專利名稱：：六味防脫生發(fā)制劑及其制備方法和質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種六味防脫生發(fā)制劑及其制備方法和質(zhì)量檢測方法，屬于中藥制藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：脫發(fā)是一個(gè)世界性難題。在美國有8000萬人患脫發(fā)；日本有2000萬人；20-39歲的歐洲人26%患有脫發(fā)，40歲以上的超過50%。我國的情況也不容樂觀一份針對(duì)北京、上海、廣州、杭州等5個(gè)城市5779名男士的調(diào)査顯示我國男性脫發(fā)發(fā)病率達(dá)25%。以6.72億男性計(jì)算，我國男性脫發(fā)患者已經(jīng)達(dá)到大約1.68億人。而一份名為"醫(yī)生誠征脫發(fā)人士意見"的問巻調(diào)査還顯示，男性脫發(fā)明顯"年輕化"，60%的患者在25歲之前就開始脫發(fā)，30歲以前脫發(fā)的比例竟高達(dá)83.9%。目前市場上治療脫發(fā)和再生發(fā)的產(chǎn)品層出不窮，有洗發(fā)劑形態(tài)的，也有藥物形態(tài)的，還有按摩器械等，但根據(jù)實(shí)際使用的情況表明，其治療效果并不理想，有的使用周期長，見效慢；有的治療不徹底；有的治療費(fèi)用昂貴；有的使用不方便等。例如市場上使用較多的章光101，雖然效果相對(duì)較好，但其費(fèi)用比較貴，并需要在專業(yè)人員的指導(dǎo)下使用。對(duì)于脫發(fā)，目前尚缺乏較理想的療法?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)常用的方法有局部外用米諾地爾，皮內(nèi)注射皮質(zhì)類固酵，使用接觸致敏劑如二硝基氯苯、光化學(xué)療法、雌性激素療法等，這些方法雖有一定療效，但都有不同程度的不良反應(yīng)。近年來以脫發(fā)為主要癥狀的疾病日益廣泛。此類疾病其病因病機(jī)多為肝腎陰虛，血虛風(fēng)燥，發(fā)失所養(yǎng)所致。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種六味防脫生發(fā)制劑及其制備方法和質(zhì)量檢測方法。本發(fā)明以六味天然中草藥組方精制而成，具有去屑止癢、防脫生發(fā)、烏發(fā)護(hù)發(fā)之功效，防治兼顧，安全無毒，是治療脂溢性脫發(fā)理想的純中藥制劑。本發(fā)明是這樣構(gòu)成的一種六味防脫生發(fā)制劑，按照重量份計(jì)算，它是用大黃2535份、苦參1525份、何首烏1020份、當(dāng)歸1020份、黃芪1020份、薄荷37份制成的。作為優(yōu)選，按照重量份計(jì)算，它是用大黃30份、苦參20份、何首烏15份、當(dāng)歸15份、黃芪15份和薄荷5份制成的。所述的制劑為酊劑、凝膠劑、軟膏劑或搽劑。本發(fā)明所述六味防脫生發(fā)制劑的制備方法為取大黃、苦參、何首烏、當(dāng)歸、黃芪和薄荷，粉碎成粗粉，混勻，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法，用55%乙醇作溶媒，浸漬24小時(shí)后，以每分鐘23ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液，活性炭吸附，濾過、灌裝制成酊劑或者加入適量輔料制成其它制劑。六味防脫生發(fā)凝膠劑的制備方法為取大黃、苦參、何首烏、當(dāng)歸、黃芪和薄荷，粉碎成粗粉，混勻，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法，用55%乙醇作溶媒，浸漬24小時(shí)后，以每分鐘23ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液，活性炭吸附，濃縮至1020重量份，加入凝膠劑基質(zhì)900990重量份，攪拌均勻，即得。按重量份計(jì)算，所述的凝膠劑基質(zhì)由卡波姆940或97114份、甘油210份、聚乙二醇400013份、無水乙醇540份、三乙醇胺15份和水50120份組成。其制法為取卡波姆940加適量蒸餾水于研缽中研磨均勻，滴加三乙醇胺調(diào)節(jié)使成凝膠狀，再依次加入聚乙二醇4000、甘油、無水乙醇，研勻即得凝膠劑基質(zhì)。六味防脫生發(fā)軟膏劑的制備方法為取大黃、苦參、何首烏、當(dāng)歸、黃芪和薄荷，粉碎成粗粉，混勻，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法，用55%乙醇作溶媒，浸漬24小時(shí)后，以每分鐘23ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液，活性炭吸附，濃縮至1020重量份，加入冷至室溫后的軟膏劑基質(zhì)900990重量份，研磨混勻，即得。按重量份計(jì)算，所述的軟膏劑基質(zhì)由羧甲基纖維素鈉15份、甘油13份、尼泊金乙酯0.010.08份和水535份組成。其制法為取羥甲基纖維素鈉置于研缽中，加入甘油研勻，加入水815份使完全溶解；然后邊研邊加入溶有尼泊金乙酯的水溶液，研磨均勻，即得軟膏劑基質(zhì)。按重量份計(jì)算，所述的軟膏劑基質(zhì)也可以由硬脂酸1018份、單硬脂酸甘油酯36份、蓖麻油1830份、甘油817份、三乙醇胺13份、對(duì)羥基苯甲酸乙酯0.080.4份和水313份組成。其制法為取硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、蓖麻油和對(duì)羥基苯甲酸乙酯在506(TC加熱攪拌熔化，得油相基質(zhì)，另將甘油、三乙醇胺、水在506(TC加熱攪拌熔化，得水相基質(zhì)，將油相基質(zhì)緩緩加入水相基質(zhì)中，并不斷攪拌，混勻，即得軟膏劑基質(zhì)。六味防脫生發(fā)搽劑的制備方法為取大黃、苦參、何首烏、當(dāng)歸、黃芪和薄荷，粉碎成粗粉，混勻，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法，用55%乙醇作溶媒，浸漬24小時(shí)后，以每分鐘23ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液，活性炭吸附，濃縮至1020重量份，加入水或甘油或乙醇或植物油900990重量份，混勻，過濾，即得。本發(fā)明所述六味防脫生發(fā)制劑的質(zhì)量檢測方法包括鑒別和含量測定，其中鑒別包括對(duì)制劑中大黃和苦參的薄層色譜鑒別；含量測定是用高效液相色譜法測定制劑中2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-{3-D-葡萄糖苷的含量。大黃的鑒別方法是以大黃對(duì)照藥材和大黃酸對(duì)照品為對(duì)照，以正已烷乙酸乙酯甲酸=30:io:o.5為展開劑的薄層色譜法；苦參的鑒別方法是以苦參堿對(duì)照品為對(duì)照，以三氯甲烷甲醇濃氨試液=20:2.4:o.8、icrc以下放置的下層溶液為展開劑的薄層色譜法。2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-e-D-葡萄糖苷的含量測定方法是以2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-o-e-D-葡萄糖苷對(duì)照品為對(duì)照，以乙腈水=23:77為流動(dòng)相的高效液相色譜法。所述的質(zhì)量檢測方法包括鑒別(1)取本制劑20ml，水浴上揮去乙醇，加乙醚提取2次，每次15ml，合并乙醚液，濃縮至lml作為供試品溶液；另取大黃對(duì)照藥材0.2g，加乙醚10ml振搖提取20分鐘，濾過，濾液揮至約lml，作為對(duì)照藥材溶液；再取大黃酸對(duì)照品，加乙醚制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國藥典附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各510yl，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以正已烷乙酸乙酯甲酸=30:io:o.5為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的一個(gè)斑點(diǎn)；置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；(2)取本制劑20ml，水浴上揮干，加25ml氯仿和0.3ml濃氨試液溶解，濾過，濾液揮至lml，作為供試品溶液；另取苦參堿對(duì)照品，加氯仿制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國藥典附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各510yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷甲醇濃氨試液=20:2.4:o.8、icrc以下放置的下層溶液為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；含量測定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)用十八烷基硅膠為填充劑；乙腈水=23:77為流動(dòng)相；柱溫4(TC;檢測波長為320nm;理論塔板數(shù)按2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-{3-0-葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000;對(duì)照品溶液的制備取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-{3-0-葡萄糖苷對(duì)照品適量，精密稱定，用50%乙醇溶解，制成每lml約含O.lmg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備精密量取本制劑5ml，置50ml量瓶中，力n50。/。乙醇30ml，密塞，超聲提取10分鐘，取出放冷至室溫，用50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法精密吸取上述三種溶液各10yl，注入液相色譜儀，測定，即得；本制劑每lml含2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-{3-D-葡萄糖苷(C20H2209)不得少于0.12mg。中醫(yī)認(rèn)為脫發(fā)常由青年之人，血熱內(nèi)盛，復(fù)由心緒煩躁，七情不遂，郁久化火，火熱內(nèi)蘊(yùn)，熱盛生風(fēng)，"風(fēng)動(dòng)葉落"，毛發(fā)因之禿落。所以青少年患本病，多為內(nèi)熱所致，其治療亦應(yīng)以清熱涼血，祛風(fēng)生發(fā)之劑。切不可妄服補(bǔ)藥。否則越補(bǔ)越熱，越熱則發(fā)越落。精神情緒變化是本病的重要原因之一，這點(diǎn)上中西醫(yī)是一致的。只要在日常生活中盡量保持情緒的穩(wěn)定，充足的睡眠，至少可以防止因精神刺激、疲勞過度引起的脫發(fā)。中醫(yī)對(duì)禿發(fā)早有認(rèn)識(shí)，有肝藏血、發(fā)為血之余，腎主骨，其榮原因與腎虛、血虛有關(guān)。近年來并有血瘀學(xué)說，故大凡禿法治療以補(bǔ)腎、養(yǎng)血、活血為主。其中醫(yī)分行大致有心脾氣虛型、肝腎不足型、肝郁血瘀型、氣血兩虛型?；颊呖捎舍t(yī)生辯證以養(yǎng)血補(bǔ)血、滋補(bǔ)肝腎、健脾益氣、養(yǎng)陰涼血、疏肝理氣、固澀通絡(luò)等方論治。本發(fā)明六味防脫生發(fā)制劑由大黃、苦參、何首烏、當(dāng)歸、黃芪、薄荷制成。方中，大黃、苦參，大苦大寒，驅(qū)熱燥濕，抑菌止癢，推蕩毒邪，有活血化瘀之功；首烏養(yǎng)陰補(bǔ)血，當(dāng)歸活血；黃芪甘溫，利水通痹，補(bǔ)氣，托里排毒，佐首烏、當(dāng)歸，潤血燥，活血通痹之功；輔以薄荷疏散風(fēng)熱，清頭目之品，毛孔宣散，氣運(yùn)血循，以減少油脂分泌。諸藥合用，活血化瘀，祛風(fēng)，并將養(yǎng)血，抑菌止癢，滋潤毛發(fā)寓于其中。因而該制劑具有養(yǎng)血活血、祛風(fēng)生發(fā)的功能，對(duì)氣血失和、化燥生風(fēng)而引起的頭屑增多、瘙癢癥狀有一定緩解作用。六味防脫生發(fā)酊為棕紅色至深紅色澄明液體，具有特殊氣味；其中含有一種能夠高效抑制皮脂分泌的高分子物質(zhì)，這種物質(zhì)能夠使過分活躍的皮脂腺萎縮，清除頭皮毛囊中的各種霉素，迅速制止脂溢性脫發(fā)；還能為毛發(fā)生長提供必需的營養(yǎng)物質(zhì)，激活毛囊，促進(jìn)頭皮血液循環(huán)和脫發(fā)再生。大量臨床應(yīng)用表明使用該酊劑治療脂溢性脫發(fā)35天，即可明顯產(chǎn)生頭皮變干，脫發(fā)逐漸減輕的療效；使用2030天左右，就能夠完全抑制脫發(fā)，并有大量新發(fā)萌生；使用34個(gè)月，毛囊尚未完全壞死的患者，脫發(fā)、白發(fā)的癥狀就會(huì)得到較大程度的恢復(fù)與改善。本制劑外用擦搽脫發(fā)部位，以透皮給藥的原理，深度滲入皮層，促進(jìn)血液循環(huán)，促進(jìn)毛發(fā)再生，對(duì)脂溢性脫發(fā)、生理性脫發(fā)、中青年頭發(fā)早白功效奇特。對(duì)斑禿、全禿、普禿、白發(fā)、少白頭、頭屑過多、頭皮瘙癢亦有奇特功效。六味防脫生發(fā)酊的五步療法減少表皮油脂，改善皮下血運(yùn)；直接松弛血管平滑肌，擴(kuò)張毛細(xì)血管，促進(jìn)皮下微循環(huán)，改善毛發(fā)生長環(huán)境；依靠特有的高分子物質(zhì)，增強(qiáng)毛囊細(xì)胞的含氧量，激活毛囊細(xì)胞的再生能力，促進(jìn)毛囊黑色素的生成；利用所含有的多種氨基酸和微量元素，直接向毛囊提供營養(yǎng)，促使毛囊由休眠期向生長期轉(zhuǎn)化；長出新發(fā)，白發(fā)變黑。為了驗(yàn)證本發(fā)明六味防脫生發(fā)制劑的效果，申請(qǐng)人以六味防脫生發(fā)酊為例進(jìn)行了臨床試驗(yàn)研究，應(yīng)用純中藥配制的"六味防脫生發(fā)酊"外用涂劑，取得了明顯的防脫發(fā)和生發(fā)、去屑止癢等功效，并與單純使用生發(fā)酊(北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠)治療的患者進(jìn)行對(duì)照，前者效果滿意，現(xiàn)總結(jié)如下1、臨床資料脫發(fā)患者共126例，隨機(jī)分成兩組，兩組在年齡，脫發(fā)范圍及病程長短上無顯著差異。治療組用六味防脫生發(fā)酊治療共68例，其中男36例，女30例，年齡17-65歲，病程O.7-13年;對(duì)照組共56例，其中男32例，女28例，年齡16.5-67歲，病程l.5-10年。兩組患者屬濕性脂溢性脫發(fā)70例，干性脂溢性脫發(fā)54例。前額對(duì)稱脫發(fā)較頭頂正中為多。皮損處頭皮油膩發(fā)亮，有大量頭皮屑，呈灰白色碎小糠皮狀，或頭皮干燥缺乏光澤，自覺瘙癢。1.1治療方法治療組患者外用六味防脫生發(fā)酊將藥液輕輕涂患處，最后用手指在涂藥處輕輕扣擊5-10分鐘，每日l-2次，30d為l個(gè)療程，連續(xù)治療4個(gè)療程。對(duì)照組患者外用生發(fā)酊(北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠)用藥棉蘸藥擦患處，3次/d。所有患者治療前及治療后4個(gè)月隨訪記錄結(jié)果，停藥后評(píng)定療效。1.2觀察指標(biāo)脂溢性脫發(fā)患者觀察治療前、后脫發(fā)程度、頭皮瘙癢、鱗屑、皮脂及每平方厘米新生毛發(fā)數(shù)量。毳毛樣發(fā)是否變粗、黑、硬、長等。斑禿患者觀察用藥前、后局部表現(xiàn)，如脫發(fā)區(qū)是否光滑，有無毳毛、終毛，毳毛、終毛占脫發(fā)區(qū)比例等。每月復(fù)診1次。1.3療效判定標(biāo)準(zhǔn)痊愈脫發(fā)區(qū)恢復(fù)正常，無瘙癢感；顯效脫發(fā)明顯減少或恢復(fù)正常，頭屑、瘙癢消失，患處有明顯新發(fā)生長或原毳毛樣發(fā)變粗、黑、硬、長，外觀明顯改善;有效脫發(fā)、頭屑減少，瘙癢減輕，患處有新發(fā)生長，外觀有所改善；無效脫發(fā)、頭屑略減少或無變化，瘙癢略輕或同前，無新發(fā)生長，外觀改善不明顯。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)采用X2檢驗(yàn)，以P判定有無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、結(jié)果兩組治療效果(見表1)兩組患者4周痊愈率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X^10.7324，P〈0.01)，治療組總有效率為57.35%，對(duì)照組為33.93%，兩組療效經(jīng)乂2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=6.7683，P〈0.01)。表l兩組患者臨床療效比較(例，％)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注P〈0.05。3、討論六味防脫生發(fā)酊劑的最初效果表現(xiàn)為固發(fā)，即停止脫發(fā)或脫發(fā)減少，隨后出現(xiàn)生發(fā)、長發(fā)，即先生出毳毛樣發(fā)，再逐漸變?yōu)榻K毛，或毳毛樣發(fā)逐漸變黑、粗、硬、長。該藥除有固發(fā)、生發(fā)作用外，對(duì)頭皮瘙癢、頭屑、皮脂過多都有不同程度的治療作用，使瘙癢消失或減輕，頭屑消退或減少。該藥能使頭部過多的皮脂減少，使部分頭部皮脂少而干燥者變?nèi)釢?。本試?yàn)中未發(fā)現(xiàn)明顯不良反應(yīng)。六味防脫生發(fā)酊為純中藥制劑，具有養(yǎng)血活血、祛風(fēng)生法之功。對(duì)氣血失和、化燥生風(fēng)而引起的頭屑增多，瘙癢癥狀有一定緩解作用，配合適當(dāng)?shù)陌茨继幰约訌?qiáng)毛囊微循環(huán)，改善毛發(fā)營養(yǎng)，促進(jìn)毛發(fā)生長和藥物吸收，有更好的生發(fā)固發(fā)效果。為了確保本發(fā)明質(zhì)量檢測方法的科學(xué)、有效、合理，申請(qǐng)人也對(duì)其進(jìn)行了相關(guān)的試驗(yàn)研究原防脫生發(fā)靈[黔衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1993)L第29號(hào)]的質(zhì)量檢測標(biāo)準(zhǔn)(貴州省衛(wèi)生廳文件[黔衛(wèi)藥字(93)第476號(hào)]}中沒有含量測定項(xiàng)目，且未明確處方量及詳細(xì)制法。本發(fā)明六味防脫生發(fā)制劑處方中含有的何首烏為方中主藥，為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，申請(qǐng)人對(duì)其含量測定進(jìn)行了方法學(xué)研究。處方中的何首烏為主要成分，參考《中國藥典》2005版何首烏藥材檢測成分為2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-{3-D-葡萄糖苷(C20H2209)，選擇何首烏所含2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-{3-D-葡萄糖苷(C20H2209)含量為指標(biāo)，對(duì)本發(fā)明制劑中2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-{3-D-葡萄糖苷(C20H2209)的高效液相含量測定方法進(jìn)行了精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、回收率試驗(yàn)線性范圍等項(xiàng)目的研究，建立了行之有效的含量測定方法，以控制產(chǎn)品質(zhì)量。1、儀器與試藥儀器島津prominenceLC-10Atvp高效液相色譜儀色譜柱Hypersil-ODSC18(4.6X150mm)HS10260D超聲波清洗機(jī)(260W，40KHZ，天津市恒澳科技發(fā)展有限公司)AUW120D電子天平(十萬分之一，日本島津公司)試藥2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-{3-D-葡萄糖苷(C20H2209)對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)100080-200306)六味防脫生發(fā)酊樣品及何首烏陰性樣品；一般用乙腈為分析純，流動(dòng)相用乙腈為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。2、測定條件的選擇供試品溶液的制備精密吸取本發(fā)明酊劑5ml，置50ml量瓶中，力n50。/。乙醇30ml，密塞，超聲提取10min，取出放冷至室溫，用50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。3、色譜條件的確定參照相關(guān)資料2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-{3-D-葡萄糖苷(C20H2209)含量測定項(xiàng)下方法，2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-{3-D-葡萄糖苷(C20H2209)在320nm處有較大吸收峰，故選擇波長320nm作為測定波長。另對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行研究，用乙腈-水(23:77)為流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)，對(duì)2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-o-e-D-葡萄糖苷(C2()H2209)分離效果、理論塔板數(shù)都比較好。同時(shí)得到流速控制在1.0ml/min時(shí)，保留時(shí)間、分離度均理想，陰性樣品無干擾。故最終確定色譜條件為檢測波長為320nm;流動(dòng)相為乙腈-水(23:77);流速為1.Oml/min。4、線性關(guān)系的考察精密稱取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-{3-D-葡萄糖苷(C20H2209)對(duì)照品25.92mg，置25ml容量瓶中，力陽0%甲醇溶液溶解，定容至刻度(濃度為1.0368mg/ml)。分別精密吸取lml、lml、lml、3ml、5ml，各置于50ml、25ml、10ml、10ml、10ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，配制成不同濃度溶液，精密吸取上述5份對(duì)照品溶液各10ul，按照色譜條件進(jìn)樣，測定峰面積。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以峰面積對(duì)樣品濃度(yg/ml)進(jìn)行線性回歸計(jì)算。得線性回歸方程為2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-e-D-葡萄糖苷(C20H22O9):y=0.0000771X-1.52572058，r=0.9999，由表可知2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-e-D-葡萄糖苷(C20H2209)在20.736yg/ml518.4yg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。結(jié)果見表2:表22，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-{3-D-葡萄糖苷(C加H"0g)線性關(guān)系<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>5、精密度試驗(yàn)取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-{3-D-葡萄糖苷(C20H2209)對(duì)照品溶液(103.68yg/ml)10yl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定峰面積，2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-{3-D-葡萄糖苷(C20H22O9)的平均峰面積為1362173;RSD(%)為O.62%。結(jié)果見表3:表32，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-葡萄糖f苷(C加H"Og)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>6、樣品提取時(shí)間的考察精密吸取本發(fā)明酊劑5ml4份，置50ml量瓶中，力陽0。/。乙醇30ml，密塞，超聲處理5分鐘、IO分鐘、15分鐘、20分鐘，取出放冷至室溫，用50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取上述供試品液和對(duì)照品10ul注入液相色譜儀，測定，即得。結(jié)果如下表4超聲時(shí)間的考察<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由結(jié)果可知提取時(shí)間對(duì)含量測定結(jié)果影響不大，故選擇提取時(shí)間為10min。7、穩(wěn)定性試驗(yàn)取本發(fā)明酊劑5ml，按含量測定項(xiàng)下供試液的制備方法制備供試液，分別于0、2、4、6、8小時(shí)進(jìn)樣，測定2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-{3-D-葡萄糖苷(C20H2209)峰面積，2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-{3-D-葡萄糖苷(C20H2209)平均峰面積為187961，RSD為0.487%，說明供試液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。結(jié)果見表5。表52，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-{3-D-葡萄糖苷(&必2209)的穩(wěn)定性試驗(yàn)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>8、重復(fù)性試驗(yàn)按本發(fā)明擬定的含量測定方法，取同一批號(hào)樣品5份，精密量取5ml，按供試品溶液制備和測定項(xiàng)下的方法進(jìn)行操作，依法測定，結(jié)果如表6:表62，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-13-D-葡萄糖苷(C加H^09)的重復(fù)性試驗(yàn)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>9、回收率試驗(yàn)精密量取已知含量的本發(fā)明酊劑5份，每份3ml，分別精密加入一定量2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-{3-D-葡萄糖苷(C20H2209)對(duì)照品溶液lml(濃度l.0368mg/ml)，按照供試品溶液制備方法處理，即得5份樣品溶液。依含量測定項(xiàng)下的方法測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表7。表7加樣回收率試驗(yàn)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>平均回收率=100.186%;RSD=0.7197%試驗(yàn)表明平均回收率為101.2%，RSD=1.6%，該方法具有較好的回收率。實(shí)驗(yàn)總結(jié)經(jīng)對(duì)六味防脫生發(fā)酊中2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-{3-D-葡萄糖苷(C2oH2209)的含量測定實(shí)驗(yàn)，表明在20.736ug/ml518.4ug/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，精密度實(shí)驗(yàn)平均峰面積為1362173，RSD(%)為O.62%;穩(wěn)定性試驗(yàn)平均峰面積為187961，RSD為0.487%，說明供試液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好；重復(fù)性試驗(yàn)平均含量為O.1432，RSD為O.23%;加樣回收率試驗(yàn)平均回收率為IOO.186%，RSD=0.7197%。因此，該含量測定方法可行。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所提供的六味防脫生發(fā)制劑具有去屑止癢、防脫生發(fā)、烏發(fā)護(hù)發(fā)之功效，臨床驗(yàn)證其總有效率達(dá)96%;且防治兼顧，安全無毒，是治療脂溢性脫發(fā)理想的純中藥制劑；所述質(zhì)量檢測方法專屬性強(qiáng)，精密度高，穩(wěn)定性好，測量結(jié)果準(zhǔn)確，可有效控制六味防脫生發(fā)制劑的質(zhì)量，從而確保其臨床療效。具體實(shí)施例方式以下為實(shí)施例本發(fā)明的實(shí)施例l:六味防脫生發(fā)酊的制備大黃30g、苦參20g、何首烏15g、當(dāng)歸15g、黃芪15g、薄荷5g取以上六味，粉碎成粗粉，混勻，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(藥典附錄I0)，用55%乙醇作溶媒，浸漬24小時(shí)后，以每分鐘23ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液1000ml，活性炭吸附，濾過，灌裝，包裝，即得六味防脫生發(fā)酊。其使用方法分為外洗法和外擦法兩種。外洗法洗頭后取本制劑20ml，加溫水100ml稀釋后直接淋在頭皮及發(fā)部，并輕輕拍打23分鐘后擦干，不再?zèng)_洗；23天一次。外擦法先用熱毛巾將局部擦洗干凈，然后將藥液輕輕涂擦患處，最后用手指在涂藥處輕輕叩擊510分鐘，每日12次。治療期間，忌食煙、酒及辛辣物。對(duì)酒精過敏者禁用。本發(fā)明的實(shí)施例2:六味防脫生發(fā)凝膠劑的制備取大黃25g、苦參15g、何首烏10g、當(dāng)歸10g、黃芪10g和薄荷3g，粉碎成粗粉，混勻，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法，用55%乙醇作溶媒，浸漬24小時(shí)后，以每分鐘23ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液，活性炭吸附，濃縮至10g，加入凝膠劑基質(zhì)(由卡波姆94020g、甘油60g、聚乙二醇400020g、無水乙醇220g、三乙醇胺30g和水800g組成；取卡波姆940加適量蒸餾水于研缽中研磨均勻，滴加三乙醇胺調(diào)節(jié)使成凝膠狀，再依次加入聚乙二醇4000、甘油、無水乙醇，研勻即得)940g，攪拌均勻，即得六味防脫生發(fā)凝膠劑。該制劑外用，每次取1030g，涂擦于頭皮及發(fā)根部，23天一次。本發(fā)明的實(shí)施例3:六味防脫生發(fā)軟膏劑的制備取大黃35g、苦參25g、何首烏20g、當(dāng)歸20g、黃芪20g和薄荷7g，粉碎成粗粉，混勻，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法，用55%乙醇作溶媒，浸漬24小時(shí)后，以每分鐘23ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液，活性炭吸附，濃縮至20g，加入冷至室溫后的軟膏劑基質(zhì)(由羧甲基纖維素鈉150g、甘油100g、尼泊金乙酯2.5g和水1000g組成；取羥甲基纖維素鈉置于研缽中，加入甘油研勻，加入水800ml使完全溶解，然后邊研邊加入溶有尼泊金乙酯的水溶液，研磨均勻，即得)950g，研磨混勻，即得六味防脫生發(fā)軟膏劑。該制劑外用，每次取1030g，涂擦于頭皮及發(fā)根部，23天一次。本發(fā)明的實(shí)施例4:六味防脫生發(fā)軟膏劑的制備取大黃25g、苦參25g、何首烏10g、當(dāng)歸20g、黃芪10g和薄荷7g，粉碎成粗粉，混勻，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法，用55%乙醇作溶媒，浸漬24小時(shí)后，以每分鐘23ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液，活性炭吸附，濃縮至15g，加入冷至室溫后的軟膏劑基質(zhì)(由硬脂酸14重量份、單硬脂酸甘油酯4重量份、蓖麻油24重量份、甘油12重量份、三乙醇胺2重量份、對(duì)羥基苯甲酸乙酯0.24重量份和水8重量份組成；取硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、蓖麻油和對(duì)羥基苯甲酸乙酯在506(TC加熱攪拌熔化，得油相基質(zhì)，另將甘油、三乙醇胺、水在506(TC加熱攪拌熔化，得水相基質(zhì)，將油相基質(zhì)緩緩加入水相基質(zhì)中，并不斷攪拌，混勻，即得)920g，研磨混勻，即得六味防脫生發(fā)軟膏劑。本發(fā)明的實(shí)施例5:六味防脫生發(fā)搽劑的制備取大黃35g、苦參15g、何首烏20g、當(dāng)歸10g、黃芪20g和薄荷3g，粉碎成粗粉，混勻，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法，用55%乙醇作溶媒，浸漬24小時(shí)后，以每分鐘23ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液，活性炭吸附，濃縮至18g，加入水或甘油或乙醇或植物油980g，混勻，過濾，即得六味防脫生發(fā)搽劑。該制劑外用，每次取1030g，涂擦于頭皮及發(fā)根部，23天一次。本發(fā)明的實(shí)施例6:六味防脫生發(fā)制劑的質(zhì)量檢測方法包括以下項(xiàng)目鑒別(1)取本制劑20ml，水浴上揮去乙醇，加乙醚提取2次，每次15ml，合并乙醚液，濃縮至lml作為供試品溶液；另取大黃對(duì)照藥材0.2g，加乙醚10ml振搖提取20分鐘，濾過，濾液揮至約lml，作為對(duì)照藥材溶液；再取大黃酸對(duì)照品，加乙醚制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國藥典附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各510yl，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以正已烷乙酸乙酯甲酸=30:io:o.5為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的一個(gè)斑點(diǎn)；置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色。(2)取本制劑20ml，水浴上揮干，加25ml氯仿和0.3ml濃氨試液溶解，濾過，濾液揮至lml，作為供試品溶液；另取苦參堿對(duì)照品，加氯仿制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國藥典附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各510yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷甲醇濃氨試液=20:2.4:o.8、icrc以下放置的下層溶液為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。含量測定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)用十八烷基硅膠為填充劑；乙腈水=23:77為流動(dòng)相；柱溫4(TC;檢測波長為320nm;理論塔板數(shù)按2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-{3-0-葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。對(duì)照品溶液的制備取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-{3-0-葡萄糖苷對(duì)照品適量，精密稱定，用50%乙醇溶解，制成每lml約含O.lmg的溶液，搖勻，即得。供試品溶液的制備精密量取本制劑5ml，置50ml量瓶中，力n50。/。乙醇30ml，密塞，超聲提取10分鐘，取出放冷至室溫，用50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法精密吸取上述三種溶液各10yl，注入液相色譜儀，測定，即得。本制劑每lml含2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-{3-D-葡萄糖苷(C20H2209)不得少于0.12mg。權(quán)利要求1.一種六味防脫生發(fā)制劑，其特征在于按照重量份計(jì)算，它是用大黃25～35份、苦參15～25份、何首烏10～20份、當(dāng)歸10～20份、黃芪10～20份、薄荷3～7份制成的。2.按照權(quán)利要求l所述的六味防脫生發(fā)制劑，其特征在于按照重量份計(jì)算，它是用大黃30份、苦參20份、何首烏15份、當(dāng)歸15份、黃芪15份和薄荷5份制成的3.按照權(quán)利要求1或2所述的六味防脫生發(fā)制劑，其特征在于所述的制劑為酊劑、凝膠劑、軟膏劑或搽劑。4.如權(quán)利要求l-3中任一項(xiàng)所述六味防脫生發(fā)制劑的制備方法，其特征在于取大黃、苦參、何首烏、當(dāng)歸、黃芪和薄荷，粉碎成粗粉，混勻，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法，用55%乙醇作溶媒，浸漬24小時(shí)后，以每分鐘23ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液，活性炭吸附，濾過、灌裝制成酊劑或者加入適量輔料制成其它制劑。5.按照權(quán)利要求4所述六味防脫生發(fā)制劑的制備方法，其特征在于取大黃、苦參、何首烏、當(dāng)歸、黃芪和薄荷，粉碎成粗粉，混勻，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法，用55%乙醇作溶媒，浸漬24小時(shí)后，以每分鐘23ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液，活性炭吸附，濃縮至1020重量份，加入凝膠劑基質(zhì)900990重量份，攪拌均勻，即得凝膠劑。6.按照權(quán)利要求4所述六味防脫生發(fā)制劑的制備方法，其特征在于取大黃、苦參、何首烏、當(dāng)歸、黃芪和薄荷，粉碎成粗粉，混勻，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法，用55%乙醇作溶媒，浸漬24小時(shí)后，以每分鐘23ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液，活性炭吸附，濃縮至1020重量份，加入冷至室溫后的軟膏劑基質(zhì)900990重量份，研磨混勻，即得軟膏劑。7.按照權(quán)利要求4所述六味防脫生發(fā)制劑的制備方法，其特征在于取大黃、苦參、何首烏、當(dāng)歸、黃芪和薄荷，粉碎成粗粉，混勻，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法，用55%乙醇作溶媒，浸漬24小時(shí)后，以每分鐘23ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液，活性炭吸附，濃縮至1020重量份，加入水或甘油或乙醇或植物油900990重量份，混勻，過濾，即得搽劑。8.如權(quán)利要求l-3所述六味防脫生發(fā)制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述質(zhì)量檢測方法包括鑒別和含量測定，其中鑒別包括對(duì)制劑中大黃和苦參的薄層色譜鑒別；含量測定是用高效液相色譜法測定制劑中2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-葡萄糖苷的含量。9.按照權(quán)利要求8所述六味防脫生發(fā)制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于大黃的鑒別方法是以大黃對(duì)照藥材和大黃酸對(duì)照品為對(duì)照，以正已烷乙酸乙酯甲酸=30:io:o.5為展開劑的薄層色譜法；苦參的鑒別方法是以苦參堿對(duì)照品為對(duì)照，以三氯甲烷甲醇濃氨試液=20:2.4:o.8、icrc以下放置的下層溶液為展開劑的薄層色譜法。10.按照權(quán)利要求8所述六味防脫生發(fā)制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-e-D-葡萄糖苷的含量測定方法是以2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-o-e-D-葡萄糖苷對(duì)照品為對(duì)照，以乙腈水=23:77為流動(dòng)相的高效液相色譜法。11.按照權(quán)利要求8、9或10所述六味防脫生發(fā)制劑的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所述的質(zhì)量檢測方法包括鑒別(1)取本制劑20ml，水浴上揮去乙醇，加乙醚提取2次，每次15ml，合并乙醚液，濃縮至lml作為供試品溶液；另取大黃對(duì)照藥材0.2g，加乙醚10ml振搖提取20分鐘，濾過，濾液揮至約lml，作為對(duì)照藥材溶液；再取大黃酸對(duì)照品，加乙醚制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國藥典附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各510yi，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以正已烷乙酸乙酯甲酸=30:io:0.5為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的一個(gè)斑點(diǎn)；置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；(2)取本制劑20ml，水浴上揮干，加25ml氯仿和0.3ml濃氨試液溶解，濾過，濾液揮至lml，作為供試品溶液；另取苦參堿對(duì)照品，加氯仿制成每lml含lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國藥典附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各510yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷甲醇濃氨試液=20:2.4:o.8、icrc以下放置的下層溶液為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；含量測定色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)用十八烷基硅膠為填充劑；乙腈水=23:77為流動(dòng)相；柱溫4(TC;檢測波長為320nm;理論塔板數(shù)按2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-{3-0-葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000;對(duì)照品溶液的制備取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-{3-0-葡萄糖苷對(duì)照品適量，精密稱定，用50%乙醇溶解，制成每lml約含O.lmg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備精密量取本制劑5ml，置50ml量瓶中，力陽0。/。乙醇30ml，密塞，超聲提取10分鐘，取出放冷至室溫，用50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法精密吸取上述三種溶液各10yl，注入液相色譜儀，測定，即得；本制劑每lml含2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-葡萄糖苷C20H2209不得少于0.12mg。全文摘要本發(fā)明公開了一種六味防脫生發(fā)制劑及其制備方法和質(zhì)量檢測方法，按照重量份計(jì)算，它是用大黃25～35份、苦參15～25份、何首烏10～20份、當(dāng)歸10～20份、黃芪10～20份、薄荷3～7份制成的。本發(fā)明所提供的六味防脫生發(fā)制劑具有去屑止癢、防脫生發(fā)、烏發(fā)護(hù)發(fā)之功效，臨床驗(yàn)證其總有效率達(dá)96％；且防治兼顧，安全無毒，是治療脂溢性脫發(fā)理想的純中藥制劑；所述質(zhì)量檢測方法專屬性強(qiáng)，精密度高，穩(wěn)定性好，測量結(jié)果準(zhǔn)確，可有效控制六味防脫生發(fā)制劑的質(zhì)量，從而確保其臨床療效。文檔編號(hào)G01N30/90GK101606988SQ200910303920公開日2009年12月23日申請(qǐng)日期2009年7月1日優(yōu)先權(quán)日2009年7月1日發(fā)明者周方勇,甘曉東申請(qǐng)人:貴州百花醫(yī)藥股份有限公司