專利名稱：一種檢測(cè)甲苯胺紅的間接競爭法酶聯(lián)免疫試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于酶聯(lián)免疫和食品安全領(lǐng)域中違禁添加劑檢測(cè)分析技術(shù)領(lǐng)域，具體而 言，本發(fā)明涉及一種用于檢測(cè)對(duì)位紅的間接競爭法酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
甲苯胺紅與對(duì)位紅一樣同屬于偶氮系列化工合成染色劑，主要應(yīng)用于油彩顏料及 橡膠制品的著色，常溫下呈固態(tài)。由于其結(jié)構(gòu)(見下圖)與致癌物蘇丹紅相似，在代謝過程 中偶氮苯可被降解，產(chǎn)生苯胺，苯胺可直接作用于肝細(xì)胞，引起中毒性肝病，長期攝入苯胺 可造成人體的神經(jīng)系統(tǒng)損害，并具有潛在的致癌性，因此被禁止用于食品生產(chǎn)。 由于添加甲苯胺紅后可使辣椒制品、番茄制品以及香腸等食品長期保持鮮艷光亮 的櫻桃紅色，增加了產(chǎn)品的外觀新鮮度，而且在偶氮染料中價(jià)格相對(duì)便宜，可大幅降低生產(chǎn) 成本，因而被不法商家作為食品添加劑使用，以吸引消費(fèi)者，雖屢禁而不止，給消費(fèi)者帶來 巨大的危害。( 二 )相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)方法現(xiàn)狀目前國內(nèi)仍沒有針對(duì)甲苯胺紅的檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)，其日常檢測(cè)主要參考蘇丹紅的方 法標(biāo)準(zhǔn)(GB/T 19681-2005)，采用溶劑萃取，液相色譜測(cè)定。國外實(shí)驗(yàn)室甲苯胺紅的檢測(cè)， 則常采用液相、氣相色譜法或與質(zhì)譜聯(lián)用進(jìn)行定性、定量。這些方法具有檢測(cè)精度高、靈敏、 準(zhǔn)確、穩(wěn)定等一系列優(yōu)點(diǎn)，但設(shè)備及檢測(cè)費(fèi)用昂貴、操作復(fù)雜、分析時(shí)間長，不能實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)檢 測(cè)，限制了其推廣和應(yīng)用，也給甲苯胺紅的快速檢測(cè)和監(jiān)管帶來困難。目前國內(nèi)外還沒有專 門針對(duì)甲苯胺紅的快速免疫檢測(cè)方法報(bào)道，因而建立高靈敏度的甲苯胺紅快速檢測(cè)技術(shù)成 為當(dāng)務(wù)之急。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種快速檢測(cè)甲苯胺紅的酶聯(lián)免疫試劑盒。本發(fā)明提供了一種快速檢測(cè)甲苯胺紅的酶聯(lián)免疫試劑盒，該試劑盒包括甲苯胺 紅特異性抗體、甲苯胺紅_載體蛋白偶聯(lián)物和酶標(biāo)二抗。其中甲苯胺紅特異性抗體為甲苯 胺紅的多克隆抗體或單克隆抗體，可用甲苯胺紅與載體蛋白偶聯(lián)物作為免疫原通過免疫動(dòng)物(例如兔或鼠)制得。所述的載體蛋白為牛血清白蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白或匙孔 銅蘭蛋白(KLH)。所述的對(duì)位紅_載體蛋白偶聯(lián)物采用化學(xué)方法偶聯(lián)得到。所述酶標(biāo)二抗 的標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶，所述酶標(biāo)二抗可以用商品化的辣根過氧化物酶酶標(biāo)二抗，也 可以通過過碘酸鈉法或戊二醛法將辣根過氧化物酶與二抗偶聯(lián)制得。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選 實(shí)施方案中，所述酶標(biāo)二抗為酶標(biāo)羊抗兔IgG抗體或酶標(biāo)羊抗鼠抗體。用于制備所述酶標(biāo)板的固相材料，包括但不限于，例如，聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙 烯。載體的形式是微量反應(yīng)板凹孔。為方便現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和大量樣本篩查，所述試劑盒還可以進(jìn)一步包括包被有對(duì)位紅抗 原的酶標(biāo)板、對(duì)位紅標(biāo)準(zhǔn)溶液、顯色劑、濃縮洗滌液、終止液和濃縮樣品稀釋液。所述的濃縮洗滌液為0. 5%吐溫-20 10倍磷酸鹽緩沖液。所述的顯色劑由顯色劑 A液和顯色劑B液組成(例如，使用體積比為1 1)，顯色劑A液為過氧化氫或過氧化脲， 顯色劑B液為四甲基聯(lián)苯胺或鄰苯二胺。所述的濃縮樣品稀釋液為含0. 吐溫-20的10 倍磷酸鹽緩沖液。另一方面，本發(fā)明還提供了一種檢測(cè)飼料、水產(chǎn)品或食品樣品中對(duì)位紅含量的方 法，包括步驟(1)樣品前處理；(2)用權(quán)利要求1-9任一所述的試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，向包被有對(duì)位紅抗原的酶標(biāo)板 孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，再加入抗甲苯胺紅多克隆或單克隆抗體，孵育后洗滌拍干，加 入酶標(biāo)記二抗，孵育后洗滌拍干，顯色、終止，用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度值；(3)分析檢測(cè)結(jié)果。本發(fā)明試劑盒的檢測(cè)原理為將甲苯胺紅抗原吸附于固相載體上，加入樣本或甲苯胺紅標(biāo)準(zhǔn)品溶液并加入甲苯 胺紅抗體工作液，待測(cè)樣品中甲苯胺紅和固相載體上包被的甲苯胺紅抗原競爭甲苯胺紅抗 體，再加入酶標(biāo)記抗抗體進(jìn)行酶活性的放大作用，顯色后終止，測(cè)定樣品的吸光度值，該值 與樣品中甲苯胺紅的量呈負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出甲苯胺紅濃度范圍。有益效果本發(fā)明檢測(cè)甲苯胺紅的試劑盒主要采用間接競爭酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法定性或定 量測(cè)定樣品中甲苯胺紅含量；對(duì)樣品的前處理要求低，樣品前處理過程簡單，能同時(shí)快速檢 測(cè)大批樣品。本發(fā)明中，該試劑盒采用高特異性的甲苯胺紅多克隆或單克隆抗體，主要試劑以 工作液形式提供，可以減少試劑盒的操作步驟，為使用者節(jié)省時(shí)間并降低因操作步驟冗繁 造成的誤差，本發(fā)明具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、高精確度、高準(zhǔn)確度、對(duì)儀器設(shè)備要求低、試 劑保存時(shí)間長、自動(dòng)化程度高、無放射性同位素污染的等優(yōu)點(diǎn)，可在飼料及動(dòng)物源性產(chǎn)品檢 測(cè)中發(fā)揮重要作用。


附圖為甲苯胺紅檢測(cè)曲線，其中系列1是lyg/ml-l 20000組合，系列2是 0. 5 μ g/ml-1 10000 組合，系列 3 是 0. 25μ g/ml-1 5000 組合。。
4實(shí)施例提供下述實(shí)施例是為了更好地進(jìn)一步理解本發(fā)明，而決不對(duì)本發(fā)明的內(nèi)容和保護(hù) 范圍構(gòu)成任何限制。實(shí)施例1免疫原的合成及多克隆、單克隆抗體制備1. 1試劑與儀器甲苯胺紅(德國Dr)，琥珀酸酐(Sigma公司)，吡啶(Sigma公司)，EDC(上海共價(jià) 化學(xué)試劑公司)，牛血清白蛋白(BSA)、匙鑰孔血藍(lán)蛋白(KLH，Sigma公司)，辣根過氧化物 酶(HRP)(上?？笊锛夹g(shù)有限公司)，其它試劑均為分析純。雙光束紫外可見分光光度儀(TU-1909，北京普析通用儀器有限公司)，層析裝置 (3057型便攜式記錄儀，重慶川儀四廠；SBS系列數(shù)控計(jì)滴器，恒流泵，自動(dòng)部分收集器，層 析柱，上海滬西分析儀器廠)，磁力攪拌器(上海東榮豐科學(xué)儀器有限公司)，臺(tái)式離心機(jī) (Minispin 最大轉(zhuǎn)速 13400rpm 最大離心力 12100rcf, 2ml X 12)。1. 2甲苯胺紅人工抗原的合成1.2.1免疫原的合成稱取25毫克(0. Immol)甲苯胺紅溶于5ml吡啶中，充分?jǐn)嚢枋蛊渫耆芙?，加?10毫克琥珀酸酐，室溫?cái)嚢?4小時(shí)，N2吹干，以一定體積DMSO復(fù)溶稱取50毫克KLH，以0. lmol/L的PBS溶解，緩慢滴加DMSO充分?jǐn)嚢瑁蛊湔伎側(cè)?液的50%，將琥珀酸酐化的對(duì)位紅加入到KLH溶液中，以加入EDC 0. 2-0. 3M (約IOOmg)，攪 拌反應(yīng)過夜。然后，將偶聯(lián)物過S印hadeXG-25M凝膠層析純化，用0. OlM pH 7. 4PBS三倍柱床體 積平衡，調(diào)節(jié)流速至3ml/min，樣品濃縮至5ml加入到平衡好的層析柱中層析提純偶聯(lián)物， 洗脫液用 PH 7. 4 0. OlM PBS。提純后的免疫原分裝后_20°C凍存。1.2. 2包被抗原的合成稱取25毫克(0. Immol)的對(duì)位紅溶于5ml無水吡啶中，加入10毫克琥珀酸酐，室 溫下攪拌24小時(shí)，N2吹干，以一定體積DMSO復(fù)溶。稱取40毫克卵清蛋白(OVA)，以0. lmol/L的PBS溶解，緩慢滴加DMSO充分?jǐn)嚢?，?其占總?cè)芤旱?0%，將琥珀酸酐活化的甲苯胺紅加入到OVA溶液中，加入EDC 0. 2-0. 3M(約 100-150mg)，攪拌反應(yīng)過夜。然后，將偶聯(lián)物過S印hadeXG-25M凝膠層析純化，用0. OlM pH 7. 4PBS三倍柱床體 積平衡，調(diào)節(jié)流速至3ml/min，樣品濃縮至5ml加入到平衡好的層析柱中層析提純偶聯(lián)物， 洗脫液用 PH 7. 4 0. OlM PBS。提純后的包被抗原加等量甘油，分裝后_20°C保存。1. 3單克隆或多克隆抗體的制備將上述甲苯胺紅-KLH偶聯(lián)物用生理鹽水稀釋成lmg/ml溶液備用。選取5只BLBE/C小鼠，將偶聯(lián)物與等量弗氏完全佐劑通過注射器對(duì)抽法混合成油 包水的乳濁液，按IOOug/只的進(jìn)行首次免疫，采取背部皮下多點(diǎn)注射。每隔兩周加強(qiáng)免疫 一次，用弗氏不完全佐劑代替弗氏完全佐劑，劑量及方法同首次免疫。從第三次免疫開始， 每次免疫后10天，尾靜脈取血進(jìn)行抗體特異性檢測(cè)，抗體符合要求后準(zhǔn)備細(xì)胞融合，在細(xì)胞融合前3天加強(qiáng)免疫一次，然后取脾臟融合。然后按照單克隆細(xì)胞株的篩選培養(yǎng)程序進(jìn) 行陽性細(xì)胞株的制備。然后將符合要求的細(xì)胞株注入小鼠腹腔，制備單克隆抗體腹水。用同樣的免疫程序，免疫5只日本大耳白兔，制備多克隆的抗體。3免一周后采血 清測(cè)定抗體滴度和特異性，4免一周后取全血清。用硫酸銨沉淀法提純抗體，過S印hadeX-G25柱除去硫酸銨。所得抗體用于效價(jià)和 特異性測(cè)定。1. 4抗體效價(jià)和特異性測(cè)定1. 4. 1間接ELISA檢測(cè)抗體效價(jià)以10 μ g/ml的甲苯胺紅-OVA按每孔100 μ 1包被酶標(biāo)板，4°C包被24h，洗滌5次， 拍干，每孔加入200μ1 2%的牛血清白蛋白磷酸鹽緩沖液(封閉液)，4°C下封閉12h，洗滌 3次，拍干。加入不同稀釋倍數(shù)的抗體ΙΟΟμ 1，37°C孵育2h，洗滌三次，立即加入ΙΟΟμ 1酶 標(biāo)羊抗兔或羊抗鼠抗體，37°C孵育30min，洗滌三次，加50 μ 1顯色劑A液和50 μ 1顯色劑B 液，室溫避光作用15min，加50 μ 1終止液終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀檢測(cè)OD值(450nm)。同時(shí)設(shè)置 陰性對(duì)照孔和平行重復(fù)孔。抗體溶液以1000倍、2000倍、4000倍、8000倍、16000倍、32000 倍稀釋。以兩倍于陰性血清OD值的抗血清OD值對(duì)應(yīng)的抗體稀釋度為抗體效價(jià)。檢測(cè)結(jié)果 見表-1表-1抗體效價(jià)檢測(cè)結(jié)果(平均OD值) 據(jù)上表數(shù)據(jù)可以確定抗體效價(jià)為32000以上，滿足實(shí)驗(yàn)要求。1. 4. 2間接競爭ELISA檢測(cè)抗體特異性ELISA操作方法同1. 4. 1。每孔加入100 μ 1不同濃度的游離甲苯胺紅與包被物 競爭隨后加入抗體溶液，得出不同的OD值。根據(jù)1.4. 1的結(jié)果，所用抗體最佳濃度約為 1 5000。甲苯胺紅抑制濃度系列值和抗體的IC5tl值結(jié)果見表-2，(以0抑制孔的OD值 為最大值Btl，其它抑制濃度孔OD值為B，Β/Β0 = 50%時(shí)對(duì)應(yīng)的對(duì)位紅濃度為此抗體的IC5tl 值。)由表中數(shù)據(jù)可知，甲苯胺紅抗血清IC5tl值在9 μ g/L左右。表-2抗體特異性檢測(cè)結(jié)果(0D平均值) 實(shí)施例2間接競爭ELISA方法的建立2. 1 ELISA棋盤法確定包被抗原和抗體最佳工作濃度將 ΙΟΟμ g/ml、10 μ g/ml、1 μ g/ml、0· 5 μ g/ml、0· 25 μ g/ml >0. 125 μ g/ml 系列濃度的甲苯胺紅-OVA按每孔100 μ 1包被酶標(biāo)板，4°C包被24h，用洗液洗滌4次，在吸水紙上 拍干，每孔用200μ1封閉液4°C下封閉12h，洗滌3次，在吸水紙上拍干。加入1 1000， 1 2000,1 4000,1 6000,1 8000,1 10000 稀釋的抗體溶液 100 μ 1，室溫作用 lh， 洗滌4次，立即加入100 μ 1酶標(biāo)羊抗兔(或羊抗鼠)抗體，室溫作用30min，洗滌三次，加 50 μ 1顯色劑A液和50 μ 1顯色劑B液，室溫避光作用lOmin，每孔加入50 μ 1終止液終止 反應(yīng)，酶標(biāo)儀檢測(cè)A值(450nm)。同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照孔和平行重復(fù)孔，取OD值為1. 7左右 時(shí)對(duì)應(yīng)的包被抗原和抗體濃度組合做抑制曲線，選取最佳曲線的濃度組合。試驗(yàn)數(shù)據(jù)列于 表_3。 表-3
包被濃度 ug/mi 100 10 10.5 0.25 0.125 空白
抗體濃度_
1:1000 3.283 3.016 2.721 2.425 1.813 0.76 0.055
1:2000 3.06 3.052 2.563 2.137 1.517 0.51 0.056- 取包被濃度分別為lyg/mLO. 5μβ/πι1，0. 25μβ/πι1對(duì)應(yīng)的抗體稀釋度為 1 6000，1 4000，1 2000 做抑制曲線，抑制濃度分別為(^8/1、148/1、3 48/1、9口8/ L、27y g/L、81y g/L，得抑制曲線如附圖1。其中，系列1是1 μ g/ml-1 6000組合，系列2 是 0. 5yg/ml-l 4000 組合，系列 3 是 0. 25 μ g/ml-1 2000 組合。結(jié)果表明系列1，SP 1 μ g/ml—1 6000組合所得的曲線為最佳曲線。實(shí)施例3甲苯胺紅間接競爭酶聯(lián)免疫試劑盒的組建組建檢測(cè)甲苯胺紅的酶聯(lián)免疫試劑盒，使其包含下述組分(1)包被甲苯胺紅抗原的酶標(biāo)板；(2)抗甲苯胺紅單克隆或多克隆抗體工作液；(3)用辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔或羊抗鼠抗體；(4)甲苯胺紅標(biāo)準(zhǔn)品溶液6瓶，濃度分別為:0yg/LUyg/L,3yg/L,9yg/L, 27μ g/L、81y g/L ；(5)底物顯色液A液為過氧化脲或過氧化氫，底物顯色液B液為四甲基聯(lián)苯胺或鄰
苯二胺；(6)濃縮洗滌液為含0. 5 %吐溫20的10倍磷酸鹽緩沖液；(7)濃縮樣品稀釋液為0. 吐溫-20的10倍磷酸鹽緩沖液；(8)終止液為2mol/L的硫酸溶液。實(shí)施例4試劑盒精密度試驗(yàn)例為標(biāo)準(zhǔn)可重復(fù)性試驗(yàn)。具體操作為從每批實(shí)施例2或3中的方法制備的酶標(biāo)板中，各抽取10個(gè)孔，測(cè)定9 μ g/L的標(biāo) 準(zhǔn)溶液的吸光度值(OD)，重復(fù)3次，計(jì)算變異系數(shù)CV%。結(jié)果表明變異系數(shù)范圍在1. 5-7. 5%之間，說明本試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品精密度達(dá)到了要 求。實(shí)施例5試劑盒的回收率試驗(yàn)取兩個(gè)濃度的甲苯胺紅標(biāo)樣，對(duì)樣品進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，每個(gè)濃度做4個(gè)平行，分 別計(jì)算回收率。結(jié)果表明飼料中的添加回收率為60% -75%。實(shí)施例6試劑盒保存期試驗(yàn)試劑盒保存條件為2_8°C，經(jīng)過6個(gè)月的測(cè)定，試劑盒的最大吸光度值(零添加)、 50%抑制濃度、甲苯胺紅添加實(shí)際測(cè)定值均在正常范圍之內(nèi)?？紤]在運(yùn)輸和使用過程中，會(huì) 有非正常保存條件出現(xiàn)，將試劑盒在37°C保存條件下放置兩周，進(jìn)行加速老化實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表 明該試劑盒各項(xiàng)指標(biāo)完全符合要求?？紤]到試劑盒冷凍情況發(fā)生，將試劑盒放入_20°C冰箱 冷凍5天，測(cè)定結(jié)果表明試劑盒各項(xiàng)指標(biāo)完全正常。從以上結(jié)果可得出試劑盒可以在2-8°C 保存12個(gè)月以上。實(shí)施例7樣品中甲苯胺紅殘留的檢測(cè)1、樣品前處理準(zhǔn)確稱取5g辣椒醬樣品于40ml離心管中。加入20mlDMS0，充分振蕩10分鐘， 4000rpm 離心 lOmin，取上清 5ml。2、用試劑盒進(jìn)行檢測(cè)向甲苯胺紅-OVA偶聯(lián)物包被的酶標(biāo)板微孔中加系列標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液100 μ 1， 再加入抗體工作液50μ 1，室溫反應(yīng)1小時(shí)。倒出孔中液體，每孔加入250μ 1經(jīng)10倍稀釋了 的洗滌液，30秒后倒出孔中液體，如此重復(fù)操作共洗板4次，在吸水紙上拍干。每孔加入酶 標(biāo)記羊抗兔(或酶標(biāo)羊抗鼠)抗體ΙΟΟμ 1，避光室溫孵育30min。倒出孔中液體，每孔加入 250 μ 1經(jīng)10倍稀釋了的洗滌液，30秒后倒出孔中液體，如此重復(fù)操作共洗板4次，在吸水 紙上拍干。加入底物顯色液A液50 μ 1，B液50 μ 1，輕輕振蕩混勻，室溫避光顯色lOmin，每 孔加入終止液(2mol/L鹽酸)50μ1，輕輕振蕩混勻，用酶標(biāo)儀測(cè)定每孔吸光度值(OD值)。結(jié)果分析計(jì)算百分吸光度值并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，相對(duì)應(yīng)每一個(gè)樣品中甲苯胺紅的濃度可以從 標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出，也可以用回歸方程法計(jì)算出在樣本中甲苯胺紅的含量。利用專業(yè)電腦軟 件更便于大量的樣本的快速分析。根據(jù)酶標(biāo)板上的樣本顏色的深淺與系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液顏 色的比較，可以判斷出樣本中甲苯胺紅的濃度范圍。
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權(quán)利要求
一種檢測(cè)甲苯胺紅的酶聯(lián)免疫試劑盒，其中包括甲苯胺紅特異性抗體、甲苯胺紅 載體蛋白偶聯(lián)物和酶標(biāo)二抗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述試劑盒還包括包被有甲 苯胺紅抗原的酶標(biāo)板、甲苯胺紅標(biāo)準(zhǔn)溶液、底物顯色劑、洗滌液、終止液和濃縮樣品稀釋液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述甲苯胺紅特異性抗 體為單克隆抗體或多克隆抗體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述的載體蛋白為牛血 清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)或鑰孔銅蘭蛋白(KLH)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述的酶標(biāo)二抗的標(biāo)記 用酶為辣根過氧化物酶。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述的酶標(biāo)二抗為羊抗 兔IgG抗體或羊抗鼠IgG抗體。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述的洗滌液為含有 0. 05% -0. 5%吐溫-20磷酸鹽緩沖液。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述的底物顯色劑由顯色劑A 和顯色劑B組成，顯色劑A為過氧化氫或過氧化脲，顯色劑B為鄰苯二胺或四甲基聯(lián)苯胺。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述的濃縮樣品稀釋液為含 0. 吐溫-20的磷酸鹽緩沖液。
10.一種檢測(cè)樣品中甲苯胺紅含量的方法，包括步驟(1)樣品前處理；(2)用權(quán)利要求1-9任一所述的試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，向包被有甲苯胺紅抗原的酶標(biāo)板孔 中加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，再加入抗甲苯胺紅多克隆抗體或單克隆抗體工作溶液，孵育后 洗滌拍干，加入酶標(biāo)記二抗(羊抗兔或羊抗鼠)，孵育后洗滌拍干，顯色、終止，用酶標(biāo)儀測(cè) 定吸光度值；(3)分析檢測(cè)結(jié)果。全文摘要
本發(fā)明屬于生物檢測(cè)領(lǐng)域。本發(fā)明公開了一種檢測(cè)甲苯胺紅的酶聯(lián)免疫試劑盒。本發(fā)明所提供的甲苯胺紅的酶聯(lián)免疫試劑盒包括甲苯胺紅特異性單克隆或多克隆抗體、甲苯胺紅與載體蛋白的偶聯(lián)物、酶標(biāo)二抗。本發(fā)明的檢測(cè)甲苯胺紅酶聯(lián)免疫試劑盒靈敏、快速、準(zhǔn)確，主要用于大批樣品的篩查；盒中的主要試劑均以工作液的形式提供，使用方便，具有高特異性、高靈敏性、高精確性、高準(zhǔn)確性等特點(diǎn)，可快速檢測(cè)食品中殘留的對(duì)位紅。
文檔編號(hào)G01N33/543GK101915843SQ201010240040
公開日2010年12月15日 申請(qǐng)日期2010年7月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月29日
發(fā)明者于洪俠, 張妍, 張薇薇, 楊曙明, 程瑪麗, 邱靜, 陳剛, 陳愛亮 申請(qǐng)人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所