專利名稱：化學(xué)發(fā)光液,增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光的試劑和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化學(xué)發(fā)光免疫分析。更具體地講，本發(fā)明涉及含有增強(qiáng)劑的化學(xué)發(fā)光液，制備方法及試劑盒；增強(qiáng)1，2-二氧雜環(huán)丁烷化合物化學(xué)發(fā)光作用的試劑和方法，制備方法及試劑盒。
背景技術(shù)：
化學(xué)發(fā)光免疫分析是世界范圍內(nèi)發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析技術(shù)，是繼酶免技術(shù)、放免技術(shù)、熒光免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種超高靈敏度的微量檢測技術(shù)。它具有靈敏度高、檢測范圍寬、操作簡便快速、標(biāo)記物穩(wěn)定性好、無污染等優(yōu)點(diǎn)，是目前免疫定量分析最理想的方法。在化學(xué)發(fā)光免疫分析中，常用發(fā)光物質(zhì)包括魯米諾、異魯米諾、吖啶酯、1，2_ 二氧雜環(huán)丁烷化合物(l，2-di0Xetane compound)。其中異魯米諾和吖啶酯作為示蹤分子直接標(biāo)記，屬于閃光型化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。魯米諾和1，2-二氧雜環(huán)丁烷化合物依靠酶作為示蹤分子標(biāo)記，屬于酶促輝光型化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。1，2-二氧雜環(huán)丁烷化合物是最新的超靈敏的堿性磷酸酶底物，在適宜的緩沖液中，隨著堿性磷酸酶的催化水解作用，1，2- 二氧雜環(huán)丁烷化合物分解發(fā)出強(qiáng)度很高的光信號(hào)，信號(hào)可持續(xù)20個(gè)小時(shí)以上，是理想的化學(xué)發(fā)光物質(zhì)。國外生產(chǎn)廠家研制出以堿性磷酸酶為標(biāo)記物，1,2- 二氧雜環(huán)丁烷化合物為底物的試劑盒，與之相匹配的有DPC、Beckman, BioMerieux, Olympus全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)。1,2- 二氧雜環(huán)丁烷化合物中的CSPD，CDP，CDP-Mar，BZPD及其發(fā)光液，多數(shù)為國外公司Tropix，Lumigen等的專利產(chǎn)品，價(jià)格昂貴，大大限制了該項(xiàng)技術(shù)在國內(nèi)的應(yīng)用。國內(nèi)能夠提供的1，2_ 二氧雜環(huán)丁烷化合物——3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3-磷酰氧基)苯-1，2-二氧雜環(huán)丁烷(AMPPD)，其發(fā)光信號(hào)強(qiáng)度大大弱于上述國外產(chǎn)品。AMPPD的分子結(jié)構(gòu)中存在一個(gè)-0-0-鍵很弱的四元雜環(huán)和一個(gè)磷酸根基團(tuán)。磷酸根基團(tuán)維持著整個(gè)分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。在通常情況下，這種化合物很穩(wěn)定，5°C下保存的固體 AMPPD幾乎不分解。當(dāng)有堿性磷酸酶催化作用時(shí)，AMPPD發(fā)生磷酸根基團(tuán)水解，形成一個(gè)不穩(wěn)定的中間體。這個(gè)中間體隨即自行分解，-0-0-四元環(huán)釋放出大量能量，激發(fā)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，發(fā)射光子。1989年，Schaap報(bào)道了利用十六烷基三甲基溴化銨和5_(N_十四酰)_氨基熒光素對1，2-二氧雜環(huán)丁烷化合物進(jìn)行化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)的技術(shù)(Clin. Chem.，35)。在美國專利 US4959182和US5004565及中國專利CN89106M9. 1中，Schaap描述了在十六燒基三甲基溴化銨形成的膠束條件下，1,2- 二氧雜環(huán)丁烷化合物進(jìn)行化學(xué)和酶觸發(fā)而導(dǎo)致的化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)。美國專利US5145772公開了聚乙烯芐基二甲基芐基氯化銨(BDMQ)、血清白蛋白等大分子物質(zhì)對1，2-二氧雜環(huán)丁烷化合物的發(fā)光增強(qiáng)效應(yīng)。美國專利US5M7836公開了聚乙烯芐基三甲基氯化銨(TMQ)及聚乙烯芐基三丁基氯化銨(TBQ)可作為1，2-二氧雜環(huán)丁烷化合物的發(fā)光增強(qiáng)劑。
美國專利US5393469公開了聚合季膦鹽對酶催化1，2_ 二氧雜環(huán)丁烷化合物所產(chǎn)生的發(fā)光增強(qiáng)作用。美國專利US5650099及中國專利CN1208399A公開了依靠雙陽離子表面活性劑——三辛膦甲基-4-三丁基膦甲基苯二氯化物和熒光物——熒光素、羥基芘磺酸對1， 2-二氧雜環(huán)丁烷化合物的發(fā)光增強(qiáng)效應(yīng)。中國專利CN1719254A公開了一種以CSPD為底物，氯化十六烷三甲基銨、肉蔻酰甘油磷酸二鈉、牛血清白蛋白、十八烷氨基熒光素為增強(qiáng)劑的化學(xué)發(fā)光液。上述專利中公開的1，2_ 二氧雜環(huán)丁烷化合物的發(fā)光增強(qiáng)劑所使用的聚合物和長鏈烷基熒光物，價(jià)格昂貴，不易購買。因此，本領(lǐng)域需要開發(fā)更經(jīng)濟(jì)的化學(xué)發(fā)光液和增強(qiáng)1，2-二氧雜環(huán)丁烷化合物發(fā)光作用的試劑和方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明一方面提供了-少一種具有通式I結(jié)構(gòu)的烷基:
權(quán)利要求
1. 一種化學(xué)發(fā)光液，含有1，2_ 二氧雜環(huán)丁烷化合物，其特征在于 所述化學(xué)發(fā)光液還包括至少一種具有通式I結(jié)構(gòu)的烷基二甲基芐基季銨鹽， Γ(
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學(xué)發(fā)光液，其特征在于所述烷基二甲基芐基季銨鹽選自十二烷基二甲基芐基氯化銨、十四烷基二甲基芐基氯化銨、十六烷基二甲基芐基氯化銨、 十八烷基二甲基芐基氯化銨、十二烷基二甲基芐基溴化銨、十四烷基二甲基芐基溴化銨、 十六烷基二甲基芐基溴化銨、十八烷基二甲基芐基溴化銨及其組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化學(xué)發(fā)光液，其特征在于所述烷基二甲基芐基季銨鹽的濃度為0. lg/L 10g/L，優(yōu)選lg/L 10g/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的化學(xué)發(fā)光液，其特征在于所述化學(xué)發(fā)光液還包括熒光劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的化學(xué)發(fā)光液，其特征在于所述化學(xué)發(fā)光液還含有2-氨基-2-甲基-1-丙醇或鎂離子或兩者。
6.一種化學(xué)發(fā)光液的制備方法，其特征在于將權(quán)利要求1-5中任一種化學(xué)發(fā)光液的組分溶解在水中。
7.一種化學(xué)發(fā)光試劑盒，其特征在于所述試劑盒中包括權(quán)利要求1-5所述的任一種化學(xué)發(fā)光液，所述發(fā)光液中的組分任選單獨(dú)包裝或混合包裝。
8.一種增強(qiáng)1，2_ 二氧雜環(huán)丁烷化合物發(fā)光作用的試劑，其特征在于所述試劑含有至少一種具有通式I結(jié)構(gòu)的烷基二甲基芐基季銨鹽，Y為苯環(huán)上的取代基，選自H、鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、烷基、烷氧基、鹵代烷基、氨基、烷基氨基或酰胺基。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑，其特征在于所述烷基二甲基芐基季銨鹽選自十二烷基二甲基芐基氯化銨、十四烷基二甲基芐基氯化銨、十六烷基二甲基芐基氯化銨、十八烷基二甲基芐基氯化銨、十二烷基二甲基芐基溴化銨、十四烷基二甲基芐基溴化銨、十六烷基二甲基芐基溴化銨、十八烷基二甲基芐基溴化銨及其組合。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的試劑，其特征在于所述烷基二甲基芐基季銨鹽的濃度為 0. lg/L 10g/L，優(yōu)選 lg/L 10g/L。
11.根據(jù)權(quán)利要求8-10任一項(xiàng)所述的試劑，其特征在于所述試劑還含有熒光劑。
12.根據(jù)權(quán)利要求8-11任一項(xiàng)所述的試劑，其特征在于所述試劑還含有2-氨基-2-甲基-1-丙醇或鎂離子或兩者。
13.一種增強(qiáng)1，2_ 二氧雜環(huán)丁烷化合物發(fā)光作用的試劑的制備方法，其特征在于將權(quán)利要求8-12所述任一種試劑的組分溶解在水中。
14.一種增強(qiáng)1，2_ 二氧雜環(huán)丁烷化合物化學(xué)發(fā)光作用的試劑盒，其特征在于所述試劑盒包括權(quán)利要求8-12所述任一種試劑，所述試劑組分任選單獨(dú)包裝或混合包裝。
15.一種增強(qiáng)1，2-二氧雜環(huán)丁烷化合物化學(xué)發(fā)光作用的方法，其特征在于包括在含 1，2-二氧雜環(huán)丁烷化合物溶液中添加權(quán)利要求8-12所述的任一種試劑或權(quán)利要求14所述的試劑盒。
16.具有通式I結(jié)構(gòu)的烷基二甲基芐基季銨鹽在制備化學(xué)發(fā)光液中的應(yīng)用，
全文摘要
本發(fā)明公開了一種以1，2-二氧雜環(huán)丁烷化合物為底物的化學(xué)發(fā)光液，含有1，2-二氧雜環(huán)丁烷化合物和式I的烷基二甲基芐基類季銨鹽。本發(fā)明還公開了一種增強(qiáng)1，2-二氧雜環(huán)丁烷化合物化學(xué)發(fā)光作用的試劑和方法，試劑中含有式I的烷基二甲基芐基類季銨鹽。
文檔編號(hào)G01N33/53GK102311730SQ20101021577
公開日2012年1月11日 申請日期2010年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月30日
發(fā)明者張?jiān)Ｆ? 錢純亙 申請人:深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司