專利名稱：：小麥的谷蛋白含量快速分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及小麥谷蛋白的分離定量方法，屬于谷物化學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：蛋白質(zhì)約占小麥籽粒重量的8%20%，主要由谷蛋白(Glutenin)和醇溶蛋白(Gliadin)兩類貯藏蛋白組成。其中谷蛋白是小麥面筋質(zhì)量和食品品質(zhì)的主要影響因素，是小麥品質(zhì)改良中最重要的目標(biāo)性狀，一直被作為小麥谷物化學(xué)研究的重要內(nèi)容。在小麥面筋質(zhì)量評價中，早世代多使用蛋白質(zhì)含量、沉降值和高分子量麥谷蛋白亞基標(biāo)記選擇；高世代多使用蛋白質(zhì)含量和面團流變學(xué)特性，基本按照具有高蛋白、優(yōu)質(zhì)亞基的基因型則具有優(yōu)良面筋質(zhì)量的一般原理進行選擇，在我國小麥品質(zhì)育種初期發(fā)揮了重要作用，極大的改善了小麥制品的加工品質(zhì)。但隨著品質(zhì)育種水平的提高，越來越發(fā)現(xiàn)那些具有高蛋白、優(yōu)質(zhì)亞基的基因型不一定具有優(yōu)良的加工品質(zhì)。小麥谷蛋白以聚合體(Gluteninpolymer)的形式存在，其中聚合程度較高，不易被提取的部分稱為谷蛋白大聚體(Gluteninmacropolymer,GMP)，與面筋強度存在顯著的正向相關(guān)性。因此，谷蛋白聚合體總量、谷蛋白大聚體含量是小麥育種世代中品質(zhì)評價的重要內(nèi)容。當(dāng)前谷蛋白含量的測定方法主要有以下幾種—、雙縮脲比色法雙縮脲比色法操作簡單、快速，是蛋白質(zhì)含量測定的常用方法。該法通過在堿性條件下肽鍵與Cu2+的顯色反應(yīng)對蛋白質(zhì)含量進行測定，適于所有種類的蛋白質(zhì)含量測定，具有操作簡單、快速、成本低廉的特點。雙縮脲比色法在谷蛋白含量測定中已有應(yīng)用(劉麗，周陽，何中虎，Pefta,R.J.，張立平.Glu-1和Glu-3等位變異對不溶性谷蛋白含量的影響.作物學(xué)報，2004，30:1086-1092)，主要有兩個步驟，第一步利用70%乙醇或50%丙醇將面粉樣本中的醇溶蛋白部分提取，經(jīng)離心后谷蛋白部分保留在沉淀中，隨后利用手工碾磨的方法在雙縮脲試劑中將沉淀破碎，并對其中的谷蛋白組分進行顯色反應(yīng)，隨后測定其含量。這種方法存在兩個問題，一是只能分析谷蛋白聚合體的總量，而不能分離測定谷蛋白大聚體的含量；二是預(yù)提醇溶蛋白后，在雙縮脲試劑中使用手工碾磨含有谷蛋白的沉淀，很難使沉淀充分破碎，造成平行樣本間的重復(fù)性很差，重復(fù)分析使得工作量大幅增加，費時費力；同時使得測定值偏低，偏離客觀值。二、正丙醇或丙醇沉淀法該法主要有兩種應(yīng)用方式。第一種應(yīng)用模式為直接利用50%正丙醇對面粉樣本進行提取，離心后將面粉中的蛋白分為兩部分，上清液部分包含清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白，以及小部分的分子量較低的谷蛋白聚合體；沉淀部分包含大部分的谷蛋白聚合體。沉淀部分經(jīng)干燥后測定蛋白含量，且被稱為"不溶性谷蛋白聚合體"的含量。這種方法雖然簡單，但仍然沒有將谷蛋白總量和谷蛋白大聚體兩部分分離量化(BeanSR，LyneRK，TilleyKA，Chung0K，LookhartGL.Ar即idmethodforqimntitationofinsolublepolymericproteinsinflour.CerealChem，1998,75:374-379)。第二種應(yīng)用模式為首先采取了第一種方式，隨后使上清液的正丙醇濃度提高到70%，使得那些少量的分子量較低的谷蛋白聚合體沉淀。結(jié)果使得面粉蛋白分為3部分，即單體蛋白(清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白)、小部分分子量較低的谷蛋白聚合體，以及絕大部分的位于沉淀中的谷蛋白。這種方法不僅復(fù)雜，且同樣未將谷蛋白總量和谷蛋白大聚體兩部分分離量化(FuBX，SapirsteinHD.Procedureforisolatingmonomericproetinsandpolymericgluteninofwheatflour.CerealChem，1996，73:143-152)。三、單亞基凝膠電泳光密度掃描法谷蛋白聚合體是現(xiàn)知自然界中分子量最大的天然大分子，利用常規(guī)的非還原溶液和機械作用很難充分提取，因此常利用還原劑，如DDT，將聚合體中的高分子量和低分子量谷蛋白還原為單體亞基。通過凝膠電泳分離后對經(jīng)染色的亞基條帶進行光密度掃描定量。這禾中方法(HuangDY，KhanK.QuantitativedeterminationofhighmolecularweightgluteninsubunitsofhardredspringwheatbySDS—PAGE.II.Quantitativeeffectsofindividimlsub皿itsonbreadmakingqualitycharacteristics.CerealChem，1997，74:786-790)存在如下幾個問題(l)測定的是單個亞基或谷蛋白總量，不能測定谷蛋白大聚體的含量；(2)此法的亞基定量通常要通過凝膠電泳完成，成本較高，費時費力且多使用有毒化學(xué)品，如丙烯酰胺、4-乙烯吡啶等。四、SDS磷酸緩沖液提取，多層濃縮膠分離+光密度掃描法該法利用SDS磷酸緩沖液將面粉蛋白質(zhì)分為兩部分，第一部分包括單體蛋白(清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白)和可溶性的分子量較低的谷蛋白聚合體；第二部分包括不溶性的分子量較高的谷蛋白大聚體。隨后對第一部分進行多層濃縮膠分離、染色和光密度掃描，結(jié)合對第一部分和第二部分的凱氏定氮或近紅外蛋白含量測定，計算出第一部分中不同分子量蛋白組分，以及第二部分谷蛋白大聚體的含量(ZhuJ，KhanK.Effectsofgenotypeandenvironmentongluteninpolymersandbreadmakingquality.CerealChem，2001，78:125-130)。這種方法存在的主要問題有(l)測定過程和技術(shù)復(fù)雜，成本較高，費時費力；(2)不同測定方法同時使用和多次計算可能導(dǎo)致測定值偏離客觀值。五、超聲波破碎+凝膠色譜法該法結(jié)合SDS磷酸緩沖液和超聲波破碎可靈活測定不同谷蛋白組分的含量。在SDS磷酸緩沖液中直接超聲波處理，并通過凝膠色譜可測定谷蛋白聚合體的總量；僅使用SDS磷酸緩沖液震蕩提取，并通過凝膠色譜可測定分子量較低的谷蛋白聚合體的含量，沉淀經(jīng)超聲波處理后，利用凝膠色譜可測定谷蛋白大聚體的含量(GuptaRB，KhanK，MacRitchieF.Biochemicalbasisofflourpropertiesinbreadwheats.I.Effectsofvariationinthequantityandsizedistributionofpolymericprotein.JCerealSci，1993，18:23-41)。該法對谷蛋白聚合體總量、分子量較低谷蛋白聚合體和谷蛋白大聚體的提取方法簡單，但在定量中需要利用色譜儀。不僅色譜儀設(shè)備本身昂貴，且測定耗材費用也較高，而且包括樣品前處理和儀器的操作都較為復(fù)雜，需要專職質(zhì)檢人員，使得工作效率降低。在雙縮脲試劑中對被測樣品采用超聲波破碎后，利用雙縮脲試劑的顯色反應(yīng)，比色后測定谷蛋白含量的測定方法，目前未見報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于鑒于上述各種測定方法的特點，針對它們在測定過程中存在的問題，提供一種區(qū)別于上述各種測定方法的小麥谷蛋白含量快速分析方法。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種小麥的谷蛋白含量快速分析方法，將待測小麥樣本清選5g30g代表性籽粒，利用實驗?zāi)ツブ迫郏^0.5mm孔徑篩網(wǎng)后裝入塑料自封口袋，室溫至少靜置24h平衡水分，測定含水量，作為被測樣本，其特征在于準(zhǔn)確稱取100mg被測樣本置于離心管中，從被測樣本中由溶劑單獨提取單體蛋白，或同時提取單體蛋白、可溶性的分子量較低的谷蛋白聚合體后，經(jīng)離心后棄上清，使谷蛋白保留在離心管中；在離心管中加入lmL雙縮脲試劑，使用超聲波破碎儀處理后，通過谷蛋白組分的顯色反應(yīng)，測定被測樣品中的谷蛋白含量；所述的被測樣品中的谷蛋白含量是指被測樣品中的谷蛋白總量或谷蛋白大聚體含量。在本發(fā)明中從被測樣本中單獨提取單體蛋白的溶劑為70%(v/v)乙醇；從被測樣本中同時提取單體蛋白與可溶性的分子量較低的谷蛋白聚合體的溶劑為PH6.90的SDS磷酸緩沖液，所述的單體蛋白包括清蛋、球蛋白和醇溶蛋白。在本發(fā)明中從被測樣本中單獨提取單體蛋白的方法是準(zhǔn)確稱取100mg被測樣本置于1.5mL離心管中，加入lmL70%(v/v)乙醇，室溫連續(xù)震蕩30min，12000rpm離心15min，棄上清；再次加入相同的溶劑，連續(xù)震蕩15min，12000rpm離心15min，使被測樣本中的醇溶蛋白充分溶于溶劑中。在本發(fā)明中提取單體蛋白后，經(jīng)離心棄上清，將離心管倒置5min，使谷蛋白保留在離心管中，在離心管中加入lmL雙縮脲試劑，使用超聲波破碎儀處理15s，隨即用移液槍轉(zhuǎn)移懸浮液至已裝有4mL雙縮脲試劑的具蓋10mL離心管中，混勻并立即放入4(TC干熱烘箱中溫浴20min，期間5min、10min和15min時分別顛倒搖晃一次；取出于4000rpm離心10min，將上清液在560nm比色，參照本底為雙縮脲試劑，將吸光值代入用標(biāo)準(zhǔn)蛋白建立的曲線方程，計算出被測樣品中的谷蛋白總量；在所述曲線方程中，相關(guān)系數(shù)r>9998。在本發(fā)明中從被測樣本中提取單體蛋白與可溶性的分子量較低的谷蛋白聚合體的方法是準(zhǔn)確稱取100mg被測樣本置于1.5mL離心管中，加入lmLpH6.90的SDS磷酸緩沖液，室溫連續(xù)震蕩20min，12000rpm離心15min，使被測樣本中的單體蛋白與可溶性的分子量較低的谷蛋白聚合體充分溶于溶劑中。在本發(fā)明中提取單體蛋白和可溶性的分子量較低的谷蛋白聚合體后，經(jīng)離心棄上清，將離心管倒置5min，使谷蛋白保留在離心管中，在離心管中加入lmL雙縮脲試劑，使用超聲波破碎儀處理15s，隨即用移液槍轉(zhuǎn)移懸浮液至已裝有4mL雙縮脲試劑的具蓋10mL離心管中，混勻并立即放入40。C干熱烘箱中溫浴20min;取出于4000rpm離心10min，將上清液在560nm比色，參照本底為雙縮脲試劑，將吸光值代入用標(biāo)準(zhǔn)蛋白建立的曲線方程，計算出被測樣品中的谷蛋白大聚體含量，在所述曲線方程中，相關(guān)系數(shù)r>0.9998。在本發(fā)明中超聲波破碎儀的探頭直徑為①3mm，所述的超聲波破碎儀處理是指超聲波破碎儀在12W的輸出功率狀態(tài)下進行處理。本發(fā)明的優(yōu)點在于超聲波破碎儀具有快速、高強度和作用均勻的突出優(yōu)點，可以使小麥的谷蛋白提取率和提取速度更高；70%乙醇可以提取包括醇溶蛋白在內(nèi)的單體蛋白，pH6.90的SDS磷酸緩沖液可以同時提取單體蛋白與可溶性的分子量較低的谷蛋白聚合體，使谷蛋白保留在離心管中；利用雙縮脲試劑的顯色反應(yīng)，測定被測樣品中的谷蛋白總量或谷蛋白大聚體的含量，不僅操作方法簡單，與目前采用的各種測定方法相比，具有快速、低廉和準(zhǔn)確的明顯優(yōu)勢。具體實施方式實施例1小麥待測樣本中，選取經(jīng)清選后的代表性籽粒20g，使用F0SSCyclotec1093型實驗旋風(fēng)磨制全麥粉，過0.5mm孔徑篩網(wǎng)后，將全麥粉裝入60mmX90mm的塑料白封口袋，并用藥匙充分?jǐn)嚢杈鶆虿⒎夂么?，室溫放?4h以上至含水量均勻一致，按照GB5497-85，即糧食油料檢測_水分測定法測定全麥粉樣本的含水量，作為被測樣本。實施例2a、雙縮脲試劑配制根據(jù)測定樣本所需量，在室溫下配制4%CuS04(w/v)、2.5%酒石酸鉀鈉(w/v)和5MNaOH溶液。在500mL容量瓶中依次加入30mL的CuS04溶液，100mL的酒石酸鉀鈉溶液，隨即再緩慢加入30mL的NaOH溶液，最后用蒸餾水定容至500mL，形成備用溶液；開始測定被測樣本前，取適量的備用溶液與等體積異丙醇混合，形成雙縮脲試劑。b、SDS磷酸緩沖液配制溶液1:0.05mol/LNa2HP04，0.5%SDS(w/v);溶液2:0.05mol/LNaH2P04，0.5%SDS(w/v);取適量溶液1于燒杯中，緩慢加入溶液2，連續(xù)攪拌直至混合溶液pH降至6.90，即為SDS磷酸緩沖溶液。實施例3標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制將蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液(7g/dL)用0.lmol/LNaOH溶液稀釋至5mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別取蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液(5mg/mL)0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.OmL于10mL試管中，分別加入1.0、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.Oml蒸餾水，各試管中加入4.OmL雙縮脲試劑(實施例2中a提供，下同)，混勻，4(TC水浴20min，560nm波長比色，測定吸光值。以吸光值為橫坐標(biāo)，以蛋白質(zhì)含量為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得下列一元一次方程y=12.516x-0.0316式中x為吸光值，y為蛋白質(zhì)的百分含量，在本實施例中，它們的相關(guān)系數(shù)r=0.9999。實施例4被測樣品中谷蛋白總量分析準(zhǔn)確稱取100mg被測樣本(實施例1提供)，置于1.5mL離心管。每組12個樣本，每樣本2次重復(fù)。加入lmL70%(v/v)乙醇。室溫連續(xù)震蕩30min，12000rpm離心15min，棄上清；再加入lmL70%(v/v)乙醇。室溫連續(xù)震蕩15min，12000rpm離心15min，將離心管倒置5min;6在含有沉淀的1.5mL離心管中加入lmL雙縮脲試劑，使用超聲波破碎儀VCX130PB，配①3mm探頭，功率12W，處理15s至沉淀充分懸浮。用移液槍將經(jīng)超聲波處理的懸浮液移至裝有4mL雙縮脲試劑的具蓋10mL離心管中，并重復(fù)吹打一次，以充分轉(zhuǎn)移樣本并使懸浮液更均勻。蓋緊試管并立即放入40。C干熱烘箱中溫浴20min，期間5min、10min和15min時分別顛倒搖晃一次。取出于4000rpm離心10min，將上清液在560nm比色。參照本底為雙縮脲試劑。將吸光值代入曲線方程，可算出樣品中的谷蛋白總量，根據(jù)樣品含水量可計算出干基含量。實施例5樣品中谷蛋白大聚體含量分析準(zhǔn)確稱取100mg樣本，置于1.5mL離心管。每組12個樣本，每樣本2次重復(fù)。加入lmL的SDS磷酸緩沖溶液(實施例2中b提供)，室溫連續(xù)震蕩20min，12000rpm離心15min，棄上清，將離心管倒置5min。在含有沉淀的1.5mL離心管中加入lmL雙縮脲試劑，使用超聲波破碎儀VCX130PB，配①3mm探頭，功率12W，處理15s至沉淀充分懸浮。用移液槍將經(jīng)超聲波處理的懸浮液移至裝有4mL雙縮脲試劑的具蓋10mL離心管中，并重復(fù)吹打一次，以充分轉(zhuǎn)移樣本并使懸浮液更均勻。蓋緊試管并立即放入40。C干熱烘箱中溫浴20min，期間5min、10min和15min時分別顛倒搖晃一次。取出于4000rpm離心10min，將上清液在560nm比色。參照本底為雙縮脲試劑。將吸光值代入曲線方程，可算出樣品中的谷蛋白大聚體含量，根據(jù)樣品含水量可計算出干基含量。實施例6根據(jù)實施例15的方法，我們分別對85份品種(系)小麥的谷蛋白總量，谷蛋白大聚體含量及面筋強度分析結(jié)果見表1。在表1中，籽粒蛋白含量的測定使用NIR法(PertenDA7200);含水量測定使用GB5497-85法；沉降值按AACC44-15A法；揉面儀參數(shù)測定使用10g微量揉面儀測定(NationalMfg)。"_"表示數(shù)據(jù)缺失；谷蛋白大聚體的百分含量，即谷蛋白大聚體百分含量(％)=(谷蛋白大聚體含量/谷蛋白總量)X100。由表1可見，代表面筋強度的揉面儀峰值時間與超聲波提取法所得谷蛋白總量、大聚體含量和大聚體百分含量皆呈極顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.60、0.77和0.87(P<0.001)。而籽粒蛋白質(zhì)含量和沉降值與峰值時間無顯著的相關(guān)性，表明此法所測得谷蛋白組分含量，尤其是大聚體百分含量可很好的預(yù)測面筋質(zhì)量。由表1還可以告訴人們，碾磨法和超聲波法測定的谷蛋白總量變異范圍分別為0.74%2.47%和0.84%2.60%?；蛐烷g比較顯示，碾磨法提取率是超聲波法提取率的79.6%99.4%。表明此法對谷蛋白的提取率更高，測定值更準(zhǔn)確，更有利于面筋質(zhì)量的評價，利于小麥品質(zhì)育種工作的開展。表185份品種(系)的品質(zhì)性狀和谷蛋白含量分析<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>西南0233516.3421.592.662.372.491.2349.40揚87-8815.5623.241.361.371.540.6441.56皖麥4412.9821.791.841.001.130.3631.86皖麥5414.5322.593.001.771.920.9348.44皖麥5512.0414.892.090.930.960.3536.46寧014914.3619.394.301.301.450.8256.55資07-0114.0123.442.411.591.760,8548.30資07-1614.3616.341.451.321.570.6239.49寧03011913.1524.192.651.581.650.7847.27資07-159614.0122.744.041.761.921,0454.17資07-170112.9815.141.721.381.580.6339.87寧030413.9319.991.091.231.340.3929.10寧032713.9321.641.231.451.470.5235.86寧033114.1016-641.351.951.990.7035.18寧043312.6414.091.561,081.090.4137.96寧056912.8111.841.291.381.420.4531.69寧060414.7024.34楊2.072.261.2354.42揚88-12814.0113.241.021.681.740.5129.31寧麥12號12.1213.792.501.411.440.5940.97揚麥10號13.4120.291.781.581.650.6841.21揚輻麥3號13.7617.491.151.371.620.5936.42揚996912.4712.391.391.201.260.4334.13寧麥1313.0718.992.080.971.120.4237.50揚981712.9016.742.981.321.380.6547.10揚03G1213.3312.641.171.181.240.3830.65南農(nóng)04Y1014.0118.842.491.661,810.8044.20常11-1013.6715.141.421.121,210.4738.84改良系I14.1018.041.651.431.560.6139.10寧024213.5819.642.571.291.620.6238.27以上各實施例不是對本發(fā)明的具體限制。權(quán)利要求一種小麥的谷蛋白含量快速分析方法，將待測小麥樣本清選5g～30g代表性籽粒，利用實驗?zāi)ツブ迫郏^0.5mm孔徑篩網(wǎng)后裝入塑料自封口袋，室溫至少靜置24h平衡水分，測定含水量，作為被測樣本，其特征在于準(zhǔn)確稱取100mg被測樣本置于離心管中，從被測樣本中由溶劑提取單體蛋白，或同時提取單體蛋白、可溶性的分子量較低的谷蛋白聚合體后，經(jīng)離心后棄上清，使谷蛋白保留在離心管中；在離心管中加入1mL雙縮脲試劑，使用超聲波破碎儀處理后，通過谷蛋白組分的顯色反應(yīng)，測定被測樣品中的谷蛋白含量；所述的被測樣品中的谷蛋白含量是指被測樣品中的谷蛋白總量或谷蛋白大聚體含量。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小麥的谷蛋白含量快速分析方法，其特征在于從被測樣本中單獨提取單體蛋白的溶劑為70%乙醇；從被測樣本中同時提取單體蛋白與可溶性的分子量較低的谷蛋白聚合體的溶劑為P朋.90的SDS磷酸緩沖液，所述的單體蛋白包括清蛋白、球蛋白和醇溶蛋白。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的小麥的谷蛋白含量快速分析方法，其特征在于從被測樣本中單獨提取單體蛋白的方法是準(zhǔn)確稱取100mg被測樣本置于1.5mL離心管中，加入lmL70%乙醇，室溫連續(xù)震蕩30min，12000rpm離心15min，棄上清；再次加入相同的溶劑，連續(xù)震蕩15min，12000rpm離心15min，使被測樣本中的單體蛋白充分溶于溶劑中。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的小麥的谷蛋白含量快速分析方法，其特征在于提取單體蛋白后，經(jīng)離心棄上清，將離心管倒置5min，使谷蛋白保留在離心管中，在離心管中加入lmL雙縮脲試劑，使用超聲波破碎儀處理15s，隨即用移液槍轉(zhuǎn)移懸浮液至已裝有4mL雙縮脲試劑的具蓋10mL離心管中，混勻并立即放入4(TC干熱烘箱中溫浴20min，期間5min、10min和15min時分別顛倒搖晃一次；取出于4000rpm離心10min，將上清液在560nm比色，參照本底為雙縮脲試劑，將吸光值代入用標(biāo)準(zhǔn)蛋白建立的曲線方程，計算出被測樣品中的谷蛋白總量；在所述曲線方程中，相關(guān)系數(shù)r>0.9998。5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的小麥的谷蛋白含量快速分析方法，其特征在于從被測樣本中提取單體蛋白與可溶性的分子量較低的谷蛋白聚合體的方法是準(zhǔn)確稱取100mg被測樣本置于1.5mL離心管中，加入lmLpH6.90的SDS磷酸緩沖液，室溫連續(xù)震蕩20min，12000rpm離心15min，使被測樣本中的單體蛋白與可溶性的分子量較低的谷蛋白聚合體充分溶于溶劑中。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的小麥的谷蛋白含量快速分析方法，其特征在于提取單體蛋白和可溶性的分子量較低的谷蛋白聚合體后，經(jīng)離心棄上清，將離心管倒置5min，使谷蛋白保留在離心管中，在離心管中加入lmL雙縮脲試劑，使用超聲波破碎儀處理15s，隨即用移液槍轉(zhuǎn)移懸浮液至已裝有4mL雙縮脲試劑的具蓋10mL離心管中，混勻并立即放入4(TC干熱烘箱中溫浴20min;取出于4000rpm離心10min，將上清液在560nm比色，參照本底為雙縮脲試劑，將吸光值代入用標(biāo)準(zhǔn)蛋白建立的曲線方程，計算出被測樣品中的谷蛋白大聚體含量，在所述曲線方程中，相關(guān)系數(shù)r>0.9998。7.根據(jù)權(quán)利要求1或4或6所述的小麥的谷蛋白含量快速分析方法，其特征在于超聲波破碎儀的探頭直徑為①3mm，所述的超聲波破碎儀處理是指超聲波破碎儀在12W的輸出功率狀態(tài)下進行處理。全文摘要本發(fā)明涉及一種小麥的谷蛋白含量快速分析方法，將待測小麥樣本清選5g～30g代表性籽粒，利用實驗?zāi)ツブ迫郏^0.5mm孔徑篩網(wǎng)后裝入塑料自封口袋，室溫至少靜置24h平衡水分，測定含水量，作為被測樣本，其特征在于準(zhǔn)確稱取100mg被測樣本置于離心管中，從被測樣本中由溶劑單獨提取單體蛋白，或同時提取單體蛋白、可溶性的分子量較低的谷蛋白聚合體后，經(jīng)離心后棄上清，使谷蛋白保留在離心管中；在離心管中加入1mL雙縮脲試劑，使用超聲波破碎儀處理后，通過谷蛋白組分的顯色反應(yīng)，測定被測樣品中的谷蛋白含量；所述的被測樣品中的谷蛋白含量是指被測樣品中的谷蛋白總量或谷蛋白大聚體含量。文檔編號G01N21/77GK101726486SQ200910232769公開日2010年6月9日申請日期2009年11月30日優(yōu)先權(quán)日2009年11月30日發(fā)明者姚金保,張平平,馬鴻翔申請人:江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院