專利名稱：一種測定維d2果糖酸鈣注射液中維生素d2含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種測定維D2果糖酸鈣注射液中維生素D2 含量的方法。
背景技術(shù)：
維D2果糖酸鈣注射液臨床上用于缺乏維生素D2所引起的鈣質(zhì)代謝障礙。 對維D2果糖酸鈣注射液中維生素D2含量及有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行測定，現(xiàn)為廣東省藥品
標(biāo)準(zhǔn)，"維丁膠性鈣注射液"的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的維生素D2測定法，該法采用經(jīng)皂化、抽提后
用分光光度法定量。而目前中國藥典2005年版有關(guān)原料維生素D2含量測定是正相色譜，
復(fù)方制劑也需經(jīng)皂化，抽提后正相色譜定量，方法同樣十分繁瑣，在測定注射液中維生素D2
的含量時，檢驗(yàn)員整天不停操作一天只能檢測兩批樣品，結(jié)果誤差大，重現(xiàn)性差，采用大量
有機(jī)溶劑對環(huán)境造成污染，浪費(fèi)大量人力、物力和時間。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種測定維D2果糖酸鈣注射液中維生素D2含量的方法，是 直接采用反相高效液相色譜法測定維生素D2的含量，結(jié)果專屬性和線性良好，本發(fā)明簡 便、準(zhǔn)確和快捷，安全且環(huán)保。 本發(fā)明的技術(shù)解決方案是先使待測樣品溶解，令待測樣品中維生素D2的濃度能 達(dá)到檢測線性范圍，然后用反相高效液相色譜法測定維D2果糖酸鈣注射液中維生素D2含 采用HPLC法進(jìn)行含量測定 ①色譜條件色譜柱十八烷基硅烷鍵合硅膠C18，流動相是甲醇、乙腈、乙腈/水、 乙腈/甲醇或者是乙腈/異丙醇，檢測波長265nm。 ②對照品溶液的制備，取維生素D2適量用流動相溶解成每毫升含12. 5ug溶液，使 達(dá)到1. 4-20ug/ml的檢測線性范圍。 ③供試品溶液的制備，取所述維D2果糖酸鈣注射液1毫升，置10毫升量瓶中，加 流動相稀釋至刻度并搖勻。 ④分別取對照品溶液和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀記錄色譜圖，按外標(biāo) 法以峰面積計(jì)算所述維D2果糖酸鈣注射液中維生素D的含量。
⑤有關(guān)物質(zhì)含量測定 取上述制備的供試品溶液1毫升，置100毫升棕色量瓶中，加流動相至刻度，搖勻， 作為維生素D2物質(zhì)測定的對照液，量取20ul，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使維生素 D2色譜峰為滿量程的20% 。 本發(fā)明所述取供試品溶液與對照溶液各20ul，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖 至供試品溶液中維生素D2峰保留時間的兩倍。 測定維D2果糖酸鈣注射液中有關(guān)物質(zhì)的方法，是供試品溶液的色譜圖如顯雜峰，
3可將單個雜峰與各雜峰的面積的和與對照溶液主峰面積比計(jì)算有關(guān)物質(zhì)含量。
經(jīng)專屬性研究和線性試驗(yàn)，結(jié)果專屬性和線性良好，線性范圍為1. 4ug-20ug/ml r =0. 99998，平均回收率100. 3X，重現(xiàn)性RSDX二 0. 29，穩(wěn)定性RSDX二 0. 55，最小檢測限 為6. 307ng/ml。 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是直接采用反相高效液相色譜法測定維生素D2的含量，結(jié)果專屬 性和線性良好，本發(fā)明簡便、準(zhǔn)確和快捷，安全且環(huán)保。


圖1本發(fā)明含量測定_對照品溶液圖譜；
圖2本發(fā)明含量-供測試品溶液圖譜；
圖3空白溶液的圖譜；
圖4有關(guān)物質(zhì)_供試品溶液圖譜；
圖5有關(guān)物質(zhì)_對照溶液圖譜。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 1 、含量測定(HPLC法) 1. 1色譜條件色譜柱十八烷基硅烷鍵合硅膠C18，流動相乙腈/甲醇，檢測波 長265nm。 1. 2對照品溶液的制備，精密稱取維生素D2適量，用流動相溶解和稀釋制成每ml 含12. 5ug的溶液，使達(dá)到1. 4-20ug/ml的檢測線性范圍。 1. 3供試品溶液的制備，精密吸取本品lml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度， 搖勻。 1.4分別精密量取對照品溶液和供試品溶液20ul，注入液相色譜儀記錄色譜圖， 按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算藥品中維生素D2的含量。見圖(1)圖(2)
2、有關(guān)物質(zhì)測定(主成分自身對照法法) 2. l對照溶液制備精密吸取(1.3)的供試品溶液lml，置100ml棕色量瓶中，加流 動相至刻度，搖勻，作為有關(guān)物質(zhì)測定的對照溶液，精密量取20ul，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢 測靈敏度，使主成分色譜峰為滿量程的20%。 2. 2取(1. 3)的供試品溶液與對照溶液各20ul，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖
至供試品溶液中維生素D2峰保留時間的2倍，供試品溶液的色譜圖如顯雜峰，可將單個雜
峰與各雜峰的面積的和與對照溶液主峰面積比計(jì)算有關(guān)物質(zhì)含量。見圖(4)圖(5) 2. 3取處方比例的輔料配制空白溶液，同法測定本品在Rt = 2. 7前有輔料峰，在計(jì)
算有關(guān)物質(zhì)時應(yīng)不計(jì)。見圖(3) 實(shí)施例2 1 、含量測定(HPLC法) 1. 1色譜條件色譜柱十八烷基硅烷鍵合硅膠C18，流動相乙腈，檢測波長 265nm。 1. 2對照品溶液的制備，精密稱取維生素D2適量，用流動相溶解和稀釋制成每ml含12. 5ug的溶液，使達(dá)到1. 4-20ug/ml的檢測線性范圍。 1. 3供試品溶液的制備，精密吸取本品lml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度， 搖勻。 1.4分別精密量取對照品溶液和供試品溶液20ul，注入液相色譜儀記錄色譜圖， 按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算藥品中維生素D2的含量。
2、有關(guān)物質(zhì) 2. 1供試品溶液制備，精密吸取本品lml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖 勻。 對照溶液的制備，精密吸取供試溶液lml，置100ml棕色量瓶中，加流動相至刻度，
搖勻。取對照溶液20ul注入液相色譜儀調(diào)節(jié)檢測靈敏度使主成分色譜峰為滿量程的20% 。
精密量取供試品溶液和對照溶液各20ul，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至供試品溶液
的維生素D2峰保留時間的2倍，供試品溶液的色譜圖中如顯雜峰，將最大雜峰面積與各雜
峰面積的和同對照溶液主峰面積的比計(jì)算有關(guān)物質(zhì)含量。 實(shí)施例3 1、含量測定(HPLC法) 1. 1色譜條件色譜柱十八烷基硅烷鍵合硅膠C18，流動相乙腈/異丙醇，檢測 波長265nm。 1. 2對照品溶液的制備，精密稱取維生素D2適量，用流動相溶解和稀釋制成每ml 含12. 5ug的溶液，使達(dá)到1. 4-20ug/ml的檢測線性范圍。 1. 3供試品溶液的制備，精密吸取本品lml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度， 搖勻。 1.4分別精密量取對照品溶液和供試品溶液20ul，注入液相色譜儀記錄色譜圖， 按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算藥品中維生素D2的含量。
2、有關(guān)物質(zhì)(主成分自身對照法法) 2. l供試品溶液制備，精密吸取本品lml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖 勻。 對照溶液的制備，精密吸取供試溶液lml，置100ml棕色量瓶中，加流動相至刻度，
搖勻。取對照溶液20ul注入液相色譜儀調(diào)節(jié)檢測靈敏度使主成分色譜峰為滿量程的20% 。
精密量取供試品溶液和對照溶液各20ul，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至供試品溶液
的維生素D2峰保留時間的2倍，供試品溶液的色譜圖中如顯雜峰，將最大雜峰面積與各雜
峰面積的和同對照試液主峰面積的比計(jì)算有關(guān)物質(zhì)含量。 實(shí)施例4 1、含量測定(HPLC法) 1. 1色譜條件色譜柱十八烷基硅烷鍵合硅膠C18，流動相乙腈/水，檢測波長 265nm。 1. 2對照品溶液的制備，精密稱取維生素D2適量，用流動相溶解和稀釋制成每ml 含12. 5ug的溶液，使達(dá)到1. 4-20ug/ml的檢測線性范圍。 1. 3供試品溶液的制備，精密吸取本品lml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度， 搖勻。
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1.4分別精密量取對照品溶液和供試品溶液20ul，注入液相色譜儀記錄色譜圖， 按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算藥品中維生素D2的含量。
2、有關(guān)物質(zhì)(主成分自身對照法法) 2. l供試品溶液制備，精密吸取本品lml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖 勻。 對照溶液的制備，精密吸取供試溶液lml，置100ml棕色量瓶中，加流動相至刻度， 搖勻。取對照溶液20ul注入液相色譜儀調(diào)節(jié)檢測靈敏度使主成分色譜峰為滿量程的20% 。 精密量取供試品溶液和對照溶液各20ul，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至供試品溶液 的維生素D2峰保留時間的2倍，供試品溶液的色譜圖中如顯雜峰，將最大雜峰面積與各雜 峰面積的和同對照試液主峰面積的比計(jì)算有關(guān)物質(zhì)含量。
權(quán)利要求
一種測定維D2果糖酸鈣注射液中維生素D2含量的方法，其特征是先使待測樣品溶解，令待測樣品中的維生素D2的濃度能達(dá)到12.5ug/ml，使檢測濃度在1.4-20ug/ml的線性范圍，然后用反相高效液相色譜法測定維D2果糖酸鈣注射液中維生素D2含量采用HPLC法進(jìn)行含量測定①色譜條件色譜柱十八烷基硅烷鍵合硅膠C18，流動相是甲醇、乙腈、乙腈/水、乙腈/甲醇或者是乙腈/異丙醇，檢測波長265nm；②對照品溶液的制備，取維生素D2用流動相溶解成每毫升含12.5ug溶液；③供試品溶液的制備，取所述維D2果糖酸鈣注射液1毫升，置10毫升量瓶中，加流動相稀釋至刻度并搖勻；④分別取對照品溶液和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算所述維D2果糖酸鈣注射液中維生素D2的含量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的色譜條件測定維D2果糖酸鈣注射液中維生素D2含量的方 法，其特征是所述待測樣品中測定有關(guān)物質(zhì)的方法是對照溶液的制備，取供試品溶液1毫 升，置100毫升棕色量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，作對照液，量取20ul，注入液相色譜儀， 調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使維生素D2色譜峰為滿量程的20%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種測定維D2果糖酸鈣注射液中維生素D2含量的方法，其 特征是取精密量取供試品溶液和對照品溶液各20ul，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至 供試品溶液的維生素D2峰保留時間的兩倍。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種測定維D2果糖酸鈣注射液中維生素D2含量的方法，其 特征是供試品溶液的色譜圖如顯雜峰，可將單個雜峰與各雜峰的面積的和與對照溶液主峰 面積比計(jì)算有關(guān)物質(zhì)含量。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種測定維D2果糖酸鈣注射液中維生素D2含量的方法，用于所述注射液中維生素D2含量的檢測，本發(fā)明公開了所述注射液中維生素D2含量的測定，是先使待測樣品溶解，令待測樣品中的維生素D2的濃度能達(dá)到檢測線性范圍，然后用反相高效液相色譜法測定維D2果糖酸鈣注射液中維生素D2含量及有關(guān)物質(zhì)的方法。本發(fā)明是直接采用反相高效液相色譜法測定維生素D2，簡便、準(zhǔn)確和快捷，安全且環(huán)保。
文檔編號G01N30/02GK101776658SQ20101010362
公開日2010年7月14日 申請日期2010年1月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月28日
發(fā)明者傅紅燕, 張旭途, 林寶兒, 黃粵東 申請人:廣州白云山天心制藥股份有限公司