專利名稱：飼料中伏馬毒素的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種飼料中伏馬毒素的檢測方法，屬飼料加工業(yè)。
背景技術(shù)：
伏馬毒素主要是由串珠鐮刀菌在一定溫度和濕度條件下繁殖所產(chǎn)生的次級代謝 產(chǎn)物。直到1988年，南非和美國的研究人員才首次從霉變的玉米中分離出伏馬毒素。糧食 在加工、貯存、運輸過程中易受上述兩種真菌污染，特別是當溫度適宜時，更利于其生長繁 殖，從而產(chǎn)生出一類結(jié)構(gòu)性質(zhì)相似的毒素，其中含有伏馬毒素B1、B2和B3，60%以上為伏馬 毒素Bi，其毒性也最強。因此，伏馬毒素可以通過糧食加工、飼料生產(chǎn)等過程對畜牧業(yè)乃至 人類健康產(chǎn)生較嚴重的危害。伏馬毒素純品為白色針狀結(jié)晶，為一類相關(guān)的極性、水溶性代 謝產(chǎn)物，為多氫醇和丙三羧酸的雙酯化合物，對熱很穩(wěn)定，不易被蒸煮破壞，在多數(shù)糧食加 工處理過程均比較穩(wěn)定。

發(fā)明內(nèi)容
一、伏馬毒素對動物及人類的危害1.馬大腦白質(zhì)軟化癥這是一種馬的神經(jīng)失調(diào)疾病。根據(jù)南非研究人員的試驗結(jié)果，每天以0. 125mg/kg 體重的水平給馬進行皮下注射，大約7天后馬開始發(fā)瘋、發(fā)狂，沖撞欄桿而死。解剖發(fā)現(xiàn)馬 的大腦呈現(xiàn)白質(zhì)軟化癥狀。1989年，美國有很多州陸續(xù)發(fā)生豬肺水腫、胸積水以及馬大腦白 質(zhì)軟化癥等動物疾病的暴發(fā)和流行，并且這些疾病均集中發(fā)生在位于美國中西部地區(qū)玉米 種植帶上的各個州中，并且通過這些州輸出的玉米飼料又擴大了疾病流行的地區(qū)和延長了 流行時間，給當?shù)氐霓r(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)造成了巨大的損失。后經(jīng)美國科學(xué)家研究證明，這一切都 是因為當?shù)厣a(chǎn)的玉米被伏馬毒素污染所致。這種病在南非、阿根廷、巴西均有發(fā)現(xiàn)。2.豬肺水腫美國和南非的科學(xué)家研究表明，每天伏馬毒素的攝取量在O.^ig/kg體重以上均 可引發(fā)豬的肺水腫，還可造成豬生殖系統(tǒng)的紊亂，如早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎和發(fā)情周期異常等。這 種病在美國及其他國家都有發(fā)現(xiàn)，并且容易對當?shù)匦竽翗I(yè)造成較大的影響。3.小鼠肝癌南非科研人員對小鼠進行了伏馬毒素的毒理試驗，試驗結(jié)果表明，以50mg/kg體 重水平飼養(yǎng)小鼠，18 沈個月后，發(fā)現(xiàn)肝腫瘤患病率急劇上升，這是首次發(fā)現(xiàn)伏馬毒素引 發(fā)肝癌的證據(jù)。對大鼠進行了伏馬毒素毒理試驗，結(jié)果相同。4.人類食道癌南非科學(xué)家就對食道癌發(fā)病率高和低的地區(qū)進行過調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)食道癌高發(fā)地 區(qū)的主食玉米受伏馬毒素的污染情況比低發(fā)區(qū)嚴重，食道癌發(fā)病率與伏馬毒素污染呈正相 關(guān)，進一步的動物試驗也得到了相同的結(jié)果。中國學(xué)者和日本學(xué)者對食道癌高發(fā)區(qū)的河南 省林縣進行了一次調(diào)查，發(fā)現(xiàn)該地區(qū)主食玉米中伏馬毒素水平高達30 50mg/kg，發(fā)霉玉米中伏馬毒素最高值達118. %ig/kg。目前伏馬毒素引發(fā)食道癌的機理還不清楚，需進一步 確證和研究。二、伏馬毒素的發(fā)生情況伏馬毒素尤其是FBl對飼料污染的情況在世界范圍內(nèi)普遍存在，且對糧食作物的 污染情況較嚴重，其污染的飼料主要為以玉米為原料的飼料。玉米中伏馬毒素含量受許多 環(huán)境因素的影響，如收獲前和收獲期間的溫度、濕度、干旱情況和玉米中高水平的伏馬毒素 與前期干熱后期一段高濕天氣有關(guān)。玉米中伏馬毒素含量也受貯存條件的影響，如收獲的 玉米在貯存期間水分在18% 23%時，最適宜產(chǎn)伏馬毒素的串珠鐮刀菌的生產(chǎn)和繁殖，導(dǎo) 致玉米中伏馬毒素含量的增加。2001年美國食品與藥物管理局(FDA)發(fā)布了供人類食用的玉米和玉米產(chǎn)品伏馬 毒素最高限量指導(dǎo)性公告，規(guī)定人類食用玉米中伏馬毒素最高限量為ang/kg ；同時，F(xiàn)DA的 畜牧醫(yī)學(xué)中心(CVM)也發(fā)布了動物飼料中伏馬毒素的最高限量指導(dǎo)性公告，規(guī)定其限量范 圍為1 50mg/kg。
具體實施例方式伏馬毒素的檢測先后使用過薄層色譜法、氣相色譜法、酶聯(lián)免疫法(ELISA)、高效 液相色譜法(HPLC)等，目前研究和應(yīng)用得最多的是利用免疫親和柱凈化后的熒光儀檢測 法和HPLC法。免疫親和柱-熒光儀檢測法的原理為將飼料樣品與提取液混合、均勻、過濾，然 后將濾液通過鍵合有伏馬毒素特殊抗體的分離柱。此時，伏馬毒素鍵合在分離柱中的抗體 上。用蒸餾水將免疫親和柱上的雜質(zhì)除去。用淋洗液通過分離柱，將伏馬毒素從抗體上分離 下來。最后，將淋洗液注入熒光計進行測定。檢測范圍為0 10mg/kg，檢測限為0.25mg/ kg，檢測時間約為15分鐘，回收率大于80%，變異系數(shù)小于15%。免疫親和柱-HPLC法的 原理為經(jīng)甲醇_水G 1)提取，提取液通過免疫親和柱凈化，凈化液經(jīng)柱前衍生、色譜柱 分離、熒光檢測器檢測、外標法定量。對玉米原料的檢測回收率Bl為82. 3% 88.7%，B2 為74. 9% 81. 6%，變異系數(shù)Bl為4. 9% 6. 3%，B2為5. 8% 7. 2%，檢測限Bl可達 0. 020mg/kg, B2 可達 0. 040mg/kgo
權(quán)利要求
1.本發(fā)明是一種飼料中伏馬毒素的檢測方法。
2.將飼料樣品與提取液混合、均勻、過濾，然后將濾液通過鍵合有伏馬毒素特殊抗體的 分離柱。
全文摘要
本發(fā)明一種飼料中伏馬毒素的檢測方法，免疫親和柱-熒光儀檢測法的原理為將飼料樣品與提取液混合、均勻、過濾，然后將濾液通過鍵合有伏馬毒素特殊抗體的分離柱。用淋洗液通過分離柱，將伏馬毒素從抗體上分離下來。最后，將淋洗液注入熒光計進行測定。檢測范圍為0～10mg/kg，檢測限為0.25mg/kg，檢測時間約為15分鐘，回收率大于80％，變異系數(shù)小于15％。免疫親和柱-HPLC法的原理為經(jīng)甲醇-水(4∶1)提取，提取液通過FumoniTest免疫親和柱凈化，凈化液經(jīng)柱前衍生、Spherisorb C18色譜柱分離、熒光檢測器檢測、外標法定量。對玉米原料的檢測回收率B1為82.3％～88.7％，B2為74.9％～81.6％，變異系數(shù)B1為4.9％～6.3％，B2為5.8％～7.2％，檢測限B1可達0.020mg/kg，B2可達0.040mg/kg。
文檔編號G01N33/531GK102043044SQ201010286138
公開日2011年5月4日 申請日期2010年9月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月19日
發(fā)明者張福生 申請人:張福生