專利名稱：地黃葉總苷指紋圖譜測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種圖譜測定方法，特別是涉及一種地黃葉總苷指紋圖譜測定法。
背景技術(shù)：
地黃葉總苷是從地黃葉中提取出的用于治療慢性腎小球腎炎的藥物，地黃葉總苷 中50%以上的主要有效成分為acteoside (毛蕊花糖苷)、cisacteoside、isoacteoside、 hydroxyacteoside、methoxyacteoside、jionosideAl、jionosideBl 等多禾中苯乙酉享苷類。其 中主要成分毛蕊花糖苷占地黃葉總苷的25%以上。而在現(xiàn)有技術(shù)中，對含量測定僅以毛蕊 花糖苷這一單一成份做對照測定以衡量地黃葉總苷的含量，不能完全反映其藥效作用成分 的真實情況，影響其藥物的臨床療效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的，是建立地黃葉總苷指紋圖譜的測定方法，通過此測定方法可控制 地黃葉總苷的質(zhì)量。采用色譜指紋圖譜質(zhì)量控制方式以分析為手段，從中獲取反映中藥 內(nèi)在質(zhì)量的信息，通過對指紋特征的分析比較，評價中藥內(nèi)在質(zhì)量的真實性、一致性和穩(wěn)定 性。本發(fā)明的技術(shù)方案
一種地黃葉總苷指紋圖譜的測定方法，該測定方法如下
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；甲醇冰乙酸水 =30 36 0. 5 1. 5 :62 70為流動相，流速lml/min，檢測波長330nm，柱溫，理論板 數(shù)按麥角留苷峰計算，應(yīng)不低于8500 ；
對照品溶液的制備取毛蕊花糖苷對照品8mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇冰 醋酸水=30 36 0. 5 1. 5 :62 70混合溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每Iml含 麥角甾苷0. 16mg；
供試品溶液的制備取本品細粉60mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加入甲醇冰醋酸 水=30 36 0. 5 1. 5 :62 70混合溶液45ml，超聲處理20分鐘，放冷，加上述混合溶劑 稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1ml，置IOml量瓶中，用上述混合溶 劑劑稀釋至刻度，搖勻，即得；
分別取對照品與供試品溶液各20ul，注入高效液相色譜儀，確定出供試品色譜中麥角 甾苷保留時間tK，用保留時間tK-A分別乘以0. 379,0. 597、1. 366，得到三個不同的保留時間 tK-H、tK-M、tK-J，在供試品色譜中，應(yīng)同時在這三個保留時間上出現(xiàn)三個色譜峰；其出峰時 間誤差應(yīng)小于士 15%。更具體的測定方法是
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；甲醇冰乙酸水=33 1 66為流動相，流速lml/min，檢測波長330nm，柱溫35°C，理論板數(shù)按麥角甾苷峰計算，應(yīng) 不低于8500 ；
3對照品溶液的制備取毛蕊花糖苷對照品8mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇冰 醋酸水=33 1 66混合溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每Iml含麥角留苷0. 16mg ；
供試品溶液的制備取本品細粉60mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加入甲醇冰醋酸 水=33 1 66混合溶液45ml，超聲處理20分鐘，放冷，加上述混合溶劑稀釋至刻度，搖勻， 濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1ml，置IOml量瓶中，用上述混合溶劑劑稀釋至刻度，搖 勻，即得；
分別取對照品與供試品溶液各20ul，注入高效液相色譜儀，確定出供試品色譜中麥角 甾苷保留時間tK，用保留時間tK-A分別乘以0. 379,0. 597、1. 366，得到三個不同的保留時間 tK-H、tK-M、tK-J，在供試品色譜中，應(yīng)同時在這三個保留時間上出現(xiàn)三個色譜峰；其出峰時 間誤差應(yīng)小于士 15%。本發(fā)明的有益效果
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明不僅能從液相色譜的整體特征上把握地黃葉總苷的質(zhì)量情 況，而且通過保留時間和指紋峰特性，能夠更好的表征地黃葉總苷的成分特異性。采用本發(fā) 明方法構(gòu)建的地黃葉總苷高效液相色譜指紋圖譜，可用于地黃葉總苷的產(chǎn)品質(zhì)量檢測與評 價。地黃葉總苷的HPLC指紋圖譜作為控制其質(zhì)量的手段，既避免了以單一化學成分為對比 參照來判定其質(zhì)量的片面性，又減少了為保證質(zhì)量合格而人為處理的可能性。本發(fā)明為完 整準確評價地黃葉總苷的質(zhì)量提供了有效的方法，從而使其進一步的產(chǎn)品質(zhì)量及療效得到 了保證。
具體實施例方式實施例1
本地黃葉總苷指紋圖譜的測定方法
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；甲醇冰乙酸水 =30 0. 5 62為流動相，流速lml/min，檢測波長330nm，柱溫35°C，理論板數(shù)按麥角甾苷峰 計算，應(yīng)不低于8500。對照品溶液的制備取毛蕊花糖苷對照品8mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲 醇冰醋酸水=30 0. 5 62混合溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每Iml含麥角甾苷 0. 16mg0供試品溶液的制備取本品細粉60mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加入甲醇冰醋 酸水=30 0. 5 62混合溶液45ml，超聲處理20分鐘，放冷，加上述混合溶劑稀釋至刻度， 搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1ml，置IOml量瓶中，用上述混合溶劑劑稀釋至刻 度，搖勻，即得。分別取對照品與供試品溶液各20ul，注入高效液相色譜儀，確定出供試品色譜中 麥角甾苷保留時間tK，用保留時間tK-A分別乘以0. 379,0. 597、1.366，得到三個不同的保留 時間tK-H、tK-M、tK-J。在供試品色譜中，應(yīng)同時在這三個保留時間上出現(xiàn)三個色譜峰；其出 峰時間誤差應(yīng)小于士 15%。實施例2:
本地黃葉總苷指紋圖譜的測定方法
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；甲醇冰乙酸水=33 1 66為流動相，流速lml/min，檢測波長330nm，柱溫35 °C，理論板數(shù)按麥角甾苷峰計 算，應(yīng)不低于8500。對照品溶液的制備取毛蕊花糖苷對照品8mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加 甲醇冰醋酸水=33 1 66混合溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每Iml含麥角甾苷 0. 16mg0供試品溶液的制備取本品細粉60mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加入甲醇冰 醋酸水=33 1 66混合溶液45ml，超聲處理20分鐘，放冷，加上述混合溶劑稀釋至刻度， 搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1ml，置IOml量瓶中，用上述混合溶劑劑稀釋至刻 度，搖勻，即得。分別取對照品與供試品溶液各20ul，注入高效液相色譜儀，確定出供試品色譜中 麥角甾苷保留時間tK，用保留時間tK-A分別乘以0. 379,0. 597、1.366，得到三個不同的保留 時間tK-H、tK-M、tK-J。在供試品色譜中，應(yīng)同時在這三個保留時間上出現(xiàn)三個色譜峰；其出 峰時間誤差應(yīng)小于士 15%。實施例3:
本地黃葉總苷指紋圖譜的測定方法
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；甲醇冰乙酸水 =36 1. 5 70為流動相，流速lml/min，檢測波長330nm，柱溫35°C，理論板數(shù)按麥角甾苷峰 計算，應(yīng)不低于8500。對照品溶液的制備取毛蕊花糖苷對照品8mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲 醇冰醋酸水=36 1. 5 70混合溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每Iml含麥角甾苷 0. 16mg0供試品溶液的制備取本品細粉60mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加入甲醇冰醋 酸水=36 1. 5 70混合溶液45ml，超聲處理20分鐘，放冷，加上述混合溶劑稀釋至刻度， 搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1ml，置IOml量瓶中，用上述混合溶劑劑稀釋至刻 度，搖勻，即得。分別取對照品與供試品溶液各20ul，注入高效液相色譜儀，確定出供試品色譜中 麥角甾苷保留時間tK，用保留時間tK-A分別乘以0. 379,0. 597、1.366，得到三個不同的保留 時間tK-H、tK-M、tK-J。在供試品色譜中，應(yīng)同時在這三個保留時間上出現(xiàn)三個色譜峰；其出 峰時間誤差應(yīng)小于士 15%。
權(quán)利要求
1.一種地黃葉總苷指紋圖譜的測定方法，其特征在于，該測定方法是色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；甲醇冰乙酸水 =30 36 0. 5 1. 5 :62 70為流動相，流速lml/min，檢測波長330nm，柱溫，理論板 數(shù)按麥角留苷峰計算，應(yīng)不低于8500 ；對照品溶液的制備取毛蕊花糖苷對照品8mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇冰 醋酸水=30 36 0. 5 1. 5 :62 70混合溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每Iml含 麥角甾苷0. 16mg；供試品溶液的制備取本品細粉60mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加入甲醇冰醋酸 水=30 36 0. 5 1. 5 :62 70混合溶液45ml，超聲處理20分鐘，放冷，加上述混合溶劑 稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1ml，置IOml量瓶中，用上述混合溶 劑劑稀釋至刻度，搖勻，即得；分別取對照品與供試品溶液各20ul，注入高效液相色譜儀，確定出供試品色譜中麥角 甾苷保留時間tK，用保留時間tK-A分別乘以0. 379,0. 597、1. 366，得到三個不同的保留時間 tK-H、tK-M、tK-J，在供試品色譜中，應(yīng)同時在這三個保留時間上出現(xiàn)三個色譜峰；其出峰時 間誤差應(yīng)小于士 15%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的地黃葉總苷指紋圖譜的測定方法，其特征在于更具體的測定 方法是 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；甲醇冰乙酸水=33 1 66為流動相，流速lml/min，檢測波長330nm，柱溫35°C，理論板數(shù)按麥角甾苷峰計算，應(yīng) 不低于8500 ；對照品溶液的制備取毛蕊花糖苷對照品8mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇冰 醋酸水=33 1 66混合溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每Iml含麥角留苷0. 16mg ；供試品溶液的制備取本品細粉60mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加入甲醇冰醋酸 水=33 1 66混合溶液45ml，超聲處理20分鐘，放冷，加上述混合溶劑稀釋至刻度，搖勻， 濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1ml，置IOml量瓶中，用上述混合溶劑劑稀釋至刻度，搖 勻，即得；分別取對照品與供試品溶液各20ul，注入高效液相色譜儀，確定出供試品色譜中麥角 甾苷保留時間tK，用保留時間tK-A分別乘以0. 379,0. 597、1. 366，得到三個不同的保留時間 tK-H、tK-M、tK-J，在供試品色譜中，應(yīng)同時在這三個保留時間上出現(xiàn)三個色譜峰；其出峰時 間誤差應(yīng)小于士 15%。
全文摘要
一種地黃葉總苷指紋圖譜的測定方法，該方法不僅能從液相色譜的整體特征上把握地黃葉總苷的質(zhì)量情況，而且通過保留時間和指紋峰特性，能夠更好的表征地黃葉總苷的成分特異性。采用本發(fā)明方法構(gòu)建的地黃葉總苷高效液相色譜指紋圖譜，可用于地黃葉總苷的產(chǎn)品質(zhì)量檢測與評價。該方法地黃葉總苷的HPLC指紋圖譜作為控制其質(zhì)量的手段，既避免了以單一化學成分為對比參照來判定其質(zhì)量的片面性，又減少了為保證質(zhì)量合格而人為處理的可能性。本測定方法為完整準確評價地黃葉總苷的質(zhì)量提供了有效的技術(shù)手段，從而進一步地使其產(chǎn)品質(zhì)量及療效得到了保證。
文檔編號G01N30/02GK102072941SQ20101055137
公開日2011年5月25日 申請日期2010年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月19日
發(fā)明者張孝齊, 楊建 , 邊寶林 申請人:四川美大康藥業(yè)股份有限公司