專(zhuān)利名稱(chēng)：梯度洗脫多柱分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種通過(guò)色譜法用于混合物級(jí)分的梯度洗脫多柱分離方法。
技術(shù)背景
色譜法是一種基于混合物的諸化合物在流動(dòng)相和固定相(也稱(chēng)為吸附相)之間的 分布差異的分離方法。通過(guò)過(guò)濾充滿(mǎn)吸附相的裝置(柱)中的液體、氣體或超臨界溶劑 分離該化合物。這種方法作為分析技術(shù)廣泛應(yīng)用，其目的是對(duì)混合物的諸化合物進(jìn)行定 性和定量。這種方法還可應(yīng)用。
根據(jù)需要使用不同的色譜方法，從而達(dá)到分子的純化。可以按照以下幾種標(biāo)準(zhǔn) 將這些方法分類(lèi)方法可以是連續(xù)或間歇地；系統(tǒng)可以包含一根或多根柱；洗脫劑的組 成可以是等度的或者可以形成梯度。
廣泛使用的是洗脫色譜法和分批色譜法。這種方法基于待純化的混合物在充滿(mǎn) 適合的固定相的柱中的間歇注射，所述混合物用洗脫劑過(guò)濾，以確保產(chǎn)物在該柱中的遷 移和分離。在柱的出口處抽出分離出的產(chǎn)物。可以在一段周期時(shí)間內(nèi)周期性地重復(fù)上述 注射，以在連續(xù)的注射的間隔期間保持分離。
所謂的分批色譜法是一種廣泛使用的方法，尤其是以小規(guī)模和中等規(guī)模的分批 色譜法。這是一種使用簡(jiǎn)便(單根柱)的方法且證實(shí)通常是有效的，但在產(chǎn)率方面表現(xiàn) 并不是很好。后者通常較低并且提純出的產(chǎn)物通常被高度稀釋在洗脫溶劑中。
為了形成移動(dòng)床(TraeMovingBed)的概念，研發(fā)出在洗脫相和吸附相之間形成 逆流的構(gòu)思。在1961年，出現(xiàn)了一種“模擬移動(dòng)床” 6MB)的方法，采用這種方法， 可以通過(guò)柱之間的精巧的連接(devercoraiection)來(lái)模擬固體的運(yùn)動(dòng)。這種方法的特征在 于用于引入原料和洗脫劑的點(diǎn)沿主流體的流動(dòng)方向是周期性遞進(jìn)的，而用于抽出殘余物 和提取物的點(diǎn)是按照相同的增量同時(shí)遞進(jìn)的。
文獻(xiàn)EP-A-1716900描述了將驅(qū)動(dòng)力梯度方法合并于SMB方法中。該文獻(xiàn)描述 了一種用于含有多種化合物的混合物的連續(xù)或準(zhǔn)連續(xù)純化的方法。在SMB中采用了多 個(gè)區(qū)。通過(guò)至少兩個(gè)、優(yōu)選三個(gè)獨(dú)立的色譜柱并向其中用溶劑引入混合物來(lái)完成純化。 含有多種化合物的混合物至少包括輕質(zhì)的雜質(zhì)、待純化的中間產(chǎn)物和重質(zhì)的雜質(zhì)。按照 分批模式中的至少一個(gè)步驟或至少一個(gè)位置使用柱。在這種模式下，柱的出口用于抽出 中間產(chǎn)物。柱也用在連續(xù)或準(zhǔn)連續(xù)模式的至少一個(gè)步驟或至少一個(gè)位置中。在這種模式 下，至少一根柱的出口與至少另一根柱的入口流體連通。可以同步或依次地執(zhí)行分批模 式和連續(xù)或準(zhǔn)連續(xù)模式。在轉(zhuǎn)換之后或在轉(zhuǎn)換的過(guò)程中，向與溶劑流動(dòng)的大致方向相反 的方向移動(dòng)柱。
這種方法的缺點(diǎn)在于需要用于實(shí)施該方法的復(fù)雜的設(shè)備以及用于理解該方法的 模擬工具。
本發(fā)明的目的是為了獲得一種性能好同時(shí)使用簡(jiǎn)單的方法。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提出了一種用于將待分離的混合物的級(jí)分分離的方 法，所述方法包括以下步驟
-提供包含至少兩個(gè)串聯(lián)安裝的色譜柱的裝置，
-在所述裝置的單個(gè)點(diǎn)處間歇地注射待分離的混合物，
-在所述裝置的單個(gè)點(diǎn)處間歇地抽出目標(biāo)產(chǎn)物中富集的級(jí)分，
-將洗脫劑注入每根柱中并置換用于注射洗脫劑的點(diǎn)，所述洗脫劑具有不同的洗 脫強(qiáng)度。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，所述用于將待分離的混合物的級(jí)分分離的方法包括 以下步驟
-提供包含三個(gè)串聯(lián)安裝的色譜柱的裝置，
-在所述裝置的單個(gè)點(diǎn)處間歇地注射待分離的混合物，
-在所述裝置的單個(gè)點(diǎn)處間歇地抽出目標(biāo)產(chǎn)物中富集的級(jí)分，
-將洗脫劑注入每根柱中并置換用于注射洗脫劑的點(diǎn)，所述洗脫劑具有不同的洗 脫強(qiáng)度。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，所述待分離的混合物的注射是循環(huán)的。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，所述富集的級(jí)分的抽出是循環(huán)的。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，所述用于注射洗脫劑的點(diǎn)的置換是周期性的。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，連續(xù)或間歇地注射所述洗脫劑。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，間歇地注射至少一種洗脫劑。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，每種洗脫劑的組成是恒定的。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，至少一種洗脫劑的組成是互相獨(dú)立地可變的。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，異步地置換至少一種洗脫劑。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，按照流動(dòng)相的流動(dòng)方向，至少兩根柱將用于注射待 處理的原料的點(diǎn)與用于抽出目標(biāo)產(chǎn)物的點(diǎn)分開(kāi)。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，按照流動(dòng)相的流動(dòng)方向，系統(tǒng)的所有柱將用于注射 待處理的原料的點(diǎn)與用于抽出目標(biāo)產(chǎn)物的點(diǎn)分開(kāi)。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，采用選自包括注射環(huán)路、注射泵和加壓容器的組中 的元件注射待分離的混合物。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，在被注入所述裝置前，所述待分離的混合物在附加 的色譜柱中流通(circulate)。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，將所述附加的色譜柱插在所述混合物的注射元件和 所述用于將混合物注入裝置的單個(gè)點(diǎn)之間或位于所述裝置的兩根柱之間。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，目標(biāo)產(chǎn)物中富集的級(jí)分的抽出體積是可變的。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，采用選自包括注射環(huán)、注射泵的組中的元件注射待 分離的混合物。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，在被注入所述裝置前，所述待分離的混合物在附加 的色譜柱中流通。4
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，將所述附加的色譜柱插在所述混合物的注射元件和 所述用于將混合物注射入裝置的單個(gè)點(diǎn)之間或位于所述裝置的兩根柱之間。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，每種洗脫劑的組成是互相獨(dú)立地固定的或可變的。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，連續(xù)或間歇地注射洗脫劑。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，互相獨(dú)立地置換洗脫劑。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，所述方法是循環(huán)的。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，所述裝置通常具有至少一個(gè)入口和至少一個(gè)出口。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，在位于引入原料的口前面的柱的出口處抽出目標(biāo)產(chǎn)物。
根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，將目標(biāo)產(chǎn)物中排空的級(jí)分重新注入所述裝置中。
本發(fā)明還提出了前述的方法用于分離合成分子、天然提取物、通過(guò)發(fā)酵獲得的 蛋白質(zhì)、通過(guò)合成或半合成獲得的蛋白質(zhì)、免疫球蛋白、單克隆抗體、通過(guò)發(fā)酵獲得的 肽、通過(guò)合成或半合成獲得的肽的用途。


通過(guò)閱讀本發(fā)明如下的僅作為例子給出的具體實(shí)施方式
的詳細(xì)描述并結(jié)合如下 的附圖，本發(fā)明其他的特征和優(yōu)點(diǎn)將是顯而易見(jiàn)的。
圖1和圖2是所述分離方法的操作圖3和圖4示出了混合物注射裝置；
圖5至圖11是化合物的示例性洗脫曲線(xiàn)圖12至圖15是所述方法的示例性操作圖。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明提供了一種用于從待分離的混合物中分離出級(jí)分的方法。在包含至少兩 個(gè)串聯(lián)安裝的色譜柱的裝置上實(shí)施所述方法。所述方法包括在所述裝置的單個(gè)點(diǎn)處間歇 地注射待分離的混合物的步驟；在所述裝置的單個(gè)點(diǎn)處間歇地抽出目標(biāo)產(chǎn)物中富集的級(jí) 分的步驟；將洗脫劑注入每根柱中的步驟和置換洗脫劑注射點(diǎn)的步驟。這些洗脫劑具有 不同的洗脫強(qiáng)度。所述方法操作簡(jiǎn)單，可以實(shí)現(xiàn)有效分離。
所述方法是一種帶梯度的多柱分離方法。所述方法是一種非分批的方法。特別 地，所述方法適用于含有至少兩種化合物的混合物的分離。所述方法提供的分離利用了 在色譜法的過(guò)程中應(yīng)用的洗脫強(qiáng)度梯度。
可以由此純化的分子的例子為合成分子、天然提取物、通過(guò)發(fā)酵獲得的蛋白 質(zhì)、通過(guò)合成或半合成獲得的蛋白質(zhì)、免疫球蛋白、單克隆抗體、通過(guò)發(fā)酵獲得的肽、 通過(guò)合成或半合成獲得的肽。
可以使用的固定相的例子為多孔固體載體(例如二氧化硅，也稱(chēng)為正相)、接 枝的多孔固體載體(例如所謂的反相)、離子交換樹(shù)脂、接枝樹(shù)脂(例如帶有蛋白質(zhì))。 在更為常見(jiàn)的方式中，所有適于應(yīng)用流動(dòng)相的組成梯度的固定相，例如在結(jié)合使用表面 活性劑梯度的尺寸排阻色譜法中。
流動(dòng)相的組成梯度可以通過(guò)以下各種方式獲得從一種組成以直接的方式過(guò)渡 至另一種組成，這種情況即指“臺(tái)階”梯度，或者從一種組成逐漸過(guò)渡至另一種組成。
可以用作流動(dòng)相為諸如以下的流體
-液體使用或不使用鹽或緩沖溶液的水和/或有機(jī)溶劑。
-存在或不存在機(jī)溶劑的超臨界氣體和/或流體。
壓力范圍可隨著固定相的顆粒尺寸、溶劑的粘度和柱內(nèi)流動(dòng)相的速率變化并且 通常在0.1至300bar之間。例如，壓力范圍可以是
-當(dāng)顆粒尺寸為40μιη至50μιη時(shí)，壓力為0.1至IObar
-當(dāng)顆粒尺寸為90μιη至5μιη時(shí)，壓力為3至50bar
-當(dāng)使用含有溶解在液相中的或液態(tài)或超臨界狀態(tài)的CO2的洗脫劑時(shí)，壓力為40 至 300bar。
圖1示出了所述分離方法的操作過(guò)程。在含有色譜柱的裝置上實(shí)施所述分離方 法。采用這種方法，可以將待分離的混合物(或原料)的級(jí)分分離。所述混合物可以是 二元或三元的，即包含兩種或三種化合物。在所述混合物為三元混合物即含有三種化合 物的情況下，目標(biāo)產(chǎn)物在核心級(jí)分(core fraction)中(即目標(biāo)產(chǎn)物被保留時(shí)間更短或更長(zhǎng) 的雜質(zhì)包圍)。但是，所述混合物可以含有多于三種的化合物。根據(jù)圖1，所述裝置包 括串聯(lián)安裝的三根柱1、2和3，即柱1具有與柱2的入口 21相鄰的出口 12;所述出口 12 可以與柱2的入口 21相連以在柱1和柱2之間形成流體流通。并且，柱2的出口 22與 柱3的入口 31相鄰。在下文中，第一根柱的出口可以與第二根柱的入口相連以在兩根柱 之間形成流體流通的柱被稱(chēng)為串聯(lián)柱。
在開(kāi)環(huán)(open loop)中進(jìn)行所述方法，即在所述方法的任意時(shí)刻，所述裝置包括 至少一個(gè)入口和至少一個(gè)出口。
通過(guò)點(diǎn)41、42和43在點(diǎn)11、21和31處分別將具有不同洗脫強(qiáng)度的洗脫劑A、 B和C注入柱1、2和3中。經(jīng)過(guò)周期Tl后，置換洗脫劑A、B和C的注射點(diǎn)41、42、 43。所述周期為同種洗脫劑的兩次置換之間的時(shí)間間隔。根據(jù)圖1，置換注射點(diǎn)41、42 和43以在點(diǎn)21、31和11處分別將所述洗脫劑A、B和C注入柱2、3和1中。位于柱3 的出口 32處的出口 4經(jīng)歷相同的置換后與柱1的出口 12相連。經(jīng)過(guò)另一個(gè)周期T2后， 置換注射點(diǎn)41、42、43，以在點(diǎn)31、11和21處分別將所述洗脫劑A、B和C注入柱3、1和2中，并且出口 4與柱2的出口 22相連。
可以注意到的是，在周期T3結(jié)束時(shí)新的置換導(dǎo)致所述裝置再次處于其起始狀 態(tài)，即周期Tl的狀態(tài)。所描述的分離方法是循環(huán)進(jìn)行的，在每個(gè)循環(huán)的終點(diǎn)所述裝置恢 復(fù)到起始的狀態(tài)。
通過(guò)注射點(diǎn)41、42和43的置換，經(jīng)過(guò)周期T后可以在柱1、2和3中獲得流動(dòng) 相的組成梯度。事實(shí)上，在周期Tl期間，即當(dāng)分別將洗脫劑A、B和C注入柱1、2和 3中時(shí)，僅洗脫劑A流經(jīng)柱1;洗脫劑A和B的混合物流經(jīng)柱2;洗脫劑A、B和C的混 合物流經(jīng)柱3。所述周期Tl的結(jié)束和所述周期T2的開(kāi)始以洗脫劑A、B和C的置換為 標(biāo)志，以分別將所述洗脫劑注入柱2、3和1中。然后洗脫劑A、B和C的混合物流經(jīng)柱 1 ；僅洗脫劑A流經(jīng)柱2 ；洗脫劑A和B的混合物流經(jīng)柱3。同樣地，所述周期T2的結(jié) 束和所述周期T3的開(kāi)始以洗脫劑的注射點(diǎn)的置換為標(biāo)志。然后洗脫劑A、B的混合物流 經(jīng)柱1 ；洗脫劑A、B和C的混合物流經(jīng)柱2 ；洗脫劑A流經(jīng)柱3。在所述周期T3的終 點(diǎn)置換洗脫劑的注射點(diǎn)。根據(jù)圖1，洗脫劑的注射點(diǎn)恢復(fù)為所述周期Tl中的位置。6
因此，在循環(huán)期間，即在洗脫劑注射點(diǎn)恢復(fù)為其起始位置之前的時(shí)間內(nèi)，相同 柱內(nèi)的流動(dòng)相的組成是變化的。例如，在循環(huán)期間，依次地流經(jīng)柱3的首先為洗脫劑A、 B和C的混合物、然后為洗脫劑A和B的混合物、最后僅為洗脫劑A。依次地，每根柱 都發(fā)生相同的情形。通過(guò)洗脫劑的簡(jiǎn)單置換，在每根柱內(nèi)都形成流動(dòng)相的組成梯度。不 論從生產(chǎn)(較短的循環(huán))還是從分離(不同的產(chǎn)物之間較好的分離度和可重復(fù)生產(chǎn)性)的 角度來(lái)看，這都是有利的。
可以在洗脫劑注射點(diǎn)41、42或43中的一個(gè)點(diǎn)處全部或部分地再注入圖1中所示 的產(chǎn)出物4。
例如根據(jù)圖1，每種洗脫劑同時(shí)進(jìn)行置換。在這種情況下，存在和柱一樣多的周 期。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施例，可以互相獨(dú)立地置換(異步置換)或不置換每種洗脫劑。這些 獨(dú)立的異步置換周期性地發(fā)生。
在一個(gè)或多個(gè)周期期間或在循環(huán)期間，洗脫劑A、B和C中的每一種均具有相同 的組成，或者所述洗脫劑具有可變的組成并且這種組成變化獨(dú)立于其他的洗脫劑。這是 有利的，因?yàn)榭梢愿鶕?jù)所需的分離(分離速率、目標(biāo)產(chǎn)物的純度…)、也可以根據(jù)目標(biāo)產(chǎn) 物的特性(保留時(shí)間對(duì)流動(dòng)相的組成的敏感性)調(diào)整洗脫劑的組成。在所述循環(huán)期間，可 以將兩種不同組成的洗脫劑同時(shí)注入相同的柱中以在入口處獲得特定的組成。這是有利 的，因?yàn)榭梢詮亩喾N可用的起始組成(具有固定組成的庫(kù))中確定柱入口處的幾種組成。
進(jìn)一步地，可以間歇地或連續(xù)地進(jìn)行洗脫劑A、B和C的注射，即洗脫劑的注射 在經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后間斷或不間斷。由于可以?xún)H在一段足夠的持續(xù)時(shí)間內(nèi)使用洗脫劑，因 而間歇注射具有顯著的靈活性的優(yōu)點(diǎn)。洗脫劑的注射可以在置換其注射點(diǎn)的時(shí)刻停止。 對(duì)于連續(xù)注射來(lái)說(shuō)，其具有使用簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)。
將待分離的混合物注入所述裝置的單個(gè)點(diǎn)中。根據(jù)圖1，在所述混合物的注射點(diǎn) 61處將混合物注入所述柱1的入口 11中。這個(gè)注射點(diǎn)是唯一的。這是特別有利的，因 為可以使用所有標(biāo)準(zhǔn)注射裝置以及更復(fù)雜的設(shè)備。進(jìn)一步地，這避免了每根柱都具有注 射裝置。因此，這種裝置需要較少的導(dǎo)管和閥門(mén)，從而更容易清洗。進(jìn)一步地，這種裝 置比具有多個(gè)用于注射待分離的混合物的點(diǎn)的裝置更易于控制。
事實(shí)上，可以使用所有標(biāo)準(zhǔn)注射方式。例如，可以使用注射環(huán)路。這種注射方 式可以插進(jìn)已知體積的待分離的混合物流中。也可以使用泵。這種注射方式使得能夠注 射待直接處理的原料的混合物，或者作為已經(jīng)存在的流的添加物。
待分離的混合物的注射是間歇的(或換句話(huà)說(shuō)是不連續(xù)的)，即所述混合物的注 射經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后間斷。這種注射具有顯著的靈活性和使用簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)。
所述待分離的混合物的注射在一個(gè)周期期間或兩個(gè)周期之間是循環(huán)的。根據(jù)圖 1的例子，在周期T3期間進(jìn)行所述混合物的注射。因此所述周期T3可以包括序列Si， 在該序列期間，可以進(jìn)行待分離的混合物的注射。如果在短于周期T3的持續(xù)時(shí)間的一段 時(shí)間內(nèi)注射所述混合物，則序列Sl可能具有短于周期T3的持續(xù)時(shí)間。注射所述混合物 的時(shí)刻以及所述混合物注射的柱是可變的，根據(jù)情況，所述注射序列可以在所述循環(huán)的 多個(gè)周期中的一個(gè)周期內(nèi)進(jìn)行，或者甚至所述注射序列可以在一個(gè)周期期間開(kāi)始、在下 一個(gè)周期期間結(jié)束。
在所述裝置的單個(gè)點(diǎn)處進(jìn)行目標(biāo)產(chǎn)物中富集的級(jí)分的抽出。根據(jù)圖1，在所述柱3的出口 32處進(jìn)行抽出。這是有利的，因?yàn)槿垦b置僅需要安裝一個(gè)抽出裝置而不是 每根柱安裝一個(gè)裝置。因此，這種裝置需要較少的導(dǎo)管和閥門(mén)并且更容易清洗。進(jìn)一步 地，所述裝置的控制更簡(jiǎn)單。
間歇地進(jìn)行目標(biāo)產(chǎn)物中富集的級(jí)分的抽出，即所述抽出經(jīng)過(guò)一段時(shí)間之后間 斷。這種抽出在抽出體積的調(diào)整方面具有顯著的靈活性的優(yōu)點(diǎn)。這可以實(shí)現(xiàn)級(jí)分濃度的 調(diào)整以保持在所述系統(tǒng)的物理極限內(nèi)(在流動(dòng)相中的溶解度、固定相的飽和度)。抽出體 積越小，所述濃度越大。進(jìn)一步地，這種抽出的應(yīng)用比連續(xù)抽出更簡(jiǎn)單。
目標(biāo)產(chǎn)物中富集的級(jí)分的抽出是循環(huán)的在所述多個(gè)周期中的一個(gè)周期期間進(jìn) 行抽出或者可以在一個(gè)周期期間開(kāi)始、在下一個(gè)周期期間結(jié)束。所述抽出可以是全部的 或部分的(取從一根柱流至下一根柱的流體的一部分作為樣品)。根據(jù)圖1的例子，在 周期T3期間，在抽出點(diǎn)62處抽出目標(biāo)產(chǎn)物中富集的級(jí)分。因此，所述周期T3可以包括 序列Si，在該序列期間可以進(jìn)行目標(biāo)產(chǎn)物中富集的級(jí)分的抽出。如果在短于周期T3的 持續(xù)時(shí)間的周期時(shí)間內(nèi)抽出目標(biāo)產(chǎn)物中富集的級(jí)分，則序列Sl可具有短于周期T3的持 續(xù)時(shí)間。作為實(shí)施例，圖1示出了可以在同一個(gè)序列Sl期間，在抽出點(diǎn)62處進(jìn)行抽出 并且在注射點(diǎn)61處進(jìn)行混合物的注射；但是，所述注射和所述抽出可在不同的序列期間 進(jìn)行。進(jìn)一步地，根據(jù)圖1的實(shí)施例，目標(biāo)產(chǎn)物中富集的級(jí)分的抽出可以延長(zhǎng)超出序列 Si、直至序列幻，在序列S2期間不再注射混合物。作為實(shí)施例，圖1還示出了所述周 期T3比序列31和幻更長(zhǎng)。因此，所述周期T3可以包括序列S3，在該序列期間，既不 進(jìn)行目標(biāo)產(chǎn)物中富集的級(jí)分的抽出也不進(jìn)行混合物的注射。
優(yōu)選地，如果在第一根柱的入口處注射待分離的混合物，則在最后一根柱的出 口處抽出目標(biāo)產(chǎn)物。這是特別有利的，因?yàn)槟繕?biāo)產(chǎn)物在流過(guò)系統(tǒng)的所有柱后被抽出。
根據(jù)圖1，待分離的混合物的注射以及目標(biāo)產(chǎn)物的抽出可以同時(shí)進(jìn)行。在圖1的 具體的例子中，在循環(huán)期間，目標(biāo)產(chǎn)物的抽出與待分離的混合物的新的注射同時(shí)開(kāi)始。 但是這種具體的例子對(duì)于本發(fā)明并非限定性的。
在進(jìn)行注射待處理的原料的步驟的過(guò)程中，可以停止一種或多種洗脫劑的注 射。并且，在目標(biāo)產(chǎn)物的抽出過(guò)程中，可以停止一種或多種洗脫劑的注射。進(jìn)行注射和 抽出目標(biāo)產(chǎn)物的周期可以具有不同的持續(xù)時(shí)間。
圖2示出了采用兩根柱的分離方法的操作實(shí)施例。在包含兩個(gè)串聯(lián)柱的裝置上 實(shí)施所述方法。根據(jù)圖2，在循環(huán)的第一個(gè)周期Tl期間，將兩種不同洗脫強(qiáng)度的洗脫劑 注入柱1和2中。
周期Tl可以分為兩個(gè)序列。第一序列Sl包括分別在注射點(diǎn)41和42處將兩種 洗脫劑A和B注入柱1和2中。第二序列幻包括分別在注射點(diǎn)41和43處將兩種洗脫 劑A和C注入柱1和2中。
經(jīng)過(guò)周期Tl后，所述方法進(jìn)行至周期T2。所述周期T2也包括兩個(gè)序列Sl和 幻。置換用于注射洗脫劑的點(diǎn)，以在序列Sl期間將兩種洗脫劑A和B分別注入柱2和1 中(注射點(diǎn)41和42)并在序列幻期間將洗脫劑A和C分別注入柱2和1中(注射點(diǎn)41 和43)。在第二周期T2期間，柱2的出口與柱1的入口相連。所述循環(huán)由兩個(gè)周期組 成。用于注射待分離的混合物和用于抽出目標(biāo)產(chǎn)物的序列(未示出)在循環(huán)期間僅出現(xiàn) 一次。例如在周期T2的序列Sl期間，可以在柱2的入口處注射混合物，并且在周期T2的序列Sl和幻期間，可以在柱1的出口處抽出目標(biāo)產(chǎn)物。所述實(shí)施例對(duì)于周期中的事 件和序列的數(shù)量并非是限定性的。
圖3和4示出了混合物注射裝置。這些裝置采用泵13和14和附加柱5。附加 柱5又稱(chēng)為預(yù)柱。所述混合物在到達(dá)裝置前在附加柱5中流通。這樣的附加柱5的目 的在于保留待分離的混合物中的某些雜質(zhì)，特別是那些非常牢固地吸附在所述柱上的雜 質(zhì)。因此，這限制了某些雜質(zhì)對(duì)裝置的污染，從而便于裝置的清洗。
圖3示出了一種用于注射混合物的裝置，在所述裝置中，將附加柱5插在第一根 柱的出口和第二根柱的入口之間，這兩根柱串聯(lián)安裝在一起。例如，在圖1中，可以將 附加柱5插在柱3的出口 32和柱1的入口 11之間。將兩個(gè)三向閥門(mén)6和7設(shè)置在附加 柱5的入口和出口處，并在串聯(lián)柱和附加柱5之間形成連接。通過(guò)入口6處的閥門(mén)還可 進(jìn)行待分離的混合物8或者再生溶劑9的注射，以清洗附加柱5。通過(guò)設(shè)置在出口 7處的 閥門(mén)還可使得附加柱5的出口與下一根柱的入口斷開(kāi)以通過(guò)管線(xiàn)10排出再生溶劑9和待 排出的雜質(zhì)。這樣僅附加柱5需要被再生而不是裝置整體，所以是特別有利的。另一個(gè) 優(yōu)點(diǎn)是可以清洗附加柱而不污染所述裝置。清洗、再生的序列可以在循環(huán)期間中發(fā)生。
圖4示出了用于注射混合物的裝置，在所述裝置中，未將所述附加柱5或預(yù)柱直 接插在第一根柱的出口和與第一根柱串聯(lián)的第二根柱的入口之間，而是將其插在一組導(dǎo) 管和三向閥門(mén)(17、18、19、20)中以實(shí)現(xiàn)以下不同的組合可以在柱的入口處直接注入 待分離的混合物8，或者在流通經(jīng)過(guò)附加柱5后注入所述混合物。所述附加柱5可以與 柱的入口斷開(kāi)并進(jìn)行再生而不污染所述裝置，而不會(huì)因再生附加柱5的步驟而中所述方 法。例如，在圖1中，所述附加柱5可以通過(guò)閥門(mén)19與柱3的出口 32相連并且通過(guò)閥 門(mén)20與柱1的入口 11相連。也可發(fā)現(xiàn)當(dāng)將閥門(mén)19和20直接連接在一起時(shí)，附加柱5 可能短路。
作為實(shí)施例，圖3和4的裝置示出了兩種使用附加柱5以進(jìn)行原料注射的方法； 可以自然而然地想到使用不同數(shù)量的兩向或多向閥門(mén)、泵和溶劑的裝置。并且，所述附 加柱中的流體流動(dòng)方向可以與圖3和4相反。
也可以不通過(guò)泵而是通過(guò)加壓容器將待處理的原料注入系統(tǒng)中。
通過(guò)抽出線(xiàn)路的周期性置換、或者在系統(tǒng)的單個(gè)點(diǎn)處抽出待處理的原料的其他 級(jí)分。可選地，所述級(jí)分的抽出對(duì)整個(gè)流進(jìn)行或者通過(guò)部分抽出來(lái)進(jìn)行。
也可以在每個(gè)周期增加再生序列以再生系統(tǒng)的柱。
根據(jù)本發(fā)明的方法也適用于非液體洗脫的情況，例如申請(qǐng)WO-A-2008025887中 所描述的含有CO2的流體，例如超臨界或亞臨界流體。然后可以添加共溶劑。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)替換的實(shí)施方式，所述柱可以具有一致或不一致的體積。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)替換的實(shí)施方式，所述周期的持續(xù)時(shí)間可以為一致的或不一 致的。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)替換的實(shí)施方式，可以增加清洗序列、用于解吸牢固保留的 產(chǎn)物序列、用于再生或平衡柱的序列，并且取決于周期，這些序列可以具有相同或不同 的持續(xù)時(shí)間。根據(jù)一個(gè)替換的實(shí)施方式，可以通過(guò)逆轉(zhuǎn)洗脫的方向執(zhí)行這些步驟。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)替換的實(shí)施方式，可以經(jīng)常在系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)用于抽 出不需要的產(chǎn)物的序列。采用這種抽出，可以避免某些保留時(shí)間與目標(biāo)產(chǎn)物的停留時(shí)間9接近的雜質(zhì)的濃度過(guò)高。
以下的實(shí)施例以非限定的方式對(duì)本發(fā)明做出了更詳盡的說(shuō)明。
實(shí)施例1
下述實(shí)施例從模擬的角度相比于分批方法說(shuō)明了本發(fā)明方法的應(yīng)用。在該實(shí)施 例中，所述模擬通過(guò)重復(fù)幾個(gè)循環(huán)準(zhǔn)確地再現(xiàn)了實(shí)施例中所描述的序列。
采用的模型為L(zhǎng)DF(線(xiàn)性驅(qū)動(dòng)力)定律所描述的抵抗內(nèi)部轉(zhuǎn)移的擴(kuò)散活塞型。 參數(shù)選自于當(dāng)改性劑濃度等于用于定義所述平衡定律的參數(shù)的改性劑濃度時(shí)所確定的范 第姆特(Van Deemter)定律的系數(shù)。吸附平衡定律和待處理的原料的組成也可以采用 Strohleta 等所提出的模型(色譜期刊(J.Chrom.)，A 1126(1-2), 338-346，2006)，考慮 直徑為Icm且長(zhǎng)度為30cm的柱，以1.6mL/min的速率洗脫，當(dāng)改性劑含量為180g/L 時(shí)，待處理的原料的三種化合物的保留時(shí)間分別為127、168和208.5分鐘；當(dāng)改性劑含 量為200g/l時(shí)，保留時(shí)間分別為38.5、49.5和60.5分鐘。
所述實(shí)施例重復(fù)根據(jù)圖1的方法。
柱的長(zhǎng)度和直徑分別為IOcm和1cm。
通過(guò)點(diǎn)41、42和43分別在點(diǎn)11、12和13處將具有不同洗脫強(qiáng)度的洗脫劑A、 B和C注入柱1、2和3中。出口 4與柱3的出口 32相連。
經(jīng)過(guò)周期Tl后，置換洗脫劑A、B和C的注射點(diǎn)41、42和43。將注射點(diǎn)41、 42和43進(jìn)行置換，以在點(diǎn)21、31和11處分別將洗脫劑A、B和C注入柱2、3和1中。 然后出口 4與柱1的出口 12相連。
經(jīng)過(guò)周期T2后，置換注射點(diǎn)41、42和43以在點(diǎn)31、11和21處分別將洗脫劑 A、B和C注入柱3、1和2中，并且出口 4與柱2的出口 22相連。
周期Tl、T2和T 3持續(xù)12.5分鐘。持續(xù)時(shí)間為37.5分鐘的循環(huán)在t = 0時(shí)開(kāi) 始。周期Tl從0延續(xù)至12.5η ι。周期Τ2從12.5延續(xù)至25分鐘。周期Τ3從25延續(xù) 至 37.5min。
如圖1中所示，可以將周期T3劃分為三個(gè)序列。第一序列Sl從25延續(xù)至沈.5 分鐘。在這個(gè)周期期間，將3.45mL待分離的混合物注入柱1的入口 11中。在柱3的出 口 32處進(jìn)行抽出。
第二序列幻從沈.5延續(xù)至27.1分鐘。不再進(jìn)行待分離的混合物的任何注射。 始終在柱3的出口 32處進(jìn)行抽出。
第三序列幻從27.1延續(xù)至37.5分鐘。不再進(jìn)行待分離的混合物的任何注射或 任何抽出。
在這種特定的情況下，發(fā)現(xiàn)注射和抽出在t = 25mte時(shí)同時(shí)開(kāi)始，注射比抽出早 結(jié)束在時(shí)，這可能發(fā)生但并不是常規(guī)情況。
在這個(gè)實(shí)施例中，洗脫劑A的改性劑成分在周期開(kāi)始和結(jié)束之間在205至215g/ L之間線(xiàn)性變化，以改變洗脫劑A的洗脫強(qiáng)度。另一方面，洗脫劑B和C的改性劑含 量保持不變并分別等于180.7和172.8g/L。洗脫劑A、B和C的流速分別為1.6、0.8和 1.4mL/min0
圖5示出了在柱3的出口處獲得的色譜。在圖5中，化合物II為需要純化的目 標(biāo)化合物。曲線(xiàn)51為化合物I濃度對(duì)時(shí)間的曲線(xiàn)。曲線(xiàn)52為化合物II濃度對(duì)時(shí)間的曲線(xiàn)。曲線(xiàn)53為化合物III濃度對(duì)時(shí)間的曲線(xiàn)。曲線(xiàn)M為改性劑濃度對(duì)時(shí)間的曲線(xiàn)。虛 線(xiàn)之間的間隔55限定了與抽出對(duì)應(yīng)的時(shí)間間隔。產(chǎn)率為89%時(shí)的純度為96%。圖6示 出了根據(jù)分批方法注射通過(guò)梯度(改性劑濃度Cm。d= 180-215g/L)洗脫(流速Q(mào)= 1.6mL/ min)的、注射體積為3.45mL的、化合物I、II、III (各自的濃度為0.15、0.55和0.25g/ L)的混合物時(shí)的色譜。柱的長(zhǎng)度和直徑分別為30cm和lcm。化合物II為需要純化的目 標(biāo)化合物。曲線(xiàn)51為化合物I濃度對(duì)時(shí)間的曲線(xiàn)。曲線(xiàn)52為化合物II濃度對(duì)時(shí)間的曲 線(xiàn)。曲線(xiàn)53為化合物III濃度對(duì)時(shí)間的曲線(xiàn)。曲線(xiàn)M為改性劑濃度對(duì)時(shí)間的曲線(xiàn)。點(diǎn) 劃線(xiàn)55表示純度為94%并且產(chǎn)率為20%的抽出級(jí)分。因此，對(duì)于每循環(huán)所處理的相同 體積的原料而言，使用相同量的固定相時(shí)，根據(jù)本發(fā)明的方法可以提高純度和產(chǎn)率。
實(shí)施例2
該實(shí)施例重復(fù)實(shí)施例1的條件，并且在根據(jù)圖2所示的兩根柱上實(shí)施。柱的長(zhǎng) 度和直徑分別為IOcm和lcm。
在第一周期期間，柱1的出口與柱2的入口相連。在第一周期期間，在序列Sl 期間，分別將洗脫劑A和B注入柱1和2中。在第一周期期間，在序列S2期間，分別 將洗脫劑A和C注入柱1和2中。
在第二周期期間，柱2的出口與柱1的入口相連。在第二周期期間，在序列Sl 期間，分別將洗脫劑A和B注入柱2和1中。在第二周期期間，在序列S2期間，分別 將洗脫劑A和C注入柱2和1中。
序列Sl持續(xù)7.5分鐘，序列S2持續(xù)17分鐘。周期的持續(xù)時(shí)間為M.5分鐘，所 述循環(huán)的總持續(xù)時(shí)間為49分鐘。
在周期期間，從0至7.5分鐘，洗脫劑A的組成為190g/L的改性劑，然后線(xiàn)性 變化直至在周期結(jié)束時(shí)該組成達(dá)到200g/L。
洗脫劑B和C的組成是固定的并等于215g/L和127g/L。
洗脫劑A、B和C的流速分別為2、1.33和0.25mL/min。
在38.5和39.5min之間，將待分離的混合物注入柱1中，流速為2mL/min。
在38.5和40.5η ι之間，在柱2的出口處收集目標(biāo)產(chǎn)物。產(chǎn)率為76%時(shí)所獲得 的目標(biāo)產(chǎn)物的純度為93%。
實(shí)施例3
下述的實(shí)施例描述了所述方法在兩種含有腦啡肽的復(fù)雜混合物Ml和Μ2上的應(yīng) 用，所述腦啡肽是根據(jù)Fmoc法在固相上合成肽而獲得的。對(duì)于每一種原料而言，根據(jù)以 下提供的方法研發(fā)出相同的模型。
為了確定模型，必須計(jì)算峰的保留時(shí)間和峰的分散度(dispersion)。
峰的保留時(shí)間由吸附平衡定律重現(xiàn)，后者與前述的實(shí)施例中所使用的定律相 同。通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)算平衡定律的參數(shù)。圖7、8和9示出了用混合物Ml獲得的色譜 (UV，λ = 220nm)，采用不同組成的水/乙醇(分別為75/25、70/30和65/35)作為 緩沖液以洗脫所述混合物，使用長(zhǎng)度為15cm且直徑為0.46cm的柱(固定相為Kromasil C18-5ym)。洗脫流速為0.5mL/mte。所獲得的腦啡肽的保留時(shí)間分別為23.0min、 12.4min和7.8η ι。通過(guò)獲得的停留時(shí)間可以推算出平衡定律的參數(shù)。
通過(guò)顆粒直徑分別為5和25 μ m的圖10和11的色譜上所測(cè)得的分散度來(lái)推算出11可用以計(jì)算出所述峰的分散度的參數(shù)。所采用的分散定律為簡(jiǎn)化的范第姆特定律
HETP = A.dp+Bu
其中HETP 理論的平臺(tái)高度(cm)
u 流體的線(xiàn)速度(cm/s)
dp:顆粒直徑(cm)
A，B 系數(shù)(A = 7.8，B = 0.588s, B取決于顆粒直徑的平方，該值為當(dāng)(Ip = 20 μ m時(shí)的值)
混合物Ml和M2的腦啡肽的含量分別為51 %和92% (λ = 220nm的UV色譜 下的表面)。采用這種模型可以以具代表性的方式重現(xiàn)腦啡肽峰的特征以及最接近的雜質(zhì) 的特征。圖10和11示出采用了這種模型獲得的色譜(點(diǎn)線(xiàn))，以及通過(guò)實(shí)驗(yàn)獲得的色譜 (實(shí)線(xiàn))。因此，可以采用這種模型進(jìn)行具代表性的方法的計(jì)算。
下面描述根據(jù)圖13中的方法對(duì)混合物Ml所進(jìn)行的調(diào)整。
完整的循環(huán)(9.15η ι)由三個(gè)周期Tl、Τ2和Τ3組成。由持續(xù)時(shí)間分別為0.775 和2.275min的兩個(gè)序列Sl和S2限定周期。圖12示出了第一周期Tl期間的入口和出口 線(xiàn)路。周期Tl、T2和T3的持續(xù)時(shí)間為3.05η ι。通過(guò)分別轉(zhuǎn)換一根或兩根柱的入口和 出口線(xiàn)路的位置，由第一周期Tl推算周期Τ2和Τ3(參考圖13)。
周期Tl包括兩個(gè)序列Sl和S2。第一序列Sl包括將三種洗脫劑A、B和D分 別在點(diǎn)11、21和31處通過(guò)注射點(diǎn)41、42和43注入柱1、2和3中。出口 51和52分別 與柱2和3的出口 22和32相連。第二序列幻包括將三種洗脫劑A、B和C分別在點(diǎn) 11、21和31處通過(guò)注射點(diǎn)41、42和43注入柱1、2和3中。出口 52與柱3的出口 32 相連。在第二序列期間，柱2的出口與柱3的入口相連。
在周期Tl結(jié)束時(shí)，置換洗脫劑的注射點(diǎn)41、42和43。所述方法延續(xù)至周期 Τ2。周期Τ2也包括兩個(gè)序列Sl和S2。置換用于注射洗脫劑的點(diǎn)以在序列Sl期間將洗 脫劑A、B和D分別注入柱2、3和1中(注射點(diǎn)為41、42和43)且出口 51和52與柱3 和1的出口 32和12相連，并且在序列幻期間將洗脫劑A、B和C分別注入柱2、3和 1中(注射點(diǎn)為41、42和43)且出口 52與柱1的出口 12相連。在所述第二序列幻期 間，柱3的出口與柱1的入口相連。
在周期Τ2結(jié)束時(shí)，置換洗脫劑的注射點(diǎn)41、42和43。所述方法延續(xù)至周期 Τ3。周期Τ3也包括兩個(gè)序列Sl和S2。置換用于注射洗脫劑的點(diǎn)以在序列Sl期間將洗 脫劑A、B和D分別注入柱3、1和2中(注射點(diǎn)為41、42和43)且出口 51和52與柱1 和2的出口 12和22相連，并且在序列幻期間將洗脫劑A、B和C分別注入柱3、1和 2中(注射點(diǎn)為41、42和43)且出口 52與柱2的出口 22相連。在所述第二序列幻期 間，柱1的出口與柱2的入口相連。
洗脫劑Α、B、C和D的線(xiàn)路具有下述的組成和流速的特征
線(xiàn)路 A 5mL/min,在 Sl 期間 33-33.5 % EtOH ν/ν,在 S2 期間 33.5_；35 % EtOH ν/ν
線(xiàn)路 B: 0.5mL/min, 20% EtOH ν/ν
線(xiàn)路 C 0.5mL/min, 20% EtOH ν/ν
線(xiàn)路 D 6mL/min, 50% EtOH ν/ν
每循環(huán)在周期T3開(kāi)始時(shí)發(fā)生一次用于注射待分離的混合物和用于抽出目標(biāo)產(chǎn)物 的序列SO (示于圖14中)。
在所述第三周期T3開(kāi)始時(shí)(t = 6.IOmin時(shí))，同時(shí)收集目標(biāo)產(chǎn)物和注射待處理 的混合物并持續(xù)0.5min。在柱3的出口 32處通過(guò)出口 53進(jìn)行所述收集，并且在柱1的 入口 11處通過(guò)注射點(diǎn)42進(jìn)行所述注射。由此獲得的純度和產(chǎn)率都高于99%。
下面描述根據(jù)圖13的方法對(duì)混合物M2所進(jìn)行的調(diào)整。
仍然由持續(xù)時(shí)間分別為0.72和3.5min的兩個(gè)序列Sl和S2(參考圖12和13)限 定周期。所述周期的持續(xù)時(shí)間為4.22η ι。
洗脫劑A、B、C和D的線(xiàn)路具有下述的組成和流速的特征
EtOH ν/ν
線(xiàn)路 A: 3.5mL/min,在 Sl 期間 33.1-33.6% KOH v/v，在 S2 期間 33.6- %線(xiàn)路B 線(xiàn)路C 線(xiàn)路D0.28mL/min，20% EtOH ν/ν 0.3mL/min, 20% EtOH ν/ν 5mL/min, 50% EtOH ν/ν次用于注射待分離的混合物和用于抽出目標(biāo)產(chǎn)物
每循環(huán)在周期Τ2開(kāi)始時(shí)發(fā)生 的序列S0(示于圖15中)。
在所述第二周期T2(在t= 7.6η ι和t = 8.1η ι之間)開(kāi)始時(shí)，同時(shí)收集目標(biāo) 產(chǎn)物和注射待處理的混合物并持續(xù)0.5η ι。在柱3的出口 32處通過(guò)出口 51進(jìn)行所述收 集，并且在柱1的入口 11處通過(guò)注射點(diǎn)43進(jìn)行所述注射。由此獲得的純度和產(chǎn)率都高 于 99%。
前述的實(shí)施例顯示所述方法適應(yīng)于不同特性的待純化的原料?；旌衔铴?中的 雜質(zhì)特性表現(xiàn)出其雜質(zhì)更接近于目標(biāo)產(chǎn)物，這解釋了調(diào)整中出現(xiàn)細(xì)微差別的原因。1權(quán)利要求
1.一種用于將待分離的混合物的級(jí)分分離的方法，所述方法包括以下步驟 -提供包含至少兩個(gè)串聯(lián)安裝的色譜柱的裝置，-在所述裝置的單個(gè)點(diǎn)處間歇地注射待分離的混合物，-在所述裝置的單個(gè)點(diǎn)處間歇地抽出目標(biāo)產(chǎn)物中富集的級(jí)分，-將洗脫劑注入每根柱中并置換用于注射洗脫劑的點(diǎn)，所述洗脫劑具有不同的洗脫強(qiáng)度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述待分離的混合物的注射是循環(huán)的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述富集的級(jí)分的抽出是循環(huán)的。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述洗脫劑的注射點(diǎn)的置換是周期性的。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，連續(xù)或間歇地注射所述洗脫劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，間歇地注射至少一種洗脫劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，每種洗脫劑的組成是恒定的。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，至少一種洗脫劑的組成是相 互獨(dú)立地可變的。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，異步地置換地至少一種洗脫劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，按照流動(dòng)相的流動(dòng)方向， 至少兩根柱將用于注射待處理的原料的點(diǎn)和用于抽出目標(biāo)產(chǎn)物的點(diǎn)分開(kāi)。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，按照流動(dòng)相的流動(dòng)方向， 所述系統(tǒng)的所有柱將用于注射待處理的原料的點(diǎn)和用于抽出目標(biāo)產(chǎn)物的點(diǎn)分開(kāi)。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，采用選自包括注射環(huán)路和 注射泵、加壓容器的組的元件注射待分離的混合物。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述待分離的混合物在被 注入所述裝置前，在附加的色譜柱中流通。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，將所述附加的色譜柱插在 所述混合物的注射元件和所述用于將混合物注入所述裝置的單個(gè)點(diǎn)之間或使所述附加的 色譜柱位于所述裝置的兩根柱之間。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的方法用于分離合成分子、天然提取物、通過(guò)發(fā) 酵獲得的蛋白質(zhì)、通過(guò)合成或半合成獲得的蛋白質(zhì)、免疫球蛋白、單克隆抗體、通過(guò)發(fā) 酵獲得的肽、通過(guò)合成或半合成獲得的肽的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于將待分離的混合物的級(jí)分分離的方法，所述方法包括以下步驟提供包含至少兩個(gè)串聯(lián)連接的色譜柱的裝置；在所述裝置的單個(gè)點(diǎn)處間歇地注射待分離的混合物；在所述裝置的單個(gè)點(diǎn)處間歇地抽出目標(biāo)產(chǎn)物中富集的級(jí)分；將洗脫劑注入每根柱中并置換洗脫劑注射點(diǎn)，所述洗脫劑具有不同的洗脫強(qiáng)度。本發(fā)明方法可實(shí)現(xiàn)有效的、易于實(shí)施的分離。
文檔編號(hào)G01N30/46GK102026695SQ200980117571
公開(kāi)日2011年4月20日 申請(qǐng)日期2009年4月3日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月3日
發(fā)明者埃克托爾·奧蘇納·桑切斯, 米歇爾·巴伊, 艾瑞克·瓦雷瑞 申請(qǐng)人:諾華賽公司