專利名稱：一種檢測微囊藻毒素的化合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測微囊藻毒素的化合物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
藻毒素是由于水體污染引起的藍(lán)藻過度生長所分泌的毒素。這種毒素具有極強(qiáng)的 肝毒性，容易引起急性肝炎，促使肝癌變；對(duì)蛋白磷酸酶有極強(qiáng)的抑制性并易引起大腸等的 癌變。該毒素對(duì)水生物沒有毒性，卻很容易在其體內(nèi)富集。當(dāng)富集到一定程度后，其濃度會(huì) 超過人類飲水的最高濃度而對(duì)人的健康產(chǎn)生極大危害。 至今發(fā)現(xiàn)的藻毒素已有80多種變體。他們?cè)诨瘜W(xué)結(jié)構(gòu)上，都有一個(gè)圓形的，由5個(gè) 氨基酸組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)其中兩個(gè)L型氨基酸被不同氨基酸替代后產(chǎn)生了不同的變體。由 這種氨基酸可以命名不同的藻毒素異構(gòu)體。在藻毒素家族中，微囊藻毒素-LR(MC-LR)是至 今研究最多也是最具代表性的藻毒素種類之一，分子式為(:491174^。012，分子量為995. 2，是 一組環(huán)狀七肽，其結(jié)構(gòu)見圖1。藻毒素對(duì)人類的危害至極，尤其是MC-LR，因此在過去的幾十 年中，研究者對(duì)藻毒素的研究主要集中在對(duì)地表水中MC-LR的檢測。 目前用來檢測藻毒素的技術(shù)有很多。至今為止，化學(xué)的分析方法，如高效液相色譜 及其與紫外聯(lián)用，質(zhì)譜以及質(zhì)譜串聯(lián)等，可以達(dá)到O. l-lng/mL的最低檢測限。但是，這些分 析方法都價(jià)格昂貴，體積龐大，這也就限制了該類儀器在現(xiàn)場進(jìn)行地表水中MC-LR的檢測。
生物毒理實(shí)驗(yàn)也曾作為可選的檢測方式，基于這種方法簡化了檢測過程的步驟， 尤其適用于新毒素變體的檢測。然而，這種檢測方法大量消耗實(shí)驗(yàn)動(dòng)物個(gè)體、藻毒素，并且 檢測周期長，無法進(jìn)行定量分析，沒有得到普遍的應(yīng)用。蛋白酶抑制分析法(PPIA)等也被 廣泛的研究，PPIA技術(shù)具有高的靈敏度至ng/L的數(shù)量級(jí)別。但是這種技術(shù)特異性，只能檢 測所有毒素變構(gòu)體的量并且還需要另行加入的標(biāo)記物質(zhì)才能檢測。 由于藻毒素的低檢測限要求，使得免疫分析法越來越受到關(guān)注。免疫分析法可以 輕松特異而靈敏的檢測到lPg/L(lng/mL)的濃度_世界衛(wèi)生組織制定的飲水標(biāo)準(zhǔn)值。同 時(shí)，免疫分析法可使用最小的裝置并且不需要樣品預(yù)處理。正是基于這些優(yōu)勢，酶聯(lián)免疫吸 附法(ELISA)成為最廣泛使用的檢測MC-LR的方法，從而成為中國環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)-地表水 藻毒素檢測的標(biāo)準(zhǔn)方法(GB3838-88，2002)。然而，即使以ELISA為代表的免疫分析技術(shù)也 存在一些問題。這項(xiàng)技術(shù)的檢測過程步驟復(fù)雜而其關(guān)鍵的檢測結(jié)果需要酶催化的顏色反應(yīng) 進(jìn)行標(biāo)記-這就不可避免的增多了實(shí)驗(yàn)步驟和最后的數(shù)據(jù)分析，并且增加了實(shí)驗(yàn)的成本。 因此，發(fā)明靈敏、快速、簡單、便攜和成本低的新型的檢測MC-LR技術(shù)成為了極迫切的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種檢測微囊藻毒素的化合物及其應(yīng)用。 本發(fā)明提供了一種檢測微囊藻毒素-LR(MC-LR)的化合物，是將微囊藻毒素_LR的
單克隆抗體偶聯(lián)到聚聯(lián)乙炔囊泡的聚聯(lián)乙炔上得到的偶聯(lián)物。 所述偶聯(lián)物可采用如下方法制備將1-9. 6 i！ g微囊藻毒素-LR的單克隆抗體與聚聯(lián)乙炔囊泡進(jìn)行偶聯(lián)；所述聚聯(lián)乙炔囊泡是由l-4ymol聯(lián)乙炔制備得到的。所述偶聯(lián)物具 體可采用如下方法制備將8ii g微囊藻毒素-LR的單克隆抗體與聚聯(lián)乙炔囊泡進(jìn)行偶聯(lián)得 到的；所述聚聯(lián)乙炔囊泡是由4iimo1聯(lián)乙炔制備得到的。 所述偶聯(lián)物可采用如下方法制備在交聯(lián)劑的作用下，所述聚聯(lián)乙炔囊泡和 1-9. 6ii g所述微囊藻毒素-LR的單克隆抗體在磷酸緩沖液中反應(yīng)，得到所述偶聯(lián)物；所述 交聯(lián)劑為N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)和1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺(EDC); 所述聚聯(lián)乙炔囊泡是由l-4ymol聯(lián)乙炔制備得到的。所述偶聯(lián)物具體可采用如下方法制 備在交聯(lián)劑的作用下，所述聚聯(lián)乙炔囊泡和8 i！ g所述微囊藻毒素-LR的單克隆抗體在 磷酸緩沖液中反應(yīng)，得到所述偶聯(lián)物；所述聚聯(lián)乙炔囊泡是由4iimo1聯(lián)乙炔制備得到的； 所述交聯(lián)劑為N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)和1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺 (EDC)。最后采用透析的方法，將多余的抗體除去，從而得到具有識(shí)別功能的檢測微囊藻毒 素的化合物。囊泡溶液中的聚聯(lián)乙炔(藍(lán)色)通過交聯(lián)反應(yīng)，可在表面產(chǎn)生活性酯基團(tuán)，與 抗體的胺基發(fā)生反應(yīng)，從而使微囊藻毒素-LR的單克隆抗體連接到聚聯(lián)乙炔囊泡的聚聯(lián)乙
炔上。該反應(yīng)需要在超凈臺(tái)中操作，且在連接抗體的過程中，需要保持不超過4t:的低溫進(jìn)
行操作。本步驟為了避免紫外線聚合聯(lián)乙炔分子過程，對(duì)抗體蛋白質(zhì)的改性而使其失活，創(chuàng) 新性的采用了在藍(lán)色聚聯(lián)乙炔囊泡表面進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)順序，為得到靈敏的聚聯(lián)乙炔 生物傳感器奠定了基礎(chǔ)。 所述N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)的用量可為10-40 iimol ;所述1_乙基-3-(3-二甲 基氨丙基)-碳化二亞胺(EDC)的用量可為10-40iimol。所述磷酸緩沖液可為pH二7.410mM 的磷酸緩沖溶液。 所述聚聯(lián)乙炔囊泡可采用如下方法制備在磷酸緩沖液中，將聯(lián)乙炔超聲處理； 然后在254nm、60w的紫外燈下照射，得到聚聯(lián)乙炔囊泡。所述聚聯(lián)乙炔囊泡具體可采用如 下方法制備在pH = 7. 410mM磷酸緩沖液中，將聯(lián)乙炔超聲處理；然后在254nm、60w的紫 外燈下照射1-2分鐘，得到聚聯(lián)乙炔囊泡；所述超聲處理的條件為超聲功率為800w、每間 隔10s工作一次，工作20次。所述聚聯(lián)乙炔囊泡更具體可采用如下方法制備采用SCIENIZ JY92-II型超聲細(xì)胞粉碎儀對(duì)聯(lián)乙炔單體在磷酸緩沖溶液中所形成的聚聯(lián)乙炔囊泡前驅(qū)體 進(jìn)行均化(超聲功率為800w、每間隔10s工作一次，工作20次)。在過夜4t:下冷凍后，即 進(jìn)行紫外照射(254nm、60w的紫外燈下照射1_2分鐘)，得到藍(lán)色的囊泡溶液。這樣所得到 的聚聯(lián)乙炔囊泡，不但粒徑小、分布均一，而且不同批次之間的重復(fù)性強(qiáng)。
以上任一所述檢測微囊藻毒素-LR(MC-LR)的化合物均可應(yīng)用于微囊藻毒素-LR 的檢測。不含微囊藻毒素-LR的樣本中，CR值都在10X以下，微囊藻毒素-LR含量越高，CR 值越大，CR值為15%以上識(shí)別已經(jīng)明顯了 。 本發(fā)明提供的方法，是利用以上所述化合物對(duì)微囊藻毒素-LR進(jìn)行檢測。有序排 列的聯(lián)乙炔分子(PCDA)在紫外光照射下發(fā)生聚合得到聚聯(lián)乙炔(PDA) 。PDA作為兩性分子， 在溶液中可自動(dòng)形成具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡。聚聯(lián)乙炔的線性骨架的離域電子，在可見光 區(qū)產(chǎn)生躍遷，會(huì)顯示特有的藍(lán)色。聚聯(lián)乙炔囊泡表面可以進(jìn)行不同的修飾從而引入分子探 針，遇到可識(shí)別的生物大分子時(shí)，會(huì)由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)榧t色。 用本發(fā)明的化合物檢測微囊藻毒素-LR，操作簡單、成本低廉、周期短。由于能產(chǎn)生 肉眼可見的顏色信號(hào)變換，對(duì)于野外地表水中微囊藻毒素-LR的檢測更加適用。這種技術(shù)在檢測水污染的應(yīng)用方面也更易普及，容易產(chǎn)業(yè)化。 本發(fā)明中通過對(duì)聚聯(lián)乙炔表面的修飾，成功的將微囊藻毒素-LR的單克隆抗體 (anti-MC-LR)嵌入聚聯(lián)乙炔表面，得到可以對(duì)微囊藻毒素_LR進(jìn)行識(shí)別的化合物。盡管 基于抗體抗原特異性作用的免疫分析已經(jīng)在醫(yī)療診斷及治療中得到了應(yīng)用和大量的研究， 如今廣泛使用的免疫分析方法仍然相對(duì)繁瑣和昂貴。而本發(fā)明的化合物，在檢測微囊藻毒 素-LR時(shí)，兼具了高靈敏度、快速、成本低廉和方便等優(yōu)勢。由于肉眼可見的顏色變化，使得 本發(fā)明和傳統(tǒng)的分析方法相比，不但更加適用于現(xiàn)場的水質(zhì)量檢測，而且為免疫傳感器最 大檢測效果的發(fā)揮奠定了工作基礎(chǔ)，并擴(kuò)展了聚聯(lián)乙炔這種優(yōu)勢生物傳感大分子在生物監(jiān) 測方面的應(yīng)用。同時(shí)對(duì)其他領(lǐng)域生物傳感器的制作及發(fā)明有著重要的啟示意義本發(fā)明的方 法具有操作簡單、成本低廉、檢測周期短、肉眼可識(shí)別等優(yōu)點(diǎn)，便于進(jìn)行野外測試和地表水 的隨時(shí)監(jiān)測。用這種方法可以實(shí)現(xiàn)lng/mL的最低檢測限(國家標(biāo)準(zhǔn)及世界衛(wèi)生組織推薦 的人類可攝入的最大濃度)。


圖1為MC-LR的結(jié)構(gòu)示意圖。 圖2為檢測MC-LR的化合物的制作流程示意圖。 圖3為連接不同濃度抗體的檢測MC-LR的化合物的識(shí)別靈敏度示意圖。 圖4為連接不同濃度抗體的檢測MC-LR的化合物的識(shí)別顏色示意圖。 圖5為檢測MC-LR的化合物對(duì)不同濃度的MC-LR檢測的動(dòng)力曲線。 圖6為檢測MC-LR的化合物對(duì)不同濃度的MC-LR檢測的顏色示意圖(a-偶聯(lián)了單
克隆抗體的聚聯(lián)乙炔囊泡；b-e :與lng/mL， 10ng/mL， 50ng/mL， 100ng/mL MC-LR結(jié)合)。 圖7為檢測MC-LR的化合物與MC-LR作用前后的電鏡示意圖。 圖8不同配比的聚聯(lián)乙炔與單克隆抗體對(duì)不同濃度MC-LR的識(shí)別示意圖。
具體實(shí)施例方式以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)
方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無特殊說明，均為自
常規(guī)生化試劑商店購買得到的。 聯(lián)乙炔分子Sigma-Aldrich。 MC-LR :伊普瑞斯科技有限公司E-LR-C100 MC-LR的單克隆抗體伊普瑞斯科技有限公司E-LR(MC8C10) _C200。 靈敏度由聚聯(lián)乙炔藍(lán)色變紅色的程度，比色響應(yīng)(colorimetric response，簡寫
成CR)來表示，CR = [ (PB。-PBf) /PB。] X 100 % ，而PB = Ablue/ (Ablue+Ared) ， Ablue是藍(lán)色聚聯(lián)乙
炔對(duì)紅波(在640nm左右)的吸收強(qiáng)度，Ared是紅色聚聯(lián)乙炔對(duì)藍(lán)波(在540nm左右)的吸
收強(qiáng)度，PB。是加入待測樣本前的偶聯(lián)物溶液對(duì)紅波吸收所占的百分?jǐn)?shù)，PBf是加入待測樣
本后的偶聯(lián)物溶液對(duì)紅波吸收所占的百分?jǐn)?shù)。CR值越大，說明聚聯(lián)乙炔變紅的程度越大。 檢測MC-LR的化合物的制作流程和檢測示意圖見圖2。 實(shí)施例1、參數(shù)的優(yōu)化 —、聚聯(lián)乙炔的囊泡溶液的制備
1、將聯(lián)乙炔分子(PCDA)(單體)的粉末溶解于氯仿中配制成ImM的溶液。取10ml ImM的PCDA溶液于25mL的圓底燒瓶，在ELELAN—"°°真空旋蒸儀中45。C將氯仿溶劑全部旋 干，至瓶壁形成一層白色薄膜。再用^氣吹10-15min。 2、在步驟1的圓底燒瓶中加入10mL pH = 7. 410mM磷酸緩沖液，SCIENIZ JY92-II 型超聲細(xì)胞粉碎儀探針超聲5min，得到半透明的溶液。將所制得的半透明溶液置于4t:冰 箱過夜。在254nm，60w的紫外燈下照射2min，得到透明藍(lán)色溶液，即為聚聯(lián)乙炔囊泡溶液。 所得到的聚聯(lián)乙炔囊泡，粒徑小、分布均一。
二、參數(shù)的優(yōu)化
1、單抗的濃度 取4mL聚聯(lián)乙炔囊泡溶液(含有4微摩爾PCDA)，表面基團(tuán)活化后，溶解成2mL組 裝體溶液，在fC下加入MC-LR的單克隆抗體，抗體的終濃度從2mg/L逐漸增加到5mg/L，得 到的偶聯(lián)物溶液。分別加入MC-LR(終濃度為50ng/mL)，均勻混合，37。C水浴孕育30min以 上進(jìn)行抗體抗原作用的檢測。其中，為了最大限度的降低實(shí)驗(yàn)誤差，聚聯(lián)乙炔囊泡溶液一批 制得；不同濃度的微囊藻毒素單克隆抗體同時(shí)加入；偶聯(lián)物同時(shí)進(jìn)行透析分離；在同樣條 件下，同樣時(shí)間段內(nèi)，檢測抗體抗原的結(jié)合作用。 結(jié)果見圖3和圖4。隨著加入抗體濃度的增大，對(duì)于50ng/mL MC-LR檢測的靈敏度
先變大后減小，4微摩爾PCDA與4. Omg/L抗體(4微摩爾PCDA與8 y g抗體)配比的偶聯(lián)物
的靈敏度最大。這是由于過多抗體在PDA囊泡表面的排布，會(huì)使得其表面的空間擁擠，使得
抗原無法接近或結(jié)合了抗原的抗體沒有足夠的空間轉(zhuǎn)動(dòng)而造成PDA骨架結(jié)構(gòu)的變化，也就
無法很好的轉(zhuǎn)變?yōu)榧t相。 2、檢測不同濃度的抗原 選擇表面負(fù)載了最佳單克隆抗體量的聚聯(lián)乙炔_抗體組裝體溶液2mL(PCDA :抗 體二4iimo1 : 8iig)，取相同的體積加入不同濃度的MC-LR。 MC-LR的濃度分別為Ong/mL、 lng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL。 37。C水浴孕育30min，并同時(shí)記錄不同時(shí)間點(diǎn)抗體抗 原的結(jié)合程度，考察免疫檢測藻毒素過程的動(dòng)力學(xué)變化(見圖5)。隨著加入的藻毒素MC-LR 的增多，宏觀上，藍(lán)色聚聯(lián)乙炔溶液逐漸由藍(lán)色變?yōu)樽仙?、紫紅色、粉色直至紅色(見圖6); 微觀上，MC-LR因與其單克隆抗體結(jié)合而使得反應(yīng)溶液由原來分散較好的囊泡聚集體轉(zhuǎn)變 為二聚體，三聚體，甚至成片的聚集在一起(見圖7 ;A作用前；B作用后)。
實(shí)施例2、檢測微囊藻毒素-LR的化合物的制備 1、將聯(lián)乙炔分子(PCDA)(單體)的粉末溶解于氯仿中配制成lmM的溶液。取10ml lmM的PCDA溶液于25mL的圓底燒瓶，在ELELAN—"°°真空旋蒸儀中45。C將氯仿溶劑全部旋 干，至瓶壁形成一層白色薄膜。再用^氣吹10-15min。 2、在步驟1的圓底燒瓶中加入10mL pH = 7. 410mM磷酸緩沖液，SCIENIZ JY92-II 超聲細(xì)胞粉碎機(jī)探針超聲5min (超聲功率為800w，每間隔10s工作一次，工作20次)，得到 半透明的溶液。將所制得的半透明溶液置于4t:冰箱過夜。在254nm、60w的紫外燈下照射 2min，得到透明藍(lán)色溶液，即為聚聯(lián)乙炔囊泡溶液。 3、取4mL步驟2得到聚聯(lián)乙炔囊泡溶液(含有4微摩爾PCDA)，向其中加入40微摩 爾NHS和40微摩爾EDC(PCDA : EDC : NHS = 0. 1 : 1 : l;摩爾比)。常溫下反應(yīng)30min。 離心機(jī)10000r/min離心，三次以上，去除上清液中多余的NHS和EDC，得到沉淀。
4、將步驟3得到的沉淀溶于2mL磷酸緩沖溶液(pH = 7. 4， 10mM)中，在4"冰箱預(yù) 冷后加入8微克MC-LR的單克隆抗體(PCDA :抗體=4 y mol : 8 y g)，在4。C冰箱中攪拌 混合過夜。 5、將步驟4的溶液在4t:冰箱中透析過夜，從而去除多余未接上的抗體。
實(shí)施例3、檢測微囊藻毒素-LR的化合物的制備 1、將聯(lián)乙炔分子(PCDA)(單體)的粉末溶解于氯仿中配制成lmM的溶液。取10ml lmM的PCDA溶液于25mL的圓底燒瓶，在ELELAN—"°°真空旋蒸儀中45。C將氯仿溶劑全部旋 干，至瓶壁形成一層白色薄膜。再用^氣吹10-15min。 2、在步驟1的圓底燒瓶中加入10mL pH = 7. 410mM磷酸緩沖液，SCIENIZ JY92-II 超聲細(xì)胞粉碎機(jī)探針超聲5min (超聲功率為800w，每間隔10s工作一次，工作20次)，得到 半透明的溶液。將所制得的半透明溶液置于4t:冰箱過夜。在254nm、60w的紫外燈下照射 2min，得到透明藍(lán)色溶液，即為聚聯(lián)乙炔囊泡溶液。 3、取lmL步驟2得到聚聯(lián)乙炔囊泡溶液(含有1微摩爾PCDA)，向其中加入10微摩
爾NHS和IO微摩爾EDC(PCDA : EDC : NHS = 0. 1 : 1 : l;摩爾比)。常溫下反應(yīng)30min。
離心機(jī)10000r/min離心，三次以上，去除上清液中多余的NHS和EDC，得到沉淀。4、將步驟3得到的沉淀溶于2mL磷酸緩沖溶液(pH = 7. 4， 10mM)中，在4。C冰箱預(yù)
冷后加入1微克微MC-LR的單克隆抗體(PCDA :抗體=1 ii mol : 1 y g)，在4t:冰箱中攪
拌混合過夜。 5、將步驟4的溶液在4t:冰箱中透析過夜，從而去除多余未接上的抗體。
實(shí)施例4、檢測微囊藻毒素-LR的化合物的制備 1、將聯(lián)乙炔分子(PCDA)(單體)的粉末溶解于氯仿中配制成lmM的溶液。取10ml lmM的PCDA溶液于25mL的圓底燒瓶，在ELELAN—"°°真空旋蒸儀中45。C將氯仿溶劑全部旋 干，至瓶壁形成一層白色薄膜。再用^氣吹10-15min。 2、在步驟1的圓底燒瓶中加入10mL pH = 7. 410mM磷酸緩沖液，SCIENIZ JY92-II 超聲細(xì)胞粉碎機(jī)探針超聲5min (超聲功率為800w，每間隔10s工作一次，工作20次)，得到 半透明的溶液。將所制得的半透明溶液置于4t:冰箱過夜。在254nm、60w的紫外燈下照射 2min，得到透明藍(lán)色溶液，即為聚聯(lián)乙炔囊泡溶液。 3、取4mL步驟2得到聚聯(lián)乙炔囊泡溶液(含有4微摩爾PCDA)，向其中加入40微摩
爾NHS和40微摩爾EDC(PCDA : EDC : NHS = 0. 1 : 1 : l;摩爾比)。常溫下反應(yīng)30min。
離心機(jī)10000r/min離心，三次以上，去除上清液中多余的NHS和EDC，得到沉淀。4、將步驟3得到的沉淀溶于2mL磷酸緩沖溶液(pH = 7. 4， 10mM)中，在4。C冰箱預(yù)
冷后加入9. 6微克MC-LR的單克隆抗體(PCDA :抗體=4 y mol : 9. 6 y g)，在4。C冰箱中
攪拌混合過夜。 5、將步驟4的溶液在4t:冰箱中透析過夜，從而去除多余未接上的抗體。
實(shí)施例5 、微囊藻毒素-LR的檢測 分別取實(shí)施例2至4制備的溶液，設(shè)置4組平行處理，每組處理設(shè)置三個(gè)重復(fù)，每 個(gè)重復(fù)為lmL溶液。在4組平行處理中分別加入等體積不同濃度的MC-LR溶液(溶質(zhì)為 MC-LR ;溶劑為pH = 7. 410mM磷酸緩沖溶液)，使得MC-LR的終濃度分別為lng/mL、10ng/ mL、50ng/mL、100ng/mL。設(shè)置1組陰性對(duì)照，加入等體積的磷酸緩沖溶液(pH = 7. 410mM)。混合攪拌，在37。C水浴中孵育30min。 各個(gè)處理的CR值見圖8。陰性對(duì)照的CR值都在10X以下，結(jié)果表明，待測溶液中， 微囊藻毒素含量越高，CR值越大。CR值為15%以上識(shí)別已經(jīng)明顯了。
權(quán)利要求
一種檢測微囊藻毒素-LR的化合物，是將微囊藻毒素-LR的單克隆抗體偶聯(lián)到聚聯(lián)乙炔囊泡的聚聯(lián)乙炔上得到的偶聯(lián)物。
2. 如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于所述偶聯(lián)物是將l-9.6y g微囊藻毒 素-LR的單克隆抗體與聚聯(lián)乙炔囊泡進(jìn)行偶聯(lián)得到的；所述聚聯(lián)乙炔囊泡是由l-4ymol聯(lián) 乙炔制備得到的。
3. 如權(quán)利要求2所述的化合物，其特征在于所述偶聯(lián)物是將8 g微囊藻毒素-LR的 單克隆抗體與聚聯(lián)乙炔囊泡進(jìn)行偶聯(lián)得到的；所述聚聯(lián)乙炔囊泡是由4iimo1聯(lián)乙炔制備 得到的。
4. 如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于所述偶聯(lián)物的制備方法如下在交聯(lián)劑 的作用下，所述聚聯(lián)乙炔囊泡和1-9. 6ii g所述微囊藻毒素-LR的單克隆抗體在磷酸緩沖液 中反應(yīng)，得到所述偶聯(lián)物；所述交聯(lián)劑為N-羥基琥珀酰亞胺和1-乙基-3-(3-二甲基氨丙 基)_碳化二亞胺；所述聚聯(lián)乙炔囊泡是由l-4y mol聯(lián)乙炔制備得到的。
5. 如權(quán)利要求4所述的化合物，其特征在于所述偶聯(lián)物的制備方法如下在所述交聯(lián) 劑的作用下，所述聚聯(lián)乙炔囊泡和8 i！ g所述微囊藻毒素-LR的單克隆抗體在磷酸緩沖液中 反應(yīng)，得到所述偶聯(lián)物；所述聚聯(lián)乙炔囊泡是由4iimo1聯(lián)乙炔制備得到的。
6. 如權(quán)利要求4或5所述的化合物，其特征在于所述N-羥基琥珀酰亞胺的用量為 10-40 iimol ;所述1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺的用量為10-40 iimol。
7. 如權(quán)利要求4至6中任一所述的化合物，其特征在于所述磷酸緩沖液為pH = 7. 410mM的磷酸緩沖溶液。
8. 如權(quán)利要求1至7中任一所述的化合物，其特征在于所述聚聯(lián)乙炔囊泡的制備方 法包括如下步驟在磷酸緩沖液中，將聯(lián)乙炔超聲處理；然后在254nm、60w的紫外燈下照 射，得到聚聯(lián)乙炔囊泡。
9. 如權(quán)利要求8所述的化合物，其特征在于所述聚聯(lián)乙炔囊泡的制備方法包括如下 步驟在pH二 7. 410mM磷酸緩沖液中，將聯(lián)乙炔超聲處理；然后在254nm、60w的紫外燈下照 射1-2分鐘，得到聚聯(lián)乙炔囊泡；所述超聲處理的條件為超聲功率為800w，每間隔10s工 作一次，工作20次。
10. 權(quán)利要求1至9中任一所述化合物在檢測微囊藻毒素-LR中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測微囊藻毒素的化合物及其應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種檢測微囊藻毒素-LR(MC-LR)的化合物，是將微囊藻毒素的單克隆抗體偶聯(lián)到聚聯(lián)乙炔囊泡的聚聯(lián)乙炔上得到的偶聯(lián)物。所述檢測微囊藻毒素-LR的化合物均可應(yīng)用于微囊藻毒素-LR的檢測。本發(fā)明的化合物，在檢測藻毒素MC-LR時(shí)，兼具高靈敏度、快速、成本低廉和方便等優(yōu)勢。由于肉眼可見的顏色變化，使得本發(fā)明和傳統(tǒng)的分析方法相比，更適用于現(xiàn)場的水質(zhì)量檢測。本發(fā)明的方法具有操作簡單、成本低廉、檢測周期短、肉眼可識(shí)別等優(yōu)點(diǎn)，便于進(jìn)行野外測試和地表水的隨時(shí)監(jiān)測。
文檔編號(hào)G01N33/577GK101701960SQ20091023755
公開日2010年5月5日 申請(qǐng)日期2009年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月18日
發(fā)明者夏玥穜, 張建平, 江龍 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院化學(xué)研究所