專利名稱：一種用于地西他濱有關(guān)物質(zhì)的分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種地西他濱的分析方法。
背景技術(shù)：
地西他濱是目前已知的最強(qiáng)的DNA甲基化特異抑制劑，主要用于骨髓增生異常綜合征(MDS)的治療，適合于新發(fā)的和繼發(fā)的MDS患者，以及按IPSS系統(tǒng)分為高危、中度2級(jí)危險(xiǎn)、中度1級(jí)危險(xiǎn)的MDS患者。地西他濱分子式為C8H12N4O4,化學(xué)結(jié)構(gòu)式為β -構(gòu)型根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，地西他濱的主要問題是其化學(xué)不穩(wěn)定性，地西他濱水解開環(huán)、去甲?；约岸嘶悩?gòu)化均導(dǎo)致其降解形成新的產(chǎn)物。雖然目前還不清楚地西他濱的降解產(chǎn)物是否具有的毒性、潛在的誘變性和DNA修復(fù)誘導(dǎo)作用，但地西他濱的降解不僅會(huì)引起其藥物濃度的降低，還會(huì)導(dǎo)致其降解產(chǎn)物可能存在地西他濱外的藥理和毒理特性，故應(yīng)控制地西他濱中各類降解產(chǎn)物的種類和含量。根據(jù)文獻(xiàn)及我們的研究共發(fā)現(xiàn)地西他濱的水解雜質(zhì)共13個(gè)，包括地西他濱α -異構(gòu)體等雜質(zhì)。在研究中，將α-異構(gòu)體單獨(dú)指出，其他雜質(zhì)取有關(guān)物質(zhì)英文“Related Substances"的簡寫“Rs”，按相對(duì)保留時(shí)間的先后順序命名為Rsl_Rsl2。地西他濱降解產(chǎn)物種類多，且極性大，在反相色譜柱中保留機(jī)制較差，需采用無有機(jī)相的流動(dòng)相才能獲得良好的分離，故在分析地西他濱有關(guān)物質(zhì)時(shí)除需考慮檢測到的雜質(zhì)種類及數(shù)量，還需考慮分析過程中溶液的穩(wěn)定性，以排除溶液穩(wěn)定性原因引起的對(duì)檢測的干擾。地西他濱α -異構(gòu)體是地西他濱的主要雜質(zhì)，它既是地西他濱的工藝雜質(zhì)也是其降解雜質(zhì)，目前的檢測分析方法也主要是控制α-異構(gòu)體。依據(jù)文獻(xiàn)(W02008/083634A1 17. 07. 2008)報(bào)道，α-異構(gòu)體具有和地西他濱相似的藥理活性，雖然活性較地西他濱稍弱，但毒性更低，并且穩(wěn)定性更好，所以，可以適當(dāng)放寬生產(chǎn)過程中對(duì)α-異構(gòu)體的控制限度。但應(yīng)嚴(yán)格控制α-異構(gòu)體外的其他雜質(zhì)的種類和含量。中國專利“高效液相色譜法分離測定地西他濱及其對(duì)映異構(gòu)體的方法”(申請(qǐng)?zhí)?00710064576)公開了使用正己烷-低級(jí)醇溶液為流動(dòng)相(流動(dòng)相中可包含有機(jī)胺改性劑)分離測定地西他濱及其α-異構(gòu)體，該方法雖然提供了分離測定地西他濱及其α -異構(gòu)體的方法，但地西他濱樣品溶解度不好， 分離過程中地西他濱易發(fā)生水解，影響結(jié)果準(zhǔn)確性，且不適于分離α-異構(gòu)體以外的有關(guān)物質(zhì)。中國專利“高效液相色譜法分離測定地西他濱有關(guān)物質(zhì)及其對(duì)映異構(gòu)體的方法”(申請(qǐng)?zhí)?00910089574. X)，該方法使用HILIC色譜柱，以乙腈-水為流動(dòng)相，平衡時(shí)間長，色譜峰分離度較差。地西他濱是FDA批準(zhǔn)上市治療MDS的三種藥物中的一種，對(duì)在人類的其他癌癥和鐮刀細(xì)胞性貧血和難治性慢性粒細(xì)胞白血病(CML)的使用也正處于臨床研究階段，如上所述，地西他濱的降解產(chǎn)物可能存在地西他濱外的藥理和毒理特性，所以，應(yīng)該建立一種新的方法用于控制地西他濱有關(guān)物質(zhì)的種類和含量，這種新方法的建立是十分必要的。

發(fā)明內(nèi)容
基于以上原因，本發(fā)明提供了一種用于地西他濱有關(guān)物質(zhì)的分析方法，該方法不僅能保證分析過程中地西他濱的穩(wěn)定性，而且能有效的檢出地西他濱中的各種有關(guān)物質(zhì)。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種地西他濱有關(guān)物質(zhì)的分析方法，包括地西他濱原料藥及注射用地西他濱，采用高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充料，檢測波長為210-240nm，流速為 1. 0-3. Oml/min，柱溫為10_30°C，使用低級(jí)醇溶解供試品及對(duì)照品，供試品及對(duì)照品溶液進(jìn)樣量為1-20 μ 1，流動(dòng)相為ρΗ6· 0-7. 5的濃度為0. 01-0. 05mol/L的磷酸鹽溶液。其中檢測波長為220nm。其中流速為1. 5ml/min。其中柱溫為25 °C。其中所述低級(jí)醇包括甲醇、乙醇、異丙醇、異戊醇。其中樣品進(jìn)樣量為5ul。其中所述磷酸鹽為磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉中的一種或幾種。其中所述磷酸鹽溶液的pH為6. 8，濃度為0. 03mol/L。分析方法確證實(shí)驗(yàn)1.檢測波長的選擇地西他濱水解三嗪環(huán)開環(huán)形成開環(huán)甲?；苌铮忾_環(huán)后甲基丟失的的不可逆反應(yīng)產(chǎn)生胍基甲酰胺衍生物。文獻(xiàn)中表明，三嗪環(huán)的水解開環(huán)使得240nm的摩爾吸收增大，因此，地西他濱開環(huán)甲?；苌镌贛Onm處有強(qiáng)吸收，吸收強(qiáng)度大于210nm處的吸收； 而地西他濱胍基甲酰胺衍生物在240nm處存在吸收，但強(qiáng)度很小。故采用210-240nm為檢測波長。為全面檢測各水解雜質(zhì)，避免末端吸收，優(yōu)選220nm為檢測波長。2.流動(dòng)相的選擇地西他濱有關(guān)物質(zhì)種類多，極性大，選擇適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)相以得到良好的分離效果是分析方法的關(guān)鍵。我們選擇磷酸鹽緩沖液-甲醇、乙酸銨溶液(文獻(xiàn)1)、磷酸鹽溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行對(duì)比。部分試驗(yàn)結(jié)果見表1表1流動(dòng)相對(duì)比篩選試驗(yàn)的部分?jǐn)?shù)據(jù)
權(quán)利要求
1.一種地西他濱有關(guān)物質(zhì)的分析方法，包括地西他濱及注射用地西他濱，其特征在于采用高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充料，檢測波長為210-240nm，流速為 1. 0-3. Oml/min，柱溫為10_30°C，使用低級(jí)醇溶解供試品及對(duì)照品，供試品及對(duì)照品溶液進(jìn)樣量為1-20 μ 1，流動(dòng)相為ρΗ6· 0-7. 5的濃度0. 01-0. 05mol/L的磷酸鹽溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種地西他濱有關(guān)物質(zhì)的分析方法，其中檢測波長為220nm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種地西他濱有關(guān)物質(zhì)的分析方法，其中流速為1.5ml/min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種地西他濱有關(guān)物質(zhì)的分析方法，其中柱溫為25°C。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種地西他濱有關(guān)物質(zhì)的分析方法，其中所述低級(jí)醇包括甲醇、乙醇、異丙醇、異戊醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種地西他濱有關(guān)物質(zhì)的分析方法，其中樣品進(jìn)樣量為5ul。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種地西他濱有關(guān)物質(zhì)的分析方法，其中所述磷酸鹽為磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉中的一種或幾種。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種地西他濱有關(guān)物質(zhì)的分析方法，其特征在于所述磷酸鹽溶液的PH為6. 8，濃度為0. 03mol/L。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種地西他濱有關(guān)物質(zhì)的分析方法，包括地西他濱及注射用地西他濱的高效液相色譜法，其特征在于以pH6.0-7.5的濃度0.01-0.05mol/L的磷酸鹽溶液為流動(dòng)相，檢測波長為210-240nm，在流速為1.0-3.0ml/min，柱溫為10-30℃的條件下，能夠有效的分離地西他濱各有關(guān)物質(zhì)，保證地西他濱中有關(guān)物質(zhì)的檢出率，保證了地西他濱質(zhì)量的可控性。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102313781SQ20101021937
公開日2012年1月11日 申請(qǐng)日期2010年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月7日
發(fā)明者姜威, 孫學(xué)偉, 孫德杰, 米長江, 顧群 申請(qǐng)人:北京本草天源藥物研究院