專利名稱：一種測定小分子抗氧化劑對羥基自由基清除率的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及環(huán)境領域中過氧化氫的檢測分析。在技術上涉及材料學、光分析化學等領域。
背景技術：
機體代謝過程中活性氧物種(ROS)不斷通過非酶促反應和酶促反應產(chǎn)生，在正常生理情況下，ROS的生成與清除處于動態(tài)平衡，可維持有利無害的極低水平。由于內(nèi)源性或外源性刺激使機體代謝異常而產(chǎn)生大量R0S，或機體抗氧化劑不足，則使機體處于氧化應急狀態(tài)，導致細胞和組織損傷，引起各種疾病。羥基自由基(·0Η)是目前所知活性氧中對生物體毒性最強、危害最大的一種自由基。羥基自由基參與的各種反應已成為生物學、生物化學和生物醫(yī)學等領域中的重要研究課題。動物體在生命活動過程中，伴隨著活性氧自由基的生成與存在，生物體在進化過程中也逐漸形成了“抗活性氧的防御系統(tǒng)”。動物體內(nèi)自由基清除劑是抗自由基防御系統(tǒng)清除自由基作用的物質(zhì)基礎，它在體內(nèi)組織和細胞中的含量決定著抗自由基系統(tǒng)的清除自由基能力。人體內(nèi)的水溶性小分子抗氧化劑包括抗壞血酸、谷胱甘肽、尿酸、色氨酸和半胱氨酸等。除抗壞血酸主要通過食物攝入外，其它幾種都是體內(nèi)的代謝產(chǎn)物。準確檢測體內(nèi)各種抗氧化劑對羥基自由基的清除能力，對相關疾病的診斷和藥物的開發(fā)具有重要的意義。目前，離體檢測這些小分子抗氧化劑對羥基自由基清除率的方法主要有電子共振自旋捕集法、化學發(fā)光法、高效液相色譜法、氣相色譜法、熒光法等。電子自旋共振法和色譜法操作復雜，需要先采用特殊的捕捉試劑對產(chǎn)生的羥基自由基進行捕捉，且這兩種方法儀器昂貴；化學發(fā)光法雖然操作簡便，測定快速，但其儀器普及不廣。分光光度法因具有儀器簡單廉價、操作方便、分析速度快、靈敏度較高的特點，在自由基清除率的測定中發(fā)揮了極大的作用。而以苯胺單體的聚合反應為媒介，通過分光光度法間接測定羥基自由基清除率的方法尚未見報道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種以苯胺的聚合反應為媒介，通過分光光度法測定小分子抗氧化劑對羥基自由基的清除率的方法。本發(fā)明的原理是通常在酸性條件下合成的聚苯胺都是酸摻雜的，呈墨綠色，不溶于水及大部分有機溶劑。在聚合底液中加入表面活性劑SDS,當SDS濃度大于CMC時，形成具有疏水核和親水界面的膠束，膠束通過靜電作用與疏水作用使苯胺分子有序排列在其表面，起模板功能， 使聚苯胺形成無分支、線性頭尾耦合的結(jié)構(gòu)；同時，SDS膠束為聚苯胺的直線摻雜提供了陰離子，使聚苯胺具有良好的水溶性。酸性條件下，亞鐵離子與過氧化氫構(gòu)成!^enton體系，產(chǎn)生強氧化性的羥基自由基，使苯胺迅速發(fā)生聚合反應。當過氧化氫濃度增加時，體系中的羥基自由基量增加，導致聚苯胺的產(chǎn)量增加，產(chǎn)物的顏色變深，從而其吸光度相應增加。當在體系中加入具有還原性的抗氧化劑時，抗氧化劑清除羥基自由基，抑制苯胺的聚合，導致產(chǎn)物的吸光度下降。通過對比加入抗氧化劑前后吸光度的差值，通過計算可求出羥基自由基的清除率。羥基自由基
清除率的計算公式為
權利要求
1. 一種以苯胺聚合顯色反應為媒介，測定小分子抗氧化劑對羥基自由基清除率的測定方法。其特征在于測定過程包括以下步驟(1)無抗氧化劑存在時聚苯胺的合成及吸光度的測量用吸量管依次準確移取一定量的HCl溶液、SDS溶液、苯胺溶液、FeSO4溶液、H2O2溶液于25mL容量瓶中，用去離子水定容，搖勻。將搖勻后的溶液轉(zhuǎn)入已調(diào)至一定溫度的數(shù)顯恒溫水浴鍋中，恒溫反應一定時間，即得到深綠色聚苯胺溶液。反應結(jié)束后，以去離子水為參比，用Icm比色皿，用紫外可見分光光度計測量產(chǎn)物的吸收光譜(見附
圖1)，獲得最大吸收波長為720nm。在最大吸收波長下，測量產(chǎn)物的吸光度A。。(2)加入抗氧化劑時聚苯胺的合成及吸光度的測量用吸量管依次準確移取一定量的HCl溶液、SDS溶液、苯胺溶液、FeSO4溶液、抗氧化劑標準溶液、H2O2溶液于25mL容量瓶中，用去離子水定容，搖勻。將搖勻后的溶液轉(zhuǎn)入已調(diào)至一定溫度的數(shù)顯恒溫水浴鍋中，恒溫反應一定時間，即得到深綠色聚苯胺溶液。反應結(jié)束后，以去離子水為參比，以720nm為分析波長，測量產(chǎn)物的吸光度Ap(3)羥基自由基清除率的計算按照公式
全文摘要
本發(fā)明涉及一種以苯胺聚合反應為媒介，測定小分子抗氧化劑對羥基自由基清除率的方法。在酸性介質(zhì)中，將苯胺溶液與十二烷基硫酸鈉溶液混合，再加入亞鐵離子和過氧化氫構(gòu)成Fenton體系，苯胺可被Fenton反應產(chǎn)生的羥基自由基氧化，在表面活性劑的摻雜下，形成可溶性的聚苯胺溶液，該溶液于720nm處有最大吸收。當在體系中加入具有還原性的抗氧化劑時，抗氧化劑清除羥基自由基，抑制苯胺的聚合，導致產(chǎn)物的吸光度下降。通過對比加入抗氧化劑前后吸光度的差值，通過計算可求出羥基自由基的清除率。方法所需儀器簡單，操作簡便，實驗成本低，靈敏度高，適宜測定小分子抗氧化劑對羥基自由基的清除率。
文檔編號G01N21/27GK102539344SQ20101058164
公開日2012年7月4日 申請日期2010年12月10日 優(yōu)先權日2010年12月10日
發(fā)明者劉瑛, 朱逸雯, 江子卿 申請人:江南大學