專利名稱：：一種人參及其制品中殺真菌劑含量的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及到食品檢測領(lǐng)域，具體指一種人參及其制品中殺真菌劑含量的檢測方法。
背景技術(shù)：
：人參(PanaxGinsengC.A.Meyer)屬于五力口科(Araliaceae)人參屬，為多年生草本，根狀莖肉質(zhì)。人參為人所知至少已有4000年的歷史，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，人參屬幾乎所有的種均可入藥，且人參的各種化學(xué)成分在藥理方面又有各自的活性和特點(diǎn)。然而，人參的生長周期較長，一般為5至6年，為了防止病蟲和真菌毒素的侵害，許多農(nóng)藥，如殺蟲劑，殺真菌劑，勢必就較多的施用在人參植株上或土壤中。由于大部分的農(nóng)藥具有半衰期長，性質(zhì)穩(wěn)定，不易分解，毒害大等特性，所以能長期在水域、土壤和植株體內(nèi)富集殘存，從而造成人參及其產(chǎn)品中殘留量不斷被檢出。這就嚴(yán)重降低了人參及其產(chǎn)品的品質(zhì)，制約了出口貿(mào)易，損害了參農(nóng)的利益，也對廣大食用者的身體健康構(gòu)成了威脅。因此，加強(qiáng)對人參及其提取物中農(nóng)藥殘留檢測就成為舉足輕重的問題和必備的環(huán)節(jié)。目前，公開報(bào)道了一些關(guān)于人參及其提取物中殘留農(nóng)藥測定的前處理方法，如索氏提取，液液萃取，固相萃取，超臨界流體萃取等。但索氏提取和液液萃取存在自動(dòng)化程度低、提取凈化效率低、成本高、試劑消耗大、環(huán)境污染嚴(yán)重等缺點(diǎn)；由于人參提取物主要是皂甙類成分，黏度較大，易造成固相萃取柱的堵塞；超臨界流體萃取存在儀器費(fèi)用和分析成本高，萃取農(nóng)藥的范圍窄等不足。故尋求一種用于人參及其提取物中農(nóng)藥殘留測定的簡單方便、費(fèi)用低廉、快速準(zhǔn)確、高通量和高選擇性的樣品前處理方法，是廣大分析工作者面臨的共同任務(wù)和難題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)的現(xiàn)狀提供一種簡單方便、快速準(zhǔn)確、費(fèi)用低廉的人參及其制品中殺真菌劑含量的檢測方法。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為該測定人參及其制品中殺真菌劑含量的方法包括檢測樣品的制備和氣相色譜檢測步驟，其主要原理是將待測食品樣品均勻化后，利用HS-SPME方法萃取，用GC-ECD進(jìn)行分析測定。具體步驟如下①樣品的制備準(zhǔn)確稱取事先均勻化的樣品，加入水使其溶解轉(zhuǎn)化為水溶液。②然后在15ml的帶有孔蓋和聚四氟乙烯隔墊的樣品瓶中進(jìn)行HS-SPME萃取，其過程為在樣品瓶中，加入10iU殺真菌劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，4ml超純水或測定樣品時(shí)為人參提取物水溶液和0.9-1.OgNaCl溶解于其中。③以進(jìn)樣針穿透樣品瓶密封膜，并將纖維頭浸于樣品溶液上方的頂空中，在68-72。C下吸附萃取30-35min。④萃取結(jié)束后，迅速縮回SPME萃取頭并將其置于氣相色譜儀的進(jìn)樣口，在275-285°C°下進(jìn)行熱解吸2-4min，然后進(jìn)行GC-ECD檢測。⑤采用氣相色譜P-ECD檢測器測定殺真菌劑的峰面積，然后用標(biāo)準(zhǔn)曲線換算成殺真菌劑的濃度。較好的，所述的氣相色譜法采用的色譜柱可以為HP-5，規(guī)格為30mX0.32mm，膜厚為0.25iim;氣相色譜法采用的色譜條件可以是進(jìn)樣口溫度為28(TC，ECD檢測器溫度為300°C;升溫程序如下初始溫度15(TC，保持2min，然后以15.(TC/min的速率升溫至18(TC，保持lmin，再以10.(TC/min的速率升溫至21(TC，保持lmin，最后以15.(TC/min的速率升溫至25(TC，保持8min;載氣和尾吹氣均為氮?dú)?，載氣和尾氣的流速分別為1.5和60ml/min;不分流進(jìn)樣1P1;保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。較好的，所述的氣相色譜法中，可以選用厚度為lOOym的聚二甲基硅烷(P匿S)作為固定相；可以采用磁力攪拌器進(jìn)行攪拌，并且控制磁力攪拌速度為600r/min左右；可以采用將所述的人參提取物水溶液稀釋8-16倍時(shí)的樣品作為最終分析樣品。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用了頂空固相微萃取(HS-SPME)-GC-ECD聯(lián)用技術(shù)，對人參及其制品中常見的五氯硝基苯(PCNB)、克菌丹(CAP)、異菌脲(IPR)、五氯苯胺(PCA)、甲基五氯苯基硫醚(MPCS)、腐霉利(PRO)等6種殘留殺真菌劑進(jìn)行測定，對影響SPME纖維涂層的吸附和解吸附的各個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)化。整個(gè)取樣過程僅用時(shí)30min，具有較高的測定靈敏度、樣品回收率和較好的實(shí)驗(yàn)重復(fù)性，適合可推廣應(yīng)用于人參及其制品或其它中草藥及其制品中農(nóng)藥的殘留分析。固相微萃取(SPME)技術(shù)是在固相萃取(SPE)基礎(chǔ)上提出并發(fā)展起來的，是采用特殊纖維涂層的萃取頭來特異吸附并濃縮待測物的樣品前處理方法。SPME幾乎克服了以往一些傳統(tǒng)樣品前處理方法的所有缺點(diǎn)，能夠與色譜(GC)或高效液相色譜法(HPLC)聯(lián)用，使得樣品前處理技術(shù)及分析操作簡單省時(shí)。目前，SPME已被成功應(yīng)用于環(huán)境水樣中污染物，土壤，葡萄酒，水果，蜂蜜，茶葉，牛奶等不同材料基質(zhì)中有機(jī)氯農(nóng)藥和其它類型農(nóng)藥殘留的分析檢測。SPME的萃取方式主要有直接固相微萃取(Direct-SPME)和頂空固相微萃取(HS-SPME)兩種。其中Direct-SPME是把纖維插入到樣品溶液中，待測物從含基體成分的樣品溶液直接遷移到萃取纖維上，適用于分析氣體樣品和較干凈的液體樣品中的有機(jī)化合物，尤其是揮發(fā)性差的化合物，但不利于復(fù)雜基體樣品的分析。而HS-SPME是將纖維暴露在密封樣品上方的氣相中，萃取揮發(fā)到固體或液體樣品頂空中的待測物，適合于分析復(fù)雜基體的液態(tài)和固態(tài)樣品中的揮發(fā)性、半揮發(fā)性有機(jī)化合物。由于不直接接觸樣品，HS-SPME避免了基體的干擾，方法的重現(xiàn)性也優(yōu)于Direct-SPME方法。目前，已有學(xué)者采用HS-SPME分析測定了部分果蔬、蜂產(chǎn)品、中草藥、油料等基質(zhì)材料中的農(nóng)藥殘留，效果顯著。本發(fā)明測定食品樣品中殺真菌劑含量的方法無需有機(jī)溶劑、簡單方便、測定快速、費(fèi)用低廉。該方法線形范圍寬，相關(guān)系數(shù)在0.996以上；檢出限在1.0ng/Kg-50ng/Kg之間；平行測定5次的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在13.5%以內(nèi)；平均加標(biāo)回收率在86.7%-113.2%之間。圖1為本發(fā)明實(shí)施例中空白人參提取物水溶液的HS-SPME-GC-ECD色譜圖4圖2為本發(fā)明實(shí)施例中加標(biāo)的人參提取物水溶液的HS-SPME-GC-ECD色譜圖其中1為PCNB吸收峰、2為PCA吸收峰、3為MPCS吸收峰、4為PRO吸收峰、5為CAP吸收峰、6為IPR吸收峰；圖3為本發(fā)明實(shí)施例中的HS-SPME吸附-溫度曲線圖；圖4為本發(fā)明實(shí)施例中的HS-SPME吸附_時(shí)間曲線圖，其中，萃取溫度為7(TC、解吸附溫度為28(TC、解吸附時(shí)間為2min、不加鹽；圖5為本發(fā)明實(shí)施例中的HS-SPME解吸附_溫度曲線圖，其中萃取溫度為70°C、萃取時(shí)間為30min、解吸附時(shí)間為2min、不加鹽；圖6為本發(fā)明實(shí)施例中的HS-SPME解吸附_時(shí)間曲線圖，其中萃取溫度為70°C、萃取時(shí)間為30min、解吸附溫度為28(TC、不加鹽；具體實(shí)施例方式以下結(jié)合附圖實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。本實(shí)施例是對人參提取物樣品的檢測人參提取物以吉林人參根或人參莖葉為原料，經(jīng)過提取、濃縮、干燥等工藝過程制備而成，為淡黃色干燥粉末。為防止病蟲和真菌毒素的侵害，許多農(nóng)藥，如殺真菌劑五氯硝基苯屬、腐霉利較多的施用在人參植株上或土壤中，同時(shí)人參為多年生宿根類藥材，種植期較長，也容易受到環(huán)境介質(zhì)中其他有機(jī)氯類農(nóng)藥的污染，從而造成人參及其產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量的超標(biāo)。所采用的儀器Agilent6890N型氣相色譜儀，ii-ECD檢領(lǐng)lj器，EPC模式，AgilentChemStationG2070AA化學(xué)工作站軟件；分析純丙酮，經(jīng)過全玻璃蒸餾裝置重蒸餾，經(jīng)氣相色譜法確認(rèn)符合農(nóng)藥殘留分析的要求；五氯硝基苯(PCNB)、克菌丹(CAP)、異菌脲(IPR)、五氯苯胺(PCA)、甲基五氯苯基硫醚(MPCS)、腐霉利(PRO)標(biāo)準(zhǔn)品(純度為98.8599.8%，德國Riedel-deHa紐公司)。SPME裝置以及PDMS纖維涂層萃取頭，100ym(SupelcoCo.，USA)農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制準(zhǔn)確稱取一定量的農(nóng)藥純品，用丙酮溶解稀釋成濃度為40iig/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，使用時(shí)用丙酮逐級稀釋。樣品制備及SPME萃取考慮到粉狀的人參提取物易溶解于水中，所以將其溶解轉(zhuǎn)化為水溶液。取lg粉狀的人參莖葉或人參根提取物，用超純水將其溶解定容至lOml。SPME萃取過程在15ml的帶有孔蓋和聚四氟乙烯隔墊的樣品瓶中進(jìn)行。在樣品瓶中，加入10殺真菌劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，4ml超純水，lgNaCl溶解于其中，得到淡黃色人參莖葉或人參根提取物水溶液。以進(jìn)樣針穿透樣品瓶密封膜，并將纖維頭浸于樣品溶液上方的頂空中，在7(TC下吸附萃取30min。萃取結(jié)束后，迅速縮回SPME萃取頭并將其置于GC進(jìn)樣口28(TC下進(jìn)行熱解吸2min。供GC-ECD檢測。GC-ECD測定條件如下色譜柱HP-5，規(guī)格為30mXO.32mm，膜厚0.25iim;進(jìn)樣口溫度28(TC;5檢測器溫度30(TC;升溫程序如下初始溫度15(TC，保持2min，然后以15.0°C/min的速度升溫至18(TC，保持lmin，再以10.0°C/min的速度升溫至21(TC，保持lmin，最后以15.0°C/min的溫度升溫至250°C，保持8min;載氣和尾吹氣均為氮?dú)?，流速分別為1.5和60ml/min;不分流進(jìn)樣1y1;保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果①GC-ECD色譜圖如圖1和圖2所示。其中萃取溫度，70°C;萃取時(shí)間，30min;解吸附溫度，28(TC;解吸附時(shí)間，2min;人參提取物水溶液稀釋8倍；加入lgNaCl。殺真菌劑名稱同表l。分析圖譜可以看出，HS-SPME-GC-ECD對人參提取物水溶液中添加的殺真菌劑萃取效果好，分離的峰形對稱尖銳，雜質(zhì)干擾峰較少。②線性關(guān)系、檢出限與精密度表1線性、檢出限和精密度實(shí)驗(yàn)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>由表1可知，HS-SPME-GC-ECD的線性范圍寬，線形關(guān)系較好(r2>0.9964)，檢出限在1.0ng/Kg-50ng/Kg之間；平行測定5次的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在13.5%以內(nèi)。③回收率實(shí)驗(yàn)向人參提取物水溶液樣品中分別添加濃度為50iig/L-100iig/L的殺真菌劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，HS-SPME-GC-ECD重復(fù)測定5次。殺真菌劑添加的種類和用量以及測試結(jié)果見表2。表2回收率測定結(jié)果序號殺真菌劑添加量Og/L)測定結(jié)果0ig/L)回收率(o/o)(mean±RSD,n=5)1PCNB5048.697.2±6.32PCA5053.7107.4±4.53MCPS5046.893.6±8.74PRO100113.2113.2±10.65CAP10092.392.3±7.46IPR10086.786.7±11.2由表2可知，本實(shí)施例中的平均回收率較高，為86.7%-113.2%。樣品分析采用該方法對來自吉林的6份人參根和人參莖葉提取物進(jìn)行了檢測，發(fā)現(xiàn)PCNB、PCA、MPCS、CAP和IPR在所檢測的樣品中均未檢出。人參根提取物中不含有PRO農(nóng)藥，3份人參莖葉提取物中含有0.5iig/g-2.0iig/g的PRO。由以上分析可知，本發(fā)明的分析方法無需有機(jī)溶劑、簡單方便、測定快速、費(fèi)用低廉，可用于人參提取物中常用殺真菌劑殘留量的測定。而現(xiàn)有技術(shù)均存在提取凈化的效率低、成本高、試劑消耗大、環(huán)境污染或分析成本高等不足之處。下述是本發(fā)明中較優(yōu)測試條件的選擇實(shí)驗(yàn)1、萃取溫度對萃取效果的影響HS-SPME吸附-溫度曲線見圖3。其中，萃取時(shí)間為30min，解吸附溫度為280°C，解吸附時(shí)間為2min，不加鹽。結(jié)果表明，除PCNB夕卜，殺真菌劑在萃取溫度為7(TC左右時(shí)可取得較好的萃取效率，因此較好的萃取溫度為68-72°C。繼續(xù)升高溫度，萃取效率有下降趨勢。故選取7(TC為最佳萃取溫度。2萃取時(shí)間對萃取效果的影響由圖4可知，30min時(shí)PDMS對大部分物質(zhì)的吸附已接近平衡，較好的萃取時(shí)間段為30-35min;3解吸附溫度和解吸附時(shí)間的影響HS-SPME解吸附-溫度曲線見圖4和圖5。結(jié)果表明，在275-285t:條件下，殺真菌劑全部解吸附完畢，故選取275_285°〇為較好的解吸附溫度，選取280°C作為最佳解吸附溫度。由圖6可知，殺真菌劑在解吸附2min后，基本解吸附完畢，故選取2min作為最佳解吸附的時(shí)間。權(quán)利要求一種人參及其制品中殺真菌劑含量的檢測方法，其特征在于包括下述步驟①向已均勻化的待測人參或其制品的樣品中加入水，使樣品溶解轉(zhuǎn)化為水溶液；②向帶有孔蓋和聚四氟乙烯隔墊的樣品瓶中加入10μl殺真菌劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液、4ml超純水或人參提取物水溶液和0.9-1.0gNaCl溶解于其中；③以進(jìn)樣針穿透樣品瓶密封膜，將纖維頭浸于樣品溶液上方的頂空中，在68℃-72℃下吸附萃取30-35min；④萃取結(jié)束后，迅速縮回SPME萃取頭并將其置于氣相色譜儀的進(jìn)樣口，在275-285℃下進(jìn)行熱解吸2-4min，用氣相色譜法檢測樣品中殺真菌劑的含量；⑤采用氣相色譜μ-ECD檢測器測定殺真菌劑的峰面積，然后用標(biāo)準(zhǔn)曲線換算成殺真菌劑的濃度。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人參及其制品中殺真菌劑含量的測定方法，其特征在于所述氣相色譜中采用HP-5色譜柱，其規(guī)格為30mX0.32mm，膜厚為0.25ym。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人參及其制品中殺真菌劑含量的測定方法，其特征在于所述的氣相色譜法所采用的色譜條件為進(jìn)樣口溫度為28(TC，檢測器溫度為300°C;升溫程序如下初始溫度15(TC，保持2min，然后以15.0°C/min的速率升溫至18(TC，保持lmin，再以10.0°C/min的速率升溫至21(TC，保持lmin，最后以15.0°C/min的速率升溫至25(TC，保持8min;載氣和尾吹氣均為氮?dú)?，兩者的流速分別為1.5和60ml/min;不分流進(jìn)樣1yl;保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人參及其制品中殺真菌劑含量的測定方法，其特征在于所述的氣相色譜法中，選用厚度為lOOym的聚二甲基硅烷(P匿S)作為固定相。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人參及其制品中殺真菌劑含量的測定方法，其特征在于所述的氣相色譜法中，采用磁力攪拌器進(jìn)行攪拌，并且控制磁力攪拌速度為600r/min左右。6.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一權(quán)利要求所述的人參及其制品中殺真菌劑含量的測定方法，其特征在于所述的人參提取物水溶液稀釋8-16倍時(shí)的樣品為最終分析樣品。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的人參及其制品中殺真菌劑含量的測定方法，其特征在于所述的最終分析樣品中按4ml添加0.9-1.OgNaCl。全文摘要本發(fā)明涉及到一種人參及其制品中殺真菌劑含量的檢測方法，其特征在于包括下述步驟①將已均勻化的待測樣品溶解轉(zhuǎn)化為水溶液；②向帶有孔蓋和聚四氟乙烯隔墊的樣品瓶中加入10μl殺真菌劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液、4ml超純水或人參提取物水溶液和0.9-1.0gNaCl溶解于其中；③以進(jìn)樣針穿透樣品瓶密封膜，將纖維頭浸于樣品溶液上方的頂空中，在68℃-72℃下吸附萃取30-35min；④萃取結(jié)束后，迅速縮回SPME萃取頭并將其置于氣相色譜儀的進(jìn)樣口，在275-285℃下進(jìn)行熱解吸2-4min，用氣相色譜法檢測樣品中殺真菌劑的含量；⑤采用氣相色譜μ-ECD檢測器測定殺真菌劑的峰面積，然后用標(biāo)準(zhǔn)曲線換算成殺真菌劑的濃度。該檢測方法具有簡單方便、快速準(zhǔn)確、費(fèi)用低廉的特點(diǎn)。文檔編號G01N30/06GK101776657SQ201010100820公開日2010年7月14日申請日期2010年1月20日優(yōu)先權(quán)日2010年1月20日發(fā)明者戚向陽申請人:戚向陽