專利名稱：一種分離檢測丙咪嗪和三甲丙咪嗪的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及丙咪嗪和三甲丙咪嗪技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說，涉及一種分離檢測丙咪 嗪和三甲丙咪嗪的方法。
背景技術(shù)：
丙咪嗪和三甲丙咪嗪屬于三環(huán)類抗抑郁藥物。三環(huán)類抗抑郁藥物自20世紀60年 代開始應(yīng)用于治療抑郁癥，目前還用于治療其他精神疾患，如強制性障礙、注意力缺乏性疾 病、恐慌、恐懼癥、慢性疼痛綜合征、周圍神經(jīng)病、夜間遺尿、焦慮癥、進食障礙及偏頭痛等。目前的分析方法有高效液相色譜法，氣相色譜法，電化學(xué)方法，毛細管電泳，非水 毛細管電泳等。高效液相色譜具有很好的分離能力，但成本較高。檢測技術(shù)包括紫外可見檢 測、激光誘導(dǎo)熒光、質(zhì)譜等方法，其中，紫外可見檢測作為常用的檢測技術(shù)，其靈敏度較低； 質(zhì)譜和激光誘導(dǎo)熒光的儀器昂貴，操作復(fù)雜。A. G. Chen等報道了一種用高效液相色譜與紫外檢測聯(lián)用分離檢測丙咪嗪和三甲 丙咪嗪的方法(A. G. Chen, Y. K. Wing, H. Chiu, S. Lee, C. N. Chen, K. Chan, J. Chromatogr. B 693 (1997) 153)。利用該方法得到丙咪嗪和三甲丙咪嗪的線性范圍分別為0. 2 1. 6 μ M和 0. 1 1. 2 μ M ；檢測限分別為160ηΜ和120ηΜ。該方法檢測靈敏度較低，使用儀器價格昂貴， 分離檢測中消耗溶劑量大?，F(xiàn)有技術(shù)中，H-Kirchhen 等報道了一種用高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用分離 檢測丙咪嗪和三甲丙咪嗪的方法(H. Kirchherr，W. N. Kuhn-Velten，J. Chromatogr. B 843(2006) 100)。高效液相色譜和質(zhì)譜儀器的價格昂貴，操作復(fù)雜，分離檢測成本高。本發(fā)明人考慮，提供一種分離檢測丙咪嗪和三甲丙咪嗪的方法，實現(xiàn)對丙咪嗪和 三甲丙咪嗪的分離檢測，以降低成本、提高靈敏度。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明提供一種分離檢測丙咪嗪和三甲丙咪嗪的方法，以實現(xiàn)對丙咪 嗪和三甲丙咪嗪的分離檢測，降低分離檢測成本，提高靈敏度。本發(fā)明提供一種分離檢測丙咪嗪和三甲丙咪嗪的方法，步驟包括連接好毛細管電泳電化學(xué)發(fā)光裝置，將配制好的丙咪嗪和三甲丙咪嗪混合樣品放 在所述裝置的樣品池內(nèi)，在所述裝置的毛細管內(nèi)運行分離溶液，待基線穩(wěn)定后，使得丙咪 嗪和三甲丙咪嗪混合樣品進入所述裝置的毛細管，所述分離溶液是由三羥甲基氨基甲烷、 β-環(huán)糊精和乙腈組成的混合溶液；以所述裝置的毛細管為分離通道，將所述樣品在分離電壓的作用下得到分離；
在所述毛細管柱末端的電化學(xué)發(fā)光檢測池內(nèi)進行檢測，所述檢測池內(nèi)為三聯(lián)吡啶 釕和NaH2PO4-Na2HPO4的混合溶液。優(yōu)選的，所述β -環(huán)糊精的濃度為0. 15 0. 30mmol/L。優(yōu)選的，所述β -環(huán)糊精的濃度為0. 20mmol/L。
優(yōu)選的，所述三羥甲基氨基甲烷的濃度為10 50mmol/L。優(yōu)選的，所述三羥甲基氨基甲烷溶液的pH為2. 0 4. 0。優(yōu)選的，所述乙腈溶液的體積百分比濃度為15 25%。優(yōu)選的，所述三聯(lián)吡啶釕的濃度為1 5mmol/L。優(yōu)選的，所述NaH2PO4-Na2HPO4 的濃度為 40 60mmol/L。優(yōu)選的，所述NaH2PO4-Na2HPO4溶液的pH值為6. 0 9. 0。優(yōu)選的，所述毛細管為內(nèi)徑為75 μ m的未涂層融硅毛細管。從上述技術(shù)方案可以看出，本發(fā)明以毛細管作為分離通道，三羥甲基氨基甲烷 (簡稱Tris)、β -環(huán)糊精和乙腈的混合溶液作為分離溶液，使得丙咪嗪和三甲丙咪嗪得 到分離，然后通過三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光體系對丙咪嗪和三甲丙咪嗪進行檢測，最終實現(xiàn) 對丙咪嗪和三甲丙咪嗪的分離檢測。本發(fā)明提供的利用毛細管電泳電化學(xué)發(fā)光聯(lián)用裝置 對丙咪嗪和三甲丙咪嗪分離檢測具有實驗裝置簡單、操作方法簡單易行、消耗試劑和藥 品的量少、成本低、分離效率高、檢測靈敏度高等優(yōu)點。通過本發(fā)明提供的方法對丙咪嗪 和三甲丙咪嗪進行分離檢測時，丙咪嗪和三甲丙咪嗪的檢測限分別為5. 0 X IO-9Hio 1/L和 1. 0Xl(T9mol/L。


為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本 發(fā)明的一些實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以 根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。圖1為本發(fā)明實施例公開的三聯(lián)吡啶釕與丙咪嗪、三甲丙咪嗪在鉬盤電極上的循 環(huán)伏安曲線及其相對應(yīng)的電化學(xué)發(fā)光曲線；圖2為本發(fā)明實施例公開的丙咪嗪、三甲丙咪嗪標準溶液的電泳圖譜。
具體實施例方式下面將結(jié)合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完 整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；?本發(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他 實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。本發(fā)明實施例公開了一種分離檢測丙咪嗪和三甲丙咪嗪的方法，以實現(xiàn)對丙咪嗪 和三甲丙咪嗪的分離檢測，降低分離檢測成本，提高靈敏度。本發(fā)明提供一種分離檢測丙咪嗪和三甲丙咪嗪的方法，步驟包括連接好毛細管電泳電化學(xué)發(fā)光裝置，將配制好的丙咪嗪和三甲丙咪嗪混合樣品放 在所述裝置的樣品池內(nèi)，在所述裝置的毛細管內(nèi)運行分離溶液，待基線穩(wěn)定后，使得丙咪 嗪和三甲丙咪嗪混合樣品進入所述裝置的毛細管，所述分離溶液是由三羥甲基氨基甲烷、 β-環(huán)糊精和乙腈組成的混合溶液；以所述裝置的毛細管為分離通道，將所述樣品在分離電壓的作用下得到分離；在所述毛細管柱末端的電化學(xué)發(fā)光檢測池內(nèi)進行檢測，所述檢測池內(nèi)為三聯(lián)吡啶釕和NaH2PO4-Na2HPO4的混合溶液。
按照本發(fā)明，對所述毛細管電泳電化學(xué)發(fā)光聯(lián)用裝置并無特別限制，例如可以選 用西安瑞邁分析儀器有限責(zé)任公司出售的MPI-A型毛細管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測儀。按照本 發(fā)明，光電倍增管的電壓優(yōu)選為700V 900V，更優(yōu)選為800V。所述檢測池內(nèi)為三電極體系，所述三電極體系優(yōu)選為直徑為500 μ m的Pt盤工作 電極、Ag/AgCl參比電極(KCl飽和溶液)和Pt絲對電極。按照本發(fā)明，分離后的樣品進入電化學(xué)發(fā)光檢測池內(nèi)進行檢測。本發(fā)明對所述檢 測電位優(yōu)選為1. 0 1. 4V，更優(yōu)選為1. 2V。所述檢測池內(nèi)為三聯(lián)吡啶釕和NaH2PO4-Na2HPO4 的混合溶液，所述三聯(lián)吡啶釕的濃度優(yōu)選為1 5mmol/L，更優(yōu)選為2mmol/L。所述 NaH2PO4-Na2HPO4緩沖溶液的pH值優(yōu)選為6. 0 9. 0，更優(yōu)選為7. 0。所述NaH2PO4-Na2HPO4 緩沖溶液濃度優(yōu)選為40mmol/L 60mmol/L，更優(yōu)選為50mmol/L。按照本發(fā)明，進樣電壓和進樣時間影響進樣量。進樣時間優(yōu)選為2 8s，更優(yōu)選為 4s。所述進樣電壓優(yōu)選為10 20kV，更優(yōu)選為20kV。所述毛細管內(nèi)為分離溶液，所述分離溶液包括三羥甲基氨基甲烷(簡稱Tris)、 β -環(huán)糊精和乙腈溶液，所述Tris緩沖溶液的pH值優(yōu)選為2. 0 4. 0，更優(yōu)選為2. 0 ；所述 Tris緩沖溶液濃度優(yōu)選為10mmol/L 50mmol/L，更優(yōu)選為20mmol/L。β-環(huán)糊精能與丙咪嗪和三甲丙咪嗪形成包和物，由于丙咪嗪和三甲丙咪嗪結(jié)構(gòu) 的不同，與環(huán)糊精形成的包合物的穩(wěn)定常數(shù)不同，從而最終實現(xiàn)兩種物質(zhì)的分離。所述 β -環(huán)糊精的濃度為 0. 15mmol/L 0. 30mmol/L，優(yōu)選為 0. 20mmol/L?，F(xiàn)有技術(shù)中，檢測過程中電極表面容易形成氧化膜，并且被分析物的氧化產(chǎn)物會 吸附在電極表面，對電極造成污染，因此，為了得到高的靈敏度和好的重現(xiàn)性，電泳每進樣 運行一次，電極就需要進行活化處理一次。本發(fā)明中，所述分離溶液包括乙腈溶液，由于乙 腈為有機溶劑，因此，吸附在電極表面的物質(zhì)可以溶解在乙腈溶液中。電極不容易受到污 染，無需活化處理，從而簡化了操作步驟，節(jié)省了分析時間。所述乙腈溶液體積百分比濃度 優(yōu)選為15% 25%，更優(yōu)選為20%。按照本發(fā)明，分離高壓影響靈敏度和遷移時間，對于所述分離電壓優(yōu)選為9kV 18kV，更優(yōu)選為15kV。為了保證檢測的靈敏度和及分析結(jié)果的重現(xiàn)性，本發(fā)明還包括對毛細管進行預(yù)處 理，所述預(yù)處理為在第一次使用毛細管電泳裝置前將毛細管用lOOmmol/L的NaOH溶液沖洗 后過夜，在每次使用毛細管電泳裝置前，依次用lOOmmol/L的NaOH溶液沖洗5min 15min、 二次水沖洗2min 6min以及用20mmol/L、pH = 2. 0的Tris緩沖溶液緩沖溶液沖洗5min 15min。本發(fā)明以毛細管作為分離通道，Tris, β-環(huán)糊精和乙腈的混合溶液作為分離溶 液，使得丙咪嗪和三甲丙咪嗪得到分離，然后通過三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光體系對丙咪嗪和 三甲丙咪嗪進行檢測，最終實現(xiàn)對丙咪嗪和三甲丙咪嗪的分離檢測。本發(fā)明提供的利用毛 細管電泳電化學(xué)發(fā)光聯(lián)用裝置對丙咪嗪和三甲丙咪嗪分離檢測具有實驗裝置簡單、操作方 法簡單易行、消耗試劑和藥品的量少、成本低、分離效率高、檢測靈敏度高等優(yōu)點。通過本發(fā) 明提供的方法對丙咪嗪和三甲丙咪嗪進行分離檢測時，丙咪嗪和三甲丙咪嗪的檢測限分別 為 5. 0 X l(T9mol/L 和 1. 0 X l(T9mol/L。
為了進一步了解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合實施例對本發(fā)明優(yōu)選實施方案進行 描述，但是應(yīng)當理解，這些描述只是為進一步說明本發(fā)明的特征和優(yōu)點，而不是對本發(fā)明權(quán) 利要求的限制。實施例1按照以下步驟配制NaH2P04-Na2HP04緩沖溶液配制濃度為100mmol/L的NaH2P04溶液和濃度為100mmol/L的Na2HP04溶液；將同濃度的上述溶液混合再用二次水稀釋配成濃度為50mmol/L，再將溶液的pH 值調(diào)成7.0。實施例2按照以下步驟配制Tris緩沖溶液配制濃度為100mmol/L的Tris溶液；用二次水稀釋上述Tris溶液至20mmol/L ；用濃H3P04溶液調(diào)節(jié)20mmol/L的Tris溶液至pH為2. 0。實施例3使用的裝置為MPI_A型毛細管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測儀，內(nèi)徑75i!m的未涂層融硅 毛細管柱，傳統(tǒng)的三電極體系包括直徑500 y m的Pt盤工作電極，Ag/AgCl參比電極，Pt絲 對電極。以實施例1中配制的NaH2P04-Na2HP04緩沖溶液作為背景電解質(zhì)，向背景電介質(zhì)中 加入2mmol/L三聯(lián)吡啶釕，掃描電位范圍為0. 20 1. 30V，記錄穩(wěn)定時的循環(huán)伏安曲線和電 化學(xué)發(fā)光曲線，如圖1中的a曲線和a’曲線；分別向含上述溶液中加入0. 3mmo 1 /L丙咪嗪和三甲丙咪嗪，掃描電位區(qū)間均為 0. 20 1.30V，記錄穩(wěn)定時的循環(huán)伏安曲線和電化學(xué)發(fā)光曲線，如圖1中的b、c曲線和b’、 c’曲線。圖1為本發(fā)明提供的三聯(lián)吡啶釕與丙咪嗪、三甲丙咪嗪在鉬盤電極上的循環(huán)伏安 曲線及其相對應(yīng)的電化學(xué)發(fā)光曲線。圖1的上半部分為循環(huán)伏安曲線，下半部分為電化學(xué) 發(fā)光曲線，由圖中可以看出加入丙咪嗪或三甲丙咪嗪的循環(huán)伏安曲線和電化學(xué)發(fā)光曲線中 的響應(yīng)度都比只加入三聯(lián)吡啶釕要強，丙咪嗪、三甲丙咪嗪可以增強三聯(lián)吡啶釕的電化學(xué) 發(fā)光活性，因此使用電化學(xué)發(fā)光檢測丙咪嗪、三甲丙咪嗪是可行的。實施例4使用的裝置為MPI_A型毛細管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測儀，內(nèi)徑75i!m的未涂層融硅 毛細管柱，傳統(tǒng)的三電極體系包括直徑500 y m的Pt盤工作電極，Ag/AgCl參比電極，Pt絲 對電極。對毛細管進行預(yù)處理步驟為將毛細管用lOOmmol/L的NaOH溶液沖洗后過夜，在 使用毛細管電泳裝置前，再依次用lOOmmol/L的NaOH溶液沖洗lOmin、二次水沖洗5min以 及用配置好的Tris緩沖液沖洗lOmin。在下述分析條件下運用毛細管電泳電化學(xué)發(fā)光聯(lián)用技術(shù)對丙咪嗪和三甲丙咪嗪 的混合樣品進行分離檢測。分析條件為檢測電位1.2V，進樣時間4s，進樣高壓20kV，分離高壓15kV，光 電倍增管電壓為800V ；檢測池內(nèi)溶液為2mmol/L的三聯(lián)吡啶釕，50mmol/L、pH = 7. 0的 NaH2P04-Na2HP04 緩沖溶液；分離溶液為 0. 2(kimol/L 的 3 -CD 溶液，20mmol/L、pH = 2. 0 的Tris緩沖溶液，體積百分比濃度為20%的乙腈溶液。在上述分析條件下，丙咪嗪、三甲丙咪嗪標準溶液在400s內(nèi)得到分離，檢測限分 別為 5. 0Xl(T9mol/L、l. 0Xl(T9mol/L，線性范圍都為 1. 0 X l(T7mol/L 5. 0 X l(T6mol/L。由 于丙咪嗪和三甲丙咪嗪的治療濃度范圍在分別為175 300ng/ml (0. 6 1. 0 y M)和150 350ng/ml (0. 4 0. 9 y M)，因此本發(fā)明提供的分離檢測方法在臨床研究上具有潛在的應(yīng) 用。圖2為本發(fā)明提供的1.5iimol/L丙咪嗪和0. 5iimol/L三甲丙咪嗪混合樣品的電泳圖 譜，如圖所示，丙咪嗪、三甲丙咪嗪得到了基線分離。a，b峰分別對應(yīng)丙咪嗪和三甲丙咪嗪。對所公開的實施例的上述說明，使本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員能夠?qū)崿F(xiàn)或使用本發(fā)明。 對這些實施例的多種修改對本領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)人員來說將是顯而易見的，本文中所定義的 一般原理可以在不脫離本發(fā)明的精神或范圍的情況下，在其它實施例中實現(xiàn)。因此，本發(fā)明 將不會被限制于本文所示的這些實施例，而是要符合與本文所公開的原理和新穎特點相一 致的最寬的范圍。
權(quán)利要求
一種分離檢測丙咪嗪和三甲丙咪嗪的方法，其特征在于，步驟包括連接好毛細管電泳電化學(xué)發(fā)光裝置，將配制好的丙咪嗪和三甲丙咪嗪混合樣品放在所述裝置的樣品池內(nèi)，在所述裝置的毛細管內(nèi)運行分離溶液，待基線穩(wěn)定后，使得丙咪嗪和三甲丙咪嗪混合樣品進入所述裝置的毛細管，所述分離溶液是由三羥甲基氨基甲烷、β-環(huán)糊精和乙腈組成的混合溶液；以所述裝置的毛細管為分離通道，將所述樣品在分離電壓的作用下得到分離；在所述毛細管柱末端的電化學(xué)發(fā)光檢測池內(nèi)進行檢測，所述檢測池內(nèi)為三聯(lián)吡啶釕和NaH2PO4-Na2HPO4的混合溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述環(huán)糊精的濃度為0.15 0. 30mmol/Lo
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述環(huán)糊精的濃度為0.20mmol/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述三羥甲基氨基甲烷的濃度為10 50mmol/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述三羥甲基氨基甲烷溶液的pH為 2. 0 4. 0。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述乙腈溶液的體積百分比濃度為15 25%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述三聯(lián)吡啶釕的濃度為1 5mmol/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述NaH2P04-Na2HP04的濃度為40 60mmol/L。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，所述NaH2P04_Na2HP04溶液的pH值為6. 0 9. 0。
10.根據(jù)權(quán)利要求1 9任一項所述的方法，其特征在于，所述毛細管為內(nèi)徑為75 ym 的未涂層融硅毛細管。
全文摘要
本發(fā)明實施例公開了一種分離檢測丙咪嗪和三甲丙咪嗪的方法，以毛細管為分離通道，三羥甲基氨基甲烷、β-環(huán)糊精和乙腈的混合溶液為分離溶液，使得丙咪嗪和三甲丙咪嗪得到分離，然后在毛細管柱末端，通過三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光體系對丙咪嗪和三甲丙咪嗪進行檢測，最終實現(xiàn)對丙咪嗪和三甲丙咪嗪的分離檢測。本發(fā)明提供的利用毛細管電泳電化學(xué)發(fā)光聯(lián)用裝置對丙咪嗪和三甲丙咪嗪分離檢測具有實驗裝置簡單、操作方法簡單易行、成本低、分離效率高、檢測靈敏度高等優(yōu)點。通過本發(fā)明提供的方法對丙咪嗪和三甲丙咪嗪進行分離檢測時，丙咪嗪和三甲丙咪嗪的檢測限分別為5.0×10-9mol/L和1.0×10-9mol/L。
文檔編號G01N21/76GK101799423SQ20101012367
公開日2010年8月11日 申請日期2010年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月15日
發(fā)明者于彩霞, 唐小風(fēng), 李霞, 由天艷, 袁柏青 申請人:中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所