專利名稱：甲型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種甲型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒及其制備方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
甲型病毒性肝炎簡(jiǎn)稱甲型肝炎，是由甲型肝病毒(HAV)引起的一種腸道傳染病。甲型肝病毒(HAV)是一種正鏈RNA病毒，屬微小RNA病毒科肝病毒屬。甲型肝炎是消化道傳染性疾病，它可引起暴發(fā)流行，并且在感染初期即可導(dǎo)致肝功能損害，是一種常見的流行性疾病。一般通過糞—口途徑傳播，具有傳染性強(qiáng)，流行面廣等特點(diǎn)，可短期內(nèi)大規(guī)模傳染。因此，早期準(zhǔn)確而特異地診斷甲型肝炎，對(duì)于甲型肝炎的防治具有重要意義。
目前HAV感染的實(shí)驗(yàn)室診斷方法主要有血清學(xué)檢查及分子生物學(xué)技術(shù)，常用的方法有代謝抑制試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫法等。
代謝抑制試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫法等操作繁瑣，需要一些較大型的儀器設(shè)備，操作復(fù)雜，價(jià)格昂貴，需專門人員操作實(shí)驗(yàn)等，在一定程度上限制了其應(yīng)用；補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)參與反應(yīng)的成分多，影響因素復(fù)雜，操作步驟繁瑣并且要求十分嚴(yán)格，容易出現(xiàn)錯(cuò)誤。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種適用于臨床輔助診斷和鑒別的甲型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒及其制備方法，該試劑盒具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、使用便捷、檢測(cè)速度快的優(yōu)點(diǎn)。
為解決以上問題，本發(fā)明的技術(shù)方案如下甲型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述試劑盒包括 檢測(cè)盒，包括檢測(cè)盒盒體和盒蓋，盒蓋的內(nèi)側(cè)設(shè)有硝酸纖維素膜，與硝酸纖維素膜位置對(duì)應(yīng)的盒蓋上設(shè)有反應(yīng)孔，檢測(cè)盒盒體內(nèi)設(shè)有吸水墊，硝酸纖維素膜上設(shè)有有檢測(cè)點(diǎn)和質(zhì)控點(diǎn)； 金標(biāo)工作液瓶，盛有金標(biāo)工作液，該金標(biāo)工作液由金標(biāo)濃縮液與稀釋液混合而成；和 洗滌液瓶，盛有洗滌液，該洗滌液包括三羥甲基氨基甲烷、氯化鈉、牛血清白蛋白和鹽酸； 其中，檢測(cè)點(diǎn)包被有固相抗人IgM，質(zhì)控點(diǎn)包被有羊抗鼠抗體。
作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn) 所述金標(biāo)濃縮液與稀釋液的混合體積比為1∶15-30。
所述金標(biāo)濃縮液與稀釋液的混合體積比為1∶20。
所述制備方法包括檢測(cè)盒、金標(biāo)工作液和洗滌液的制備； 其中，金標(biāo)工作液的制備包括以下步驟 a、制備金標(biāo)濃縮液 取1-4％的氯金酸水溶液100ml，加熱至沸騰，加入0.5-1％檸檬酸三鈉溶液0.8ml，迅速混勻，待溶液顏色由淡黃→藍(lán)色→紫色→完全透明的酒紅色，繼續(xù)煮沸10分鐘，停止加熱，冷卻至室溫； 向得到的溶液中加入1mg/ml的甲肝抗原溶液100μl，得到混合溶液； 然后將混合溶液進(jìn)行離心處理，棄去上清液，得到下層金標(biāo)濃縮液，備用； b、制備稀釋液 將121.1-363.3mg的三羥甲基氨基甲烷、0.1-1mg的氯化鈉和0.5-2mg的牛血清白蛋白置于容量瓶?jī)?nèi)，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然后繼續(xù)加入雙蒸水至100mL，最后用鹽酸將其pH調(diào)節(jié)至7.4，得到稀釋液，在2～8℃下保存，備用； c、將稀釋液與金標(biāo)濃縮液按混合，得到金標(biāo)工作液，并放置在金標(biāo)工作液瓶?jī)?nèi)。
所述洗滌液的制備包括以下步驟 將121.1-242.2mg的三羥甲基氨基甲烷、0.1-1mg的氯化鈉和0.1-1mg的牛血清白蛋白置于容量瓶?jī)?nèi)，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然后繼續(xù)加入雙蒸水至100mL，再用鹽酸將其pH調(diào)節(jié)為7.4，得到洗滌液，放在洗滌液瓶?jī)?nèi)，置于2～8℃下保存。
所述檢測(cè)盒的制備包括以下步驟 首先在硝酸纖維素膜的檢測(cè)點(diǎn)包被固相抗人IgM，在質(zhì)控點(diǎn)包被羊抗鼠抗體； 然后將盒蓋、硝酸纖維素膜、吸水墊和檢測(cè)盒盒體按照從上而下的順序組裝并扣緊，組裝成檢測(cè)盒； 將檢測(cè)盒放置在濕度小于40％的環(huán)境下干燥2小時(shí)； 最后將干燥后的檢測(cè)盒放置在鋁箔袋內(nèi)并封口。
步驟b中，三羥甲基氨基甲烷的用量為242.2mg，氯化鈉的用量為0.9mg，牛血清白蛋白的用量為1mg。
所述三羥甲基氨基甲烷的用量為121.1mg，氯化鈉的用量為0.9mg，牛血清白蛋白的用量為0.5mg。
本發(fā)明采用以上技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)只需將待測(cè)血清滴入檢測(cè)盒的硝酸纖維素膜上，就能快速診斷甲型肝炎病毒特異性抗體，使用簡(jiǎn)單便捷、檢測(cè)速度快，臨床檢驗(yàn)不需任何儀器，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，避免了實(shí)驗(yàn)過程中各種因素對(duì)結(jié)果的影響以及減輕了操作人員的勞動(dòng)強(qiáng)度。
下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明


附圖1為本發(fā)明實(shí)施例中試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖； 附圖2為本發(fā)明實(shí)施例中檢測(cè)盒的結(jié)構(gòu)示意圖； 附圖3為附圖2中A-A向的剖視圖。
圖中， 1-金標(biāo)工作液瓶，2-洗滌液瓶，3-盒蓋，4-硝酸纖維素膜，5-吸水墊，6-檢測(cè)盒盒體，7-檢測(cè)點(diǎn)，8-質(zhì)控點(diǎn)，9-反應(yīng)孔，10-鋁箔袋。
具體實(shí)施例 實(shí)施例1，如圖1所示，甲型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒，包括檢測(cè)盒、金標(biāo)工作液瓶1以及洗滌液瓶2，檢測(cè)盒放置在鋁箔袋10內(nèi)。
如圖2、圖3所示，檢測(cè)盒包括檢測(cè)盒盒體6和盒蓋3，盒蓋3的內(nèi)側(cè)設(shè)有硝酸纖維素膜4，與硝酸纖維素膜4位置對(duì)應(yīng)的盒蓋3上設(shè)有反應(yīng)孔9，檢測(cè)盒盒體6內(nèi)設(shè)有吸水墊5，硝酸纖維素膜4上設(shè)有檢測(cè)點(diǎn)7和質(zhì)控點(diǎn)8，檢測(cè)點(diǎn)7包被有固相抗人IgM，質(zhì)控點(diǎn)8包被有羊抗鼠抗體。
金標(biāo)工作液瓶1內(nèi)盛有金標(biāo)工作液，該金標(biāo)工作液是由金標(biāo)濃縮液經(jīng)稀釋液稀釋所獲得的。
洗滌液瓶2內(nèi)盛有洗滌液，該洗滌液是由三羥甲基氨基甲烷、氯化鈉、牛血清白蛋白和鹽酸配制獲得的。
該試劑盒通過以下步驟制備 (一)檢測(cè)盒的制備 首先在硝酸纖維素膜的檢測(cè)點(diǎn)7包被固相抗人IgM，在質(zhì)控點(diǎn)8包被羊抗鼠抗體； 然后將盒蓋3、硝酸纖維素膜4、吸水墊5和檢測(cè)盒盒體6按照從上而下的順序組裝并扣緊，組裝成檢測(cè)盒； 將檢測(cè)盒放置在濕度小于40％的環(huán)境下干燥2小時(shí)； 最后將干燥后的檢測(cè)盒放置在鋁箔袋10內(nèi)并封口； (二)金標(biāo)工作液的制備 a、制備金標(biāo)濃縮液 取1％的氯金酸水溶液100ml，加熱至沸騰，加入0.5％檸檬酸三鈉溶液0.8ml，迅速混勻，待溶液顏色由淡黃→藍(lán)色→紫色→完全透明的酒紅色，繼續(xù)煮沸10分鐘，停止加熱，冷卻至室溫； 向得到的溶液中加入1mg/ml的甲肝抗原溶液100μl，得到混合溶液； 然后將混合溶液進(jìn)行離心處理，棄去上清液，得到下層金標(biāo)濃縮液，備用； b、制備稀釋液 將121.1mg的三羥甲基氨基甲烷、0.1mg的氯化鈉和0.5mg的牛血清白蛋白置于容量瓶?jī)?nèi)，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然后繼續(xù)加入雙蒸水至100mL，最后用鹽酸將其pH調(diào)節(jié)至7.4，得到稀釋液，在2～8℃下保存，備用； c、將稀釋液與金標(biāo)濃縮液按15∶1的體積比混合，得到金標(biāo)工作液，并放置在金標(biāo)工作液瓶1內(nèi)； (三)制備洗滌液 將121.1mg的三羥甲基氨基甲烷、0.1mg的氯化鈉和0.1mg的牛血清白蛋白置于容量瓶?jī)?nèi)，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然后繼續(xù)加入雙蒸水至100mL，再用鹽酸將其pH調(diào)節(jié)為7.4，得到洗滌液，放在洗滌液瓶?jī)?nèi)，置于2～8℃下保存； (四)在金標(biāo)工作液瓶1和洗滌液瓶2上貼好標(biāo)簽后與檢測(cè)盒一起組裝成試劑盒。
以上試劑盒的使用、檢測(cè)方法 1、樣本收集 將靜脈血置于干凈、未加抗凝劑的容器內(nèi)，靜置使血自然收縮，離心取血清檢測(cè)。
2、檢測(cè) a、取出試劑盒，室溫平衡20～30分鐘； b、將血清用生理鹽水按1∶200倍稀釋； c、打開包裝，滴加2滴洗滌液于硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入； d、滴加150μl待測(cè)血清于硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入； e、滴加3滴金標(biāo)工作液于硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入； f、滴加3滴洗滌液于硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入后于3分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。
3、結(jié)果判斷 陽性若被測(cè)標(biāo)本中含有甲肝病毒抗體，標(biāo)本中的特異性抗體便與硝酸纖維素膜4上的固相抗人IgM單抗發(fā)生特異性結(jié)合形成復(fù)合物，而其他無關(guān)物質(zhì)則被濾過，再加上金標(biāo)抗原，濾過時(shí)金標(biāo)抗原便與復(fù)合物結(jié)合，即可在檢測(cè)點(diǎn)7觀察到紅色反應(yīng)標(biāo)記。同時(shí)，金標(biāo)抗原與質(zhì)控點(diǎn)8上包被的羊抗鼠抗體結(jié)合，在質(zhì)控點(diǎn)8形成紅色反應(yīng)標(biāo)記，檢測(cè)點(diǎn)7有紅色反應(yīng)標(biāo)記出現(xiàn)，這表明被測(cè)標(biāo)本中含有甲肝病毒抗體，為陽性結(jié)果。
陰性若被測(cè)標(biāo)本中不含有甲肝病毒抗體，反應(yīng)體系中的金標(biāo)抗原與包被的固相抗人IgM單抗無法形成金標(biāo)復(fù)合物，即在檢測(cè)點(diǎn)7無紅色反應(yīng)標(biāo)記。同時(shí)，金標(biāo)抗原與質(zhì)控點(diǎn)8上包被的羊抗鼠抗體結(jié)合，在質(zhì)控點(diǎn)8形成紅色反應(yīng)標(biāo)記，檢測(cè)點(diǎn)7無紅色反應(yīng)標(biāo)記出現(xiàn)，這表明被測(cè)標(biāo)本中不含有甲肝病毒抗體，為陰性結(jié)果。
無效反應(yīng)后，若質(zhì)控點(diǎn)8不顯色，表明操作失誤或試劑失效。
使用本發(fā)明實(shí)施例的試劑盒對(duì)1000例測(cè)試標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下表
從以上檢測(cè)方法及檢測(cè)結(jié)果可以看出，本發(fā)明的試劑盒只需將待測(cè)血清滴入檢測(cè)盒的硝酸纖維素膜上，就能快速診斷甲型肝炎病毒特異性抗體，使用簡(jiǎn)單便捷、檢測(cè)速度快，符合率高，臨床檢驗(yàn)不需任何儀器，避免了實(shí)驗(yàn)過程中各種因素對(duì)結(jié)果的影響以及減輕了操作人員的勞動(dòng)強(qiáng)度。
實(shí)施例2，如圖1所示，甲型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒，包括檢測(cè)盒、金標(biāo)工作液瓶1以及洗滌液瓶2，檢測(cè)盒放置在鋁箔袋10內(nèi)。
如圖2、圖3所示，檢測(cè)盒包括檢測(cè)盒盒體6和盒蓋3，盒蓋3的內(nèi)側(cè)設(shè)有硝酸纖維素膜4，與硝酸纖維素膜4位置對(duì)應(yīng)的盒蓋3上設(shè)有反應(yīng)孔9，檢測(cè)盒盒體6內(nèi)設(shè)有吸水墊5，硝酸纖維素膜4上設(shè)有檢測(cè)點(diǎn)7和質(zhì)控點(diǎn)8，檢測(cè)點(diǎn)7包被有固相抗人IgM，質(zhì)控點(diǎn)8包被有羊抗鼠抗體。
金標(biāo)工作液瓶1內(nèi)盛有金標(biāo)工作液，該金標(biāo)工作液是由金標(biāo)濃縮液經(jīng)稀釋液稀釋所獲得的。
洗滌液瓶2內(nèi)盛有洗滌液，該洗滌液是由三羥甲基氨基甲烷、氯化鈉、牛血清白蛋白和鹽酸配制獲得的。
該試劑盒通過以下步驟制備 (一)檢測(cè)盒的制備 首先在硝酸纖維素膜的檢測(cè)點(diǎn)7包被固相抗人IgM，在質(zhì)控點(diǎn)8包被羊抗鼠抗體； 然后將盒蓋3、硝酸纖維素膜4、吸水墊5和檢測(cè)盒盒體6按照從上而下的順序組裝并扣緊，組裝成檢測(cè)盒； 將檢測(cè)盒放置在濕度小于40％的環(huán)境下干燥2小時(shí)； 最后將干燥后的檢測(cè)盒放置在鋁箔袋10內(nèi)并封口； (二)金標(biāo)工作液的制備 a、制備金標(biāo)濃縮液 取2％的氯金酸水溶液100ml，加熱至沸騰，加入0.7％檸檬酸三鈉溶液0.8ml，迅速混勻，待溶液顏色由淡黃→藍(lán)色→紫色→完全透明的酒紅色，繼續(xù)煮沸10分鐘，停止加熱，冷卻至室溫； 向得到的溶液中加入1mg/ml的甲肝抗原溶液100μl，得到混合溶液； 然后將混合溶液進(jìn)行離心處理，棄去上清液，得到下層金標(biāo)濃縮液，備用； b、制備稀釋液 將242.2mg的三羥甲基氨基甲烷、0.9mg的氯化鈉和1.0mg的牛血清白蛋白置于容量瓶?jī)?nèi)，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然后繼續(xù)加入雙蒸水至100mL，最后用鹽酸將其pH調(diào)節(jié)至7.4，得到稀釋液，在2～8℃下保存，備用； c、將稀釋液與金標(biāo)濃縮液按20∶1的體積比混合，得到金標(biāo)工作液，并放置在金標(biāo)工作液瓶1內(nèi)； (三)制備洗滌液 將121.1mg的三羥甲基氨基甲烷、0.9mg的氯化鈉和0.5mg的牛血清白蛋白置于容量瓶?jī)?nèi)，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然后繼續(xù)加入雙蒸水至100mL，再用鹽酸將其pH調(diào)節(jié)為7.4，得到洗滌液，放在洗滌液瓶?jī)?nèi)，置于2～8℃下保存； (四)在金標(biāo)工作液瓶1和洗滌液瓶2上貼好標(biāo)簽后與檢測(cè)盒一起組裝成試劑盒。
以上試劑盒的使用、檢測(cè)方法 1、樣本收集 將靜脈血置于干凈、未加抗凝劑的容器內(nèi)，靜置使血自然收縮，離心取血清檢測(cè)。
2、檢測(cè) a、取出試劑盒，室溫平衡20～30分鐘； b、將血清用生理鹽水按1∶200倍稀釋； c、打開包裝，滴加2滴洗滌液于硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入； d、滴加150μl待測(cè)血清于硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入； e、滴加3滴金標(biāo)工作液于硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入； f、滴加3滴洗滌液于硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入后于3分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。
3、結(jié)果判斷 陽性若被測(cè)標(biāo)本中含有甲肝病毒抗體，標(biāo)本中的特異性抗體便與硝酸纖維素膜4上的固相抗人IgM單抗發(fā)生特異性結(jié)合形成復(fù)合物，而其他無關(guān)物質(zhì)則被濾過，再加上金標(biāo)抗原，濾過時(shí)金標(biāo)抗原便與復(fù)合物結(jié)合，即可在檢測(cè)點(diǎn)7觀察到紅色反應(yīng)標(biāo)記。同時(shí)，金標(biāo)抗原與質(zhì)控點(diǎn)8上包被的羊抗鼠抗體結(jié)合，在質(zhì)控點(diǎn)8形成紅色反應(yīng)標(biāo)記，檢測(cè)點(diǎn)7有紅色反應(yīng)標(biāo)記出現(xiàn)，這表明被測(cè)標(biāo)本中含有甲肝病毒抗體，為陽性結(jié)果。
陰性若被測(cè)標(biāo)本中不含有甲肝病毒抗體，反應(yīng)體系中的金標(biāo)抗原與包被的固相抗人IgM單抗無法形成金標(biāo)復(fù)合物，即在檢測(cè)點(diǎn)7無紅色反應(yīng)標(biāo)記。同時(shí)，金標(biāo)抗原與質(zhì)控點(diǎn)8上包被的羊抗鼠抗體結(jié)合，在質(zhì)控點(diǎn)8形成紅色反應(yīng)標(biāo)記，檢測(cè)點(diǎn)7無紅色反應(yīng)標(biāo)記出現(xiàn)，這表明被測(cè)標(biāo)本中不含有甲肝病毒抗體，為陰性結(jié)果。
無效反應(yīng)后，若質(zhì)控點(diǎn)8不顯色，表明操作失誤或試劑失效。
使用本發(fā)明實(shí)施例的試劑盒對(duì)1000例測(cè)試標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下表
從以上檢測(cè)方法及檢測(cè)結(jié)果可以看出，本發(fā)明的試劑盒只需將待測(cè)血清滴入檢測(cè)盒的硝酸纖維素膜上，就能快速診斷甲型肝炎病毒特異性抗體，使用簡(jiǎn)單便捷、檢測(cè)速度快，符合率高，臨床檢驗(yàn)不需任何儀器，避免了實(shí)驗(yàn)過程中各種因素對(duì)結(jié)果的影響以及減輕了操作人員的勞動(dòng)強(qiáng)度。
實(shí)施例3，如圖1所示，甲型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒，包括檢測(cè)盒、金標(biāo)工作液瓶1以及洗滌液瓶2，檢測(cè)盒放置在鋁箔袋10內(nèi)。
如圖2、圖3所示，檢測(cè)盒包括檢測(cè)盒盒體6和盒蓋3，盒蓋3的內(nèi)側(cè)設(shè)有硝酸纖維素膜4，與硝酸纖維素膜4位置對(duì)應(yīng)的盒蓋3上設(shè)有反應(yīng)孔9，檢測(cè)盒盒體6內(nèi)設(shè)有吸水墊5，硝酸纖維素膜4上設(shè)有檢測(cè)點(diǎn)7和質(zhì)控點(diǎn)8，檢測(cè)點(diǎn)7包被有固相抗人IgM，質(zhì)控點(diǎn)8包被有羊抗鼠抗體。
金標(biāo)工作液瓶1內(nèi)盛有金標(biāo)工作液，該金標(biāo)工作液是由金標(biāo)濃縮液經(jīng)稀釋液稀釋所獲得的。
洗滌液瓶2內(nèi)盛有洗滌液，該洗滌液是由三羥甲基氨基甲烷、氯化鈉、牛血清白蛋白和鹽酸配制獲得的。
該試劑盒通過以下步驟制備 (一)檢測(cè)盒的制備 首先在硝酸纖維素膜的檢測(cè)點(diǎn)7包被固相抗人IgM，在質(zhì)控點(diǎn)8包被羊抗鼠抗體； 然后將盒蓋3、硝酸纖維素膜4、吸水墊5和檢測(cè)盒盒體6按照從上而下的順序組裝并扣緊，組裝成檢測(cè)盒； 將檢測(cè)盒放置在濕度小于40％的環(huán)境下干燥2小時(shí)； 最后將干燥后的檢測(cè)盒放置在鋁箔袋10內(nèi)并封口； (二)金標(biāo)工作液的制備 a、制備金標(biāo)濃縮液 取3％的氯金酸水溶液100ml，加熱至沸騰，加入0.8％檸檬酸三鈉溶液0.8ml，迅速混勻，待溶液顏色由淡黃→藍(lán)色→紫色→完全透明的酒紅色，繼續(xù)煮沸10分鐘，停止加熱，冷卻至室溫； 向得到的溶液中加入1mg/ml的甲肝抗原溶液100μl，得到混合溶液； 然后將混合溶液進(jìn)行離心處理，棄去上清液，得到下層金標(biāo)濃縮液，備用； b、制備稀釋液 將363.3mg的三羥甲基氨基甲烷、0.5mg的氯化鈉和1.5mg的牛血清白蛋白置于容量瓶?jī)?nèi)，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然后繼續(xù)加入雙蒸水至100mL，最后用鹽酸將其pH調(diào)節(jié)至7.4，得到稀釋液，在2～8℃下保存，備用； c、將稀釋液與金標(biāo)濃縮液按25∶1的體積比混合，得到金標(biāo)工作液，并放置在金標(biāo)工作液瓶1內(nèi)； (三)制備洗滌液 將242.2mg的三羥甲基氨基甲烷、0.5mg的氯化鈉和0.7mg的牛血清白蛋白置于容量瓶?jī)?nèi)，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然后繼續(xù)加入雙蒸水至100mL，再用鹽酸將其pH調(diào)節(jié)為7.4，得到洗滌液，放在洗滌液瓶?jī)?nèi)，置于2～8℃下保存； (四)在金標(biāo)工作液瓶1和洗滌液瓶2上貼好標(biāo)簽后與檢測(cè)盒一起組裝成試劑盒。
以上試劑盒的使用、檢測(cè)方法 1、樣本收集 將靜脈血置于干凈、未加抗凝劑的容器內(nèi)，靜置使血自然收縮，離心取血清檢測(cè)。
2、檢測(cè) a、取出試劑盒，室溫平衡20～30分鐘； b、將血清用生理鹽水按1∶200倍稀釋； c、打開包裝，滴加2滴洗滌液于硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入； d、滴加150μl待測(cè)血清于硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入； e、滴加3滴金標(biāo)工作液于硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入； f、滴加3滴洗滌液于硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入后于3分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。
3、結(jié)果判斷 陽性若被測(cè)標(biāo)本中含有甲肝病毒抗體，標(biāo)本中的特異性抗體便與硝酸纖維素膜4上的固相抗人IgM單抗發(fā)生特異性結(jié)合形成復(fù)合物，而其他無關(guān)物質(zhì)則被濾過，再加上金標(biāo)抗原，濾過時(shí)金標(biāo)抗原便與復(fù)合物結(jié)合，即可在檢測(cè)點(diǎn)7觀察到紅色反應(yīng)標(biāo)記。同時(shí)，金標(biāo)抗原與質(zhì)控點(diǎn)8上包被的羊抗鼠抗體結(jié)合，在質(zhì)控點(diǎn)8形成紅色反應(yīng)標(biāo)記，檢測(cè)點(diǎn)7有紅色反應(yīng)標(biāo)記出現(xiàn)，這表明被測(cè)標(biāo)本中含有甲肝病毒抗體，為陽性結(jié)果。
陰性若被測(cè)標(biāo)本中不含有甲肝病毒抗體，反應(yīng)體系中的金標(biāo)抗原與包被的固相抗人IgM單抗無法形成金標(biāo)復(fù)合物，即在檢測(cè)點(diǎn)7無紅色反應(yīng)標(biāo)記。同時(shí)，金標(biāo)抗原與質(zhì)控點(diǎn)8上包被的羊抗鼠抗體結(jié)合，在質(zhì)控點(diǎn)8形成紅色反應(yīng)標(biāo)記，檢測(cè)點(diǎn)7無紅色反應(yīng)標(biāo)記出現(xiàn)，這表明被測(cè)標(biāo)本中不含有甲肝病毒抗體，為陰性結(jié)果。
無效反應(yīng)后，若質(zhì)控點(diǎn)8不顯色，表明操作失誤或試劑失效。
使用本發(fā)明實(shí)施例的試劑盒對(duì)1000例測(cè)試標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下表
從以上檢測(cè)方法及檢測(cè)結(jié)果可以看出，本發(fā)明的試劑盒只需將待測(cè)血清滴入檢測(cè)盒的硝酸纖維素膜上，就能快速診斷甲型肝炎病毒特異性抗體，使用簡(jiǎn)單便捷、檢測(cè)速度快，符合率高，臨床檢驗(yàn)不需任何儀器，避免了實(shí)驗(yàn)過程中各種因素對(duì)結(jié)果的影響以及減輕了操作人員的勞動(dòng)強(qiáng)度。
實(shí)施例4，如圖1所示，甲型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒，包括檢測(cè)盒、金標(biāo)工作液瓶1以及洗滌液瓶2，檢測(cè)盒放置在鋁箔袋10內(nèi)。
如圖2、圖3所示，檢測(cè)盒包括檢測(cè)盒盒體6和盒蓋3，盒蓋3的內(nèi)側(cè)設(shè)有硝酸纖維素膜4，與硝酸纖維素膜4位置對(duì)應(yīng)的盒蓋3上設(shè)有反應(yīng)孔9，檢測(cè)盒盒體6內(nèi)設(shè)有吸水墊5，硝酸纖維素膜4上設(shè)有檢測(cè)點(diǎn)7和質(zhì)控點(diǎn)8，檢測(cè)點(diǎn)7包被有固相抗人IgM，質(zhì)控點(diǎn)8包被有羊抗鼠抗體。
金標(biāo)工作液瓶1內(nèi)盛有金標(biāo)工作液，該金標(biāo)工作液是由金標(biāo)濃縮液經(jīng)稀釋液稀釋所獲得的。
洗滌液瓶2內(nèi)盛有洗滌液，該洗滌液是由三羥甲基氨基甲烷、氯化鈉、牛血清白蛋白和鹽酸配制獲得的。
該試劑盒通過以下步驟制備 (一)檢測(cè)盒的制備 首先在硝酸纖維素膜的檢測(cè)點(diǎn)7包被固相抗人IgM，在質(zhì)控點(diǎn)8包被羊抗鼠抗體； 然后將盒蓋3、硝酸纖維素膜4、吸水墊5和檢測(cè)盒盒體6按照從上而下的順序組裝并扣緊，組裝成檢測(cè)盒； 將檢測(cè)盒放置在濕度小于40％的環(huán)境下干燥2小時(shí)； 最后將干燥后的檢測(cè)盒放置在鋁箔袋10內(nèi)并封口； (二)金標(biāo)工作液的制備 a、制備金標(biāo)濃縮液 取4％的氯金酸水溶液100ml，加熱至沸騰，加入1.0％檸檬酸三鈉溶液0.8ml，迅速混勻，待溶液顏色由淡黃→藍(lán)色→紫色→完全透明的酒紅色，繼續(xù)煮沸10分鐘，停止加熱，冷卻至室溫； 向得到的溶液中加入1mg/ml的甲肝抗原溶液100μl，得到混合溶液； 然后將混合溶液進(jìn)行離心處理，棄去上清液，得到下層金標(biāo)濃縮液，備用； b、制備稀釋液 將242.2mg的三羥甲基氨基甲烷、1mg的氯化鈉和2.0mg的牛血清白蛋白置于容量瓶?jī)?nèi)，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然后繼續(xù)加入雙蒸水至100mL，最后用鹽酸將其pH調(diào)節(jié)至7.4，得到稀釋液，在2～8℃下保存，備用； c、將稀釋液與金標(biāo)濃縮液按30∶1的體積比混合，得到金標(biāo)工作液，并放置在金標(biāo)工作液瓶1內(nèi)； (三)制備洗滌液 將121.1mg的三羥甲基氨基甲烷、1mg的氯化鈉和1mg的牛血清白蛋白置于容量瓶?jī)?nèi)，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然后繼續(xù)加入雙蒸水至100mL，再用鹽酸將其pH調(diào)節(jié)為7.4，得到洗滌液，放在洗滌液瓶?jī)?nèi)，置于2～8℃下保存； (四)在金標(biāo)工作液瓶1和洗滌液瓶2上貼好標(biāo)簽后與檢測(cè)盒一起組裝成試劑盒。
以上試劑盒的使用、檢測(cè)方法 1、樣本收集 將靜脈血置于干凈、未加抗凝劑的容器內(nèi)，靜置使血自然收縮，離心取血清檢測(cè)。
2、檢測(cè) a、取出試劑盒，室溫平衡20～30分鐘； b、將血清用生理鹽水按1∶200倍稀釋； c、打開包裝，滴加2滴洗滌液于硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入； d、滴加150μl待測(cè)血清于硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入； e、滴加3滴金標(biāo)工作液于硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入； f、滴加3滴洗滌液于硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入后于3分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。
3、結(jié)果判斷 陽性若被測(cè)標(biāo)本中含有甲肝病毒抗體，標(biāo)本中的特異性抗體便與硝酸纖維素膜4上的固相抗人IgM單抗發(fā)生特異性結(jié)合形成復(fù)合物，而其他無關(guān)物質(zhì)則被濾過，再加上金標(biāo)抗原，濾過時(shí)金標(biāo)抗原便與復(fù)合物結(jié)合，即可在檢測(cè)點(diǎn)7觀察到紅色反應(yīng)標(biāo)記。同時(shí)，金標(biāo)抗原與質(zhì)控點(diǎn)8上包被的羊抗鼠抗體結(jié)合，在質(zhì)控點(diǎn)8形成紅色反應(yīng)標(biāo)記，檢測(cè)點(diǎn)7有紅色反應(yīng)標(biāo)記出現(xiàn)，這表明被測(cè)標(biāo)本中含有甲肝病毒抗體，為陽性結(jié)果。
陰性若被測(cè)標(biāo)本中不含有甲肝病毒抗體，反應(yīng)體系中的金標(biāo)抗原與包被的固相抗人IgM單抗無法形成金標(biāo)復(fù)合物，即在檢測(cè)點(diǎn)7無紅色反應(yīng)標(biāo)記。同時(shí)，金標(biāo)抗原與質(zhì)控點(diǎn)8上包被的羊抗鼠抗體結(jié)合，在質(zhì)控點(diǎn)8形成紅色反應(yīng)標(biāo)記，檢測(cè)點(diǎn)7無紅色反應(yīng)標(biāo)記出現(xiàn)，這表明被測(cè)標(biāo)本中不含有甲肝病毒抗體，為陰性結(jié)果。
無效反應(yīng)后，若質(zhì)控點(diǎn)不顯色，表明操作失誤或試劑失效。
使用本發(fā)明實(shí)施例的試劑盒對(duì)1000例測(cè)試標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下表
從以上檢測(cè)方法及檢測(cè)結(jié)果可以看出，本發(fā)明的試劑盒只需將待測(cè)血清滴入檢測(cè)盒的硝酸纖維素膜上，就能快速診斷甲型肝炎病毒特異性抗體，使用簡(jiǎn)單便捷、檢測(cè)速度快，符合率高，臨床檢驗(yàn)不需任何儀器，避免了實(shí)驗(yàn)過程中各種因素對(duì)結(jié)果的影響以及減輕了操作人員的勞動(dòng)強(qiáng)度。
權(quán)利要求
1.甲型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述試劑盒包括
檢測(cè)盒，包括檢測(cè)盒盒體(6)和盒蓋(3)，盒蓋(3)的內(nèi)側(cè)設(shè)有硝酸纖維素膜(4)，與硝酸纖維素膜(4)位置對(duì)應(yīng)的盒蓋(3)上設(shè)有反應(yīng)孔(9)，檢測(cè)盒盒體(6)內(nèi)設(shè)有吸水墊(5)，硝酸纖維素膜(4)上設(shè)有有檢測(cè)點(diǎn)(7)和質(zhì)控點(diǎn)(8)；
金標(biāo)工作液瓶(1)，盛有金標(biāo)工作液，該金標(biāo)工作液由金標(biāo)濃縮液與稀釋液混合而成；和
洗滌液瓶(2)，盛有洗滌液，該洗滌液包括三羥甲基氨基甲烷、氯化鈉、牛血清白蛋白和鹽酸；
其中，檢測(cè)點(diǎn)(7)包被有固相抗人IgM，質(zhì)控點(diǎn)(8)包被有羊抗鼠抗體。
2.如權(quán)利要求1所述的甲型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述金標(biāo)濃縮液與稀釋液的混合體積比為1∶15-30。
3.如權(quán)利要求2所述的甲型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述金標(biāo)濃縮液與稀釋液的混合體積比為1∶20。
4.甲型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒的制備方法，其特征在于所述制備方法包括檢測(cè)盒、金標(biāo)工作液和洗滌液的制備；
其中，金標(biāo)工作液的制備包括以下步驟
a、制備金標(biāo)濃縮液
取1-4％的氯金酸水溶液100ml，加熱至沸騰，加入0.5-1％檸檬酸三鈉溶液0.8ml，迅速混勻，待溶液顏色由淡黃→藍(lán)色→紫色→完全透明的酒紅色，繼續(xù)煮沸10分鐘，停止加熱，冷卻至室溫；
向得到的溶液中加入1mg/ml的甲肝抗原溶液100μl，得到混合溶液；
然后將混合溶液進(jìn)行離心處理，棄去上清液，得到下層金標(biāo)濃縮液，備用；
b、制備稀釋液
將121.1-363.3mg的三羥甲基氨基甲烷、0.1-1mg的氯化鈉和0.5-2.0mg的牛血清白蛋白置于容量瓶?jī)?nèi)，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然后繼續(xù)加入雙蒸水至100mL，最后用鹽酸將其pH調(diào)節(jié)至7.4，得到稀釋液，在2～8℃下保存，備用；
c、將稀釋液與金標(biāo)濃縮液按比例混合，得到金標(biāo)工作液，并放置在金標(biāo)工作液瓶(1)內(nèi)。
5.如權(quán)利要求4所述的甲型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒的制備方法，其特征在于所述洗滌液的制備包括以下步驟
將121.1-242.2mg的三羥甲基氨基甲烷、0.1-1mg的氯化鈉和0.1-1mg的牛血清白蛋白置于容量瓶?jī)?nèi)，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然后繼續(xù)加入雙蒸水至100mL，再用鹽酸將其pH調(diào)節(jié)為7.4，得到洗滌液，放在洗滌液瓶?jī)?nèi)，置于2～8℃下保存。
6.如權(quán)利要求4所述的甲型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒的制備方法，其特征在于所述檢測(cè)盒的制備包括以下步驟
首先在硝酸纖維素膜的檢測(cè)點(diǎn)(7)包被固相抗人IgM，在質(zhì)控點(diǎn)(8)包被羊抗鼠抗體；
然后將盒蓋(3)、硝酸纖維素膜(4)、吸水墊(5)和檢測(cè)盒盒體(6)按照從上而下的順序組裝并扣緊，組裝成檢測(cè)盒；
將檢測(cè)盒放置在濕度小于40％的環(huán)境下干燥2小時(shí)；
最后將干燥后的檢測(cè)盒放置在鋁箔袋內(nèi)并封口。
7.如權(quán)利要求4所述的甲型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒的制備方法，其特征在于步驟b中，三羥甲基氨基甲烷的用量為242.2mg，氯化鈉的用量為0.9mg，牛血清白蛋白的用量為1mg。
8.如權(quán)利要求5所述的甲型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒的制備方法，其特征在于所述三羥甲基氨基甲烷的用量為121.1mg，氯化鈉的用量為0.9mg，牛血清白蛋白的用量為0.5mg。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種甲型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒，包括檢測(cè)盒、盛有金標(biāo)工作液的金標(biāo)工作液瓶和盛有洗滌液的洗滌液瓶，檢測(cè)盒包括檢測(cè)盒盒體和盒蓋，盒蓋的內(nèi)側(cè)設(shè)有硝酸纖維素膜，與硝酸纖維素膜位置對(duì)應(yīng)的盒蓋上設(shè)有反應(yīng)孔，檢測(cè)盒盒體內(nèi)設(shè)有吸水墊，硝酸纖維素膜上設(shè)有有檢測(cè)點(diǎn)和質(zhì)控點(diǎn)，檢測(cè)點(diǎn)包被有固相抗人IgM，質(zhì)控點(diǎn)包被有羊抗鼠抗體，只需將待測(cè)血清滴入檢測(cè)盒的硝酸纖維素膜上，就能快速診斷甲型肝炎病毒特異性抗體，使用簡(jiǎn)單便捷、檢測(cè)速度快，臨床檢驗(yàn)不需任何儀器，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，避免了實(shí)驗(yàn)過程中各種因素對(duì)結(jié)果的影響以及減輕了操作人員的勞動(dòng)強(qiáng)度。
文檔編號(hào)G01N33/544GK101762702SQ201010011329
公開日2010年6月30日 申請(qǐng)日期2010年1月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月11日
發(fā)明者楊致亭, 管廷武, 單永德, 劉光福, 馬金環(huán) 申請(qǐng)人:楊致亭