液。
8. 根據(jù)權利要求l所述的一種血紅素含量的測定方法，其特征在于步驟(4)中血紅素 含量的計算先測出樣品液的吸光值，再根據(jù)蛋白濃度對吸光度作出的回歸方程計算出此 時血紅素的濃度。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種血紅素含量的測定方法。本發(fā)明提供了一種在用分光光度法測定血紅素時解決氧化干擾的方法，其主要內(nèi)容包括(1)血紅素標準供試溶液的制備；(2)血紅素標準曲線的制作；(3)含血紅素的樣品溶液的制備；(4)樣品液血紅素含量的測定。本發(fā)明通過在溶液中添加異抗壞血酸鈉減少了血紅素測定過程中的干擾因素，增加了分光光度法測定血紅素含量的準確性，為血紅素含量的測定提供了一種更準確可靠的方法。
文檔編號G01N21/31GK101713728SQ200910185280
公開日2010年5月26日 申請日期2009年11月3日 優(yōu)先權日2009年11月3日
發(fā)明者張立娟, 蔡克周, 賈征 申請人:安徽寶迪肉類食品有限公司