專利名稱：用于檢測男性不育的檢測劑及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于檢測男性不育的檢測劑和試劑盒、所述檢測劑和試劑盒在檢測 DAZ基因家族缺失的用途、以及一種檢測DAZ基因家族缺失的方法。
背景技術(shù)：
近年來，不育癥患者日益增多。世界衛(wèi)生組織預(yù)測，在21世紀，不育癥將成為僅次于腫瘤和心腦血管疾病的第三大疾病。據(jù)統(tǒng)計，全世界共有6000萬 8000萬對夫婦有不育癥，而在我國約10% 15%夫婦不能生育，其中男性因素占40% 50%，而且在工業(yè)發(fā)達、人口稠密的城市高于農(nóng)村。Y染色體上的微小缺失可以造成生精障礙，導(dǎo)致無精癥或嚴重少精子癥。研究發(fā)現(xiàn) Y染色體長臂的5 6區(qū)間有一個與精子生成有關(guān)的區(qū)域，稱為無精子因子(Azoospermia factor，下文簡稱為“AZF”)，AZF被分成3個與生育相關(guān)的功能區(qū)，a區(qū)、b區(qū)和c區(qū)。研究發(fā)現(xiàn)，c區(qū)的微缺失率遠高于a和b區(qū)，并且約占Y染色體微缺失的60 %左右。所以 AZF c區(qū)缺失常作為原發(fā)性無精子癥和嚴重少精子癥患者的主要篩查基因。而DAZ基因 (deleted in azoospermia，下文簡稱為“DAZ”)則是AZF c區(qū)的最佳候選基因，AZF c區(qū)的缺失幾乎均累及到DAZ基因，并造成DAZ基因家族的缺失(S. Fernandes, K. Huellen, J.Goncalves, et al. High frequency of DAZl/DAZ2gene deletions in patientswith severe oligozoospermia[J]. Molecular Human Reproduction,2002,8(3) :286-298.)。DAZ基因家族定位于染色體Yqll. 2，多數(shù)具有4個基因拷貝(DAZ 1 4)，分成兩簇(DAZ 1/2, DAZ3/4) (DAZlGenbank 登錄號為1617 ；DAZ2 Genbank 登錄號為57055 ； DADGenbank登錄號為570 ;DAZ4Genbank登錄號為571；35)，位于Y染色體AZF c區(qū)的擴展子rl r4內(nèi)，以頭對頭的形式排在一起。有研究表明DAZ 1/2和DAZ 3/4基因拷貝的缺失在生精過程中起的作用存在差異。DAZ 1/2基因拷貝的缺失是生精障礙的高風險因子，而DAZ 3/4基因拷貝的缺失在生精過程中起的作用相對比較微弱(G Letizia D Amico, Daniela DI Benedetto, Franca MPezzino, et al. Quantitative evaluation of partial deletionsof the DAZ gene cluster [J].International Journal of MolecularMedicine，2006，17 :785-789.)。并且在發(fā)生缺失時，DAZl 和 DAZ2 同時缺失，尚未發(fā)現(xiàn)其中一個單獨缺失的情況。DAZ 3和DAZ 4也存在類似的情形。目前，關(guān)于DAZ基因家族缺失的檢測，最常用的是STS-PCR方法(阿周存，楊元等嚴重寡精癥ICSI精子供體的DAZ基因拷貝缺失研究遺傳HEREDITAS(BeijingU8(9) 1057-1060，2006)，近年來，有往更高靈敏度的定量PCR檢測方法發(fā)展的趨勢。但這兩種方法都有其不足。關(guān)于STS-PCR方法，針對DAZ基因拷貝數(shù)和DAZ基因是否缺失進行檢測，無法確認DAZ基因家族的部分缺失，在樣本預(yù)處理方面顯得更為復(fù)雜，對于STS-PCR檢測缺失的病例，有時在進行FISH檢測時依然能看到DAZ基因的存在Otepping S，etc. The use οfspermHAL0-FISH to determine DAZ gene copy number. Mol Hum Reprod. 2003Apr ；9(4) :183-188.),說明用STS-PCR方法有待于FISH技術(shù)的進一步驗證。并且PCR擴增后存在電泳的檢測過程，操作煩瑣且易造成污染，增加了實現(xiàn)檢測的技術(shù)復(fù)雜程度和大量的不確定因素。Real-Time PCR相對于前者雖靈敏度更高，且不用進行電泳檢測，但目前對于該技術(shù)的應(yīng)用與STS-PCR方法相同，且用戶的一次性設(shè)備投入大。針對現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，本發(fā)明人通過創(chuàng)造性的構(gòu)思和不懈的實驗努力完成了本發(fā)明。本發(fā)明通過使包含DAZ基因家族的DNA序列帶有熒光標記，制備熒光原位雜交探針，同時，使18號染色體著絲粒區(qū)域帶有熒光標記(例如藍色熒光標記)，成為DAZ基因檢測的對照探針，以不同的顏色進行區(qū)分。通過與從患者身上取得的血液或精液樣本等進行雜交，帶有熒光標記的原位雜交探針與樣本的DAZ基因家族區(qū)和18號染色體著絲粒依次按照堿基互補的原理結(jié)合，從而將患者的DAZ基因家族缺失以熒光信號改變的方式顯示。由于本發(fā)明的熒光原位雜交探針組是針對DNA序列進行的檢測，因此具有高度的臨床檢測靈敏度與特異性，并具有取材方便等優(yōu)勢，不僅能檢測DAZ基因家族的全部缺失， 也能同時檢測DAZ基因家族的部分缺失，比傳統(tǒng)的男性不育檢測技術(shù)更具有先進性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個方面涉及用于檢測男性不育的檢測劑，所述檢測劑包括DGLP DAZ a探針組和GLP DAZ b探針組中的至少一組，以及2) CSP 18 探針組，其中，GLP DAZ a探針組由第一探針、第二探針、和第三探針組成，所述第一探針的下游序列與第二探針序列的上游序列相互重疊或緊鄰，所述第二探針的下游序列與第三探針序列上游序列相互重疊或緊鄰；將第一探針-第三探針各自的核酸序列按照從上游至下游的順序依次連接得到的序列定義為序列A，前提是當相鄰兩個探針的連接處有重疊序列時去除其中1個探針的重疊部分的序列，該序列A由下述三部分構(gòu)成I)染色體Yqll. 22上的DAZ a基因的全部核酸序列，II)染色體Yqll. 22上的DAZ a基因外側(cè)向上游方向的70kb 120kb的核酸序列，和/或III)染色體Yqll. 22上的DAZ a基因外側(cè)向下游方向的120kb 180kb的核酸序列；上述第一探針-第三探針各自為線性序列且各自對應(yīng)于序列A上的一段連續(xù)序列；所述第一探針-第三探針均帶有第一熒光標記；GLP DAZ b探針組由第四探針、第五探針、和第六探針組成，所述第四探針的下游序列與第五探針序列的上游序列相互重疊或緊鄰，所述第五探針的下游序列與第六探針序列上游序列相互重疊或緊鄰；將第四探針-第六探針各自的核酸序列按照從上游至下游的順序依次連接得到的序列定義為序列B，前提是當相鄰兩個探針的連接處有重疊序列時去除其中1個探針的重疊部分的序列，該序列B由下述三部分構(gòu)成
I)染色體Yqll. 22上的DAZ b基因的全部核酸序列，II)染色體Yqll. 22上的DAZ b基因外側(cè)向上游方向的401Λ 801Λ的核酸序列， 和/或III)染色體Yqll. 22上的DAZ b基因外側(cè)向下游方向的140kb 200kb的核酸序列；上述第四探針-第六探針各自為線性序列且各自對應(yīng)于序列B上的一段連續(xù)序列；所述第四探針-第六探針均帶有第二熒光標記；CSP 18探針組為第七探針，所述第七探針是帶有第三熒光標記的核酸序列，為18 號染色體著絲粒序列制備的探針，探針長度約為450_480bp ；所述第一熒光標記、第二熒光標記、以及第三熒光標記相互之間均不相同。其中DAZ a 代表 DAZ 1/2，DAZ b 代表 DAZ 3/4。第一探針下游與第二探針上游相鄰，第二探針下游與第三探針上游相鄰。第四探針下游與第五探針上游相鄰，第五探針下游與第六探針上游相鄰。相鄰包含了 “重疊”和 “緊鄰”兩種情況。所述“重疊”是指在將相鄰兩個探針按照從上游至下游的順序連接在一起的情況下，連接處的核酸序列相同。以第一探針和第二探針為例，如果設(shè)定第一探針起點為Al，終點為A2，第二探針的起點為Bi，終點為B2，在坐標軸上，如果A2大于等于Bi，則說明這兩個探針有重疊，重疊部分為Bl至A2。對于其它探針重疊的情況，可以如此類推。所述“緊鄰”是指，還是以第一探針和第二探針為例，Bl比A2大1，視為第一探針和第二探針緊鄰。對于其它探針緊鄰的情況，可以如此類推。在一些情況下，Bl比A2大N，而N數(shù)值較小，例如N的取值范圍為自然數(shù)1-1000等等，也可以視為兩個探針緊鄰。在本發(fā)明的一個實施方案中，第一探針、第二探針、和第三探針按照各自從上游至下游的順序依次連接起來的核酸序列(參見附

圖1A)為大約3801Λ，這些探針的序列選自購買的 BAC clone(購自 Children's Hospital of Oakland Research Institute(CHORI) 或 invitrogen)RPll-140H23(起止位置chrY :252(^605-25390006)、RP11-346G2 (起止位置chrY :25202690-25389997)、RP11-263A15 (起止位置:chrY :25328461-25496569)、 RP11-340D2(起止位置chrY :25326662-25512793), RP11-829H8(起止位置chrY 25394785-25587236)以及 RP11_70G12(起止位置chrY :25401934-25582078)中的 3 個克隆的插入片段，并且優(yōu)選如下的2組RP11-140H23、RP11-340D2、RP11-70G12或者 RP11-346G2、RP11-263A15、RP11-829H8, S 3個探針各自的核酸序列合起來約380kb，包含 DAZUDAZ2基因的全部核酸序列和染色體Yqll. 22上的DAZUDAZ2基因5’和/或3，末端以外的部分序列。在本發(fā)明的一個實施方案中，第四探針、第五探針、和第六探針按照各自從上游至下游的順序依次連接起來的核酸序列(參見附圖1B)為大約3401Λ，這些探針的序列選自購買的 BAC clone(購自 Children's Hospital of Oakland Research Institute(CHORI) 或 invitrogen)RPlU6D12(起止位置chrY :26903388-27059018)、RPl 11618(起止位置:chrY :26903432-27059042)、RP11-1089F15 (起止位置chrY :26951894-27166509)、 AC006338(起止位置chrY J6987714-27163503)、RP11-185E22(起止位置chrY 27076444-27236806)、CTD-2504K5 (起止位置chrY :27079925- 27262399)中的 3 個克隆的插入片段，并且優(yōu)選如下的2組RP11-26D12、RP11-1089F15、RP11-185E22或者 RPl 1-2618,AC006338.CTD-2504K5, S 3個探針各自的核酸序列合起來約340kb，包含DAZ3、 DAZ4基因的全部核酸序列和染色體Yqll. 22上的DAD、DAZ4基因5’和/或3’末端以外的部分序列。所述第一探針至第七探針的各自序列的長短并不特別限定。在本發(fā)明的一個實施方案中，第七探針為18號染色體著絲粒探針，其序列長度約
為450-480bp，例如，其可以為SEQID NO 1所示的序列。
TATCTGGAAGTGGACATTTGGAGCGCTTTCAGGCCTATTTTGGAAAGGGA
AATATCTTCCCGTAACAACTATGCAGAAGCATTCTCAGAAACTTGTTTGT
GATGTGTGCCCTCTACTGACAGAGTTGAACCTTTCTTTTCATAGAGCACT
TTTGAAACACTCTTTTTGTAGAATCTGCAAGAGGATATTTGCATAGCTTT
GAGGATTTCGTGGGAAACGGGATTGTCTTCAGGCAAAGTCTAGACAGAAG
CATTCTCAGAAACTTCTTTGGGATGTTTGCATTCAAGTCACAGAGTAGAA
CATTCCCTTTGGTAGAGCAGGTTTGAAACACTCTTTTTGTAGTATCTGGA
AGTGGACATTTGGAGCGCTTTCAGGCCCATGTTGGAAAGGGAAATATCTT
CCCGTAACAACTAGGCAGAAGCATTCTCAGAAACTTATTTGAGATGTGTGTACTCAACTA(SEQ ID NO 1)在本發(fā)明的一個實施方案中，第一探針、第二探針、和第三探針用紅色熒光標記， 第四探針、第五探針、和第六探針用綠色熒光標記，第七探針用藍色熒光標記作為對照，可以有效地排除假陰性的情況，并且在特異性等方面均不影響DAZ檢測探針的識別，提高了臨床檢測靈敏度。相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的探針組覆蓋范圍更特異，既保證在熒光顯微鏡下的肉眼檢測效果更為顯著，又通過不同熒光標記的顏色，使檢測范圍包含全拷貝缺失與部分結(jié)構(gòu)缺失兩種類型，并且通過一次性檢測確認上述兩種變異情況，具有很大的臨床意義。在本發(fā)明的一個實施方案中，探針組中的探針序列為上述探針組中的探針的互補序列，或者選自如下的變體1)在高等嚴緊條件下與上述探針組中的探針的核苷酸序列雜交的核苷酸序列，2)對上述探針組中的探針的核苷酸序列進行一個或多個堿基的取代、缺失、添加修飾的核苷酸序列，3)與上述探針組中的探針的核苷酸序列具有至少90%的序列同一性的核苷酸序列。典型地，“雜交條件”根據(jù)測量雜交時所用條件的“嚴緊性”程度來分類。嚴緊性程度可以以例如核酸結(jié)合復(fù)合物或探針的解鏈溫度(Tm)為依據(jù)。例如，“最大嚴緊性”典型地發(fā)生在約Tm-5°C (低于探針Tm 5°C )；“高等嚴緊性”發(fā)生在Tm以下約5_10°C;“中等嚴緊性”發(fā)生在探針Tm以下約10-20°C ；“低嚴緊性”發(fā)生在Tm以下約20_25°C。作為替代，或者進一步地，雜交條件可以以雜交的鹽或離子強度條件和/或一或多次的嚴緊性洗滌為依據(jù)。例如，6XSSC =極低嚴緊性；3XSSC =低至中等嚴緊性；IXSSC =中等嚴緊性； 0. 5XSSC =高等嚴緊性。從功能上說，可以采用最大嚴緊性條件確定與雜交探針嚴緊同一或近嚴緊同一的核酸序列；而采用高等嚴緊性條件確定與該探針有約80%或更多序列同一性的核酸序列。對于要求高選擇性的應(yīng)用，典型地期望采用相對嚴緊的條件來形成雜交體，例如， 選擇相對低的鹽和/或高溫度條件。Sambrook等(Sambr00k，J.等(1989)分子克隆，實驗室手冊，Cold Spring HarborPress, Plainview, N. Y.)提供了包括中等嚴緊性和高等嚴緊性在內(nèi)的雜交條件。為便于說明，用于檢測本發(fā)明的多核苷酸與其它多核苷酸雜交的合適的中度嚴緊條件包括用 5XSSC、0. 5% SDS、1. OmM EDTA(ρΗ8· 0)溶液預(yù)洗；在 50-65°C下在 5XSSC 中雜交過夜；隨后用含0. SDS的2X、0. 5X和0. 2XS SC在65°C下各洗滌兩次20分鐘。 本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當理解，能容易地操作雜交嚴緊性，如改變雜交溶液的含鹽量和/或雜交溫度。例如，在另一個實施方案中，合適的高度嚴緊雜交條件包括上述條件，不同之處在于雜交溫度升高到例如60-65°C或65-70°C。在本發(fā)明中，所述對上述探針組中的探針的核苷酸序列進行一個或多個堿基的取代、缺失、添加修飾的核苷酸序列，是指分別或同時在所述核苷酸序列的5’端和/或3’端， 和/或序列內(nèi)部進行例如不超過2-45個，或者不超過2-30個，或者不超過3-20個，或者不超過4-15個，或者不超過5-10個，或者不超過6-8個的分別用逐個連續(xù)整數(shù)表示的堿基的取代、缺失、添加修飾。通過一種多核苷酸進行說明，其所具有的核苷酸序列例如與上述探針組中的探針的核苷酸序列至少具95%的“同一性”是指在上述探針組中的探針的核苷酸序列之每100 個核苷酸中，該多核苷酸的核苷酸序列除了含有多達5個核苷酸的不同外，該多核苷酸之核苷酸序列與參考序列相同。換句話說，為了獲得核苷酸序列與參考核苷酸序列至少95% 相同的多核苷酸，參考序列中多達5%的核苷酸可被刪除或被另一核苷酸替代；或可將一些核苷酸插入?yún)⒖夹蛄兄?，其中插入的核苷酸可多達參考序列之總核苷酸的5% ；或在一些核苷酸中，存在刪除、插入和替換的組合，其中所述核苷酸多達參考序列之總核苷酸的5%。 參考序列的這些突變可發(fā)生在參考核苷酸序列的5’或3’末端位置，或在這些末端位置之間的任意地方，它們或單獨散在于參考序列的核苷酸中，或以一個或多個鄰近的組存在于參考序列中。在本發(fā)明中，所述與上述探針組中的探針的核苷酸序列具有至少90%的序列同一性的核苷酸序列包括與上述探針組中的探針所公開序列基本同一的多核苷酸序列，例如當采用本文所述方法(例如采用標準參數(shù)的BLAST分析)時，與本發(fā)明多核苷酸序列相比含有至少90%序列同一性、優(yōu)選至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%或更高的序列同一性的那些序列。關(guān)于探針的標記方法，可以采用現(xiàn)有技術(shù)中的方法使DNA序列帶有相應(yīng)的熒光標記。所述方法包括但不限于采用隨機引物法、切口平移法等。隨機引物法利用6個堿基的寡核苷酸作引物，在大腸桿菌DNA聚合酶的Klenow 片段的催化下，沿單鏈模板起始DNA的合成。如果寡核苷酸的序列不均一，它們就可在模板的多位點上與模板雜交(所述方法具體可以參見，例如，J.薩姆布魯克等著，黃培堂等譯的 《分子克隆實驗指南》，第三版，科學(xué)出版社)切口平移法需要用兩種不同的酶活性參與反應(yīng)，限制性內(nèi)切酶DNA酶I可在雙鏈靶DNA兩條鏈上的隨機位點切口磷酸二酯鍵，大腸桿菌DNA聚合酶I則將脫氧核糖核苷酸加到DNA酶I產(chǎn)生的3’羥基端。DNA聚合酶I除具有聚合酶活性，還具有5’ -3’外切核酸酶活性，因而能從切口 5’端去除核苷酸。5’端核苷酸的去除與熒光帶有熒光標記的核苷酸的摻入同時進行，使切口沿著DNA鏈移動，產(chǎn)生高活性比的標記DNA(所述方法具體可以參見，例如，J.薩姆布魯克等著，黃培堂等譯的《分子克隆實驗指南》，第三版，科學(xué)出版社)所用熒光標記可以是本領(lǐng)域中已知的熒光標記染料，例如下面的表1所示的熒光染料。表1可選用熒光染料，其激發(fā)及發(fā)射波長
權(quán)利要求
1.用于檢測男性不育的檢測劑，所述檢測劑包括1)GLPDAZ a探針組和GLP DAZ b探針組中的至少一組，以及2)CSP 18探針組， 其中，GLP DAZ a探針組由第一探針、第二探針、和第三探針組成，所述第一探針的下游序列與第二探針序列的上游序列相互重疊或緊鄰，所述第二探針的下游序列與第三探針序列上游序列相互重疊或緊鄰；將第一探針-第三探針各自的核酸序列按照從上游至下游的順序依次連接得到的序列定義為序列A，前提是當相鄰兩個探針的連接處有重疊序列時去除其中1個探針的重疊部分的序列，該序列A由下述三部分構(gòu)成I)染色體Yqll.22上的DAZ a基因的全部核酸序列，II)染色體Yqll.22上的DAZ a基因外側(cè)向上游方向的701Λ 1201Λ的核酸序列，和/或III)染色體Yqll.22上的DAZ a基因外側(cè)向下游方向的1201Λ 1801Λ的核酸序列； 上述第一探針-第三探針各自為線性序列且各自對應(yīng)于序列A上的一段連續(xù)序列； 所述第一探針-第三探針均帶有第一熒光標記；GLP DAZ b探針組由第四探針、第五探針、和第六探針組成，所述第四探針的下游序列與第五探針序列的上游序列相互重疊或緊鄰，所述第五探針的下游序列與第六探針序列上游序列相互重疊或緊鄰；將第四探針-第六探針各自的核酸序列按照從上游至下游的順序依次連接得到的序列定義為序列B，前提是當相鄰兩個探針的連接處有重疊序列時去除其中1個探針的重疊部分的序列，該序列B由下述三部分構(gòu)成I)染色體Yqll.22上的DAZ b基因的全部核酸序列，II)染色體Yqll.22上的DAZ b基因外側(cè)向上游方向的401Λ 801Λ的核酸序列，和/或III)染色體Yqll.22上的DAZ b基因外側(cè)向下游方向的140kb 200kb的核酸序列； 上述第四探針-第六探針各自為線性序列且各自對應(yīng)于序列B上的一段連續(xù)序列； 所述第四探針-第六探針均帶有第二熒光標記；CSP 18探針組為第七探針，所述第七探針是帶有第三熒光標記的核酸序列，為18號染色體著絲粒序列制備的探針，探針長度約為450-480bp ；所述第一熒光標記、第二熒光標記、以及第三熒光標記相互之間均不相同。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測劑，其中，所述第一熒光標記是四甲基羅丹明，第二熒光標記是異硫氰酸，第三熒光標記是DEAC。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測劑，其中第一探針、第二探針、和第三探針分別以選自BAC cloneRPll-140H23、RP11-70G12、 RP11-340D2、RP11-263A15、RP11-346G2、RP11-829H8 中的 3個克隆的插入片段作為探針制備的模板，并且優(yōu)選地，這3個克隆是RP11-140H23、RP11-340D2、RP11-70G12，或者 RP11-346G2、RP11-263A15、RP11-829H8 ；第四探針、第五探針、和第六探針分別以選自BAC cloneRPll-26D12、RP11-185E22、RP11-1089F15、RP11-26I8、CTD-2504K5、AC006338中的3個克隆的插入片段作為探針制備的模板，并且優(yōu)選地，這3個克隆是RP11-26D12、RP11-1089F15、RP11-185E22，或者 RPl1-2618, AC006338.CTD-2504K5 ；第七探針的序列如SEQ ID N0:1所示。
4.用于檢測男性不育的試劑盒，所述試劑盒包括權(quán)利要求1-3中任一項所述的檢測劑。
5.權(quán)利要求1-3中任一項所述的檢測劑、或者權(quán)利要求4所述的試劑盒在檢測DAZ基因家族缺失中的用途。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其中，所述缺失為DAZa基因和/或DAZ b基因的缺失。
7.一種檢測DAZ基因家族缺失的方法使用權(quán)利要求1-3中任一項所述的檢測劑、或者權(quán)利要求4或5所述的試劑盒，通過熒光原位雜交檢測DAZ基因家族的缺失狀況。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，所用檢測樣本為血液或精液。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，還包含如下步驟 觀察整張玻片，考察10個細胞的中期分裂相如果只有1個或兩個細胞異常，那么擴大考察，再考察10個中期分裂相； 如果超過兩個細胞異常，則表明有DAZ基因的缺失。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，還包含如下步驟 對于如下的情形不要進行分析1)細胞核輪廓不清或有重疊的計數(shù)細胞；2)雜交不均勻的區(qū)域；3)背景深影響信號判斷的區(qū)域；4)超過25%的染色體上信號太弱的區(qū)域；5)超過10%的細胞質(zhì)內(nèi)有信號的區(qū)域。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于檢測男性不育的檢測劑和試劑盒。具體地，所述檢測劑包括1)GLP DAZ a探針組和GLP DAZ b探針組中的至少一組，以及2)CSP 18探針組；所述試劑盒包括溶解在TE Buffer中的所述檢測劑，其中所包括的每個探針組的濃度為50～300ng/μl。本發(fā)明還涉及所述檢測劑和試劑盒在檢測DAZ基因家族缺失的用途、以及一種檢測DAZ基因家族缺失的方法。
文檔編號G01N21/64GK102277412SQ20101019574
公開日2011年12月14日 申請日期2010年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月9日
發(fā)明者吳曉東, 成華, 程曉蕾, 陳忠 申請人:北京金菩嘉醫(yī)療科技有限公司