專(zhuān)利名稱(chēng)：一種用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法，特別涉及一種同時(shí)對(duì)多種香豆素系化合物進(jìn)行檢測(cè)的方法。

背景技術(shù)：
香豆素系化合物是一類(lèi)具有芳香氣味，母核為苯并α-吡喃酮結(jié)構(gòu)的天然產(chǎn)物，廣泛分布于植物界，根據(jù)結(jié)構(gòu)可分為簡(jiǎn)單香豆素系化合物、呋喃香豆素系化合物、吡喃香豆素系化合物和其他香豆素系化合物等。日常生活使用的化妝品通常添加有一定量的香料和香精，以賦予化妝品溫馨和優(yōu)雅的香氣，但與此同時(shí)，添加的香料和香精的安全性將直接影響化妝品的安全性。香豆素系化合物被廣泛用于添加在香水、沐浴啫喱和除臭劑等化妝品中。德國(guó)聯(lián)邦風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究所的研究結(jié)果顯示，部分香豆素系化合物可引發(fā)肝損傷；并且，在具有高含量香豆素系化合物的化妝品使用過(guò)程中，香豆素系化合物可通過(guò)皮膚接觸方式進(jìn)入人體內(nèi)，可能導(dǎo)致使用者每日攝入的香豆素系化合物的量超出人體的每日耐受攝入量(即，0.1mg/kg體重)。為此，我國(guó)《化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》、《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》和歐盟化妝品規(guī)程(Council Directive76/768/EEC)均明確規(guī)定醋硝香豆素、雙香豆素和6-甲氧基-7-羥基香豆素等香豆素系化合物為化妝品組分中的禁用物質(zhì)。國(guó)際日化香料協(xié)會(huì)也不推薦具有致敏作用的二氫香豆素、7-甲基香豆素和7-甲氧基香豆素等香豆素系化合物作為日化香料成分使用。
目前，化妝品中香豆素系化合物的檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法和氣相色譜法等。上述檢測(cè)方法存在的不足是檢測(cè)靈敏度和分析通量還有待于進(jìn)一步提高。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的檢測(cè)靈敏度和分析通量低的不足，提供一種高通量的用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法，該方法不僅分析速度快，而且檢測(cè)靈敏度高。
根據(jù)本發(fā)明的用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法，該方法包括以下步驟 獲取液相色譜中香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間和質(zhì)譜中香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的特征碎片離子峰、以及香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的特征碎片離子峰面積與濃度之間的線(xiàn)性方程； 制備樣品溶液，進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，得到樣品中各個(gè)組分的保留時(shí)間，對(duì)各個(gè)組分進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)，得到各個(gè)組分的特征碎片離子峰及特征碎片離子峰的面積；以及 將各個(gè)組分的保留時(shí)間和特征碎片離子峰與所述香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間和特征碎片離子峰進(jìn)行比對(duì)，從而確定所述樣品中含有的香豆素系化合物的種類(lèi)，并根據(jù)所述特征碎片離子峰面積與濃度之間的線(xiàn)性方程進(jìn)行計(jì)算，從而確定所述樣品中含有的香豆素系化合物的含量； 其特征在于，所述香豆素系化合物為醋硝香豆素、雙香豆素、6-甲氧基-7-羥基香豆素、7-羥基香豆素、8-羥基補(bǔ)骨脂素、4-甲基-7-羥基香豆素、6，7-二甲氧基香豆素、香豆素、7-甲氧基香豆素、二氫香豆素、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、8-甲氧基補(bǔ)骨脂素、7-甲基香豆素、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素、4-甲基-7-乙氧基香豆素、4-甲基-7-二乙氨基香豆素、2’，4，8-三甲基補(bǔ)骨脂素、歐前胡素、異歐前胡素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯和環(huán)香豆素中的一種或多種； 所述液相色譜為超高效液相色譜，所述質(zhì)譜檢測(cè)是通過(guò)串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行的。
根據(jù)本發(fā)明的用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法不僅具有分析通量高的特點(diǎn)，還具有精密度和檢測(cè)靈敏度高的特點(diǎn)。具體地，根據(jù)本發(fā)明的用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法可以在4分鐘內(nèi)完成22種香豆素系化合物的分析檢測(cè)，并且檢出限為2.5-18.0μg/kg，在20-100μg/kg的3個(gè)添加水平范圍內(nèi)的平均回收率為80.2-93.1％，精密度均小于10％。

具體實(shí)施例方式 本發(fā)明提供了一種用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法，該方法包括以下步驟 獲取液相色譜中香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間和質(zhì)譜中香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的特征碎片離子峰、以及香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的特征碎片離子峰面積與濃度之間的線(xiàn)性方程； 制備樣品溶液，進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，得到樣品中各個(gè)組分的保留時(shí)間，對(duì)各個(gè)組分進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)，得到各個(gè)組分的特征碎片離子峰及特征碎片離子峰的面積；以及 將各個(gè)組分的保留時(shí)間和特征碎片離子峰與所述香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間和特征碎片離子峰進(jìn)行比對(duì)，從而確定所述樣品中含有的香豆素系化合物的種類(lèi)，并根據(jù)所述特征碎片離子峰面積與濃度之間的線(xiàn)性方程進(jìn)行計(jì)算，從而確定所述樣品中含有的香豆素系化合物的含量； 其特征在于，所述香豆素系化合物為醋硝香豆素、雙香豆素、6-甲氧基-7-羥基香豆素、7-羥基香豆素、8-羥基補(bǔ)骨脂素、4-甲基-7-羥基香豆素、6，7-二甲氧基香豆素、香豆素、7-甲氧基香豆素、二氫香豆素、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、8-甲氧基補(bǔ)骨脂素、7-甲基香豆素、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素、4-甲基-7-乙氧基香豆素、4-甲基-7-二乙氨基香豆素、2’，4，8-三甲基補(bǔ)骨脂素、歐前胡素、異歐前胡素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯和環(huán)香豆素中的一種或多種； 所述液相色譜為超高效液相色譜，所述質(zhì)譜檢測(cè)是通過(guò)串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行的。
根據(jù)本發(fā)明的檢測(cè)方法可以同時(shí)對(duì)多種香豆素系化合物進(jìn)行檢測(cè)，所述香豆素系化合物可以為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的各種香豆素系化合物。優(yōu)選地，所述香豆素系化合物為醋硝香豆素、雙香豆素、6-甲氧基-7-羥基香豆素、7-羥基香豆素、8-羥基補(bǔ)骨脂素、4-甲基-7-羥基香豆素、6，7-二甲氧基香豆素、香豆素、7-甲氧基香豆素、二氫香豆素、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、8-甲氧基補(bǔ)骨脂素、7-甲基香豆素、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素、4-甲基-7-乙氧基香豆素、4-甲基-7-二乙氨基香豆素、2’，4，8-三甲基補(bǔ)骨脂素、歐前胡素、異歐前胡素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯和環(huán)香豆素中的一種或多種。
本發(fā)明的用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法中，所述液相色譜為超高效液相色譜。與常規(guī)的液相色譜和高效液相色譜相比，超高效液相色譜大幅度改善了液相色譜的分析速度、分離效率、樣品通量和靈敏度。本發(fā)明的用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法中，所述質(zhì)譜檢測(cè)是通過(guò)串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行的。串聯(lián)質(zhì)譜法具有高選擇性和高靈敏度的優(yōu)點(diǎn)。將超高效液相色譜與串聯(lián)質(zhì)譜結(jié)合起來(lái)，則可以充分發(fā)揮二者各自的優(yōu)點(diǎn)，為本發(fā)明的檢測(cè)方法提供一個(gè)可靠、靈敏且快速的分析平臺(tái)。
根據(jù)本發(fā)明的用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法包括獲取液相色譜中香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間和質(zhì)譜中香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的特征碎片離子峰、以及香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的特征碎片離子峰面積與濃度之間的線(xiàn)性方程的步驟。
對(duì)香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的溶液進(jìn)行超高效液相色譜檢測(cè)可以確定香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品在超高效液相色譜中的保留時(shí)間；對(duì)香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)可以確定香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的特征碎片離子；對(duì)具有不同濃度的香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的溶液進(jìn)行超高效液相色譜和串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)則可以建立該香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的特征碎片離子峰面積與濃度之間的線(xiàn)性方程。
確定香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品在超高效液相色譜中的保留時(shí)間、在串聯(lián)質(zhì)譜分析中的特征碎片離子以及建立特征碎片離子峰面積與濃度之間的線(xiàn)性方程的方法可以為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法。一般地，可以配制一系列具有不同濃度的香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的溶液，分別對(duì)這些溶液進(jìn)行超高效液相色譜檢測(cè)和串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)，從而確定該香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品在超高效液相色譜中的保留時(shí)間以及在串聯(lián)質(zhì)譜中的特征碎片離子峰；將串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)得到的特征碎片離子峰面積相對(duì)于該香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度作圖，并進(jìn)行線(xiàn)性擬和，從而建立該香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的特征碎片離子峰面積與濃度之間的線(xiàn)性方程。
本發(fā)明對(duì)于配制一系列具有不同濃度的香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品溶液所采用的溶劑并沒(méi)有特別的限定，可以為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的各種溶劑，只要所述溶劑可以溶解所述香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品即可。優(yōu)選地，所述溶劑為乙腈和水，其中，乙腈與水的體積比可以為1∶1.5-4，優(yōu)選為3∶7。同時(shí)，本發(fā)明對(duì)于所述香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度也沒(méi)有特別的限定，可以根據(jù)所采用的儀器的檢測(cè)范圍和待測(cè)樣品中的香豆素系化合物的含量來(lái)確定。
根據(jù)本發(fā)明的用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法包括制備樣品溶液，進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，得到樣品中各個(gè)組分的保留時(shí)間，對(duì)各個(gè)組分進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)，得到各個(gè)組分的特征碎片離子峰及特征碎片離子峰的面積。
制備所述樣品溶液時(shí)所采用的溶劑可以為本領(lǐng)域常用的各種溶劑，只要所述溶劑可以溶解所述樣品，并與確定香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品在液相色譜中的保留時(shí)間時(shí)所采用的溶劑相同即可。優(yōu)選地，所述溶劑為乙腈和水，其中乙腈與水的體積比可以為1∶1.5-4，優(yōu)選為3∶7。
本發(fā)明對(duì)所述樣品溶液的濃度沒(méi)有特別的限定，只要該濃度使得樣品中的香豆素系化合物的濃度落入所述特征碎片離子峰面積與濃度之間的線(xiàn)性方程的線(xiàn)性范圍內(nèi)即可。當(dāng)樣品中含有多種香豆素系化合物時(shí)，所述樣品溶液的濃度使每種香豆素系化合物的濃度分別落入各自的特征碎片離子峰面積與濃度之間的線(xiàn)性方程的線(xiàn)性范圍內(nèi)即可。當(dāng)所述樣品中的香豆素系化合物的濃度不在所述線(xiàn)性方程的線(xiàn)性范圍內(nèi)時(shí)，可以對(duì)所述樣品溶液進(jìn)行稀釋或濃縮。一般地，所述樣品溶液中樣品的濃度可以使得樣品溶液中每種香豆素系化合物的濃度處于1-500ng/mL的范圍內(nèi)，優(yōu)選處于1-250ng/mL的范圍內(nèi)。
本發(fā)明對(duì)于所述樣品的來(lái)源并無(wú)特別的限定，可以為任意來(lái)源的樣品，優(yōu)選來(lái)自化妝品。所述化妝品可以為各種類(lèi)型的化妝品，一般地，所述化妝品可以為膏霜、散粉、水劑、唇膏和香波中的一種或多種。
優(yōu)選地，當(dāng)所述樣品來(lái)自化妝品時(shí)，本發(fā)明的用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法還可以包括從化妝品中提取樣品的步驟將所述化妝品與溶劑混合，進(jìn)行超聲提取，然后獲取上清液，相對(duì)于1g的化妝品，所述溶劑的用量可以為10-30mL，所述超聲提取的時(shí)間可以為5-30分鐘；脫除所述上清液中的溶劑，得到樣品基質(zhì)；以及通過(guò)固相萃取從所述樣品基質(zhì)中獲取樣品。
本發(fā)明對(duì)于所述溶劑的種類(lèi)沒(méi)有特別限定，可以為本領(lǐng)域常用的各種溶劑。但是，為了進(jìn)一步提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性，優(yōu)選根據(jù)化妝品的種類(lèi)來(lái)選擇所述溶劑。當(dāng)所述化妝品為膏霜、水劑、散粉和香波中的一種或多種時(shí)，所述溶劑優(yōu)選為乙腈；當(dāng)所述化妝品為唇膏時(shí)，所述溶劑優(yōu)選為四氫呋喃和甲醇，且四氫呋喃與甲醇的體積比可以為1∶3-5，優(yōu)選為1∶4。
所述固相萃取可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法進(jìn)行。從進(jìn)一步提高檢測(cè)結(jié)果的可靠性的角度出發(fā)。優(yōu)選地，所述固相萃取包括依次用第一淋洗劑和第二淋洗劑對(duì)處于固相萃取柱內(nèi)的所述樣品基質(zhì)進(jìn)行淋洗。
本發(fā)明對(duì)于所述固相萃取柱的種類(lèi)沒(méi)有特別限定，可以為本領(lǐng)域常用的各種固相萃取柱。從進(jìn)一步提高萃取效率和萃取速度的角度出發(fā)，所述萃取柱優(yōu)選為Oasis HLB萃取柱。
所述第一淋洗劑用于洗脫所述樣品基質(zhì)含有的極性弱于所述香豆素系化合物的雜質(zhì)，即應(yīng)當(dāng)先淋洗出極性弱于香豆素系化合物的雜質(zhì)，避免所述雜質(zhì)進(jìn)入香豆素系化合物，從而進(jìn)一步提高檢測(cè)結(jié)果的可靠性；所述第二淋洗劑用于洗脫所述樣品基質(zhì)含有的香豆素系化合物。本發(fā)明對(duì)于第一淋洗劑和第二淋洗劑的用量并無(wú)特別限定，只要所述第一淋洗劑可以確保除去或基本除去極性弱于所述香豆素系化合物的雜質(zhì)，而所述第二淋洗劑的用量可以確保完全或基本完全將所述香豆素系化合物淋洗下來(lái)即可。
本發(fā)明對(duì)于所述第一淋洗劑和第二淋洗劑的種類(lèi)也沒(méi)有特別的限定，只要所述第一淋洗劑的極性不足以將香豆素系化合物淋洗出來(lái)，而所述第二淋洗劑的極性足以將所述樣品基質(zhì)含有的各種香豆素系化合物淋洗出來(lái)即可。
本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，不同濃度的甲醇水溶液對(duì)香豆素系化合物表現(xiàn)出不同的淋洗能力，隨甲醇水溶液中甲醇含量的提高，淋洗能力逐漸增強(qiáng)?；诖?，所述第一淋洗劑可以為5-15體積％的甲醇水溶液，所述第二淋洗劑可以為85-95體積％的甲醇水溶液；優(yōu)選地，所述第一淋洗劑為濃度為10體積％的甲醇水溶液，所述第二淋洗劑為濃度為90體積％的甲醇水溶液。本發(fā)明對(duì)于所述甲醇水溶液的pH沒(méi)有特別的限定，可以為堿性、中性或酸性的甲醇水溶液，例如中性甲醇水溶液與酸化甲醇水溶液(含有2重量％的乙酸)和氨化甲醇水溶液(含有2重量％的NH4OH)的淋洗效果并無(wú)顯著差異。
除去用第二淋洗劑進(jìn)行淋洗而得到的淋洗液中的淋洗劑，即可得到所述樣品。除去所述淋洗液中的淋洗劑的方法可以為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法，不再贅述。
在使所述樣品基質(zhì)進(jìn)入所述固相萃取柱之前，優(yōu)選將所述固相萃取柱活化，所述活化的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，在此不再詳述。本發(fā)明對(duì)于使所述樣品基質(zhì)進(jìn)入所述固相萃取柱的方法也沒(méi)有特別限定，可以為本領(lǐng)域常用的方法，一般包括使用第一淋洗劑溶解所述樣品基質(zhì)，從而得到樣品基質(zhì)的溶液；然后，將所述樣品基質(zhì)的溶液添加到所述固相萃取柱中，并使所述樣品基質(zhì)的溶液進(jìn)入所述固相萃取柱的固定相。
根據(jù)本發(fā)明的用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法，對(duì)所述樣品溶液進(jìn)行超高效液相色譜檢測(cè)可以將所述樣品溶液分離成為多個(gè)具有不同的保留時(shí)間的組分，對(duì)得到的各個(gè)組分進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)可以確定各個(gè)組分的特征碎片離子峰以及該特征碎片離子峰的面積。
根據(jù)本發(fā)明的用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法，同時(shí)涵蓋了定性分析和定量分析兩個(gè)方面。所述定性分析包括將通過(guò)超高效液相色譜分析得到的樣品中的各個(gè)組分的保留時(shí)間與香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間進(jìn)行比對(duì)，以及通過(guò)串聯(lián)質(zhì)譜法而得到的樣品中的各個(gè)組分的特征碎片離子峰與香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的特征碎片離子峰進(jìn)行比對(duì)，從而確定所述樣品是否含有香豆素系化合物，并確定所述樣品含有的香豆素系化合物的種類(lèi)。所述定量分析包括根據(jù)通過(guò)串聯(lián)質(zhì)譜分析而確定的特征碎片離子峰的面積，以及所述香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的特征碎片離子峰面積與濃度之間的線(xiàn)性方程來(lái)確定所述樣品溶液中含有的香豆素系化合物的濃度，進(jìn)而確定所述樣品中含有的香豆素系化合物的量。
如前所述，根據(jù)本發(fā)明的用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法中，所述液相色譜為超高效液相色譜。
所述超高效液相色譜在超高效液相色譜儀上進(jìn)行。所述超高效液相色譜儀可以為可商購(gòu)得到的各種型號(hào)的超高效液相色譜儀。所述超高效液相色譜儀的配置可以為本領(lǐng)域的常規(guī)配置。但是，從進(jìn)一步提高分離效果、樣品通量和檢測(cè)的靈敏度的角度出發(fā)，所述超高效液相色譜儀所配備的色譜柱優(yōu)選為填料的粒徑為亞微米的色譜柱。所述亞微米為低于2微米。滿(mǎn)足上述要求的色譜柱可以為各種來(lái)源的色譜柱，優(yōu)選地，所述色譜柱為ACQUITY UPLCBEH C18色譜柱。為了獲得更為優(yōu)異的色譜峰形、分離效果和質(zhì)譜信號(hào)響應(yīng)，所述超高效液相色譜儀運(yùn)行時(shí)的流動(dòng)相優(yōu)選為乙腈和水。
所述超高效液相色譜儀的運(yùn)行條件可以為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的條件，沒(méi)有特別限定。優(yōu)選地，所述超高效液相色譜儀的運(yùn)行條件包括所述流動(dòng)相的流速為0.2-0.4毫升/分鐘，所述色譜柱的溫度為20-40℃；梯度洗脫程序?yàn)?-2分鐘時(shí)，流動(dòng)相中乙腈的濃度從30體積％線(xiàn)性升高至45體積％；2-4.5分鐘時(shí)，流動(dòng)相中乙腈的濃度從45體積％線(xiàn)性升高至95體積％；4.5-6分鐘時(shí)，流動(dòng)相中乙腈的濃度為95體積％；6-7分鐘時(shí)，流動(dòng)相中乙腈的濃度從95體積％線(xiàn)性降低至30體積％。更優(yōu)選地，所述流動(dòng)相的流速為0.3毫升/分鐘；所述色譜柱的溫度為40℃。
根據(jù)本發(fā)明的用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法，所述質(zhì)譜檢測(cè)是通過(guò)串聯(lián)質(zhì)譜法而進(jìn)行的。所述串聯(lián)質(zhì)譜法中的第一級(jí)質(zhì)譜用于獲取準(zhǔn)分子離子；第二級(jí)質(zhì)譜用于獲取特征碎片離子，由此提高質(zhì)譜檢測(cè)的選擇性。特征碎片離子是由準(zhǔn)分子離子進(jìn)一步裂解而得的。所述串聯(lián)質(zhì)譜法采用的質(zhì)譜儀可以為本領(lǐng)域常用的各種質(zhì)譜儀，優(yōu)選地，所述串聯(lián)質(zhì)譜法在串聯(lián)的四極桿質(zhì)譜儀上進(jìn)行。所述四極桿質(zhì)譜儀優(yōu)選采用電噴霧離子源。
本發(fā)明對(duì)于質(zhì)譜檢測(cè)中的離子化模式并沒(méi)有特別的限制。為了進(jìn)一步提高檢測(cè)的可靠性，優(yōu)選地，醋硝香豆素、雙香豆素和8-羥基補(bǔ)骨脂素的電離方式為電噴霧電離源負(fù)離子方式(ESI-)；6-甲氧基-7-羥基香豆素、7-羥基香豆素、4-甲基-7-羥基香豆素、6，7-二甲氧基香豆素、香豆素、7-甲氧基香豆素、二氫香豆素、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、8-甲氧基補(bǔ)骨脂素、7-甲基香豆素、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素、4-甲基-7-乙氧基香豆素、4-甲基-7-二乙氨基香豆素、2’，4，8-三甲基補(bǔ)骨脂素、歐前胡素、異歐前胡素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯和環(huán)香豆素的電離方式為電噴霧電離源正離子方式(ESI+)。
一般地，所述四極桿質(zhì)譜儀的運(yùn)行條件包括毛細(xì)管電壓為2.5-4kV；離子源溫度為120-180℃；去溶劑氣溫度為400-600℃；去溶劑氣流量為900-1100升/小時(shí)；錐孔氣流量為10-50升/小時(shí)；光電倍增器電壓為550-750V；碰撞氣體為氬氣，碰撞氣壓為0.3-0.35Pa，碰撞氣流量為0.1-0.2毫升/分鐘；采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式進(jìn)行檢測(cè)。
優(yōu)選地，所述毛細(xì)管電壓為3kV；所述離子源溫度為150℃；所述去溶劑氣溫度為500℃；所述去溶劑氣流量為1000升/小時(shí)；所述錐孔氣流量為50升/小時(shí)；所述光電倍增器電壓為650V；所述碰撞氣壓為0.35Pa，所述碰撞氣流量為0.15毫升/分鐘。
根據(jù)本發(fā)明的用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法，所述超高效液相色譜和串聯(lián)質(zhì)譜優(yōu)選為聯(lián)用。
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的檢測(cè)香豆素系化合物方法進(jìn)行詳細(xì)描述。
實(shí)施例1 本實(shí)施例用來(lái)說(shuō)明根據(jù)本發(fā)明的用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法。
(1)香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 分別準(zhǔn)確稱(chēng)取適量的各香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容至100mL，配制成1000mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-20℃下保存。準(zhǔn)確量取各香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液4mL于100mL容量瓶中，用甲醇定容至100mL，配制成40mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。使用時(shí)，用甲醇逐級(jí)稀釋成濃度為1、2、5、10、20、50、100、200和250ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。
其中，所述香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品為醋硝香豆素(純度98重量％)購(gòu)自加拿大TRC公司；雙香豆素(純度99重量％)和8-甲氧基補(bǔ)骨脂素(純度99重量％)購(gòu)自比利時(shí)Acros公司；6-甲氧基-7-羥基香豆素(純度95重量％)、7-羥基香豆素(純度95重量％)、4-甲基-7-羥基香豆素(純度95重量％)、6，7-二甲氧基香豆素(純度95重量％)、異歐前胡素(純度95重量％)和二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯(純度95重量％)購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；8-羥基補(bǔ)骨脂素(純度98重量％)購(gòu)自美國(guó)ChromaDex公司；香豆素(純度97重量％)購(gòu)自美國(guó)Fluka公司；7-甲氧基香豆素(純度99重量％)和7-甲基香豆素(純度99重量％)購(gòu)自美國(guó)AccuStandard公司；二氫香豆素(純度99重量％)和4-甲基-7-乙氧基香豆素(純度98重量％)購(gòu)自美國(guó)Alfa Aesar公司；補(bǔ)骨脂素(純度99重量％)、異補(bǔ)骨脂素(純度98重量％)、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素(純度99重量％)、4-甲基-7-二乙氨基香豆素(純度99重量％)、2’，4，8-三甲基補(bǔ)骨脂素(純度98重量％)和歐前胡素(純度98重量％)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；以及環(huán)香豆素(純度99重量％)購(gòu)自德國(guó)


公司。
(2)香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品溶液的超高效液相色譜和串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè) 檢測(cè)儀器為ACQUITY超高效液相色譜儀和Xevo TQ MS三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀，采用MassLynx數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(美國(guó)Waters公司)。
超高效液相色譜分析的條件包括色譜柱為Waters公司的ACQUITYUPLC BEH C18柱(50mm×2.1mm，填料粒徑為1.7μm)；保護(hù)柱為Waters公司的VanGuard BEH C18柱(5mm×2.1mm，填料粒徑為1.7μm)；流動(dòng)相為乙腈和水，梯度洗脫程序?yàn)?-2分鐘時(shí)，乙腈的濃度從30體積％線(xiàn)性升高至45體積％；2-4.5分鐘時(shí)，乙腈的濃度從45體積％線(xiàn)性升高至95體積％；4.5-6分鐘時(shí)，乙腈的濃度為95體積％；6-7分鐘時(shí)，乙腈的濃度從95體積％線(xiàn)性降低至30體積％；流動(dòng)相的流速為0.3毫升/分鐘；柱溫為40℃；樣品室溫度為20℃；進(jìn)樣量為5μL。
質(zhì)譜檢測(cè)條件為采用電噴霧離子源；毛細(xì)管電壓為3.0kV；離子源溫度為150℃；去溶劑氣溫度為500℃；去溶劑氣流量為1000升/小時(shí)；錐孔氣流量為50升/小時(shí)；碰撞氣流量為0.15毫升/分鐘；光電倍增器電壓為650V；碰撞氣體為氬氣，碰撞氣壓為0.35Pa；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式檢測(cè)。
香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品在超高效液相色譜中的保留時(shí)間，在串聯(lián)質(zhì)譜中的準(zhǔn)分子離子峰以及特征碎片離子峰如下表1所示。
表1
*強(qiáng)度相對(duì)較大的特征碎片離子 表1中，每種香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品均給出了兩個(gè)特征碎片離子，其中強(qiáng)度相對(duì)較大的特征碎片離子的離子峰面積用于與濃度作圖，從而得出特征碎片離子峰面積與濃度之間的線(xiàn)性方程；強(qiáng)度相對(duì)較小的特征碎片離子用于輔助強(qiáng)度相對(duì)較大的特征碎片離子來(lái)確定香豆素系化合物的種類(lèi)。
在上述超高效液相色譜條件和串聯(lián)質(zhì)譜條件下，對(duì)具有不同濃度的香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行檢測(cè)，確定特征碎片離子峰面積與濃度之間的線(xiàn)性方程。得到的線(xiàn)性方程、以及線(xiàn)性方程的線(xiàn)性范圍和相關(guān)系數(shù)如表2所示。以信噪比為10估算檢出限為2.5-18.0μg/kg。
表2 *上述線(xiàn)性方程中的x對(duì)應(yīng)于濃度，y對(duì)應(yīng)于特征碎片離子峰面積。
(3)方法的回收率和精密度 分別稱(chēng)取經(jīng)測(cè)定不含有香豆素系化合物的香波類(lèi)化妝品各0.500g，分別添加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)添加濃度設(shè)置6個(gè)平行樣，用本發(fā)明的用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法進(jìn)行測(cè)定，確定方法的回收率和精密度。香豆素系化合物的添加量、回收率和精密度結(jié)果見(jiàn)表3。
回收率的計(jì)算公式為 回收率＝香豆素系化合物的檢測(cè)量/香豆素系化合物的添加量×100％。
精密度(RSD)的計(jì)算公式為 其中，Ai為第i次的檢測(cè)值； A為各次檢測(cè)的檢測(cè)值的平均值； n為檢測(cè)次數(shù)，等于6。
表3
*RSD為精密度 表3中的數(shù)據(jù)表明，在低、中、高3個(gè)添加水平范圍內(nèi)的平均回收率為80.2-93.1％，精密度均小于10％。
實(shí)施例2 本實(shí)施例用來(lái)說(shuō)明根據(jù)本發(fā)明的用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法。
準(zhǔn)確稱(chēng)取化妝品試樣(為膏霜)0.500g于25mL具塞比色管中，加入10mL乙腈，渦旋混勻，超聲提取20分鐘后，以15000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心15分鐘，收集上清液于50mL雞心瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于40℃的水浴中濃縮至近干，用氮?dú)饩徛蹈珊螅瑴?zhǔn)確加入2mL 10重量％的甲醇水溶液溶解殘?jiān)?，得到的溶液用于固相萃取。Oasis HLB固相萃取柱用5mL甲醇活化、5mL水平衡后，將試樣溶液過(guò)柱，棄去直接流出液，先用1mL 10重量％的甲醇水溶液淋洗，再用3mL 90重量％的甲醇水溶液洗脫，收集90重量％的甲醇水溶液的洗脫液，用氮?dú)饩徛蹈珊螅瑴?zhǔn)確加入1mL 30體積％的乙腈水溶液溶解殘?jiān)?，過(guò)0.20μm微孔濾膜后，按照與實(shí)施例1相同的超高效液相色譜條件和串聯(lián)質(zhì)譜條件進(jìn)行檢測(cè)，并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果確定該化妝品含有香豆素，且香豆素的含量為37.37mg/kg。
實(shí)施例3 本實(shí)施例用來(lái)說(shuō)明根據(jù)本發(fā)明的用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法。
準(zhǔn)確稱(chēng)取化妝品試樣(為唇膏)0.500g于25mL具塞比色管中，加入2mL四氫呋喃，超聲提取5分鐘，再加8mL甲醇，渦旋混勻，超聲提取20分鐘后，以15000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心15分鐘，收集上清液于50mL雞心瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于40℃的水浴中濃縮至近干，用氮?dú)饩徛蹈珊螅瑴?zhǔn)確加入2mL 10體積％的甲醇水溶液溶解殘?jiān)?，得到的溶液用于固相萃取。OasisHLB固相萃取柱用5mL甲醇活化、5mL水平衡后，將試樣溶液過(guò)柱，棄去直接流出液，先用1mL 10體積％甲醇水溶液淋洗，再用3mL 90體積％的甲醇水溶液洗脫，收集90體積％的甲醇水溶液的洗脫液，用氮?dú)饩徛蹈珊?，?zhǔn)確加入1mL 30體積％的乙腈水溶液溶解殘?jiān)?，過(guò)0.20μm微孔濾膜后，按照與實(shí)施例1相同的超高效液相色譜條件和串聯(lián)質(zhì)譜條件進(jìn)行檢測(cè)，并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果確定該化妝品含有香豆素，且香豆素的含量為20.07mg/kg。
實(shí)施例4 本實(shí)施例用來(lái)說(shuō)明根據(jù)本發(fā)明的用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法。
準(zhǔn)確稱(chēng)取化妝品試樣(為散粉)0.500g于25mL具塞比色管中，加入15mL乙腈，渦旋混勻，超聲提取30分鐘后，以15000轉(zhuǎn)/分鐘轉(zhuǎn)速離心15分鐘，收集上清液于50mL雞心瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于40℃的水浴中濃縮至近干，用氮?dú)饩徛蹈珊?，?zhǔn)確加入2mL 5重量％的甲醇水溶液溶解殘?jiān)玫降娜芤河糜诠滔噍腿?。Oasis HLB固相萃取柱用5mL甲醇活化、5mL水平衡后，將試樣溶液過(guò)柱，棄去直接流出液，先用3mL 5重量％的甲醇水溶液淋洗，再用2mL 95重量％的甲醇水溶液洗脫，收集95重量％的甲醇水溶液的洗脫液，用氮?dú)饩徛蹈珊?，?zhǔn)確加入1mL 30體積％的乙腈水溶液溶解殘?jiān)?，過(guò)0.20μm微孔濾膜后，按照與實(shí)施例1相同的超高效液相色譜條件和串聯(lián)質(zhì)譜條件進(jìn)行檢測(cè)，并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果確定該化妝品含有香豆素，且香豆素的含量為27.60mg/kg。
實(shí)施例5 本實(shí)施例用來(lái)說(shuō)明根據(jù)本發(fā)明的用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法。
準(zhǔn)確稱(chēng)取化妝品試樣(為水劑)0.500g于25mL具塞比色管中，加入5mL乙腈，渦旋混勻，超聲提取5分鐘后，以15000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心15分鐘，收集上清液于50mL雞心瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于40℃的水浴中濃縮至近干，用氮?dú)饩徛蹈珊?，?zhǔn)確加入2mL 15重量％的甲醇水溶液溶解殘?jiān)玫降娜芤河糜诠滔噍腿?。Oasis HLB固相萃取柱用5mL甲醇活化、5mL水平衡后，將試樣溶液過(guò)柱，棄去直接流出液，先用1mL 15重量％的甲醇水溶液淋洗，再用3mL 85重量％的甲醇水溶液洗脫，收集85重量％的甲醇水溶液的洗脫液，用氮?dú)饩徛蹈珊?，?zhǔn)確加入1mL 30體積％的乙腈水溶液溶解殘?jiān)?，過(guò)0.20μm微孔濾膜后，按照與實(shí)施例1相同的超高效液相色譜條件和串聯(lián)質(zhì)譜條件進(jìn)行檢測(cè)，并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果確定該化妝品含有7-甲基香豆素，且7-甲基香豆素的含量為2.10mg/kg。
權(quán)利要求
1.一種用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法，該方法包括以下步驟
獲取液相色譜中香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間和質(zhì)譜中香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的特征碎片離子峰、以及香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的特征碎片離子峰面積與濃度之間的線(xiàn)性方程；
制備樣品溶液，進(jìn)行液相色譜檢測(cè)，得到樣品中各個(gè)組分的保留時(shí)間，對(duì)各個(gè)組分進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)，得到各個(gè)組分的特征碎片離子峰及特征碎片離子峰的面積；以及
將各個(gè)組分的保留時(shí)間和特征碎片離子峰與所述香豆素系化合物標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間和特征碎片離子峰進(jìn)行比對(duì)，從而確定所述樣品中含有的香豆素系化合物的種類(lèi)，并根據(jù)所述特征碎片離子峰面積與濃度之間的線(xiàn)性方程進(jìn)行計(jì)算，從而確定所述樣品中含有的香豆素系化合物的含量；
其特征在于，所述香豆素系化合物為醋硝香豆素、雙香豆素、6-甲氧基-7-羥基香豆素、7-羥基香豆素、8-羥基補(bǔ)骨脂素、4-甲基-7-羥基香豆素、6，7-二甲氧基香豆素、香豆素、7-甲氧基香豆素、二氫香豆素、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、8-甲氧基補(bǔ)骨脂素、7-甲基香豆素、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素、4-甲基-7-乙氧基香豆素、4-甲基-7-二乙氨基香豆素、2’，4，8-三甲基補(bǔ)骨脂素、歐前胡素、異歐前胡素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯和環(huán)香豆素中的一種或多種；
所述液相色譜為超高效液相色譜，所述質(zhì)譜檢測(cè)是通過(guò)串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述樣品溶液的溶劑為乙腈和水，且乙腈與水的體積比為1∶1.5-4。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述樣品溶液的濃度使得所述樣品中含有的香豆素系化合物的濃度落入所述特征碎片離子峰面積與濃度之間的線(xiàn)性方程的線(xiàn)性范圍之內(nèi)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述樣品來(lái)自化妝品。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述化妝品為膏霜、散粉、水劑、唇膏和香波中的一種或多種。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其中，該方法還包括從所述化妝品中提取樣品的步驟
將所述化妝品與溶劑混合，進(jìn)行超聲提取，然后獲取上清液，相對(duì)于1g化妝品，所述溶劑的用量為10-30mL，所述超聲提取的時(shí)間為5-30分鐘；
脫除所述上清液中的溶劑，得到樣品基質(zhì)；以及
通過(guò)固相萃取從所述樣品基質(zhì)中獲取樣品。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，當(dāng)所述化妝品為膏霜、水劑、散粉和香波中的一種或多種時(shí)，所述溶劑為乙腈；當(dāng)所述化妝品為唇膏時(shí)，所述溶劑為四氫呋喃和甲醇，且四氫呋喃與甲醇的體積比為1∶3-5。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，所述固相萃取包括依次用第一淋洗劑和第二淋洗劑對(duì)處于固相萃取柱內(nèi)的所述樣品基質(zhì)進(jìn)行淋洗，所述第一淋洗劑為5-15體積％的甲醇水溶液；所述第二淋洗劑為85-95體積％的甲醇水溶液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述超高效液相色譜在超高效液相色譜儀上進(jìn)行，所述超高效液相色譜儀的色譜柱中的填料粒徑為小于2微米，流動(dòng)相為乙腈和水。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中，所述色譜柱為ACQUITY UPLCBEH C18色譜柱。
11.根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的方法，其中，所述超高效液相色譜儀的運(yùn)行條件包括所述流動(dòng)相的流速為0.2-0.4毫升/分鐘，所述色譜柱的溫度為20-40℃，梯度洗脫程序?yàn)?-2分鐘時(shí)，流動(dòng)相中乙腈的濃度從30體積％線(xiàn)性升高至45體積％；2-4.5分鐘時(shí)，流動(dòng)相中乙腈的濃度從45體積％線(xiàn)性升高至95體積％；4.5-6分鐘時(shí)，流動(dòng)相中乙腈的濃度為95體積％；6-7分鐘時(shí)，流動(dòng)相中乙腈的濃度從95體積％線(xiàn)性降低至30體積％。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述串聯(lián)質(zhì)譜法在串聯(lián)的四極桿質(zhì)譜儀上進(jìn)行。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述四極桿質(zhì)譜儀采用電噴霧離子源。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中，醋硝香豆素、雙香豆素、8-羥基補(bǔ)骨脂素的電離方式為電噴霧電離源負(fù)離子方式；6-甲氧基-7-羥基香豆素、7-羥基香豆素、4-甲基-7-羥基香豆素、6，7-二甲氧基香豆素、香豆素、7-甲氧基香豆素、二氫香豆素、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、8-甲氧基補(bǔ)骨脂素、7-甲基香豆素、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素、4-甲基-7-乙氧基香豆素、4-甲基-7-二乙氨基香豆素、2’，4，8-三甲基補(bǔ)骨脂素、歐前胡素、異歐前胡素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯和環(huán)香豆素的電離方式為電噴霧電離源正離子方式。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，以m/z表示，醋硝香豆素的特征碎片離子為265.2、雙香豆素的特征碎片離子為117.3、6-甲氧基-7-羥基香豆素的特征碎片離子為133.1、7-羥基香豆素的特征碎片離子為107.2、8-羥基補(bǔ)骨脂素的特征碎片離子為157.1、4-甲基-7-羥基香豆素的特征碎片離子為105.2、6，7-二甲氧基香豆素的特征碎片離子為151.2、香豆素的特征碎片離子為91.4、7-甲氧基香豆素的特征碎片離子為121.4、二氫香豆素的特征碎片離子為107.4、補(bǔ)骨脂素的特征碎片離子為115.4、異補(bǔ)骨脂素的特征碎片離子為131.3、8-甲氧基補(bǔ)骨脂素的特征碎片離子為174.3、7-甲基香豆素的特征碎片離子為105.3、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素的特征碎片離子為174.3、4-甲基-7-乙氧基香豆素的特征碎片離子為121.4、4-甲基-7-二乙氨基香豆素的特征碎片離子為188.4、2’，4，8-三甲基補(bǔ)骨脂素的特征碎片離子為142.3、歐前胡素的特征碎片離子為147.3、異歐前胡素的特征碎片離子為147.4、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯的特征碎片離子為187.4、以及環(huán)香豆素的特征碎片離子為173.3。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中，所述特征碎片離子是由準(zhǔn)分子離子進(jìn)一步裂解而得的。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，以m/z表示，醋硝香豆素的準(zhǔn)分子離子為352.1、雙香豆素的準(zhǔn)分子離子為335.5、6-甲氧基-7-羥基香豆素的準(zhǔn)分子離子為193.1、7-羥基香豆素的準(zhǔn)分子離子為163.1、8-羥基補(bǔ)骨脂素的準(zhǔn)分子離子為201.1、4-甲基-7-羥基香豆素的準(zhǔn)分子離子為177.1、6，7-二甲氧基香豆素的準(zhǔn)分子離子為207.1、香豆素的準(zhǔn)分子離子為147.4、7-甲氧基香豆素的準(zhǔn)分子離子為177.4、二氫香豆素的準(zhǔn)分子離子為149.4、補(bǔ)骨脂素的準(zhǔn)分子離子為187.4、異補(bǔ)骨脂素的準(zhǔn)分子離子為187.3、8-甲氧基補(bǔ)骨脂素的準(zhǔn)分子離子為217.5、7-甲基香豆素的準(zhǔn)分子離子為161.4、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素的準(zhǔn)分子離子為217.5、4-甲基-7-乙氧基香豆素的準(zhǔn)分子離子為205.5、4-甲基-7-二乙氨基香豆素的準(zhǔn)分子離子為232.5、2’，4，8-三甲基補(bǔ)骨脂素的準(zhǔn)分子離子為229.5、歐前胡素的準(zhǔn)分子離子為271.6、異歐前胡素的準(zhǔn)分子離子為271.5、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯的準(zhǔn)分子離子為329.6、以及環(huán)香豆素的準(zhǔn)分子離子為323.6。
18.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述四極桿質(zhì)譜儀的運(yùn)行條件包括毛細(xì)管電壓為2.5-4kV；離子源溫度為120-180℃；去溶劑氣溫度為400-600℃；去溶劑氣流量為900-1100升/小時(shí)；錐孔氣流量為10-50升/小時(shí)；光電倍增器電壓為550-750V；碰撞氣體為氬氣，碰撞氣壓為0.3-0.35Pa，碰撞氣流量為0.1-0.2毫升/分鐘；采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式進(jìn)行檢測(cè)。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于檢測(cè)香豆素系化合物的方法，該方法包括對(duì)樣品進(jìn)行超高效液相色譜和串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)，從而確定樣品含有的香豆素系化合物的種類(lèi)和含量。所述香豆素系化合物為醋硝香豆素、雙香豆素、6-甲氧基-7-羥基香豆素、7-羥基香豆素、8-羥基補(bǔ)骨脂素、4-甲基-7-羥基香豆素、6，7-二甲氧基香豆素、香豆素、7-甲氧基香豆素、二氫香豆素、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、8-甲氧基補(bǔ)骨脂素、7-甲基香豆素、5-甲氧基補(bǔ)骨脂素、4-甲基-7-乙氧基香豆素、4-甲基-7-二乙氨基香豆素、2′，4，8-三甲基補(bǔ)骨脂素、歐前胡素、異歐前胡素、二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯和環(huán)香豆素中的一種或多種。本發(fā)明的方法可以在4分鐘內(nèi)完成22種香豆素系化合物的分析檢測(cè)。
文檔編號(hào)G01N30/72GK101762667SQ200910244198
公開(kāi)日2010年6月30日 申請(qǐng)日期2009年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月30日
發(fā)明者馬強(qiáng), 白樺, 王超, 張慶, 董益陽(yáng), 肖海清, 閆妍, 楊海峰, 李坤威 申請(qǐng)人:中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院