專利名稱：一種夏桑菊顆粒的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體是涉及一種夏桑菊顆粒的質(zhì)量控制方法。
技術(shù)背景 夏桑菊顆粒為嶺南地區(qū)的特色藥物，精選夏枯草、桑葉、野菊花，經(jīng)現(xiàn)代工藝精制 加工而成，是《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑(第十五冊)收載的第11類 中藥，具有清肝明目、疏風(fēng)散熱，除濕痹，解瘡毒之功效，適用于治療風(fēng)熱感冒引起的目赤頭 痛，高血壓，頭暈耳鳴，咽喉腫痛，疔瘡腫毒等癥狀。目前，國內(nèi)外生產(chǎn)夏桑菊顆粒的企業(yè)105家。但是，在質(zhì)量標準研究方面，主要還 是集中在定性鑒別方面，如《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑(第十五冊) 采用薄層色譜法鑒別是否含有熊果酸。在定量方面，黃曉文，謝艷婷，馮嘉欣，謝鑾鳳采用 《HPLC測定夏桑菊顆粒中蒙花苷的含量》(廣東藥學(xué)院學(xué)報，2008年03期)；熊國營，徐君， 梁兆昌采用《高效液相色譜法測定夏桑菊顆粒中綠原酸的含量》(江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2004 年06期)；黃淑彰采用《HPLC法測定夏桑菊顆粒中熊果酸的含量》(現(xiàn)代中藥研究與實踐， 2004年03期)。但是蒙花苷、綠原酸、熊果酸均不是夏桑菊顆粒最主要的有效成分和特征 性成分，單獨以這些指標不足以說明夏桑菊顆粒的質(zhì)量，也不能區(qū)別市面上眾多廠家生產(chǎn) 的質(zhì)量參差不齊的產(chǎn)品。文獻"夏桑菊顆粒指紋圖譜的建立及其在質(zhì)量控制中的應(yīng)用"(柯雪紅，孫維 廣，姚江雄，花汝鳳，陳錦富，中成藥2008年07期)及專利號為200710026346.9的中國專 禾IJ"夏桑菊制劑指紋圖譜的建立及指紋圖譜"建立了夏桑菊顆粒的指紋圖譜，并指認了夏 桑菊中的綠原酸。但是該專利指認的成分只有一個，且隨著研究的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)綠原酸并不是 夏桑菊顆粒的特征性成分，不足以區(qū)別夏桑菊顆粒的質(zhì)量。進一步研究發(fā)現(xiàn)，夏枯草是夏桑菊顆粒中的君藥。《中國藥典》規(guī)定夏枯草的藥 用部位為果穗，而夏枯草的特征性成分熊果酸、齊墩果酸、迷迭香酸、咖啡酸在夏枯草的 根、莖、葉、果穗等不同部位均有一定含量，不能作為《中國藥典》規(guī)定的夏枯草的藥用部 位一果穗的特征性成分?；衔飐alviaflaside是咖啡酰縮酚酸苷類化合物，其主要藥理活性未見報 道。[Zhao, Lin Min ；He, Wen Yi ；Liang, Xiao Tian ；Li, Lian Niang. Salviaflaside andsalviaflaside methyl ester two new depsidic glycosides from Salvia flava. ChineseChemical Letters (1996)，7 (5)，449-452.]得到化合物 salviaflaside，具有如下 結(jié)構(gòu)式 本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過長期的實驗分析得出，salviaflaside化合物只存在于夏枯 草果穗中，是夏枯草果穗的特征性成分。然而，現(xiàn)有技術(shù)中對夏桑菊顆粒的質(zhì)量控制方法沒 有針對其君藥成分夏枯草，且建立的指紋圖譜指認的成分單一，夏桑菊顆粒的質(zhì)量控制具 有模糊性，因此，需要建立一種完善的質(zhì)量標準體系。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種夏桑菊顆粒的質(zhì)量控制方法，通過該質(zhì)量控制方法能夠 系統(tǒng)地保證夏桑菊顆粒質(zhì)量的有效性，區(qū)別市面上質(zhì)量參差不齊的夏桑菊顆粒產(chǎn)品。實現(xiàn)本發(fā)明目的技術(shù)方案如下一種夏桑菊顆粒的質(zhì)量控制方法，采用高效液相色譜法測定夏枯草的特征成分迷 迭香酸的含量，包括以下步驟(1)對照品溶液的制備精密稱取迷迭香酸對照品，用甲醇或乙醇溶解，配制成迷迭香酸對照品溶液；(2)供試品溶液的制備取夏桑菊顆粒，精密稱定，加2-10倍量的甲醇或乙醇，稱重，超聲15 60min，取 出，靜置，放涼，補重，微孔濾膜濾過，作為供試品溶液；(3)液相色譜測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，其中色譜條件 為流速0· 5 1. 5mL. mirT1 ；檢測波長325 335nm ；柱溫25 40°C ； 流動相流動相A為乙腈，比例為10 30 %，流動相B為醋酸體積濃度為0. 5 % 2%的水溶液，比例為90 70%;或流動相A為甲醇，比例為30 40%，流動相B為醋酸體 積濃度為0. 5% 的水溶液，比例為70 60% ；優(yōu)選地，所述色譜條件為流速1· OmL. mirT1 ；檢測波長329nm；柱溫30°C；流動相流動相A為乙腈，比例為20%，流動相B為醋酸體積濃度為1. 0%的水溶液，比例為80% ；或流動相A為甲醇，比例為35%，流動相B為醋酸體積濃度為0. 5%的水 溶液，比例為65%。優(yōu)選地，所述夏桑菊顆粒中迷迭香酸的含量不少于1. 50mg/10g。本發(fā)明的夏桑菊顆粒的質(zhì)量控制方法還包括采用薄層色譜法鑒別夏枯草，包括以 下步驟(1)制備對照品溶液精密稱取迷迭香酸對照品，用甲醇或乙醇溶解，配制成迷迭香酸對照品溶液；(2)制備供試品溶液取夏桑菊顆粒，精密稱定，加2-10倍量的甲醇或乙醇，稱重，超聲15 60min，取 出，靜置，放涼，補重，微孔濾膜濾過，作為供試品溶液；(3)點樣、展開、顯色分別吸取對照品溶液、供試品溶液點樣于同一薄層板上，以體積比為6 8 2 4 0. 5 1的氯仿甲醇甲酸或體積比為6 8 4 5 0. 5 1的氯仿甲醇 水為展開劑，展開，取出，晾干，用0. 5 2%的香草醛濃硫酸顯色，加熱至斑點清晰；供試品 溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。優(yōu)選地，所述步驟(3)中的展開劑為體積比為8 2 0.5的氯仿甲醇甲酸 或體積比為6:4:1的氯仿甲醇水。本發(fā)明的夏桑菊顆粒的質(zhì)量控制方法還包括采用高效液相色譜方法建立夏桑菊 顆粒的指紋圖譜，包括以下步驟(1)對照品溶液的制備分別取對照品咖啡酸、綠原酸、salviaflaside、迷迭香酸、蒙花苷適量，加甲醇或 乙醇溶解，作為對照品溶液；(2)供試品溶液的制備取夏桑菊顆粒，精密稱定，加1 4倍量甲醇或乙醇，稱重，超聲15 60min，取出， 靜置，放涼，補重，微孔濾膜濾過，作為供試品溶液；(3)液相色譜分析分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，其中色譜條件為流速0· 5 1. 5mL. mirT1 ；檢測波長280 305nm ；柱溫25 40°C ；
流動相流動相A為乙腈，流動相B為醋酸體積濃度為的水溶液，進行梯度洗 脫。優(yōu)選地，所述色譜條件為流速1· OmL. mirT1 ；檢測波長290nm；柱溫30°C；所述梯度洗脫的程序為0 IOmin,流動相A的比例為5%，流動相B的比例為95% ；10 20min,流動相A的比例由5%到8. 6%，流動相B的比例由95%到91. 5% ；
20 45min,流動相A的比例由8. 6 %到17. 6%,流動相B的比例由91. 5 %至Ij 82. 4% ；45 70min,流動相A的比例 17. 6%到25. 1%,流動相B的比例 82. 4%到 74. 9% ；70 80min,流動相A的比例 25. 1 %到32. 1%,流動相B的比例 74. 9%到 67. 9% ；80 90min,流動相A的比例 32. 1 %到37. 1%,流動相B的比例 67. 9%到 62. 9%。 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果1.本發(fā)明以迷迭香酸為主要指標建立夏桑菊顆粒含量測定和薄層鑒別的質(zhì)量控 制方法，迷迭香酸是夏桑菊顆粒中君藥夏枯草的特征成分，同時也是夏桑菊顆粒的有效成 分，有利于保證夏桑菊顆粒的有效性；2.本發(fā)明建立的指紋圖譜中指認了咖啡酸、綠原酸、salviafIaside、迷迭香酸和 蒙花苷，其中咖啡酸、迷迭香酸和salviaflaside是夏桑菊顆粒中君藥夏枯草的有效成分， salviaflaside是夏枯草果穗中的特征性成分，只存在于果穗部位，不存在于根、莖、葉等其 他部位，可以有效地防止使用夏枯草其他部位冒充果穗入藥；本發(fā)明建立的指紋圖譜彌補 了現(xiàn)有夏桑菊顆粒指紋圖譜的模糊性；3.本發(fā)明建立的質(zhì)量控制方法從定性和定量方面系統(tǒng)地保證了夏桑菊顆粒的質(zhì) 量，共同構(gòu)成夏桑菊顆粒的質(zhì)量標準體系，從而有效地區(qū)分市面上質(zhì)量參差不齊的夏桑菊 顆粒，保證用藥的有效性和患者的利益。


圖1是夏桑菊顆粒的HPLC色譜圖；圖2是夏桑菊顆粒的薄層色譜圖；圖3是夏桑菊顆粒的指紋圖譜；圖4是根據(jù)夏桑菊顆粒的指紋圖譜建立的夏桑菊顆粒的標準對照圖譜。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明進行詳細說明。以下實施例1-6為夏桑菊顆粒中夏枯草的特征成分迷迭香酸的含量測定方法。實施例1采用高效液相色譜測定迷迭香酸的含量，包括以下步驟1、對照品溶液制備精密稱取迷迭香酸對照品適量，用甲醇溶解，得濃度為0. 22 μ g/μ L的對照品溶 液。2、供試品溶液制備稱夏桑菊顆粒約2. 5g，精密稱定，加甲醇10mL，稱重，超聲30min，取出，靜置，放 涼，補重，微孔濾膜濾過，作為供試品。3、液相色譜測定
分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定。色譜條件色譜柱Agilent Eclipse XDB-C18 (4. 6mmX 250mm, 5 μ m)；流速1· OmL. mirT1 ；檢測波長329nm；柱溫30°C； 流動相流動相A為乙腈，比例為20 30 %，流動相B為醋酸體積濃度為1. 0 %的 水溶液，比例為80%。液相色譜所得的圖譜見圖1，其中A、B、C分別為夏桑菊顆粒樣品、迷迭香酸對照 品、陰性樣品的圖譜，峰1為迷迭香酸峰；4、標準曲線的繪制分別精密吸取迷迭香酸對照品溶液1，2，3，5，10，15，20，25，30和40 μ L 進樣分析，以峰面積為縱坐標(Y)，進樣量(μ g)為橫坐標(X)，得回歸方程Y = 4541216. 83X-411008. 21 (r = 0. 9999)，線性范圍為0. 22 8. 80 μ g。5、精密度試驗按照《中國藥典》附錄記載的方法，分別精密吸取同一供試品溶液10μ L，連續(xù)進樣 6次，按上述色譜條件測定迷迭香酸的峰面積，其RSD為0. 50%。6、穩(wěn)定性試驗按照《中國藥典》附錄記載的方法，精密吸取同一供試品溶液10 μ L，分別在2，4， 6，8，10，12，24h進樣，按上述色譜條件測定迷迭香酸的峰面積，其RSD為1. 01%。7、重復(fù)性試驗按照《中國藥典》附錄記載的方法，取同一份樣品6份，精密稱定，按照1項下制備 供試品溶液，按上述色譜條件測定迷迭香酸的峰面積，其RSD為0. 77%。8、回收率試驗按照《中國藥典》附錄記載的方法，取同一批已知含量的夏桑菊顆粒樣品約1. 25g， 精密稱定，分別精密加入一定量迷迭香酸對照品溶液，按供試品制備方法制備成供試品溶 液，按上述色譜條件測定含量，計算回收率。平均回收率為101. 08%，RSD為1.75。9、含量測定結(jié)果分別測定選自廣州星群(藥業(yè) )股份有限公司、廣州花城制藥廠、四川禾邦制藥有 限公司、廣西億康藥業(yè)股份有限公司等廠家的夏桑菊顆粒中迷迭香酸的含量，結(jié)果見表1。表1不同生產(chǎn)廠家的夏桑菊顆粒中迷迭香酸含量 表1結(jié)果表明，所測樣品中迷迭香酸的含量差別很大，說明現(xiàn)在市面上流通的夏 桑菊顆粒中質(zhì)量也是參差不齊?？紤]到夏桑菊顆粒中主藥夏枯草所含的迷迭香酸及保證 一定的轉(zhuǎn)移率，為了保證夏桑菊顆粒的質(zhì)量，夏桑菊顆粒中迷迭香酸的含量應(yīng)不能少于 1. 50mg/10g。實施例2采用高效液相色譜測定迷迭香酸的含量，包括以下步驟1、對照品溶液制備同實施例1。2、供試品溶液制備稱夏桑菊顆粒約2. 5g，精密稱定，加甲醇10mL，稱重，超聲 60min，取出，靜置，放涼，補重，微孔濾膜濾過，作為供試品。3、液相色譜測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定。色譜條件色譜柱Agilent Eclipse XDB-C18 (4. 6mmX 250mm, 5 μ m)；、流速1· 5mL. mirT1 ；檢測波長335nm;柱溫25°C；流動相流動相A為乙腈，比例為10%，流動相B為醋酸體積濃度為0. 5%的水溶 液，比例為90%。其他步驟同實施例1。實施例3
采用高效液相色譜測定迷迭香酸的含量，包括以下步驟1、對照品溶液制備同實施例1。2、供試品溶液制備稱夏桑菊顆粒約2. 5g，精密稱定，加甲醇10mL，稱重，超聲 15min，取出，靜置，放涼，補重，微孔濾膜濾過，作為供試品。3、液相色譜測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定。色譜條件 色譜柱Agilent Eclipse XDB-C18 (4. 6mmX 250mm, 5 μ m)；流速0· 5mL. mirT1 ；檢測波長325nm;柱溫40°C;流動相流動相A為乙腈，比例為30 %，流動相B為醋酸體積濃度為2 %的水溶液， 比例為70%。其他步驟同實施例1。實施例4采用高效液相色譜測定迷迭香酸的含量，包括以下步驟1、對照品溶液制備同實施例1。2、供試品溶液制備稱夏桑菊顆粒約2. 5g，精密稱定，加甲醇10mL，稱重，超聲 45min，取出，靜置，放涼，補重，微孔濾膜濾過，作為供試品。3、液相色譜測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定。色譜條件色譜柱Agilent Eclipse XDB-C18 (4. 6mmX 250mm, 5 μ m)；、流速ImL. mirT1 ；檢測波長328nm;柱溫30°C;流動相流動相A為甲醇，比例為30%，流動相B為醋酸體積濃度為1. 0%的水溶 液，比例為70%。其他步驟同實施例1。實施例5采用高效液相色譜測定迷迭香酸的含量，包括以下步驟1、對照品溶液制備同實施例1。2、供試品溶液制備稱夏桑菊顆粒約2. 5g，精密稱定，加甲醇10mL，稱重，超聲 45min，取出，靜置，放涼，補重，微孔濾膜濾過，作為供試品。3、液相色譜測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定。色譜條件色譜柱Agilent Eclipse XDB-C18 (4. 6mmX 250mm, 5 μ m)；流速1· 2mL. mirT1 ；
檢測波長330nm;柱溫30°C；
流動相流動相A為甲醇，比例為40%，流動相B為醋酸體積濃度為0. 5%的水溶 液，比例為60%。其他步驟同實施例1。實施例6采用高效液相色譜測定迷迭香酸的含量，包括以下步驟1、對照品溶液制備同實施例1。2、供試品溶液制備稱夏桑菊顆粒約2. 5g，精密稱定，加甲醇10mL，稱重，超聲 30min，取出，靜置，放涼，補重，微孔濾膜濾過，作為供試品。3、液相色譜測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定。色譜條件色譜柱Agilent Eclipse XDB-C18 (4. 6mmX 250mm, 5 μ m)；、流速1. OmL. mirT1 ；檢測波長330nm;柱溫30°C;流動相流動相A為甲醇，比例為35%，流動相B為醋酸體積濃度為0. 5%的水溶 液，比例為65%。其他步驟同實施例1。以下實施例7-10為采用薄層色譜法鑒別夏桑菊顆粒中的夏枯草。實施例7采用薄層色譜法鑒別夏桑菊顆粒中的夏枯草，包括以下步驟1、對照品溶液的制備取對照品迷迭香酸，加甲醇溶解，配置成濃度分別為0. 3074mg/mL的對照品溶液。2、供試品溶液的制備分別取夏桑菊顆粒樣品及同法制成的缺夏枯草陰性樣品各10g，加甲醇15ml，超 聲30min，取出，靜置，放涼，補重，濾過，作為供試品溶液。3、點樣、展開、顯色分別吸取對照品溶液、供試品溶液點樣于同一薄層板上，以體積比為8 2 0.5 的氯仿甲醇甲酸展開劑，展開，取出，晾干，用香草醛濃硫酸顯色，加熱至斑點清晰， 得夏桑菊顆粒薄層色譜，見圖2。其中1 13為夏桑菊顆粒樣品，14為缺夏枯草的夏桑菊 顆粒陰性樣品。從圖2可以看出，供試品色譜中，在對照品色譜的相應(yīng)位置上，有相同顏色的斑 點，而陰性對照沒有相應(yīng)斑點；迷迭香酸僅存在于夏桑菊顆粒組成君藥夏枯草之中，而桑葉 和野菊花中沒有該化合物，指標專屬性強。因此，該方法不僅簡單，易重復(fù)，而且具有明顯的 實用性，可以作為夏桑菊顆粒的質(zhì)量標準之一。實施例8采用薄層色譜法鑒別夏桑菊顆粒中的夏枯草，包括以下步驟
1、對照品溶液的制備同實施例7。2、供試品溶液的制備分別取夏桑菊顆粒樣品及同法制成的缺夏枯草陰性樣品各10g，加甲醇15ml，超 聲15min，取出，靜置，放涼，補重，濾過，作為供試品溶液；3、點樣、展開、顯色分別吸取對照品溶液、供試品溶液點樣于同一薄層板上，以體積比為7 3 1的 氯仿甲醇甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，用0.5%香草醛濃硫酸顯色，加熱至斑點清 晰，得夏桑菊顆粒的薄層色譜。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯 相同顏色的斑點。實施例9采用薄層色譜法鑒別夏桑菊顆粒中的夏枯草，包括以下步驟
1、對照品溶液的制備同實施例7。2、供試品溶液的制備分別取夏桑菊顆粒樣品及同法制成的缺夏枯草陰性樣品各10g，加甲醇15ml，超 聲60min，取出，靜置，放涼，補重，濾過，作為供試品溶液；3、點樣、展開、顯色分別吸取對照品溶液、供試品溶液點樣于同一薄層板上，以體積比為6 4 1的 氯仿甲醇水為展開劑，展開，取出，晾干，用1.5%香草醛濃硫酸顯色，加熱至斑點清晰， 得夏桑菊顆粒的薄層色譜。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同 顏色的斑點。實施例10采用薄層色譜法鑒別夏桑菊顆粒中的夏枯草，包括以下步驟1、對照品溶液的制備同實施例7。2、供試品溶液的制備分別取夏桑菊顆粒樣品及同法制成的缺夏枯草陰性樣品各10g，加甲醇15ml，超 聲45min，取出，靜置，放涼，補重，濾過，作為供試品溶液；3、點樣、展開、顯色分別吸取對照品溶液、供試品溶液點樣于同一薄層板上，以體積比為6 5 0.5 的氯仿甲醇水為展開劑，展開，取出，晾干，用2%香草醛濃硫酸顯色，加熱至斑點清晰， 得夏桑菊顆粒薄層色譜。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏 色的斑點。實施例11夏桑菊顆粒的指紋圖譜的建立采用高效液相色譜法建立夏桑菊顆粒的指紋圖譜，包括以下步驟1、對照品溶液制備分別取對照品綠原酸，蘆丁，木犀草苷，salviaflaside，迷迭香酸，蒙花苷適量，力口 甲醇溶解，作為對照品溶液。2、供試品溶液制備取夏桑菊顆粒約5g，精密稱定，加甲醇10mL，稱重，超聲30min，取出，靜置，放涼， 補重，微孔濾膜濾過，作為供試品。
3、色譜條件色譜柱Agilent Eclipse XDB-C18 (4. 6mmX 250mm, 5 μ m)；、流速1. OmL. mirT1 ；檢測波長290nm；柱溫30°C；進樣體積IOyL;流動相流動相A 乙腈；流動相B 醋酸體積濃度為1. 0%的水溶液，進行系統(tǒng)梯 度洗脫，梯度見表2。表2流動相系統(tǒng)梯度 7025.174.9 80 32.1 67.9 90 37.1 62.94、精密度取供試品一份，按照3的色譜分析條件，連續(xù)進樣6次，計算保留時間及峰面積的 精密度，結(jié)果表明實施例7方法的精密度符合要求，其RSD值小于5%5、重現(xiàn)性平行制備6份藥材供試品溶液，進行分析，以主要成分峰面積為標準，考察方法重 現(xiàn)性，其RSD值小于5%，表明該實施例方法的重現(xiàn)性在誤差范圍內(nèi)。6、穩(wěn)定性制備的供試品溶液，在室溫下放置不同時間，進行分析，以主要成分的峰面積計 算，考察樣品的穩(wěn)定性，其RSD值小于5%，表明樣品至少在48h內(nèi)是穩(wěn)定的。7、夏枯草藥材的指紋圖譜按照上述色譜條件，將18個廠家的夏桑菊顆粒制成供試品溶液進樣分析，得到夏 桑菊顆粒的指紋圖譜，見圖3，指紋圖譜中共有19個色譜峰作為共有峰。其中色譜峰2號、 4號、11號、15號和18號分別為咖啡酸，綠原酸，salviaflaside，迷迭香酸和蒙花苷。11號 色譜峰來源于夏枯草果穗中的特征成分，15號為夏桑菊顆粒中最主要的色譜峰，也來源夏 枯草，因此均是影響夏枯草藥材質(zhì)量的關(guān)鍵峰。這19個色譜峰的保留時間見表3，平均保留 時間見表4，以15號峰的保留時間為標準，其他色譜峰的保留時間與之相比，從而求得各色 譜峰的相對保留時間值，見表5 ；共有峰的平均峰面積見表6，相對峰面積見表7。表3 19個色譜峰的保留時間
保留\樣 表5色譜峰的相對保留時間 表6色譜峰平均峰面積 表7色譜峰相對峰面積 8、用相似度軟件對夏桑菊顆粒指紋圖譜的處理通過藥典會頒布的中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，建立夏桑菊顆粒的標準對 照圖譜，見圖4。各特征峰的平均保留時間分別為5. 47min、8. 24min、10. 28min、13. 07min、 17. 10min>22. 94min>25. 74min>38. 15min ；46.58min>47.02min>50.29min>51. 82min> 54. 32min、57. 82min、58. 50min、61. 31min、71. 49min、71. 93min、80. 69min，其中平均保留時 間為 8. 24min、13. 07min、50. 29min、58. 50min、71. 93min 的 2 號、4 號、11 號、15 號和 18 號分 別為咖啡酸，綠原酸，salviaflaside，迷迭香酸和蒙花苷。其中11號色譜峰來源于夏枯草 果穗中的特征成分，15號為夏桑菊顆粒中最主要的色譜峰，也來源夏枯草，因此均是影響夏 枯草藥材質(zhì)量的關(guān)鍵峰。本發(fā)明建立的夏桑菊顆粒的指紋圖譜，其方法穩(wěn)定、可靠，輔以夏桑菊顆粒主要色譜峰的指認，可以作為夏桑菊顆粒的質(zhì)量標準之一 。
權(quán)利要求
一種夏桑菊顆粒的質(zhì)量控制方法，其特征是，采用高效液相色譜法測定夏枯草的特征成分迷迭香酸的含量，包括以下步驟(1)制備對照品溶液精密稱取迷迭香酸對照品，用甲醇或乙醇溶解，配制成迷迭香酸對照品溶液；(2)制備供試品溶液取夏桑菊顆粒，精密稱定，加2-10倍量的甲醇或乙醇，稱重，超聲15～60min，取出，靜置，放涼，補重，微孔濾膜濾過，作為供試品溶液；(3)液相色譜測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，其中色譜條件為流速0.5～1.5mL.min-1；檢測波長325～335nm；柱溫25～40℃；流動相流動相A為乙腈，流動相B為醋酸體積濃度為0.5％～2％的水溶液，流動相A和B的比例分別為10～30％和90～70％；或流動相A為甲醇，流動相B為醋酸體積濃度為0.5％～1％的水溶液，流動相A和B的比例分別為30～40％和70～60％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的夏桑菊顆粒的質(zhì)量控制方法，其特征是，所述色譜條件為流速1. OmL. mirT1 ；檢測波長329nm ；柱溫:30°C ；流動相流動相A為乙腈，流動相B為醋酸體積濃度為1.0%的水溶液，流動相A和B的 比例分別為20%和80% ；或流動相A為甲醇，流動相B為醋酸體積濃度為0. 5%的水溶液， 流動相A和B的比例分別為35%和65%。
3 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的夏桑菊顆粒的質(zhì)量控制方法，其特征是，所述夏桑菊顆粒 中迷迭香酸的含量不少于1. 50mg/10g。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的夏桑菊顆粒的質(zhì)量控制方法，其特征是，還包括采用薄層色 譜法鑒別夏枯草，包括以下步驟(1)制備對照品溶液精密稱取迷迭香酸對照品，用甲醇或乙醇溶解，配制成迷迭香酸對照品溶液；(2)制備供試品溶液取夏桑菊顆粒，精密稱定，加2-10倍量的甲醇或乙醇，稱重，超聲15 60min，取出，靜 置，放涼，補重，微孔濾膜濾過，作為供試品溶液；(3)點樣、展開、顯色分別吸取對照品溶液、供試品溶液點樣于同一薄層板上，以體積比為6 8 2 4 0. 5 1的氯仿甲醇甲酸或體積比為6 8 4 5 0. 5 1的氯仿甲醇 水為展開劑，展開，取出，晾干，用0. 5 2%的香草醛濃硫酸顯色，加熱至斑點清晰；供試品 溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的夏桑菊顆粒的質(zhì)量控制方法，其特征是，所述步驟(3)中的展 開劑為體積比為8 2 0. 5的氯仿甲醇甲酸或體積比為6:4:1的氯仿甲醇 水。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的夏桑菊顆粒的質(zhì)量控制方法，其特征是，還包括采用高效液 相色譜方法建立夏桑菊顆粒的指紋圖譜，包括以下步驟(1)制備對照品溶液分別取對照品咖啡酸、綠原酸、salviaflaside、迷迭香酸、蒙花苷適量，加甲醇或乙醇 溶解，作為對照品溶液；(2)制備供試品溶液取夏桑菊顆粒，精密稱定，加1 4倍量甲醇或乙醇，稱重，超聲15 60min，取出，靜 置，放涼，補重，微孔濾膜濾過，作為供試品溶液；(3)液相色譜分析分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，其中色譜條件為 流速0. 5 1. 5mL. mirT1 ； 檢測波長280 305nm ； 柱溫25 40°C ；流動相流動相A為乙腈，流動相B為醋酸體積濃度為的水溶液，進行梯度洗脫。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的夏桑菊顆粒的質(zhì)量控制方法，其特征是，所述色譜條件為 流速1. OmL. mirT1 ；檢測波長290nm ； 柱溫:30°C ；所述梯度洗脫的程序為0 lOmin，流動相A的比例為5%，流動相B的比例為95% ； 10 20min,流動相A的比例由5%到8. 6%，流動相B的比例由95%到91. 5% ； 20 45min，流動相A的比例由8. 6 %到17. 6 %，流動相B的比例由91. 5 %到82. 4 % ； 45 70min,流動相A的比例由17. 6%到25. 1 %，流動相B的比例由82. 4%到74.9%； 70 80min,流動相A的比例由25. 1 %到32. 1%,流動相B的比例由74. 9%到67. 9%； 80 90min,流動相A的比例由32. 1 %到37. 1%,流動相B的比例由67. 9%到62.9%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種夏桑菊顆粒的質(zhì)量控制方法，該方法包括采用高效液相色譜法測定夏枯草的特征成分迷迭香酸的含量。本發(fā)明所建立的薄層色譜和高效液相色譜方法簡便，有很好的實用性；建立了夏桑菊顆粒的指紋圖譜，有助于對夏桑菊顆粒質(zhì)量的全面把握，同時指認了主要色譜峰，彌補了夏桑菊顆粒指紋圖譜的模糊性，共同組成夏桑菊顆粒的質(zhì)量標準體系，達到有效控制夏桑菊顆粒質(zhì)量的目的。
文檔編號G01N30/90GK101862373SQ20101020106
公開日2010年10月20日 申請日期2010年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月12日
發(fā)明者方鐵錚, 林麗美, 花汝鳳, 蔣莉娟, 許招懂, 譚新 申請人:廣州星群(藥業(yè))股份有限公司