專利名稱：卡馬西平致皮膚嚴(yán)重不良反應(yīng)遺傳檢測(cè)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，更具體的，本發(fā)明涉及一種通過(guò)遺傳檢測(cè)控 制卡馬西平致皮膚嚴(yán)重不良反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)的方法。
背景技術(shù)：
癲癇是一種疾病和綜合征，以腦部神經(jīng)元反復(fù)突然過(guò)度放電所致的間歇性中樞神 經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào)為特征。在癲癇發(fā)作的治療中，抗癲癇藥物有特殊重要的意義。卡馬西平 (Carbamazepine,CBZ)是臨床常用的一線抗癲癇藥物，用于治療口腔頌面部三叉神經(jīng)痛、舌 咽神經(jīng)痛和癲癇發(fā)作。但CBZ在使用過(guò)程中易產(chǎn)生各種毒副作用，甚至危及生命，其中常見(jiàn) 的是皮膚損害，約10%長(zhǎng)期服用的患者易發(fā)生皮疹、濕疹、蕁麻疹、皮肌炎、過(guò)敏性皮炎、剝 脫性皮炎、中毒性表皮壞死松解癥(Toxic epidermal necrolysis, TEN)、滲出性多形性紅 斑、紅斑狼瘡綜合征和Mevens-Johnson綜合征(SJQ等，嚴(yán)重皮膚反應(yīng)的發(fā)生概率大約為 1/10000，致死率達(dá)30%以上，其中SJS/TEN的致死率高達(dá)40%。因此，臨床醫(yī)生在應(yīng)用CBZ 前應(yīng)特別慎重，在評(píng)估其致皮膚不良反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)的基礎(chǔ)上合理使用。人類白細(xì)胞抗原(human leukocyte antigen, HLA)系統(tǒng)，即人類主要組織相容性 復(fù)合物(majorhistocompatibility complex, MHC)，位于人類第 6 號(hào)染色體短臂 6p21. 31， 由一群緊密連鎖的復(fù)等位基因位點(diǎn)組成，DNA片段長(zhǎng)度約36001Λ。HLA復(fù)合體結(jié)構(gòu)十分復(fù) 雜，是迄今為止所知最復(fù)雜的遺傳多態(tài)系統(tǒng)，在啟動(dòng)和參與機(jī)體特異性免疫識(shí)別、免疫應(yīng)答 中發(fā)揮重要作用。HLA復(fù)合體已鑒定出2M個(gè)基因座，其中能表達(dá)產(chǎn)物的功能性基因?yàn)? 個(gè)，習(xí)慣上按HLA復(fù)合體在染色體上的排列分為3個(gè)區(qū)1類基因區(qū)位于HLA復(fù)合體遠(yuǎn)離著 絲粒一端；II類基因區(qū)位于HLA復(fù)合體近著絲粒一端；III類基因區(qū)位于二者之間。3個(gè)基 因區(qū)含數(shù)十個(gè)基因座，分別稱為HLA-I、HLA-II, HLA-III類基因(圖2)。I類包括A、B、C 經(jīng)典基因和E、F、G、X、J、H非經(jīng)典基因。HLA-B*1502是HLA基因B座位的1個(gè)基因亞型。 到2009年HLA-B座位已有1000多種等位基因，其多態(tài)性主要位于HLA-B基因的第2、3號(hào) 外顯子。有報(bào)道HLA-B*1502與CBZ引起的Mevens-Johnson綜合征/中毒性表皮壞死溶 解癥(CBZ-SJS/TEN)存在強(qiáng)相關(guān)性，而且是目前為止有關(guān)HLA標(biāo)記與某一疾病的相關(guān)性中 最強(qiáng)的。研究表明HLA-B*1502陽(yáng)性患者服用CBZ出現(xiàn)SJS/TEN的風(fēng)險(xiǎn)顯著性增強(qiáng)，美國(guó) 基礎(chǔ)研發(fā)報(bào)告FDA建議如果患者有HLA-B*1502流行地區(qū)的血統(tǒng)，首次服用CBZ前應(yīng)進(jìn)行 HLA-B*1502基因型檢測(cè)，以減低抗癲癇藥物的高風(fēng)險(xiǎn)性。目前在中國(guó)大陸地區(qū)均未見(jiàn)有關(guān) HLA-B^l502基因與CBZ-SJS/TEN的相關(guān)性報(bào)道。因此，開(kāi)展該方面的研究，可以進(jìn)一步完善 CBZ導(dǎo)致的皮膚型藥物不良反應(yīng)與HLA-B*1502相關(guān)性研究，從而為臨床個(gè)體用藥提供參考 依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種通過(guò)遺傳檢測(cè)控制卡馬西平致皮膚嚴(yán)重不良反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)的方法。
通過(guò)采集受檢者的口腔粘膜細(xì)胞，提取其基因組DNA，對(duì)其基因組DNA的 HLA-B*1502等位基因型進(jìn)行檢測(cè)，從基因?qū)用嬖u(píng)估抗癲癇藥物卡馬西平致皮膚嚴(yán)重不良反 應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，從而為臨床個(gè)體用藥提供參考依據(jù)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn) 方法，通常按照常規(guī)條件，或按照廠商所建議的條件。實(shí)施例檢測(cè)試劑盒的使用步驟1:DNA模板的抽取用硅膠吸附法抽提口腔上皮細(xì)胞的基因組DNA。步驟2 熒光定量PCR反應(yīng)使用檢測(cè)試劑盒中的熒光定量PCR套裝，進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)，反應(yīng)的體系為總 體積10 μ 1，包含濃度為20ng/ μ 1的DNA模板2 μ 1、1 μ 1 IOX熒光定量PCR反應(yīng)緩沖液、 0. 1 μ 1 25mM dNTP 混合液、0. 6 μ 1 25mM MgCl2 溶液、0. 025 μ 1 (5units/ μ 1) Taq DNA 聚合 酶、20 μ M的有義引物和反義引物各0. 225 μ 1、10 μ M的帶VIC熒光探針和帶FAM熒光探針 各0.25 μ 1，去離子水5. 325 μ 1。在PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)條件為50°C、2分鐘，95°C、10分鐘，進(jìn)行60個(gè)循環(huán) 的95°C、30秒，60°C、1分鐘。反應(yīng)結(jié)束后在熒光定量PCR儀上讀取樣品熒光量。步驟3:基因型分析根據(jù)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)標(biāo)示的基因分型圖示對(duì)SNP位點(diǎn)進(jìn)行基因型分析。熟悉熒光定量PCR技術(shù)的本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠通過(guò)辨識(shí)熒光定量PCR儀上顯示 的最終樣品熒光量，根據(jù)不同序列探針熒光信號(hào)的強(qiáng)弱即可確定所檢測(cè)的SNP位點(diǎn)的基因 型。
權(quán)利要求
1. 一種卡馬西平致皮膚嚴(yán)重不良反應(yīng)遺傳檢測(cè)方法，其特征在于采集受檢者的口腔 粘膜細(xì)胞，提取其基因組DNA，對(duì)其基因組DNA的HLA-B*1502等位基因型進(jìn)行檢測(cè)，從基因 層面評(píng)估抗癲癇藥物卡馬西平致皮膚嚴(yán)重不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，從而為臨床個(gè)體用藥提供參考 依據(jù)。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種卡馬西平致皮膚嚴(yán)重不良反應(yīng)遺傳檢測(cè)方法，通過(guò)采集受檢者的口腔粘膜細(xì)胞，提取其基因組DNA，對(duì)其基因組DNA的HLA-B*1502等位基因型進(jìn)行檢測(cè)，從基因?qū)用嬖u(píng)估抗癲癇藥物卡馬西平致皮膚嚴(yán)重不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，從而為臨床個(gè)體用藥提供參考依據(jù)。
文檔編號(hào)G01N21/64GK102108382SQ20091020048
公開(kāi)日2011年6月29日 申請(qǐng)日期2009年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月23日
發(fā)明者馮哲民, 賀憲民, 鄒祖燁 申請(qǐng)人:上海主健生物工程有限公司