專利名稱：植物粉末樣品的預(yù)處理方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物組分的提取，尤其涉及一種植物粉末樣品的預(yù)處理方法。
背景技術(shù)：
在植物組分顯色法檢測(cè)過程中，例如果膠的檢測(cè)，由于色素會(huì)有一定吸光度，從而 對(duì)顯色法造成干擾，同時(shí)糖會(huì)與顯色劑反應(yīng)形成有色物質(zhì)，這也會(huì)對(duì)顯色法造成干擾，所以 在植物樣品預(yù)處理過程中，通常都需要進(jìn)行除糖、除色素處理。常用的樣品預(yù)處理方法是 將植物粉末樣品用濃度為80%的乙醇溶液加熱回流1小時(shí)，去除濾液，余下濾渣再做進(jìn)一 步的提取處理，用于其它檢測(cè)，此種方法一般稱為乙醇處理法，但這種乙醇處理法存在的問 題是只能除去小分子水溶性糖，同時(shí)對(duì)色素的提取也有一定局限性。而在濾渣處理時(shí)，有 時(shí)候需要用酸液提取，這就造成之前未被提取出來的多糖水解而被提取出來，而由于酸的 作用破壞了細(xì)胞壁，使之前未能溶解出來的色素也被提取出來，從而影響最終檢測(cè)結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，提供一種植物粉末樣品的 預(yù)處理方法，提高除糖、除色素效果。本發(fā)明提供的一種植物粉末樣品的預(yù)處理方法，包括如下步驟將植物粉末樣品 加入預(yù)處理提取液中，然后在水浴中加熱回流，去除濾液，保留濾渣，所述預(yù)處理提取液為 酸-醇溶液，所述酸-醇溶液的氫離子濃度為o. 005mol/L 0. 05mol/L,以體積百分比計(jì)， 所述酸_醇溶液的醇濃度為60 % 80 %。優(yōu)選地，所述酸_醇溶液中的酸為鹽酸或醋酸。優(yōu)選地，所述酸_醇溶液中的醇為乙醇、異丙醇、甲醇中的任一種。優(yōu)選地，所述氫離子濃度為0. 008mol/L 0. 03mol/L。優(yōu)選地，所述氫離子濃度為0. 01mol/L 0. 02mol/L。優(yōu)選地，所述在水浴中加熱回流的時(shí)間為lOmin 60min。優(yōu)選地，所述在水浴中加熱回流的時(shí)間為20min 40min。優(yōu)選地，以體積百分比計(jì)，所述酸-醇溶液的醇濃度為65% 75%。優(yōu)選地，所述水浴的溫度為80°C 100°C。優(yōu)選地，所述水浴的溫度為85°C 90°C。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明由于采用酸-醇溶液作為預(yù)處理提取液對(duì)植物粉末樣品 進(jìn)行預(yù)處理，因此，具有如下優(yōu)點(diǎn)1、由于含有醇，醇可以有效提取植物粉末樣品中的糖和色素，并可以沉淀待測(cè)組 分；2、由于含有酸，在酸性條件下，使植物粉末樣品中部分多糖水解成低分子糖，一并 被提取出來，避免多糖在其后酸解時(shí)水解釋放出來而干擾樣品的顯色檢測(cè)；通過酸化作用可以破壞植物粉末樣品的細(xì)胞壁，使包裹在里面的色素和糖類組分更容易被提取出來，從而大幅縮短除糖、除色素的時(shí)間，也有利于其后待測(cè)定組分的提取， 可減少其后的樣品待測(cè)組分萃取時(shí)間；此外，適當(dāng)濃度氫離子的存在，可以破壞植物組分表面的水化層和電荷，從而有利 于果膠、蛋白質(zhì)等大分子植物組分的沉淀，減小植物組分的溶解和水解造成的損失，提高后 續(xù)測(cè)定的準(zhǔn)確性。但酸性過強(qiáng)會(huì)使植物組分水解成為水溶性組分，本發(fā)明中的酸-醇溶液， 氫離子濃度在0. 005mol/L 0. 05mol/L之間，能夠有利于植物組分的沉淀，而又不會(huì)使植 物組分水解成為水溶性組分。3、較之現(xiàn)有技術(shù)_乙醇處理法只能除去小分子水溶性糖的局限，本發(fā)明的酸_醇 溶液處理法可以使植物中的多分子糖類水解并被提取出來，避免了在其后酸解浸提待測(cè)組 分時(shí)，多分子糖類水解被提取出來，從而對(duì)顯色檢測(cè)造成干擾，尤其在植物組分顯色檢測(cè) 中，糖類組分也可以與顯色劑發(fā)生反應(yīng)顯色，從而對(duì)檢測(cè)造成干擾；4、將除糖、除色素及酸化三個(gè)操作合并在一起，簡(jiǎn)化了預(yù)處理過程，減小了操作過 程引入誤差的機(jī)會(huì)，也大大節(jié)省了分析時(shí)間。


圖1是本發(fā)明植物粉末樣品的預(yù)處理方法的流程圖；圖2是酸-醇溶液對(duì)植物組分的提取量隨醇濃度的變化示意圖；圖3是本發(fā)明植物粉末樣品的預(yù)處理方法與現(xiàn)有技術(shù)處理方法的除色素效果對(duì) 比圖。
具體實(shí)施例方式參見圖1，本發(fā)明的基本構(gòu)思是，提供一種植物粉末的預(yù)處理方法，采用氫離子濃 度為0. 005mol/L 0. 05mol/L、醇濃度為60% 80%的酸-醇溶液作為預(yù)處理提取液對(duì) 植物粉末進(jìn)行預(yù)處理，將植物粉末樣品加入酸-醇溶液中，在水浴中加熱回流，而后去除濾 液，保留濾渣。下面通過具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明植物粉末的預(yù)處理方法進(jìn)一步描述。實(shí)施例一將植物粉末樣品加入預(yù)處理提取液中，然后在80°C的水浴中加熱回流lOmin，然 后過濾，去除濾液，保留濾渣待進(jìn)一步檢測(cè)用。其中，預(yù)處理提取液為鹽酸-乙醇溶液，其中，氫離子濃度為0. 02mol/L、以體積百 分比計(jì)，乙醇濃度為60%。實(shí)施例二將植物粉末樣品加入預(yù)處理提取液中，然后在85°C的水浴中加熱回流15min，然 后過濾，去除濾液，保留濾渣待進(jìn)一步檢測(cè)用。其中，預(yù)處理提取液為鹽酸-異丙醇溶液，其氫離子濃度O.Olmol/L，以體積百分 比計(jì)，異丙醇濃度為65%。實(shí)施例三將植物粉末樣品加入預(yù)處理提取液中，然后在90°C的水浴中加熱回流20min，然 后過濾，去除濾液，保留濾渣待進(jìn)一步檢測(cè)用。
其中，預(yù)處理提取液為鹽酸-甲醇溶液，其氫離子濃度為0. 03mol/L,以體積百分 比計(jì)，其甲醇濃度為70%。實(shí)施例四將植物粉末樣品加入預(yù)處理提取液中，然后在87°C的水浴中加熱回流15min，然 后過濾，去除濾液，保留濾渣。其中，預(yù)處理提取液為醋酸-異丙醇溶液，其氫離子濃度為0. 04mol/L,以體積百 分比計(jì)，其異丙醇濃度為80%。實(shí)施例五將植物粉末樣品加入預(yù)處理提取液中，然后在89°C的水浴中加熱回流20min，然 后過濾，去除濾液，保留濾渣。其中，預(yù)處理提取液為鹽酸-乙醇溶液，其氫離子濃度為0. 04mol/L,以體積百分 比計(jì)，其乙醇濃度為70%。實(shí)施例六將植物粉末樣品加入預(yù)處理提取液中，然后在88°C的水浴中加熱回流25min，然 后過濾，去除濾液，保留濾渣。其中，預(yù)處理提取液為醋酸-異丙醇，其氫離子濃度為0.05mol/L，以體積百分比 計(jì)，其異丙醇濃度為80%。實(shí)施例七將植物粉末樣品加入預(yù)處理提取液中，然后在89°C的水浴中加熱回流35min，然 后過濾，去除濾液，保留濾渣。其中，預(yù)處理提取液為鹽酸-甲醇溶液，其氫離子濃度0.035mol/L、以體積百分比 計(jì)，其甲醇濃度為75%。實(shí)施例八將植物粉末樣品加入預(yù)處理提取液中，然后在69°C的水浴中加熱回流35min，然 后過濾，去除濾液，保留濾渣。其中，預(yù)處理提取液為醋酸-甲醇溶液，其氫離子濃度為0. 03mol/L,以體積百分 比計(jì)，甲醇濃度為75%。以下通過具體的實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明植物粉末樣品的預(yù)處理方法的處理效果。1、酸-醇溶液中醇濃度(體積百分比)在60% 80%時(shí)，對(duì)植物組分的提取效率
最佳；以果膠為樣品，采用沉淀法對(duì)果膠樣品進(jìn)行試驗(yàn)，看不同濃度乙醇的回收率。試驗(yàn)方案準(zhǔn)確稱取2g果膠樣品，用不同濃度乙醇溶液250mL加熱提取lh后過 濾，氮吹干燥后看果膠的回收率。結(jié)果如圖2所示，當(dāng)乙醇濃度(體積百分比)達(dá)到60% 后，果膠的回收率增幅基本趨于緩和，合適的醇溶液濃度為60 % 90 %。由于糖提取的合 適醇溶液濃度是20% 80%，所以本發(fā)明技術(shù)方案選用的體積百分比為60% 80%醇溶 液，果膠的提取率最佳。2、酸-醇溶液中酸濃度對(duì)植物組分回收率的影響；以植物組分中的果膠為試驗(yàn)對(duì)象，采用乙醇濃度為80%的提取液——鹽酸-乙醇 溶液，看不同酸濃度的酸-醇溶液處理時(shí)，洗脫液中的是否含有果膠。
試驗(yàn)方案準(zhǔn)確稱取lg植物粉末樣品，用100mL酸濃度不同的鹽酸-乙醇溶液加 熱提取lh后，過濾液定容到250mL。采用酶解-離子色譜檢測(cè)濾液中是否含有半乳糖醛酸， 具體為取l.OmL上述溶液于lOOmL磨口三角瓶中，依次加入20mL乙酸/乙酸鈉緩沖溶 液(濃度為0. lmol/L, pH值為4. 0)和1. OmL的Aspergillus niger果膠酶溶液(濃度為 300u/mL)，在55°C水浴中振蕩1. Oh，酶解液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 1% 的苯甲酸溶液定容至刻度。該溶液經(jīng)過0. 45 y m濾膜后，用離子色譜通過保留時(shí)間比對(duì)，檢 測(cè)其中是否含有半乳糖醛酸及其含量高低。表1 不同氫離子濃度條件下酸_醇溶液中半乳糖醛酸檢測(cè)結(jié)果
氫離子濃度(mol/L)00. 0050. 010. 050. 10提取液檢測(cè)結(jié)果(％ )1. 380. 760. 600. 982. 45檢測(cè)結(jié)果(見表1)采用鹽酸濃度為0. 01mol/L的酸醇溶液處理時(shí)，離子色譜檢 測(cè)到的、處理液中所含半乳糖醛酸含量很低，表明該處理方法造成的果膠組分流失率低。而 采用單純的乙醇溶液(即表1中氫離子濃度為Omol/L)、或者酸醇溶液中的鹽酸濃度較高 (氫離子濃度為0. lmol/L)時(shí)，溶液中檢測(cè)到的半乳糖醛酸含量較高，反映出該除糖、除色 素方法造成的果膠組分流失率較高。氫離子的存在，可以破壞果膠、蛋白質(zhì)等組分的表面電荷，從而減少其親水性，降 低其在水中的溶解度，從而流失率減少。但是，當(dāng)酸的濃度不斷提高，將使原果膠、蛋白質(zhì) 等組分容易發(fā)生水解，變成小分子組分，從而在水中的溶解度提高，組分流失率變大。從 表1可以看出，本發(fā)明所用的預(yù)處理提取液-酸-醇溶液，其氫離子濃度為0. 005mol/L O.Olmol/L，果膠的流失率低。3、預(yù)處理提取液-酸-醇溶液的除糖效率；試驗(yàn)方案準(zhǔn)確稱取lg植物粉末樣品，用0. 01mol/L鹽酸-80% (體積百分比) 乙醇溶液加熱進(jìn)行預(yù)處理，采用不同加熱提取時(shí)間，用顯色法測(cè)定濾液中的總糖含量，看 酸_醇溶液的合適提取時(shí)間。表2:提取時(shí)間實(shí)驗(yàn)結(jié)果
lOmin20min40min60min樣品128. 07%28. 72%28. 89%28. 81%樣品224. 15%24. 58%24. 57%24. 55%由上表可以看到，采用酸-醇溶液提取總糖，只要20min時(shí)間就能達(dá)到理想的效 果。而現(xiàn)有技術(shù)則需長(zhǎng)達(dá)1小時(shí)、部分需要除糖率高的實(shí)驗(yàn)需要2小時(shí)才能實(shí)現(xiàn)。4、預(yù)處理提取液-酸-醇溶液的除色素效果；對(duì)照例準(zhǔn)確稱取lg植物粉末樣品，用現(xiàn)有技術(shù)的預(yù)處理提取液-100ml乙醇濃度
6為80% (體積百分比)的乙醇水溶液進(jìn)行預(yù)處理，水浴回流1小時(shí)，然后用濾紙過濾，將濾 紙和濾渣用2mol/L的鹽酸水解提取其中的果膠，得到的酸解液顏色渾濁、泛黃，這說明除 色素效果差，進(jìn)一步顯色法檢測(cè)時(shí)會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果?？蓞⒁妶D3中左邊容器，左邊容器中盛 放的是用現(xiàn)有技術(shù)-80%乙醇溶液除糖后濾渣的酸解液，顏色渾濁、泛黃。本發(fā)明的預(yù)處理方法準(zhǔn)確稱取lg植物粉末樣品，用100mL乙醇濃度為80%、鹽 酸濃度為0. 01mol/L的乙醇-鹽酸水溶液進(jìn)行預(yù)處理，水浴下回流20min，然后用濾紙過濾， 將濾紙和濾渣用2mol/L的鹽酸水解提取其中的果膠，得到的酸解液顏色透明、清澈，這說 明本發(fā)明除色素效果好，供進(jìn)一步顯色法檢測(cè)用時(shí)不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。可參見圖3中右邊 容器，該容器中盛放的是用本發(fā)明乙醇-鹽酸溶液除糖后濾渣的酸解液，顏色透明、清澈。由此可見，本發(fā)明采用酸-醇溶液作為預(yù)處理提取液的除色素效果明顯優(yōu)于現(xiàn)有 技術(shù)中單純的醇溶液。5、預(yù)處理提取液-酸-醇溶液的除糖效果；對(duì)照例準(zhǔn)確稱取lg植物粉末樣品，用現(xiàn)有技術(shù)的預(yù)處理提取液-100mL80% (體 積百分比)的乙醇水溶液進(jìn)行預(yù)處理，水浴回流1小時(shí)；本發(fā)明的酸-醇溶液處理法準(zhǔn)確稱取lg植物粉末樣品，用100mL乙醇濃度(體 積百分比)為80%、鹽酸濃度為0. 01mol/L的乙醇-鹽酸水溶液進(jìn)行預(yù)處理，水浴下回流 20min。濾液用連續(xù)流動(dòng)法測(cè)定其總糖含量，測(cè)定結(jié)果見表3。表3、除糖效果對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
一種植物粉末樣品的預(yù)處理方法，包括如下步驟將植物粉末樣品加入預(yù)處理提取液中，然后在水浴中加熱回流，去除濾液，保留濾渣，其特征在于，所述預(yù)處理提取液為酸 醇溶液，所述酸 醇溶液的氫離子濃度為0.005mol/L～0.05mol/L，以體積百分比計(jì)，所述酸 醇溶液的醇濃度為60％～80％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物粉末樣品的預(yù)處理方法，其特征在于，所述酸-醇溶液中 的酸為鹽酸或醋酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物粉末樣品的預(yù)處理方法，其特征在于，所述酸-醇溶液中 的醇為乙醇、異丙醇、甲醇中的任一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物粉末樣品的預(yù)處理方法，其特征在于，所述氫離子濃度 為 0. 008mol/L 0. 03mol/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物粉末樣品的預(yù)處理方法，其特征在于，所述氫離子濃度 為 0. 01mol/L 0. 02mol/Lo
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物粉末樣品的預(yù)處理方法，其特征在于，所述在水浴中加 熱回流的時(shí)間為lOmin 60min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物粉末樣品的預(yù)處理方法，其特征在于，所述在水浴中加 熱回流的時(shí)間為20min 40min。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物粉末樣品的預(yù)處理方法，其特征在于，以體積百分比計(jì)， 所述酸_醇溶液的醇濃度為65% 75%。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物粉末樣品的預(yù)處理方法，其特征在于，所述水浴的溫度 為 80°C 100°C。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物粉末樣品的預(yù)處理方法，其特征在于，所述水浴的溫度 為 85°C 90°C。
全文摘要
本發(fā)明公開一種植物粉末樣品的預(yù)處理方法，包括如下步驟將植物粉末樣品加入預(yù)處理提取液中，然后在水浴中加熱回流，去除濾液，保留濾渣，所述預(yù)處理提取液為酸-醇溶液，所述酸-醇溶液的氫離子濃度為0.005mol/L～0.05mol/L，以體積百分比計(jì)，所述酸-醇溶液的醇濃度為60％～80％。本發(fā)明采用酸-醇溶液對(duì)植物粉末樣品進(jìn)行預(yù)處理的方法，除糖、除色素效果更加理想，所需要的時(shí)間也更短、效率更高，而且不會(huì)加大預(yù)處理過程中植物粉末樣品中組分的流失率。同時(shí)，由于酸化液加熱處理，可破壞細(xì)胞壁，不僅提高了除糖、除色素的效率，也有利于其后待測(cè)定組分的提取，可減少其后的樣品待測(cè)組分萃取時(shí)間。
文檔編號(hào)G01N1/34GK101975690SQ201010507469
公開日2011年2月16日 申請(qǐng)日期2010年10月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月15日
發(fā)明者孔浩輝, 程志穎, 金保鋒, 黃翼飛 申請(qǐng)人:廣東中煙工業(yè)有限責(zé)任公司