專利名稱：一種測(cè)定人血漿中洛伐他汀和羥基洛伐他汀酸的濃度的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種測(cè)定人血漿中洛伐他汀和羥基洛伐他汀酸的濃度的方法，特別涉及一種液相色譜-質(zhì)譜法(LC/MS/MS法)，用于測(cè)定含甲酸乙二胺四乙酸抗凝血漿(ETDA-K2 人血漿)中洛伐他汀和羥基洛伐他汀酸的濃度的方法。
背景技術(shù)：
目前測(cè)定血漿中洛伐他汀和洛伐他汀酸的方法主要有HPLC/GC/MS、HPLC/MS、 HPLC/MS/MS、RP-HPLC以及固相萃取法等等。HPLC/GC/MS和HPLC/MS法測(cè)定需要的血漿用量較大，而且最低檢測(cè)濃度高(一般為0. 36-2. 5 μ g/L)。HPLC/MS/MS法的預(yù)處理方法為離心后取上層液直接進(jìn)樣，血漿中的雜質(zhì)易保留在色譜柱上，引起柱壓升高，壽命縮短，最低檢測(cè)濃度亦較高，一般為0. 97 μ g/L。RP-HPLC法樣品處理復(fù)雜、測(cè)定速度慢，不能滿足實(shí)際檢測(cè)的需要。固萃取法步驟多，成本高，最低檢測(cè)濃度一般為0. 5 μ g/L，不利于大量樣品的測(cè)定。本法采用LC/MS/MS法測(cè)定含甲酸乙二胺四乙酸抗凝血漿(ETDA-K2人血漿)中洛伐他汀和羥基洛伐他汀酸濃度的方法尚未見文獻(xiàn)報(bào)道，本法具有血漿用量少、穩(wěn)定性好、最低檢測(cè)濃度小等優(yōu)點(diǎn)，且對(duì)于長(zhǎng)期儲(chǔ)存的樣品是穩(wěn)定的，因此可以用于大量血漿樣品的檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于公開一種測(cè)定ETDA-K2人血漿中洛伐他汀和羥基洛伐他汀酸的濃度的方法。本發(fā)明是通過(guò)如下方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明濃度測(cè)定方法包括如下步驟A.配備溶液(1)空白介質(zhì)的配制配制pH 4士0. 1的空白K2ETDA人血漿移取166.7yL 96%甲酸至50mL空白ETDA-K2 (乙二胺四乙酸二鉀)人血漿，并充分混合；(2)洗針液的配制甲醇水=50 50移取500mL水和500mL甲醇至容器中；充分混合，室溫存放；(3)0. 甲酸溶液(用甲醇配制)的配制移取100 μ L的甲酸和IOOml甲醇至試劑瓶中；充分混合，室溫存放；(4)流動(dòng)相A 0. 5%甲酸水溶液的配制移取IOOOmL水和5mL甲酸至試劑瓶中；充分混合，超聲5min，室溫存放；(5)流動(dòng)相B 0. 5%甲酸甲醇溶液的配制移取IOOOmL甲醇和5mL甲酸至試劑瓶中；充分混合，超聲5min，室溫存放；(6)0. 5%甲酸的甲醇/水(50 50)溶液的配制移取500mL甲醇，500mL水和5mL甲酸至試劑瓶，充分混合，超聲5min，室溫存放；
(7)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制洛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液精確稱取5mg洛伐他汀至5mL容量瓶中，用0. 1 %甲酸溶液溶解并稀釋至刻度，充分混合，即得濃度為lmg/ml的洛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-20°C儲(chǔ)存；羥基洛伐他汀酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液精確稱取5mg羥基洛伐他汀酸鈉至5mL容量瓶中， 用0. 甲酸溶液溶解并稀釋至刻度，充分混合，即得濃度為lmg/ml的羥基洛伐他汀酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-20°C儲(chǔ)存；標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1 移取0. ImL洛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和0. ImL羥基洛伐他汀酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至IOmL容量瓶中，用0. 甲酸甲醇溶液稀釋至刻度，即得濃度為10μ g/ml的洛伐他汀和10μ g/ml的羥基洛伐他汀酸的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，充分混合，得標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1，于-20°C 儲(chǔ)存；(8)標(biāo)準(zhǔn)曲線用標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制標(biāo)準(zhǔn)曲線用標(biāo)準(zhǔn)工作溶液用0. 甲酸甲醇溶液稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1配制，如表1 所示；充分混合并于-20°C儲(chǔ)存；表1標(biāo)準(zhǔn)曲線用標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制
權(quán)利要求
1. 一種測(cè)定人血漿中洛伐他汀和羥基洛伐他汀酸的濃度的方法，其特征在于該方法包括如下步驟 A.配備溶液(1)空白介質(zhì)的配制配制PH4士0. 1的空白K2ETDA人血漿移取166. 7μ L 96%甲酸至50mL空白K2ETDA(乙二胺四乙酸二鉀)人血漿，并充分混合；(2)洗針液的配制甲醇水=50 50移取500mL水和500mL甲醇至容器中；充分混合，室溫存放；(3)0.甲酸溶液(用甲醇配制)的配制移取100 μ L的甲酸和IOOml甲醇至試劑瓶中；充分混合，室溫存放；(4)流動(dòng)相A0. 5%甲酸水溶液的配制移取IOOOmL水和5mL甲酸至試劑瓶中；充分混合，超聲5min，室溫存放；(5)流動(dòng)相B0. 5%甲酸甲醇溶液的配制移取IOOOmL甲醇和5mL甲酸至試劑瓶中；充分混合，超聲5min，室溫存放；(6)0.5%甲酸的甲醇/水(50 50)溶液的配制移取500mL甲醇，500mL水和5mL甲酸至試劑瓶，充分混合，超聲5min，室溫存放；(7)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制洛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液精確稱取5mg洛伐他汀至5mL容量瓶中，用0. 1 %甲酸溶液溶解并稀釋至刻度，充分混合，即得濃度為lmg/ml的洛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于_20°C儲(chǔ)存；羥基洛伐他汀酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液精確稱取5mg羥基洛伐他汀酸鈉至5mL容量瓶中，用 0. 甲酸溶液溶解并稀釋至刻度，充分混合，即得濃度為lmg/ml的羥基洛伐他汀酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于_20°C儲(chǔ)存；標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1 移取0. ImL洛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和0. ImL羥基洛伐他汀酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至IOmL容量瓶中，用0. 甲酸甲醇溶液稀釋至刻度，即得濃度為10 μ g/ml的洛伐他汀和 10yg/ml的羥基洛伐他汀酸的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，充分混合，得標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1，于-20°C儲(chǔ)存；(8)標(biāo)準(zhǔn)曲線用標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制標(biāo)準(zhǔn)曲線用標(biāo)準(zhǔn)工作溶液用0. 甲酸甲醇溶液稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1配制，如表1所示；充分混合并于-20°C儲(chǔ)存；表1標(biāo)準(zhǔn)曲線用標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制
全文摘要
本發(fā)明公開了一種采用LC/MS/MS法測(cè)定K2ETDA人血漿(含甲酸)中洛伐他汀和羥基洛伐他汀酸的濃度的方法。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明本發(fā)明濃度測(cè)定方法適用于濃度在0.5-48ng/mL范圍內(nèi)的洛伐他汀和羥基洛伐他汀酸的測(cè)定。
文檔編號(hào)G01N30/72GK102384954SQ201010270529
公開日2012年3月21日 申請(qǐng)日期2010年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月1日
發(fā)明者段震文, 郭樹仁 申請(qǐng)人:北京北大維信生物科技有限公司