專利名稱：作為非特異疾病的通用標(biāo)記的ykl-40的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種診斷受試者中非特異疾病或紊亂存在的方法，其中測定的YKL-40 水平高于參考水平表明存在非特異疾病或紊亂。受試者可能患有多種疾病或紊亂。本發(fā) 明還涉及一種將受試者的非特異疾病或紊亂的嚴(yán)重性進(jìn)行分類的方法，其中測定的YKL-40 水平高于或低于一個或多個參考水平顯示了所述非特異疾病或紊亂的嚴(yán)重性。本發(fā)明進(jìn)一 步涉及一種可用于本發(fā)明方法的試劑盒和裝置，其包括用于測量樣品中的YKL-40水平的 工具；以及將測量的YKL-40與至少一個YKL-40參考水平進(jìn)行比較的工具。
背景技術(shù)：
每當(dāng)處理身體不適、疾病或者一種或多種癥狀時，都需要診斷潛在的疾病或紊亂。 許多癥狀可以由幾種疾病引起，包括身體和心理疾病。因此，疾病的診斷對于后續(xù)的治療 是極為重要的。在許多情況下，治療的結(jié)果取決于疾病的進(jìn)展，因此在診斷前的時間中，早 期介入是非常重要的。然而，想要患者尋求醫(yī)療救助，至少需要出現(xiàn)一些癥狀。很多時候疾 病可能在患者覺察之前發(fā)展，例如各種癌癥疾病以及生活形態(tài)疾病，如動脈粥樣硬化、冠心 病、糖尿病、高血壓、肝纖維化、慢性阻塞性肺疾病等。如果及時引入預(yù)防措施，例如改變生活方式，某些疾病可以得到更有效的治療甚 至避免。因此，參加健康普查變得越來越普遍。健康普查通常并不依賴任何癥狀作為起點。 為了給患者作出診斷，無論是癥狀已經(jīng)存在，還是與健康普查有關(guān)，醫(yī)生都需要一個起點作 為解釋?！凹t細(xì)胞沉降率”(也稱作沉降率)先前已經(jīng)被廣泛用作炎癥存在的指示劑。沉降 率是血液紅細(xì)胞在1小時內(nèi)的沉淀速率。當(dāng)存在炎性過程時，血液中高比例的纖維蛋白原 引起紅血細(xì)胞相互粘連。沉降速率是由任何原因或炎癥聚集而增大?；境两德试谂灾?稍高，并隨年齡趨于上升。然而，在無癥狀人群中，沉降速率的有效性被它的低靈敏性和特 異性所限制，但是當(dāng)存在對疾病的適度懷疑時，它已經(jīng)被作為一種疾病指數(shù)使用。目前，在炎癥初始篩選方面，生物標(biāo)記C-反應(yīng)蛋白(CRP)很大程度上已經(jīng)接替了 過去使用的沉降速率。CRP是一種急性或慢性炎癥或感染的指示劑，因此具有醫(yī)學(xué)測試價 值，反應(yīng)炎癥的存在和強(qiáng)度，但C-反應(yīng)蛋白的升高并不是任意情況的警示性診斷標(biāo)志。例 如，能夠在血清CRP水平引起陽性應(yīng)答的情況有風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡、風(fēng)濕熱、癌癥、心 臟疾病、心血管疾病、炎癥性腸病和細(xì)菌或病毒感染。然而并不是患有這些疾病的所有患者 的血清CRP水平都升高，對于這些患者來說，血清CRP水平不能用作疾病指數(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種診斷受試者的非特異疾病或紊亂存在的方法，所述方法包括i)測定從受試者獲得的樣品中的YKL-40水平；和ii)將所述YKL-40水平與YKL-40參考水平進(jìn)行比較；其中樣品中的YKL-40水平高于參考水平表明存在非特異疾病或紊亂。優(yōu)選地，
8YKL-40參考水平是通過測定健康個體樣品中的YKL-40水平而獲得的平均水平。或者， YKL-40參考水平是先前從相同受試者中測定的YKL-40水平，其中樣品中的YKL-40水平與 先前測定的YKL-40水平相比增加到1. 10倍，表明存在非特異疾病或紊亂。
本發(fā)明還涉及一種將受試者的非特異疾病或紊亂的嚴(yán)重性進(jìn)行分類的方法，所述 方法包括 i)測定從受試者獲得的樣品中的YKL-40水平；和ii)將所述YKL-40水平與一個或多個YKL-40參考水平進(jìn)行比較；其中所述非特異疾病或紊亂的嚴(yán)重性是從所述比較中推出的。優(yōu)選地，可通過測 定健康個體樣品中的YKL-40水平來提供一個或多個YKL-40參考水平?；蛘?，YKL-40的參 考水平可以是先前從相同受試者中測定的YKL-40水平。本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種診斷非特異疾病或紊亂存在的裝置，其中所述裝置包括用 于測定樣品中YKL-40水平的工具；以及用于將測定的YKL-40水平與至少一個YKL-40參考 水平進(jìn)行比較的工具。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，該裝置包括單一參考水平，其代表一臨 界值。此外，本發(fā)明涉及一套試劑盒，包括i)用于測量樣品中YKL-40水平的工具；和 ii)用于將測量的YKL-40水平與至少一個YKL-40參考水平進(jìn)行比較的工具；iii)可選地， 關(guān)于如何根據(jù)提供樣品的受試者的年齡，對YKL-40參考水平進(jìn)行年齡校正的說明。


圖1 根據(jù)年齡和性別得到的2116名健康女性和1494名健康男性的YKL-40血漿 濃度。參與者在1991-1994年血液采樣時未患已知的疾病，并且在16年追蹤期間保持健 康(即，沒有人死亡或患癌癥、缺血性心血管疾病、肝臟疾病、糖尿病、慢性阻塞性肺疾病、 哮喘、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸病和肺炎)。這些健康參與者的中值血漿YKL-40是42 μ g/ 1(2.5% -97. 5%百分位數(shù)范圍14-168μ g/L ；90 %百分位數(shù)92 μ g/L ；95%百分位數(shù) 124 μ g/L)。血漿YKL-40水平在兩種性別中都隨著年齡增大而增大(t檢驗ρ < 0. 0001)。 血漿YKL-40與年齡之間的spearman' s rho相關(guān)性是0. 41 (ρ < 0. 0001)。女性和男性之 間的血漿 YKL-40 沒有差異(Mann-Whitney U ;p = 0. 27)。圖2 :929名(463名女性和466名男性)健康參與者組中的YKL-40血漿濃度，從他 們1991-1994年檢查的血液中進(jìn)行第一次YKL-40測定，并且從2001-2003年檢查的血液中 進(jìn)行第二次YKL-40測定。平均增加在女性中為0. 5 μ g/L/年(四分位間距-0. 6-2. 1 μ g/ L/年)，男性中為0. 8 μ g/L/年(四分位間距-0. 3-2. 9 μ g/L/年)。這說明血漿YKL-40在 保持健康的受試者中是非常穩(wěn)定的，并且計算回歸稀釋比率為0. 8042。男性和女性之間沒 有統(tǒng)計學(xué)差異。圖3A 在2116名健康女性和1494名健康男性中測定YKLA-40的血漿濃度。參與者 在1991-1994年血液采樣時未患已知的疾病，并且在16年追蹤期間保持健康(即沒有人死 亡或者患癌癥、缺血性心血管疾病、肝臟疾病、糖尿病、慢性阻塞性肺疾病、哮喘、風(fēng)濕性關(guān) 節(jié)炎、炎癥性腸病和肺炎)。這些圖顯示了這些健康參與者中取決于年齡的50%百分位數(shù) 血漿YKL-40(圓圈)，70%百分位數(shù)(定義為In(血漿YKL-40) = 3. 1+0. 02X年齡(歲))， 75%百分位數(shù)(定義為In(血漿YKL-40) = 3. 2+0. 02X年齡(歲))，90%百分位數(shù)(定02X年齡(歲))，以及95%百分位數(shù)(定義為In(血漿 YKL-40) = 3. 6+0. 02X年齡(歲))。男性和女性合并。圖3B 與圖3A對應(yīng)，另外的血漿YKL-40百分位數(shù)85%百分位數(shù)(定義為In (血 漿YKL-40) = 3.4+0.02\年齡(歲))和97.5%百分位數(shù)(定義為111(血漿￥此-40)= 3. 9+0. 02X 年齡(歲))。圖4A —般人群的取決于YKL-40血漿濃度增加的壽命和存活率(分成5個等級 和10歲年齡百分位數(shù)類別0-33%百分位數(shù)、34-66%、67-90%、91-95%和96-100% )。下 面的時間刻度分別為左截斷年齡和追蹤時間。追蹤從血液采樣時開始，以死亡或者2007年 7月為結(jié)束，以先到的為準(zhǔn)。將男性和女性合并。為進(jìn)行比較，顯示了相同人群中吸煙狀態(tài) 的影響。圖4B 取決于血漿YKL-40百分位數(shù)類別、吸煙狀態(tài)、性別和年齡的絕對10年死亡 率?；诟绫竟行呐K研究1991-1994年檢查并追蹤16年的8899名參與者。P值用于 測試對數(shù)檢驗趨勢。從左至右給出了 < 50歲、50-70歲和> 70歲的各年齡組的血漿YKL-40 百分位數(shù)類別 0-33%、34-66%、67-90%、91-95%和 96-100%。圖5 16名健康受試者的YKL-40血漿濃度的個體日變化。圖6 38名健康受試者為期3周的血漿YKL-40水平的個體變化。圖7 23名受試者在4輪為期3周的測試中每輪得到的中值血漿YKL-40水平(每 一條表示每一輪每個受試者的中值)。圖8 30名健康女性為期4周采樣的個體血漿YKL-40水平，其中21名女性3年后
重復(fù)進(jìn)行。圖9A和9B 如上所見的試紙實施方式。發(fā)明詳細(xì)說明本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，YKL-40水平可以用作通用的生物標(biāo)記(物)，指示非特異疾 病或紊亂的存在。因此，通過本發(fā)明的方法，YKL-40水平可以用于診斷非特異疾病或紊亂 的存在。提供以下定義是為了簡化本發(fā)明的討論，因此不應(yīng)將它們理解為對本發(fā)明的限 制，本發(fā)明通過所附權(quán)利要求和說明書整體來限定。本文使用的術(shù)語“非特異疾病或紊亂”，“非特異疾病”或“非特異紊亂”，用于表示 任意疾病或紊亂，例如任意一種或多種疾病或紊亂，它們有待被具體地診斷為具體的疾病 或紊亂?；加蟹翘禺惣膊』蛭蓙y的受試者可以與一般人群進(jìn)行區(qū)分，因為它們不健康，即患 有某些形式的疾病或紊亂。因此，診斷非特異疾病或紊亂的存在并不提供受試者中存在的 具體疾病或紊亂的信息。本文使用的術(shù)語“通用生物標(biāo)記(物)”(general biomarker)，用于表示一種生物 標(biāo)記，其給出受試者存在疾病或紊亂的指示，與健康的受試者形成對照。通用生物標(biāo)記并不 給出關(guān)于受試者的具體疾病或紊亂的信息或診斷，而是用于初始的篩選。然而，缺乏通用生 物標(biāo)記，例如水平低于可檢測的水平，或者低于預(yù)先定義的臨界值，并不應(yīng)視為受試者中不 存在疾病或紊亂的證據(jù)。通用生物標(biāo)記可以用于給出存在疾病或紊亂的第一指示，作為進(jìn) 一步診斷具體疾病的起始點。針對炎癥廣泛使用的通用生物標(biāo)記的實例是血漿C-反應(yīng)蛋白(CRP)。CRP通常與
10初始篩選聯(lián)系使用，例如用作心臟疾病、心血管疾病、細(xì)菌感染、病毒感染等的粗略指示劑。 然而，某些患有疾病或紊亂的病人沒有血清CRP水平或血清CRP水平的增加，因此CRP水平 不能用作患有這些疾病的所有患者的疾病指數(shù)。在CRP廣泛使用并為人熟知之前，紅血球沉淀速率(通常稱作沉淀速率)被用在 初始篩選中作為炎癥的非特異性測量，即作為疾病指數(shù)。本發(fā)明的方法提供一種YKL-40形式的新型的通用生物標(biāo)記，并提供一種診斷非 特異疾病或紊亂存在的方法或分類這種非特異疾病或紊亂的嚴(yán)重性的方法。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)， YKL-40不僅可以用于確定是否存在非特異疾病或紊亂，也可以確定疾病的狀態(tài)，例如非特 異疾病或紊亂的嚴(yán)重性。換句話說，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)YKL-40水平可以用作疾病指數(shù)。因此，YKL-40 可以用于分類受試者的疾病或紊亂是朝向更嚴(yán)重還是更緩和的狀態(tài)發(fā)展。本發(fā)明人已經(jīng)發(fā) 現(xiàn)YKL-40是一種比CRP更廣泛的通用生物標(biāo)記。因此，本發(fā)明的第一方面涉及一種診斷受試者的非特異疾病或紊亂存在的方法， 所述方法包括iii)測定從受試者獲得的樣品中的YKL-40水平；和iv)將所述YKL-40水平與YKL-40參考水平進(jìn)行比較；其中樣品中的YKL-40水平高于參考水平表明存在非特異疾病或紊亂。本發(fā)明的方法是關(guān)于診斷任何疾病或紊亂的存在，例如任何一種或多種疾病或紊 亂。例如，所述疾病或紊亂可以是導(dǎo)致YKL-40水平增加的任意疾病或紊亂。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，個體中的血清或血漿YKL-40水平是長期穩(wěn)定的，不受每日或每周變化 的影響；還發(fā)現(xiàn)，該水平不受至少20分鐘的鍛煉的影響。因此，個體中的血清或血漿YKL-40 的一次測量可以用于本發(fā)明的方法中。優(yōu)選地，樣品可以獲得自受試者，例如之前已經(jīng)戒除 重度飲酒的受試者，以及例如沒有細(xì)菌感染等明顯癥狀的受試者。視需要可以在之后的時 間點(如兩周后)獲得第二次或進(jìn)一步的樣品，以確認(rèn)第一次測定的YKL-40水平的結(jié)果。應(yīng)強(qiáng)調(diào)的是，YKL-40水平的增加，例如血漿或血清中，可以反映多種或不同類型的 疾病或紊亂，并且這種YKL-40水平的增加在健康受試者中一般見不到。因此根據(jù)本發(fā)明， YKL-40可以用作一種疾病指數(shù)。本發(fā)明的第二方面涉及YKL-40作為非特異疾病或紊亂存在的生物標(biāo)記的用途。 從描述本發(fā)明的上述方法的文字中，可以明顯看出本發(fā)明這一方面的進(jìn)一步細(xì)節(jié)。因此，關(guān) 于本發(fā)明方法所提及的任意特征加以必要的更改都適用于YKL-40作為非特異疾病或紊亂 存在的生物標(biāo)記的用途。本發(fā)明還涉及一種測定受試者中存在增加的YKL-40水平的方法，例如增加的血 漿或血清YKL-40水平，所述方法包括ν)測定從受試者獲得的樣品中的YKL-40水平；和vi)將所述YKL-40水平與YKL-40參考水平進(jìn)行比較；其中樣品中的YKL-40水平高于參考水平表明所述受試者中存在非特異疾病或紊 亂。參考水平可以是本文所述的，尤其是“參考水平”部分所述的任何參考水平。該方法優(yōu) 選地用于診斷受試者中非特異疾病或紊亂的存在，例如本文描述的任意疾病或紊亂。本發(fā)明的第三方面涉及一種診斷受試者中非特異疾病或紊亂存在的方法，所述方 法包括
i)測定從受試者獲得的樣品中的YKL-40水平；和ii)將所述YKL-40水平與YKL-40參考水平進(jìn)行比較；所述參考水平是先前從相 同的受試者中測定的YKL-40水平；其中樣品中的YKL-40水平與YKL-40參考水平相比增加到1. 10倍，表明存在非特 異疾病或紊亂。從描述本發(fā)明上述第一方面的文字中可以明顯看出本發(fā)明第三方面的進(jìn)一 步細(xì)節(jié)。因此，除非另有說明，關(guān)于本發(fā)明第一方面提及的任意特征加以必要的更改都適用 于本發(fā)明的第三方面。本發(fā)明的第四方面涉及 一種分類受試者中非特異疾病或紊亂的嚴(yán)重性的方法，所 述方法包括iii)測定從受試者獲得的樣品中的YKL-40水平；和iv)將所述YKL-40水平與一個或多個YKL-40參考水平進(jìn)行比較；其中所述非特異疾病或紊亂的嚴(yán)重性是從所述比較中推出的。優(yōu)選地，一個或多 個YKL-40參考水平可以通過測量來自健康個體的樣品中的YKL-40水平來提供?；蛘撸?YKL-40參考水平可以是先前從相同受試者中測定的YKL-40水平。這種類型的參考水平將 在下文進(jìn)一步描述，尤其是在以下“參考水平”部分。本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，YKL-40水平可以作為一種生物標(biāo)記用于本發(fā)明的第四方 面，通過與一個或多個YKL-40參考水平進(jìn)行比較，用于分類非特異疾病或紊亂的嚴(yán)重性。 本發(fā)明人進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，YKL-40水平可以用作生物標(biāo)記，用于跟蹤記錄疾病或紊亂的進(jìn)展，即 疾病或紊亂朝向疾病或紊亂的更嚴(yán)重還是較緩和的階段發(fā)展，從而隨著時間的推移重復(fù)和 /或繼續(xù)分類疾病或紊亂的嚴(yán)重性。當(dāng)受試者的YKL-40測定值與一個或多個參考水平比較 時，這是特別有意義且可行的，所述參考水平是先前從相同受試者中獲得的測量值。因此， 根據(jù)本發(fā)明的方法，YKL-40水平不僅可以用于分類受試者的疾病或紊亂的嚴(yán)重性，而且可 以分類和跟蹤疾病或紊亂的嚴(yán)重性?；加邢嗤膊〉牟∪嗽诩膊?yán)重性方面具有顯著的差異(即疾病嚴(yán)重性的等級 不同)。本文使用的術(shù)語“嚴(yán)重階段”、“嚴(yán)重性”、“較緩和”和“更嚴(yán)重”用于表示嚴(yán)重的等 級，例如根據(jù)對治愈的預(yù)測、存活的預(yù)測、疾病進(jìn)展的預(yù)測，或者根據(jù)不同的預(yù)先確定的疾 病階段。這些階段可以取決于不同的癥狀、和/或傳統(tǒng)的可測量的生物標(biāo)記水平、身體功能 等。當(dāng)集中研究一個和相同受試者的疾病進(jìn)展時，則更嚴(yán)重的階段指病情的惡化；反之，與 先前確定的相比，較緩和的階段指病情的好轉(zhuǎn)，例如由于有令人滿意的治療方案。從描述本發(fā)明上述的第一或第三方面的文字中可以明顯看出本發(fā)明第四方面的 進(jìn)一步細(xì)節(jié)。因此，除非另有說明，關(guān)于本發(fā)明第一或第三方面提及的任意特征加以必要的 更改都適用于本發(fā)明的第四方面。本發(fā)明的第五方面涉及YKL-40作為一種分類疾病或紊亂的嚴(yán)重性的生物標(biāo)記的 用途。從描述本發(fā)明上述方法的文字中可以明顯看出本發(fā)明該方面的進(jìn)一步細(xì)節(jié)。因此， 關(guān)于本發(fā)明的方法所提及的任意特征加以必要的更改都適用于YKL-40作為一種分類疾病 或紊亂的嚴(yán)重性的生物標(biāo)記的用途。本發(fā)明的方法可以用于鑒別那些也可通過CRP鑒別的疾病的存在或嚴(yán)重性，而且 可以進(jìn)一步用于鑒別那些在CRP水平不產(chǎn)生響應(yīng)的疾病。因此，在本發(fā)明的一種實施方式 中，非特異疾病或紊亂是不產(chǎn)生升高的C-反應(yīng)蛋白水平的一種或多種疾病或紊亂或一組疾病或紊亂。
可以進(jìn)一步設(shè)想，本發(fā)明的方法可用作個體化醫(yī)療中與伴隨診斷試驗相關(guān)的診斷 工具。例如，這可能與YKL-40配體或用于治療疾病或紊亂的其他類型的化合物相關(guān)。本文使用的術(shù)語“改善”用于表示改進(jìn)或者變得更好；與疾病狀態(tài)的嚴(yán)重性或進(jìn)展 的緩解相關(guān)，包括它的減輕或治愈，或者感覺到的嚴(yán)重性的緩解，如相關(guān)疼痛的緩解。本文使用的術(shù)語“抗體”用于表示免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子的活性部分 或片段，如Fab和F (ab' ) 2，它們能夠與YKL-40蛋白的抗原決定簇結(jié)合。例如，抗體是完 整的免疫球蛋白分子或保留該免疫活性的片段。本文使用的術(shù)語“抗原”用于表示免疫原 性的全長YKL-40分子或者其片段。本文使用的術(shù)語“生物樣品”用于表示從受試者或個體獲得的樣品。本文使用的術(shù)語“生物標(biāo)記”用于表示特定生物學(xué)性質(zhì)如病理或生理狀態(tài)的分子 指示劑。本文使用的術(shù)語“疾病”和/或“紊亂”用于表示受試者或者個體的疾病、損傷或 紊亂。紊亂通常是先天性的疾病或損傷。本文使用的術(shù)語“受試者”和/或“個體”用于表示一種物種的單個成員，本文優(yōu) 選地表示哺乳動物物種。本文使用的術(shù)語“哺乳動物”包括人類和非人類。本文使用的術(shù) 語“病人”用于表示患有疾病或紊亂的任意個體。本文使用的術(shù)語“hnRNA”表示異核RNA。本文使用的術(shù)語“mAb”表示單克隆抗體。 本文使用的術(shù)語“mRNA”表示信使RNA。本文使用的術(shù)語“RNA”表示從天然或合成源分離的 任意類型的RNA。本文使用的術(shù)語“基本上純的”用于描述YKL-40，指基本完整的分子，其 本質(zhì)上不包含可能與YKL-40同時出現(xiàn)的其他分子。YKL-40YKL-40的命名是基于它的三個N-端氨基酸酪氨酸(Y)、賴氨酸(K)和亮氨酸(L) 及其約40kDa的分子量(Johansen et al. 1992)。人YKL-40的完整氨基酸(SEQ ID NO 2) 和編碼序列(SEQ ID NO 1)可在GenBank中找到，登錄號M80927。人YKL-40含有383個 氨基酸的單肽鏈，并且就進(jìn)化史來說是一種高度保守的肝素結(jié)合性與幾丁質(zhì)結(jié)合性血漿糖 蛋白。人YKL-40與來自幾種其他哺乳動物的同系物之間的序列同一性為豬(84%序列同 一性)，牛(83% )，山羊(83% )，綿羊(83% )，豚鼠、大鼠(80% )，小鼠(73% )。YKL-40 是“哺乳動物幾丁質(zhì)酶樣蛋白”中的一員，但是沒有幾丁質(zhì)酶活性。YKL-40的體外表達(dá)在正 常的人單核細(xì)胞中是沒有的，但是可以在巨噬細(xì)胞分化的后期通過激活的單核細(xì)胞和中性 粒細(xì)胞，通過血管平滑肌細(xì)胞、癌細(xì)胞和關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞而強(qiáng)烈地誘導(dǎo)。在體內(nèi)，YKL-40mRNA 和蛋白通過炎癥組織中的巨噬細(xì)胞亞群表達(dá)，如動脈粥樣硬化斑塊、患有巨細(xì)胞性關(guān)節(jié)炎 的個體的關(guān)節(jié)炎脈管、發(fā)炎的滑膜、肉瘤病灶，以及通過瘤周巨噬細(xì)胞表達(dá)。分子處理支配YKL-40的誘導(dǎo)，但它的確切功能尚不清楚。YKL-40是一種分泌蛋 白，表明它的活性位點很可能是細(xì)胞外；不過還沒有識別出YKL-40的特異性細(xì)胞表面或者 可溶性受體。YKL-40是成纖維細(xì)胞和軟骨細(xì)胞的生長因子，與IGF-I協(xié)同發(fā)揮作用，由TNF 和 IL-6 調(diào)控，并且需要 NF-kappaB 的持續(xù)活化(Recklies et al.，2002，Ling et al. ,2004, Recklies etal.，2005)。通過AKT的磷酸化，纖維原細(xì)胞的YKL-40處理可以抵消對TNF和 IL-I的炎性應(yīng)答，從而減弱ASKl介導(dǎo)的信號途徑。這導(dǎo)致金屬蛋白酶和IL-8表達(dá)的水平降低(Recklies et al.，2002，Ling et al.，2004，Recklies et al. ,2005) 而且，YKL-40 與 I型、II型和III型膠原結(jié)合，并調(diào)節(jié)I型膠原纖維蛋白形成的速率(Bigg et al.，2006)。 這些觀察結(jié)果表明YKL-40在炎癥環(huán)境中可能發(fā)揮保護(hù)的作用，限制細(xì)胞外基質(zhì)的降解，并 由此控制組織重塑。YKL-40還可以充當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞的化學(xué)誘導(dǎo)劑，刺激它們的遷移，并促進(jìn)血 管平滑肌細(xì)胞的遷移和粘著(Millis et al.，1986，Nishikawa et al.，2003 ；Shackelton et al.，1995)，表明了在血管形成方面的作用。YKL-40也是纖維原細(xì)胞的生長因子，并具有 抗分解作用，在組織重塑期間保護(hù)細(xì)胞外基質(zhì)(De Ceunicnck et al. , 2001. Recklies et al. ,2002, Ling et al.，2004，Recklies et al.，2005)。此外，動脈粥樣硬化斑塊中的巨噬 細(xì)胞表達(dá)YKL-40mRNA，尤其是那些已經(jīng)滲透病灶深處的巨噬細(xì)胞，并且在動脈粥樣硬化癥 早期病灶的巨噬細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)最高的YKL-40表達(dá)(Boot et al.，1999)。此外，YKL-40可以 被視為一種急性期蛋白，因為它的血漿或血清濃度在幾種炎癥疾病中是增大的。
介導(dǎo)YKL-40的生物效應(yīng)的細(xì)胞受體尚不知，但是胞漿內(nèi)信號傳導(dǎo)途徑的激活表 明YKL-40與細(xì)胞膜上的信號組件發(fā)生相互作用。本發(fā)明的一個目的是檢測YKL-40基因的任意轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，該基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可能 是YKL-40蛋白的hnRNA、mRNA、全長蛋白、片段蛋白、或肽?？梢岳斫獾氖?，可同時檢測一種 或多種蛋白、RNA轉(zhuǎn)錄物、片段和/或肽。本發(fā)明的另一方面是通過任意可得的手段檢測轉(zhuǎn) 錄產(chǎn)物，例如通過免疫分析檢測YKL-40蛋白、其片段或肽的抗體等，以及通過基于PCR的分 析進(jìn)行檢測，例如通過RT-PCR檢測RNA。YKL-40 的檢測本發(fā)明的肽和核苷酸包括YKL-40的功能衍生物、YKL-40肽及其編碼核苷酸。“功 能衍生物”表示分子的“片段”、“變體”、“類似物”或“化學(xué)衍生物”。分子的“片段”，例如本 發(fā)明的任意DNA序列，包括該分子的任意核苷酸子集。這類分子的“變體”是指基本上與整 個分子或其片段相似的天然產(chǎn)生的分子。分子的“類似物”指基本上與整個分子或其片段 相似的非天然分子。如果兩個分子的氨基酸序列基本相同，則認(rèn)為一個分子與另一分子“基本相似”。 基本相似的氨基酸分子具有相似的生物活性。因此，假定兩種分子具有相似的活性，即使其 中一個分子含有另一分子中沒有的另外的氨基酸殘基，或者氨基酸殘基的序列不一致，它 們也被視為本文使用的術(shù)語“變體”。此外，當(dāng)分子含有另外的通常不是分子一部分的化學(xué)基團(tuán)時，該分子被看作是另 一分子的“化學(xué)衍生物”。這類基團(tuán)可以改善分子的溶解性、吸收、生物半衰期等?；蛘?， 該基團(tuán)也可降低分子的毒性，消除或者減輕分子的任意未知的副作用等。能夠調(diào)節(jié)這種 作用的基團(tuán)己經(jīng)被公開，例如 Remington’ s Pharmaceutical Sciences, 16th Ed. , Mack Publishing Co.，Easton, Pa.，1980。YKL-40 一級氨基酸序列的微小修飾可能產(chǎn)生與本文所述的YKL-40肽具有基本相 似的活性的多肽和蛋白。這種修飾可以是有意設(shè)計的，如通過定位誘變，或者可以是無意識 的。通過這些修飾產(chǎn)生的所有的肽都包含在本文中，只要YKL-40的生物活性仍然存在。此 夕卜，一個或多個氨基酸的缺失也可以導(dǎo)致對所得的分子結(jié)構(gòu)的修飾，而不顯著改變它的生 物活性。這樣可以開發(fā)具有更廣用途的更小的活性分子。例如，可以除去氨基或羧酸末端 的氨基酸，對于酶發(fā)揮令人滿意的催化或抗原活性來說，可能不需要這些氨基酸。
無論多克隆還是單克隆抗體都可用于本發(fā)明下述的免疫分析和治療方法中。某些 抗YKL-40抗體可以商業(yè)購買，或者可根據(jù)本文描述或本領(lǐng)域已知的方法產(chǎn)生。通過將基本 上純的YKL-40或者抗原YKL-40肽多次皮下或者肌肉內(nèi)注射到適宜的非人哺乳動物中，可 以產(chǎn)生多克隆抗體。YKL-40肽的抗原性可以通過常規(guī)的技術(shù)來測定，以確定用該肽免疫過 的動物的抗體應(yīng)答的程度。一般而言，用于產(chǎn)生抗YKL-40抗體的YKL-40肽通常應(yīng)該誘導(dǎo) 產(chǎn)生高滴度抗體，該抗體對YKL-40有相對高的親和力。在本發(fā)明的一種實施方式中，使用 試紙測定YKL-40水平。視需要，免疫肽可以使用本領(lǐng)域熟知的技術(shù)通過偶聯(lián)作用與載體相連接。這類 常用的可以與肽化學(xué)偶聯(lián)的載體包括鑰孔戚血藍(lán)素(KLH)、甲狀腺球蛋白、牛血清白蛋白 (BSA)以及破傷風(fēng)類毒素。然后，將偶聯(lián)的肽用于免疫動物(如小鼠或兔子)。因為YKL-40 可保存在哺乳動物物種中，優(yōu)選的是使用載體蛋白以增強(qiáng)YKL-40蛋白的免疫原性。
然后，從取自哺乳動物的血液樣品中獲得抗體。用于開發(fā)多克隆抗體的技術(shù)是 本領(lǐng)域己知的，例如 Methods of Enzymology, ‘‘ Production of Antisera WithSmall Doses of Immunogen :Multiple Intradermal Injections" , Langone,et al. eds. (Acad. Press, 1981)。由動物制備的多克隆抗體可以進(jìn)一步被純化，例如通過將產(chǎn)生抗體的肽與基 質(zhì)結(jié)合并從基質(zhì)中洗脫。本領(lǐng)域的技術(shù)人員知曉免疫領(lǐng)域中常用的純化和/或濃縮多克隆 抗體及單克隆抗體的多種技術(shù)，例如見Coligan，et al.，Unit 9，Current Protocols in Immunology, Wiley Interscience,1991。然而，優(yōu)選地，產(chǎn)生的YKL-40抗體為單克隆抗體(“mAb' s”)。對制備單克隆抗 體來說，優(yōu)選的是免疫小鼠或大鼠。本發(fā)明使用的術(shù)語“抗體”包括完整分子及其片段，例 如能夠與抗原決定簇結(jié)合的Fab和F(ab' )2。同時，在本文中，術(shù)語“本發(fā)明的mAb‘ S”指 對于YKL-40具有特異性的單克隆抗體。用于生產(chǎn)分泌mAbs的雜交瘤細(xì)胞的一般方法是眾所周知的(Kohler and Milstein，1975)。簡而言之，如Kohler和Milstein所述，該技術(shù)包括從5名單獨患有黑 素瘤、畸胎癌或子宮癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤或肺癌的癌癥病人的局部引流淋巴結(jié)中分離淋巴細(xì)胞 (此處樣品是從手術(shù)樣本中獲得)；將細(xì)胞集中；以及將細(xì)胞與SHFP-I融合。雜交瘤細(xì)胞經(jīng) 篩選，用于生產(chǎn)與癌細(xì)胞系結(jié)合的抗體。mAb' s中YKL-40特異性的確認(rèn)可以用相對常規(guī)的篩選技術(shù)來完成(例如酶聯(lián) 免疫吸附分析，或“ELISA”)，以確定所關(guān)注的mAb的基本反應(yīng)模式。還可能用于評估一種 mAb，在沒有過度試驗的情況下，通過確定被測試的mAb是否防止本發(fā)明的mAb與所述分離 的YKL-40相結(jié)合，以確定是否具有與本發(fā)明mAb同樣的特異性。如果被測試的mAb與本發(fā) 明的mAb競爭，本發(fā)明mAb顯示的結(jié)合下降，那么有可能是這兩種單克隆抗體結(jié)合相同的或 密切相關(guān)的表位。確定一種mAb是否具有本發(fā)明mAb的特異性的另一種方法是用通常能 與mAb反應(yīng)的抗原來預(yù)孵育本發(fā)明的mAb，并確定被測試的mAb與抗原結(jié)合的能力是否被抑 制。如果被測試的mAb被抑制，那么很可能它具有與本發(fā)明的mAb相同或密切相關(guān)的表位 特異性。免疫分析方法使用的免疫分析方法必須是定量的，使得患病個體的YKL-40的水平可以與健康 人中存在的正常水平和/或該個體中測量的背景水平相區(qū)別。因此，優(yōu)選的是在固相上使用可檢測的標(biāo)記(直接或間接)的競爭性和夾心分析法。該標(biāo)記會提供一種檢測信號，指 示抗體與YKL-40抗原的結(jié)合?？贵w或抗原可以用本領(lǐng)域已知的任意標(biāo)記物來標(biāo)記以提供 檢測信號，包括放射性同位素、酶、熒光分子、化學(xué)發(fā)光分子、生物發(fā)光分子和膠體金。在已 知的分析方法中，對于靈敏度而言，放射免疫分析(RIA)或者酶聯(lián)免疫分析(ELISA)是最優(yōu) 選的。因此，放射性同位素是優(yōu)選的標(biāo)記。 因此，在本發(fā)明方法的具體實施方式
中，YKL-40水平是用免疫分析法來測定。在 一種實施方式中，免疫分析是競爭性免疫分析。在本發(fā)明的一種實施方式中，免疫分析使用單克隆抗體來測定YKL-40。在本發(fā)明 另一種實施方式中，免疫分析使用多克隆抗體來測定YKL-40。當(dāng)本發(fā)明的方法使用免疫分析法時，則可使用檢測標(biāo)記來測定YKL-40，該檢測標(biāo) 記選自放射性同位素、酶、熒光分子、化學(xué)發(fā)光分子、生物發(fā)光分子和膠體金屬?？梢灾苯优c抗體結(jié)合、或間接與YKL-40抗原結(jié)合的金屬離子的實例是本領(lǐng)域技 術(shù)人員熟知的，包括125I、mIn、97RU、67Ga、68Ga、72AS、89Zr、9°Y和2tllTL考慮到易于連接且不損 害抗原結(jié)合特異性，優(yōu)選的是125I (鈉鹽，Amersham, United Kingdom)。用125I標(biāo)記YKL-40 可按照SalacinskLetal. (1981)中描述的方法進(jìn)行。用于提供125I標(biāo)記的Iodogen (1，3， 4,6- Hit -3 α ,6 α - 二苯基昔月尿)可購自 Pierce and Warriner, Chester, England。在本發(fā)明優(yōu)選的實施方式中，YKL-40的血漿水平可以通過雙位點夾心型酶聯(lián)免 疫吸附分析(ELISA)(如商業(yè)的Quidel，California, USA)以一式兩份進(jìn)行測定(Harvey et al.，1998)，使用鏈霉親合素包被的微孔板、生物素化的Fab單克隆捕獲抗體、以及堿 性磷酸酶標(biāo)記的多克隆檢測抗體。當(dāng)使用Quidel時，ELISA的回收率是102%，檢測限是 10μ g/L。本文中靈敏度定義為等于零結(jié)合值的標(biāo)準(zhǔn)偏差的2倍的可檢測質(zhì)量。標(biāo)準(zhǔn)曲線在 20-300 μ g/Ι之間一般是線性的。批內(nèi)變異系數(shù)是5% (在401^/1時)、4% (在104 μ g/ L時)、4% (在155 μ g/L時)。批間變異系數(shù)<6%。本發(fā)明的另一種實施方式使用放射性免疫測定法，其中將標(biāo)準(zhǔn)品或樣品與基本上 等體積的YKL-抗血清和YKL-40示蹤物一起孵育。標(biāo)準(zhǔn)品和樣品通常一式兩份進(jìn)行分析。 本發(fā)明分析的靈敏度(檢測限)為約lOyg/Ι。本文中的靈敏度定義為等于零結(jié)合值的標(biāo) 準(zhǔn)偏差2倍的可檢測質(zhì)量。標(biāo)準(zhǔn)曲線在20-100 μ g/Ι之間一般是線性的。以下實施例中描 述的分析的批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)分別為< 6. 5%和< 12%。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，雖然不一定像RIA那樣靈敏，但使用放射性同位素以 外的標(biāo)記物的分析程序也具有某些優(yōu)勢，因此可被采用作為RIA設(shè)計的替代方案。例如，酶聯(lián)免疫吸附分析(ELIAS)容易自動化，使用易于從許多研究和臨床實驗 室中獲得的ELISA微量滴定板讀取器和試劑。熒光、化學(xué)發(fā)光和生物發(fā)光標(biāo)記具有可以 視覺檢測的優(yōu)點，不過在分析中它們不像放射性同位素那樣用于定量被抗體結(jié)合的抗原數(shù) 量?；赑CR的分析此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，免疫分析法以外的方法也可用于檢測和定量生 物樣品中YKL-40的存在。例如，編碼YKL-40的多肽可用本領(lǐng)域已知的定量聚合酶鏈反應(yīng) (PCR)方法來檢測。因此，在本發(fā)明方法的一種實施方式中，YKL-40水平是以基于PCR的分 析法來測定。進(jìn)行定量PCR的優(yōu)選方法是使用競爭模板進(jìn)行的競爭性PCR技術(shù)，競爭模板含有一個或多個堿基對的誘導(dǎo)突變，導(dǎo)致競爭體在序列或大小方面不同于目標(biāo)YKL-40基 因模板。其中一種引物是生物素化的、或者優(yōu)選地是氨基化的，使得所得PCR產(chǎn)物的一條鏈 (通常是反義鏈)可以通過氨基_羧基、氨基_氨基、生物素_鏈親合素或其他適宜的與固 體載體的緊密結(jié)合進(jìn)行固定，該固體載體已經(jīng)與適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)物緊密結(jié)合。最優(yōu)選地，PCR產(chǎn) 物、固相載體以及反應(yīng)物之間的結(jié)合是共價結(jié)合，這樣能可靠地使鍵在變性條件下抵抗解 偶聯(lián)。
一旦PCR產(chǎn)物的氨基化或生物素化的鏈被固定，未結(jié)合的互補(bǔ)鏈就在堿性變性洗 滌中分離出來，并從反應(yīng)環(huán)境中除去。將與目標(biāo)和競爭核酸相對應(yīng)的序列特異性寡核苷酸 ("SSO' S”)用檢測標(biāo)簽進(jìn)行標(biāo)記。然后，SSO' S與反義鏈進(jìn)行雜交，不存在已除去的未 結(jié)合的正義鏈的競爭。添加合適的分析試劑，并且通過ELISA測定工具測定雜交的程度，該 工具與使用的檢測標(biāo)簽和固相載體工具是相稱的，優(yōu)選地為ELISA酶標(biāo)儀。將測定值與衍 生的目標(biāo)核酸含量使用單獨來自PCR反應(yīng)擴(kuò)增模板的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，所述模板包含目 標(biāo)模板和競爭性模板。該方法是具有優(yōu)勢的，因為它是定量的，不依賴于PCR循環(huán)的次數(shù)， 并且不受SSO探針與PCR產(chǎn)物的互補(bǔ)鏈之間競爭的影響?；蛘撸糠志酆喜襟E與整個雜交步驟可以在固相載體上進(jìn)行。在該方法中，捕獲在 固相載體上的是核苷酸聚合引物(優(yōu)選寡糖)，而不是PCR產(chǎn)物的鏈。然后，將目標(biāo)和競爭 性核酸PCR產(chǎn)物添加到固相載體上，并進(jìn)行聚合步驟。將聚合產(chǎn)物的未結(jié)合的正義鏈在上 述變性條件下除去。通過標(biāo)記的寡糖SSO探針的檢測，使用合適的測定方法(優(yōu)選ELISA閱讀器)和 之前所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以確定目標(biāo)核酸與競爭性核酸的比率。該方法的效率很高使得聚 合步驟中的鏈反應(yīng)可以是非必需的，從而縮短完成該方法所需要的時間。該方法的精確度 也得到增強(qiáng)，因為最終的聚合產(chǎn)物不必從反應(yīng)管轉(zhuǎn)移到固相載體上用于雜交，從而限制了 它們受損失或損害的可能性。然而，對具體樣品來說，如果需要，PCR可在單獨的反應(yīng)管中 用于擴(kuò)增目標(biāo)和競爭性核酸，接著在固相載體上進(jìn)行最后的聚合。在反應(yīng)的最后幾個周期中，可以向反應(yīng)液中添加一些本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的分 子，該分子能夠提供不同的可檢測信號，指示結(jié)合的PCR產(chǎn)物的形成(例如標(biāo)記的核苷酸發(fā) 色團(tuán)，其可以形成不同的顏色，指示目標(biāo)和競爭性PCR產(chǎn)物的形成)。目標(biāo)和競爭性核酸之 間的比率也可以通過ELISA或其他適宜的測定方法以及與檢測標(biāo)簽反應(yīng)的試劑來測定，所 述檢測標(biāo)簽與固定的雜交引物的3’端相連。通過進(jìn)行常規(guī)的非競爭性PCR，該方法還可適 用于檢測樣品中是否存在特定的基因(不進(jìn)行定量)。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員知道或者可易于確認(rèn)，如何選擇合適的底物用于上述的方 法。至于上述技術(shù)的進(jìn)一步細(xì)節(jié)，可參考Kohsaka，et al.，Nuc. Acids Res. ,21 :3469_3472， 1993 ；Bunn, etal.，U. S. Pat. No. 5，213，961 以及 tonnis，et al.，PCRProtocols :A Guide to Methods and Applications，Acad. Press，1990中公開的內(nèi)容，本文將其中的內(nèi)容納入， 僅為了說明定量PCR方法相關(guān)領(lǐng)域的現(xiàn)有技術(shù)。參考水平Y(jié)KL-40的水平提高表示存在非特異疾病或紊亂，因此可以用于診斷此種非特異疾 病或紊亂的存在。通過將測定的值與參考水平值進(jìn)行比較，可確定給定的受試者的YKL-40 水平是否提高。參考水平還可以是一個或多個參考水平，例如每個參考水平反映非特異疾病或紊亂的增強(qiáng)的嚴(yán)重性，或者例如參考水平可以是先前從相同受試體的樣品中測量獲得 的一個或多個參考水平。例如，先前已經(jīng)針對各種疾病或從健康個體中報道了 YKL-40水平，由此給出正常 水平的指示。然而，先前報道的來自健康個體的“正常"YKL-40水平，在后續(xù)隨著時間推移得 不到支持時，可以研究該健康個體是否隨時間推移而保持健康。相應(yīng)地，先前報道的YKL-40 水平包括那些在采樣時潛在地患有未被識別的疾病的個體，因此報道的YKL-40水平不能 代表真實的“正常水平”。例如，在不考慮年齡影響的情況下，這種先前報道的來自健康個體 的YKL-40水平也可以報道為平均水平。從本發(fā)明中包含的實施例中可以看出，本發(fā)明已經(jīng)建立一種表達(dá)真實的“正常水 平”的方法。該正常水平的識別是以大量健康個體為基礎(chǔ)，并且隨時間推移對這些個體進(jìn)行 追蹤，以證實他們是否為真的“健康個體”。本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，識別的“正常水平”可以 根據(jù)本發(fā)明的方法用于診斷受試者中疾病或紊亂的存在，例如非特異疾病或紊亂。本發(fā)明 人還發(fā)現(xiàn)，年齡對YKL-40水平有很大的影響，因此在使用本發(fā)明的方法時需要考慮年齡。YKL-40的參考水平可以用多種方式表示；傳統(tǒng)地，參考水平可來自不同年齡的健 康個體組。本發(fā)明人已經(jīng)研究了年齡對YKL-40水平的影響，并且發(fā)現(xiàn)測量的YKL-40水平 最好與特定年齡組進(jìn)行相比。 個體的特定年齡組可包括所有出生在同年或十年內(nèi)的個體或任意其他分組，例如 包括年齡0-10歲，年齡10-20歲，年齡20-30歲，年齡30-40歲，年齡40-50歲，年齡50-60 歲，年齡60-70歲，年齡70-80歲，年齡80-90歲，年齡90-100歲等個體的組。間隔可以是 相隔2歲的年齡差異，3、4或5歲的年齡差異，6、7、8、9、10歲的年齡差異(如上所寫)，12、 15,20或更多歲的年齡差異。所述間隔還可以是開放式的，例如個體都大于20、30、40、50、 60或其他年齡。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，男性和女性的血漿YKL-40水平之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異(見本文實施 例1)。因此，形成參考水平的計算基礎(chǔ)的個體組可以是混合性別或相同性別的個體組。參 考水平也可從當(dāng)前正待診斷疾病或紊亂存在的相同個體中獲得。例如，YKL-40水平可以在 一個或多個樣品中測量，該樣品是在診斷疾病或紊亂之前(生病前)，或者在確立疾病或紊 亂的癥狀之前(癥狀前)獲得。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，YKL-40的參考水平是通過測定健康個體樣品中的 YKL-40而獲得的平均水平，更優(yōu)選地，由此獲得的平均水平是經(jīng)年齡校正的平均水平。具體來講，在本發(fā)明的一種實施方式中，平均水平是約14至約168yg/L范圍 (2.5% -97. 5%百分位數(shù)范圍)的YKL-40血漿水平，優(yōu)選小于約124 μ g/L的血漿水平 (95%百分位數(shù))，更優(yōu)選小于約92 μ g/L的血漿水平(90%百分位數(shù))。優(yōu)選地，該平均水 平是約35至約55 μ g/1的YKL-40血漿水平，例如優(yōu)選約40至約50 μ g/1。在本發(fā)明更具 體的實施方式中，中值水平是約42 μ g/1的YKL-40血漿水平。血漿YKL-40水平在兩種性 別中都隨年齡增加而增加，并且女性和男性的血漿YKL-40水平之間沒有差異。這些血漿 YKL-40水平來自大量健康受試者的樣品并通過研究大量健康受試者的樣品而得到，因此為 本發(fā)明方法中使用的血漿YKL-40水平提供了有充分根據(jù)的參考水平(見本文實施例1)。當(dāng)本發(fā)明使用年齡校正的平均水平時，則該平均水平對女性來說可通過增加 0. 5 μ g/L/年來進(jìn)行年齡校正，男性為0. 8 μ g/L/年。該年齡-校正優(yōu)選地是針對相同受試者中先前測定的YKL-40水平進(jìn)行，例如，其可以與本發(fā)明的第三或第四方面相關(guān)?；蛘撸?參考水平可以是一組YKL-40年齡依賴性參考水平，例如一個或多個YKL-40參考水平，通過 測量健康個體的年齡分布亞群的樣品的YKL-40水平而獲得，即本文以上所述的個體的年 齡特異性分組，例如都在相同10年內(nèi)出生的個體。例如，一組參考水平，每一個都是以下年 齡組中健康個體的平均YKL-40血漿水平30至39歲，40至49歲，50至59歲，60至69歲。 本文以下進(jìn)一步給出優(yōu)選的YKL-40年齡依賴性參考水平組在本發(fā)明方法的具體實施方式
中，YKL-40的一個或多個參考水平中，有一個是年 齡校正的臨界值，其對應(yīng)健康個體中測定的YKL-40的第75個百分位數(shù)。在本發(fā)明方法的另一種具體實施方式
中，YKL-40的一個或多個參考水平中，有一 個是年齡校正的臨界值，其對應(yīng)健康個體中測定的YKL-40的第85個百分位數(shù)。在本發(fā)明方法的另一種具體實施方式
中，YKL-40的一個或多個參考水平中，有一 個是年齡校正的臨界值，其對應(yīng)健康個體中測定的YKL-40的第90個百分位數(shù)。在本發(fā)明方法的另一種具體實施方式
中，YKL-40的一個或多個參考水平中，有一 個是年齡校正的臨界值，其對應(yīng)健康個體中測定的YKL-40的第95個百分位數(shù)。在本發(fā)明方法的另一種具體實施方式
中，YKL-40的一個或多個參考水平中，有一 個是年齡校正的臨界值，其對應(yīng)健康個體中測定的YKL-40的第97. 5個百分位數(shù)。在本發(fā)明方法的優(yōu)選實施方式中，YKL-40的一個或多個參考水平包括由測量健康 個體樣品中的YKL-40水平而獲得的一組YKL-40參考水平第一參考水平是YKL-40的中位 值，第二參考水平是YKL-40的第75個百分位數(shù)，第三參考水平是YKL-40的第85個百分位 數(shù)，第四參考水平是YKL-40的第90個百分位數(shù)，第五參考水平是YKL-40的第95個百分位 數(shù)，第六參考水平是健康個體中YKL-40的第97. 5個百分位數(shù)，第七參考水平是YKL-40的 中位值的4. 5倍，第八參考水平是健康個體中YKL-40的中位值的5倍。另一種具體說明參考水平的方法是使用臨界值。臨界值一般是將許多個體分成兩 組的值一組具有高于具體臨界值的YKL-40水平，一組具有低于具體臨界值的YKL-40水 平。臨界值可以是代表生理YKL-40水平的任意數(shù)值，該生理YKL-40水平可以在任意類型 的生物樣品中測定，或者由該領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員進(jìn)行選擇。臨界值可用作個體是否屬于某一類別的是或否的指示劑，對本發(fā)明來說，它與非 特異疾病或者與非特異疾病或紊亂的不同階段的嚴(yán)重性相對應(yīng)(與本發(fā)明的第四方面相 關(guān))。在本發(fā)明的一種實施方式中，YKL-40參考水平是年齡校正的臨界值，例如約 80 μ g/1血清YKL-40的臨界值，例如約90 μ g/1血清，約100 μ g/1血清，約110 μ g/1血清， 約120 μ g/1血清，或約130 μ g/1血清YKL-40。優(yōu)選約100 μ g/1血清YKL-40。年齡校正 可以按照本文其他地方所述進(jìn)行。因此，在本發(fā)明優(yōu)選的實施方式中，YKL-40參考水平是年齡校正的臨界值，對應(yīng)健 康個體中血漿YKL-40的第90個百分位數(shù)，例如年齡約50歲的受試者的YKL-40血漿值為 92 μ g/Ι，或年齡約60歲的受試者的YKL-40血漿值為111 μ g/Ι ；更優(yōu)選地，它是對應(yīng)健康 個體中血漿YKL-40的第95個百分位數(shù)的年齡校正的臨界值，例如年齡約50歲的受試者 的YKL-40血漿值為100 μ g/1，或年齡約60歲的受試者的YKL-40血漿值為124 μ g/Ι。當(dāng) 第95個百分位數(shù)血漿水平經(jīng)年齡校正，并用作臨界值時，則YKL-40水平中可以存在更大的潛在個體差異。例如，當(dāng)本發(fā)明的方法集中針對一個個體受試者應(yīng)用時，使用第95個百分 位數(shù)，或者第97. 5個百分位數(shù)可能是恰當(dāng)?shù)摹Ｈ欢?，在本發(fā)明方法的某些例子中，優(yōu)選的是 應(yīng)用第90個百分位數(shù)的血漿YKL-40水平，例如，當(dāng)該方法應(yīng)用于篩選目的以識別尚未產(chǎn)生 癥狀的非特異疾病時。以相同的方式，例如對于篩選目的來說，還可能恰當(dāng)?shù)氖鞘褂媒】祩€ 體中血漿YKL-40的第70個百分位數(shù)、第75個百分位數(shù)或第85個百分位數(shù)，使用哪種百分 位數(shù)將取決于所需要的靈敏性的水平。選擇作為臨界值的百分位數(shù)越低，獲得的靈敏性越 高。通過使用低百分位數(shù)，可發(fā)現(xiàn)受試者僅輕微地受到疾病或紊亂的影響，如疾病或紊亂的 早期階段。然而，選擇的百分位數(shù)越低，篩選中發(fā)現(xiàn)的未患非特異疾病或紊亂的受試者部分 越高，這可能是由于潛在的個體的生物變化。因此，通過確定樣品中YKL-40的測定水平是否高于一個或多個參考水平，進(jìn)一步 提供了本發(fā)明的第四方面的非特異疾病或紊亂的嚴(yán)重性的分類。換句話說，通過將樣品中 測定的YKL-40水平與YKL-40的一個或多個參考水平進(jìn)行比較來提供非特異疾病或紊亂的 分類，其中YKL-40水平越高，非特異疾病或紊亂的分類就越嚴(yán)重。 或者，臨界值可定義為與3610名健康受試者中限定的以下百分位數(shù)對應(yīng)的血漿 YKL-40水平根據(jù)年齡70%百分位數(shù)(定義為In (血漿YKL-40) = 3. 1+0. 02 X年齡(歲))，75%百分位數(shù)(定義為In (血漿YKL-40) = 3· 2+0. O2 X年齡(歲))，90%百分位數(shù)(定義為In (血漿YKL-40) = 3. 5+0. 02 X年齡(歲))，和%%百分位數(shù)(定義為In (血漿YKL-40) = 3· 6+0. O2 X年齡(歲))。臨界值還可定義為與3610名健康受試者中限定的以下百分位數(shù)對應(yīng)的血漿 YKL-40水平根據(jù)年齡70%百分位數(shù)(定義為In (血漿YKL-40) = 3. 1+0. 02 X年齡(歲))，75%百分位數(shù)(定義為In (血漿YKL-40) = 3· 2+0. O2 X年齡(歲))，85%百分位數(shù)(定義為In (血漿YKL-40) = 3· 4+0. O2 X年齡(歲))，90%百分位數(shù)(定義為In (血漿YKL-40) = 3. 5+0. 02 X年齡(歲))，95%百分位數(shù)(定義為In (血漿YKL-40) = 3. 6+0. 02 X年齡(歲))，和97.5%百分位數(shù)(定義為111(血漿￥此-40) = 3. 9+0. 02 X年齡(歲))。在本發(fā)明方法的優(yōu)選實施方式中，YKL-40的參考水平是用受試者的年齡，直接根 據(jù)上述公式計算。該公式在圖3A和3B中也有描述，這些圖可以以更直接的方式應(yīng)用，可 以在不需要計算的情況下確定臨界值。圖3A和3B還可以直接將測定的YKL-40水平和受 試者的年齡與例如第90個百分位數(shù)和第95個百分位數(shù)進(jìn)行比較，從而立即指示出測定 的YKL-40水平不同于參考水平的程度。通過對第90個百分位數(shù)使用上述公式，年齡約20 歲、約30歲、約40歲、約50歲、約60歲、約70歲的受試者的臨界值分別為約49μ g/Ι、約 60μ g/1、約 74μ g/1、約 90μ g/1、約 110μ g/1 和約 134μ g/1 YKL-40。因此，對于第 95 個 百分位數(shù)來說，上述公式給出以下臨界值分別為約55 μ g/1、約67 μ g/1、約81 μ g/1、約 99 μ g/1、約 122 μ g/1 和約 148 μ g/1 的 YKL-40。在本發(fā)明方法的一種實施方式中，YKL-40參考水平是對應(yīng)健康個體血清或血漿 YKL-40水平的第70個百分位數(shù)的年齡校正的臨界值。更優(yōu)選地，該年齡校正的臨界值是定 義為In(血漿YKL-40) = 3. 1+0. 02X年齡(歲))的第70個百分位數(shù)。
在本發(fā)明方法的另一種實施方式中，YKL-40參考水平是對應(yīng)健康個體血清或血漿 YKL-40水平的第75個百分位數(shù)的年齡校正的臨界值。更優(yōu)選地，年齡校正的臨界值是定義 為In(血漿YKL-40) = 3. 2+0. 02X年齡(歲))的第75個百分位數(shù)。在本發(fā)明方法的另一種實施方式中，YKL-40參考水平是對應(yīng)健康個體血清或血漿 YKL-40水平的第85個百分位數(shù)的年齡校正的臨界值。更優(yōu)選地，年齡校正的臨界值是定義 為In(血漿YKL-40) = 3. 4+0. 02X年齡(歲))的第85個百分位數(shù)。在本發(fā)明方法的另一種實施方式中，YKL-40參考水平是對應(yīng)健康個體血清或血漿 YKL-40水平的第90個百分位數(shù)的年齡校正的臨界值。更優(yōu)選地，年齡校正的臨界值是定義 為In(血漿YKL-40) = 3. 5+0. 02X年齡(歲))的第90個百分位數(shù)。在本發(fā)明方法的另一種實施方式中，YKL-40參考水平是對應(yīng)健康個體血清或血漿 YKL-40水平的第95個百分位數(shù)的年齡校正的臨界值。更優(yōu)選地，年齡校正的臨界值是定義 為In(血漿YKL-40) = 3. 6+0. 02X年齡(歲))的第95個百分位數(shù)。在本發(fā)明方法的另一種實施方式中，YKL-40參考水平是對應(yīng)健康個體血清或血漿 YKL-40水 平的第97. 5個百分位數(shù)的年齡校正的臨界值。更優(yōu)選地，年齡校正的臨界值是定 義為In(血漿YKL-40) = 3. 9+0. 02X年齡(歲))的第97. 5個百分位數(shù)。在本發(fā)明方法的一種具體實施方式
中，YKL-40參考水平是一組YKL-40年齡依賴 性臨界值，定義為本文上述分別對應(yīng)第70個、第75個、第85個、第90個、第95個或第97. 5 個百分位數(shù)的年齡校正的臨界值中的兩個或多個。在本發(fā)明第一或第四方面的另一種優(yōu)選實施方式中，YKL-40參考水平是一組 YKL-40年齡依賴性臨界值，其由第70個、第75個、第85個、第90個、第95個或第97. 5個百 分位數(shù)中的兩個或多個來定義，例如優(yōu)選由上述公式來計算。例如，當(dāng)臨界值是該年齡組中 的最高值時，還可以針對計算一組年齡，如20-29歲、30-39歲、40-49歲等，計算一組YKL-40
年齡依賴性臨界值。在本發(fā)明第一或第四方面的一種優(yōu)選實施方式中，臨界值組如下
健康受試者的年齡依賴性臨界值
^mmmi 第70個第75個第85個第90個第95個^
^ 百分位數(shù)百分位數(shù)百分位數(shù) 百分位數(shù)百分位數(shù)
(μ^/Ι YKL-40)(μο/Ι YKL-40) (pg/i YKL-40) (μ^/Ι YKL-40) (pg/l YKL-40)
40..............................................................44Γ-~54————^―
30-39 485465 7280
40-49 ’596580 8898
50-59 72“^~ 8098^108119
60-69 8898 9 132145
70-79—… 19…TBF"" —....161—....178
60 - 89^178 —217 ""“通過上述公式獲得的類似值是用于本發(fā)明方法的更加詳細(xì)的一組優(yōu)選的年齡依 賴性臨界值
權(quán)利要求
一種診斷受試者中非特異疾病或紊亂的存在的方法，所述方法包括v)測定從受試者獲得的樣品中的YKL 40水平；和vi)將所述YKL 40水平與YKL 40參考水平進(jìn)行比較；其中所述樣品中的YKL 40水平高于參考水平，表明存在非特異疾病或紊亂。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述YKL-40參考水平是通過測量來自健康個體樣品 中的YKL-40水平而獲得的平均水平。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述YKL-40參考水平是年齡校正的平均水平。
4.如前面任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述YKL-40參考水平是年齡校正的臨界 值，其對應(yīng)健康個體中血清或血漿YKL-40水平的第70個百分位數(shù)。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述年齡校正的臨界值是定義為In(血漿YKL-40) =3. 1+0. 02X年齡(歲)的第70個百分位數(shù)。
6.如權(quán)利要求1-3任一項所述的方法，其中所述YKL-40參考水平是年齡校正的臨界 值，其對應(yīng)健康個體中血清或血漿YKL-40水平的第75個百分位數(shù)。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述年齡校正的臨界值是定義為In(血漿YKL-40) =3. 2+0. 02X年齡(歲)的第75個百分位數(shù)。
8.如權(quán)利要求1-3任一項所述的方法，其中所述YKL-40參考水平是年齡校正的臨界 值，其對應(yīng)健康個體中血清或血漿YKL-40水平的第85個百分位數(shù)。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述年齡調(diào)整的臨界值是定義為In(血漿YKL-40) =3. 4+0. 02X年齡(歲)的第85個百分位數(shù)。
10.如權(quán)利要求1-3任一項所述的方法，其中所述YKL-40參考水平是年齡校正的臨界 值，其對應(yīng)健康個體中血清或血漿YKL-40水平的第90個百分位數(shù)。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述年齡校正的臨界值是定義為In(血漿 YKL-40) = 3. 5+0. 02X年齡(歲)的第90個百分位數(shù)。
12.如權(quán)利要求1-3任一項所述的方法，其中所述YKL-40參考水平是年齡校正的臨界 值，其對應(yīng)健康個體中血清或血漿YKL-40水平的第95個百分位數(shù)。
13.如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述年齡校正的臨界值是定義為In(血漿 YKL-40) = 3. 6+0. 02 X年齡(歲)的第95個百分位數(shù)。
14.如權(quán)利要求1-3任一項所述的方法，其中所述YKL-40參考水平是年齡校正的臨界 值，其對應(yīng)健康個體中血清或血漿YKL-40水平的第97. 5個百分位數(shù)。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述年齡校正的臨界值是定義為In(血漿 YKL-40) = 3. 9+0. 02X年齡(歲)的第97. 5個百分位數(shù)。
16.如權(quán)利要求1-3任一項所述的方法，其中所述YKL-40參考水平是權(quán)利要求4-15中 的兩項或多項限定的一組YKL-40年齡依賴性臨界值。
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述一組YKL-40年齡依賴性臨界值在下表中限定
18.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述YKL-40參考水平是通過測量健康個體的年齡 分布亞群的樣品中的YKL-40水平而獲得的一組YKL-40年齡依賴性參考水平。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述一組年齡依賴性參考水平在下表中限定
20.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述方法是用于診斷受試者中非特異疾病或紊亂 的存在的方法，所述方法包括iii)測定從受試者中獲得的樣品中的YKL-40水平；和iv)將所述YKL-40水平與YKL-40參考水平進(jìn)行比較，所述參考水平是先前從相同受試 者中測定的YKL-40水平；其中所述樣品中的YKL-40水平與YKL-40參考水平相比增加到至少1. 10倍，表明存在 非特異疾病或紊亂。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述YKL-40參考水平是經(jīng)年齡校正的。
22.如權(quán)利要求20-21任一項所述的方法，其中所述參考水平是通過對女性增加(0. 5 μ g/1/年，對男性增加0. 8 μ g/1/年進(jìn)行年齡校正。
23.如權(quán)利要求20-22任一項所述的方法，其中當(dāng)所述樣品中的YKL-40水平增加了約 109%或更多時，則認(rèn)為該樣品中的YKL-40水平明顯高于參考水平，由此表明存在非特異 疾病或紊亂。
24.如權(quán)利要求20-22任一項所述的方法，其中所述樣品中的YKL-40水平與YKL-40參 考水平相比增加到至少1. 10倍，表明存在非特異疾病或紊亂，更優(yōu)選與YKL-40參考水平相 比增加到至少1. 25倍，例如1. 30倍，或1. 40倍；更優(yōu)選至少1. 50倍，例如1. 60倍，1. 70 倍，或1. 75倍；更優(yōu)選至少1. 75倍，例如1. 80倍，或1. 90倍，或2倍；最優(yōu)選至少2倍，例 如2. 10倍，2. 20倍，2. 25倍，或2. 50倍，表明存在非特異疾病或紊亂。
25.一種分類受試者中非特異疾病或紊亂的嚴(yán)重性的方法，所述方法包括vii)測定從受試者中獲得的樣品中的YKL-40水平；和viii)將該YKL-40水平與一個或多個YKL-40參考水平進(jìn)行比較；其中所述非特異疾病或紊亂的嚴(yán)重性是從所述比較中推出。
26.如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述一個或多個YKL-40參考水平是通過測量健康 個體樣品中的YKL-40水平來提供。
27.如權(quán)利要求25-26任一項所述的方法，其中所述一個或多個YKL-40參考水平是一 個或多個年齡校正的參考水平。
28.如權(quán)利要求25-27任一項所述的方法，其中所述一個或多個YKL-40參考水平是通 過測量健康個體的年齡分布亞群的樣品中的YKL-40水平而獲得的一組YKL-40年齡依賴性 參考水平。
29.如權(quán)利要求25-28任一項所述的方法，其中所述一個或多個YKL-40參考水平是年 齡校正的臨界值，其對應(yīng)健康個體中YKL-40的第75個百分位數(shù)。
30.如權(quán)利要求25-29任一項所述的方法，其中所述一個或多個YKL-40參考水平是年 齡校正的臨界值，其對應(yīng)健康個體中YKL-40的第85個百分位數(shù)。
31.如權(quán)利要求25-30任一項所述的方法，其中所述一個或多個YKL-40參考水平是年 齡校正的臨界值，其對應(yīng)健康個體中YKL-40的第90個百分位數(shù)。
32.如權(quán)利要求25-31任一項所述的方法，其中所述一個或多個YKL-40參考水平是年 齡校正的臨界值，其對應(yīng)健康個體中YKL-40的第95個百分位數(shù)。
33.如權(quán)利要求25-32任一項所述的方法，其中所述一個或多個YKL-40參考水平是年 齡校正的臨界值，其對應(yīng)健康個體中YKL-40的第97. 5個百分位數(shù)。
34.如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述一個或多個參考水平是先前從相同受試者中 測定的一個或多個參考水平。
35.如權(quán)利要求34所述的方法，其中所述一個或多個YKL-40參考水平是年齡校正的 YKL-40血漿水平，其通過對女性增加0. 5 μ g/1/年，對男性增加0. 8 μ g/1/年進(jìn)行年齡校 正。
36.如權(quán)利要求34-35任一項所述的方法，其中所述樣品中的YKL-40水平與YKL-40參 考水平相比增加到至少1.10倍或更多，表明非特異疾病或紊亂已經(jīng)發(fā)展到該疾病或紊亂 的更嚴(yán)重階段，更優(yōu)選與YKL-40參考水平相比增加到至少1. 25倍，例如1. 30倍，或1. 40 倍；更優(yōu)選增加到至少1. 50倍，例如1. 60倍，1. 70倍，或1. 75倍；更優(yōu)選增加到至少1. 75倍，例如1. 80倍，或1. 90倍，或2倍；最優(yōu)選增加到至少2倍，例如2. 10倍，2. 20倍，2. 25 倍，或2. 50倍，表明非特異疾病或紊亂已經(jīng)發(fā)展到該疾病或紊亂的更嚴(yán)重階段。
37.如權(quán)利要求34-36任一項所述的方法，其中所述樣品中的YKL-40水平與YKL-40參 考水平相比至少減小到0. 90倍，表明非特異疾病或紊亂已經(jīng)發(fā)展到該疾病或紊亂的較緩 和階段，更優(yōu)選與YKL-40參考水平相比至少減小到0. 80倍，例如0. 70倍；更優(yōu)選至少減小 到0. 60倍；更優(yōu)選至少減小到0. 50倍；更優(yōu)選至少減小到0. 48倍；例如0. 45倍，0. 43倍， 0. 40倍，或0. 38倍，表明非特異疾病或紊亂已經(jīng)發(fā)展到該疾病或紊亂的較緩和階段。
38.如權(quán)利要求34-37任一項所述的方法，其中所述樣品中的YKL-40水平與YKL-40參 考水平相比增加了 109%，表明非特異疾病或紊亂已經(jīng)發(fā)展到該疾病或紊亂的更嚴(yán)重階段。
39.如權(quán)利要求34-38任一項所述的方法，其中所述樣品中的YKL-40水平與YKL-40參 考水平相比減小了 52%，表明非特異疾病或紊亂已經(jīng)發(fā)展到該疾病或紊亂的較緩和階段。
40.如權(quán)利要求25-39任一項所述的方法，其中所述測定的樣品的YKL-40水平高于一 個或多個參考水平提供了非特異疾病或紊亂的分類。
41.如權(quán)利要求25-40任一項所述的方法，其中通過將測定的樣品的YKL-40水平與一 個或多個YKL-40參考水平進(jìn)行比較，提供所述非特異疾病或紊亂的分類，其中所述YKL-40 水平越高，所述非特異疾病或紊亂就分類為越嚴(yán)重。
42.如前面任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述疾病或紊亂是不產(chǎn)生升高的C-反應(yīng) 蛋白水平的一種或多種疾病或紊亂或者一組疾病或紊亂。
43.如前面任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述YKL-40水平是用免疫分析法測定。
44.如前面任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述免疫分析法是競爭性免疫分析法。
45.如前面任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述免疫分析法使用可檢測的標(biāo)記測量 YKL-40，所述可檢測標(biāo)記選自放射性同位素、酶、熒光分子、化學(xué)發(fā)光分子、生物發(fā)光分子和 膠體金屬。
46.如前面任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述免疫分析法使用單克隆抗體測量 YKL-40。
47.如前面任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述免疫分析法使用多克隆抗體測量 YKL-40。
48.如權(quán)利要求1-42任一項所述的方法，其中所述YKL-40水平是在基于PCR的分析中 測定。
49.如前面任一項權(quán)利要求所述的方法，其中在與YKL-40相同的樣品中測定一個或多 個另外的生物標(biāo)記的水平。
50.如前面任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述一個或多個另外的生物標(biāo)記選自 C-反應(yīng)蛋白(CRP)、ESR、癌胚抗原(CEA)、CA-125、人表皮生長因子受體2 (HER2)、CA19-9, 乳酸脫氫酶(LDH)、金屬蛋白酶組織抑制劑I(TIMP-I)、腦鈉素(BNP)、白細(xì)胞介素、腫瘤壞 死因子-α、同型半胱氨酸、淀粉樣A蛋白、妊娠相關(guān)血漿蛋白-Α、肌鈣蛋白、可溶性細(xì)胞間 粘附分子-1、可溶性UPAR、III型前膠原性氨基端肽(P-III-NP)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1、纖 維蛋白D-二聚體、生長分化因子-15、缺血修飾性白蛋白、脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2、基質(zhì)金屬 蛋白酶和CKMB。
51.如前面任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述一個或多個另外的生物標(biāo)記選自C-反應(yīng)蛋白、腦鈉素和同型半胱氨酸。
52.如前面任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述YKL-40水平是用試紙測定。
53.如前面任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述生物樣品是血液、血清或血漿。
54.如前面任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述生物樣品是血清或血漿。
55.如前面任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述受試者是哺乳動物，優(yōu)選為人。
56.YKL-40作為存在非特異疾病或紊亂的生物標(biāo)記的用途。
57.YKL-40作為存在非特異疾病或紊亂的生物標(biāo)記的用途。
58.YKL-40作為分類非特異疾病或紊亂的嚴(yán)重性的生物標(biāo)記的用途。
59.一種診斷非特異疾病或紊亂的存在的裝置，其中所述裝置包括用于測量樣品中的 YKL-40水平的工具，以及用于將測量的YKL-40水平與至少一個YKL-40參考水平進(jìn)行比較 的工具。
60.如權(quán)利要求59所述的裝置，其中所述裝置是試紙。
61.如權(quán)利要求59-60任一項所述的裝置，其中所述裝置包括一代表臨界值的單個參 考水平。
62.如權(quán)利要求59-60任一項所述的裝置，其中所述裝置包括用于將測量的YKL-40水 平與一組年齡校正的YKL-40參考水平進(jìn)行比較的工具。
63.如權(quán)利要求59-60任一項所述的裝置，其中所述裝置包括用于將測量的YKL-40水 平與下表限定的一組年齡依賴性臨界值進(jìn)行比較的工具
64.一種試劑盒，包括i)用于測量樣品中的YKL-40水平的工具；ii)用于將測量的YKL-40水平與至少一個YKL-40參考水平進(jìn)行比較的工具；iii)可選地，關(guān)于如何根據(jù)提供樣品的受試者的年齡，對所述YKL-40參考水平進(jìn)行年 齡校正的說明書。
65.如權(quán)利要求64所述的試劑盒，其中所述試劑盒進(jìn)一步包括用于分析另外的生物標(biāo) 記的工具，所述另外的生物標(biāo)記選自C-反應(yīng)蛋白(CRP)、ESR、癌胚抗原(CEA)、CA-125、人表皮生長因子受體2(HER2)、CA19-9、乳酸脫氫酶(LDH)、金屬蛋白酶組織抑制劑1 (TIMP-1)、 腦鈉素(BNP)、白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子-α、同型半胱氨酸、淀粉樣A蛋白、妊娠相關(guān)血 漿蛋白-Α、肌鈣蛋白、可溶性細(xì)胞間粘附分子-1、可溶性UPAR、III型前膠原性氨基端肽 (P-III-NP)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1、纖維蛋白D-二聚體、生長分化因子-15、缺血修飾性白 蛋白、脂蛋白相關(guān)磷脂酶Α2、基質(zhì)金屬蛋白酶和CKMB。
66.如權(quán)利要求64-65任一項所述的試劑盒，包括至少一種權(quán)利要求59-63所述的裝置。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種診斷受試者中非特異疾病或紊亂存在的方法，其中測定的YKL-40水平高于參考水平表明存在非特異疾病或紊亂。受試者可能患有多種疾病或紊亂。參考水平可能是從健康個體中獲得的參考水平或者可能是先前從相同受試者獲得的測量值。本發(fā)明還涉及一種分類受試者的非特異疾病或紊亂的嚴(yán)重性的方法，其中測定的YKL-40水平高于或低于一個或多個參考水平顯示了所述非特異疾病或紊亂的嚴(yán)重性。本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種可用于本發(fā)明方法的試劑盒和裝置，其包括用于測量樣品中的YKL-40水平的工具；以及將測量的YKL-40與至少一個YKL-40參考水平進(jìn)行比較的工具。
文檔編號G01N33/53GK101971027SQ200980103026
公開日2011年2月9日 申請日期2009年1月22日 優(yōu)先權(quán)日2008年1月23日
發(fā)明者伊布·雅勒·克里斯坦森, 博格·格朗尼·諾德埃斯特加爾德, 斯蒂格·玻約森, 朱莉婭·約翰森, 漢斯·喬根·尼爾森 申請人:海萊烏醫(yī)院;哈維德夫醫(yī)院;里格舒斯匹塔里特醫(yī)院