專利名稱：一種三聚氰胺快速檢測試紙的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及快速檢測三聚氰胺的器具，特別是涉及一種能快速檢測三聚氰胺 的試紙條和試紙卡。
背景技術(shù)：
2007年，在美國發(fā)生了多起狗、貓等寵物因食用含三聚氰胺的食品而發(fā)生中毒死 亡的“毒糧”事件，2008年9月份，我國爆發(fā)了性質(zhì)惡劣、危害嚴(yán)重的因食用含三聚氰胺奶粉 導(dǎo)致嬰幼兒腎結(jié)石甚至腎衰竭的“毒奶粉”事件。三聚氰胺引發(fā)的食品安全問題受到了國 內(nèi)外的極大關(guān)注。三聚氰胺(Melamine，MEL)又名蜜胺，氰尿三酰胺，是一種重要的氮雜環(huán)有機(jī)化工 原料，主要用來與甲醛縮合聚合制備三聚氰胺樹脂，可用于塑料及涂料工業(yè)，也可作紡織物 防褶、防縮處理劑。MEL因其分子中含有大量氮元素，以常用的凱氏定氮法測定產(chǎn)品中的蛋 白質(zhì)含量時(shí)，不能區(qū)分這種偽蛋白，因而一些不良廠家將MEL添加到飼料和食品中，以提高 產(chǎn)品中蛋白質(zhì)的檢測數(shù)值，降低產(chǎn)品成本，牟取暴利。目前，國內(nèi)外測定飼料和食品中MEL的方法，主要是采用理化分析方法，包括高 效液相色譜法(Highperformanceliquidchromatography，HPLC)、液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用分 析法(Liquidchromatography/PBSsspectrometry, LC/MS)、氣相色譜 / 質(zhì)譜聯(lián)用分析法 (Gaschromatograph/PBSsspectrometry, GC/MS)、電位滴定法、濁度法、重量法、苦味酸法和 升華法等。這些檢測方法，待檢樣品需經(jīng)一系列復(fù)雜的處理凈化，從樣品處理到得出檢測結(jié) 果需要2天以上時(shí)間，繁瑣費(fèi)時(shí)；同時(shí)這些檢測方法需要大型專門儀器設(shè)備和專業(yè)技術(shù)人 員操作，無法進(jìn)行現(xiàn)場檢測，難以推廣。由于這些方法的局限性和嚴(yán)重的滯后性，使監(jiān)控三 聚氰胺的非法使用變得異常困難，無法保證食品安全監(jiān)控的有效性。
發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型要解決的技術(shù)問題提供一種特異強(qiáng)、靈敏度高，能快速、簡便地檢測 三聚氰胺試紙條和試紙卡。一種三聚氰胺快速檢測試紙條，包括襯板、包被膜、樣品墊、金標(biāo)結(jié)合墊、吸水墊和 玻璃纖維膜，試紙條兩端設(shè)有保護(hù)層，包被膜設(shè)置在襯板上，樣品墊和吸水墊設(shè)置在襯板兩 端，金標(biāo)結(jié)合墊設(shè)置在包被膜的一側(cè)，所述金標(biāo)結(jié)合墊為吸附三聚氰胺金標(biāo)抗體的玻璃纖 維棉，所述包被膜上設(shè)有用三聚氰胺偶聯(lián)載體蛋白溶液印制的隱形檢測印跡，包被膜上設(shè) 有用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG溶液印制的隱形對(duì)照印跡，所述玻璃纖維膜 遮蓋包被膜或遮蓋試紙條進(jìn)行保護(hù)。所述襯板為硬質(zhì)塑膠條或不吸水的硬紙條；所述樣品墊為玻璃纖維棉、尼龍膜、聚 偏二氟乙烯膜或聚酯膜；所述吸水墊為吸水濾紙或?yàn)V油紙；所述包被膜為硝酸纖維素膜、 純纖維素膜或羧化纖維素膜。所述三聚氰胺金標(biāo)抗體為膠體金標(biāo)記的三聚氰胺單克隆抗體或多克隆抗體，所述三聚氰胺偶聯(lián)載體蛋白為牛血清白蛋白、雞卵清白蛋白或人血清白蛋白。所述保護(hù)層為保護(hù)膜，該保護(hù)膜覆蓋在樣品墊、金標(biāo)結(jié)合墊和吸水墊上，保護(hù)膜上 印制有樣品標(biāo)記線，該標(biāo)記線偏向樣品墊一側(cè)約0. 5cm處。所述隱形檢測印跡和隱形對(duì)照印跡排列方式為“ ι ι ”，或者為“+”，或者為“ · · ”。一種三聚氰胺快速檢測試紙卡，含有殼體和位于殼體內(nèi)的試紙芯，試紙芯包括襯 板以及襯板上依次固定銜接的樣品墊、金標(biāo)結(jié)合墊、包被膜和吸水墊和玻璃纖維膜，所述金 標(biāo)結(jié)合墊為吸附三聚氰胺金標(biāo)抗體的玻璃纖維棉，所述包被膜上設(shè)有用三聚氰胺偶聯(lián)載體 蛋白溶液印制的隱形檢測印跡，包被膜上還設(shè)有用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或羊抗兔 IgG溶液印制的隱形對(duì)照印跡，所述玻璃纖維膜遮蓋包被膜或遮蓋試紙芯進(jìn)行保護(hù)。所述三聚氰胺金標(biāo)抗體為膠體金標(biāo)記的三聚氰胺單克隆抗體或多克隆抗體，三聚 氰胺偶聯(lián)載體蛋白為牛血清白蛋白、雞卵清白蛋白或人血清白蛋白。所述襯板為硬質(zhì)塑膠條或不吸水的硬紙條；所述樣品墊為玻璃纖維棉、尼龍膜、聚 偏二氟乙烯膜或聚酯膜；所述吸水墊為吸水濾紙或?yàn)V油紙；所述包被膜為硝酸纖維素膜、 純纖維素膜或羧化纖維素膜。所述殼體由底座和面蓋構(gòu)成，底座和面蓋通過嵌合連在一起，底座上設(shè)有放置試 紙芯的凹槽，面蓋上設(shè)有觀察窗、加樣孔，觀察窗與試紙芯的包被膜相對(duì)應(yīng)，加樣孔與試紙 芯的樣品墊相對(duì)應(yīng)。所述隱形檢測印跡和隱形對(duì)照印跡排列方式為“ I I ”，或者為“ + ”，或者為“ · · ”。本實(shí)用新型的檢測試紙條和試紙卡具有下列優(yōu)點(diǎn)①特異性強(qiáng)，敏感性高。該膠體金層析檢測試紙條和試紙卡以膠體金標(biāo)記高親 和力的單克隆抗體為基礎(chǔ)制備而成，金標(biāo)抗體中金顆粒與抗體分子之間無共價(jià)鍵形成，二 者通過異性電荷間的范德華力相結(jié)合，膠體金標(biāo)記對(duì)單克隆抗體的特異性和親和力影響很 小，且具有較高的標(biāo)記率。因此，試紙條和試紙卡具有較強(qiáng)的特異性和較高的敏感性，檢出 MEL最低限量可達(dá)到IOppb。②簡便、快速、時(shí)效性強(qiáng)。使用膠體金層析檢測試紙條和試紙卡，無需任何其它試 劑和儀器，可現(xiàn)場操作，試紙條(卡)加入被檢樣品液后，在10分鐘內(nèi)即可判定檢測結(jié)果。③結(jié)果顯示形象、直觀、準(zhǔn)確。檢測試紙條和試紙卡均以顯示棕紅色線“ I ”和“ 11，， 作為檢測結(jié)果陽性和陰性標(biāo)記，即在包被膜上顯示一條棕紅色線“ I ”時(shí)，表示在被檢樣品中 含有三聚氰胺，顯示兩條棕紅色線“I I”時(shí)，表示在被檢樣品中不含三聚氰胺。結(jié)果判定形 象、直觀、準(zhǔn)確，簡單明了，不易出現(xiàn)假陽性和假陰性等人為誤判。④節(jié)省費(fèi)用，適用范圍廣，便于推廣。使用檢測試紙條和試紙卡，比用儀器分析和 進(jìn)口 ELISA試劑盒的費(fèi)用大幅下降。另外，試紙條和試紙卡的適用范圍廣，可滿足不同層次 人員需要，包括實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)、口岸檢驗(yàn)、集貿(mào)市場衛(wèi)生監(jiān)督、加工企業(yè)和養(yǎng)殖場戶等，便于推 廣應(yīng)用，具有廣闊的市場前景和明顯的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)效益。

圖1、三聚氰胺快速檢測試紙條俯視結(jié)構(gòu)示意圖。圖2、三聚氰胺快速檢測試紙條剖面結(jié)構(gòu)示意圖。圖3、三聚氰胺快速檢測試紙卡俯視結(jié)構(gòu)示意圖。[0024]圖4、三聚氰胺快速檢測試紙卡剖面結(jié)構(gòu)示意圖。圖5、三聚氰胺快速檢測試紙卡附加玻璃纖維膜示意圖。圖中1 襯板，2 樣品墊，3 金標(biāo)結(jié)合墊，4 包被膜，5 檢測線，6 對(duì)照線，7 吸水墊， 8-1 樣品浸入端保護(hù)膜，8-2 手柄端保護(hù)膜，9 標(biāo)識(shí)線，10 加樣孔，11 觀察窗，12 面板， 13 試紙芯固定槽，14 底座，15 面板凹槽，16 玻璃纖維膜，17 檢測液，18 濾血膜，19 透 明玻璃紙，20 質(zhì)控線
具體實(shí)施方式
要制成快速檢測三聚氰胺試紙條(卡)，首先要制備偶聯(lián)三聚氰胺載體蛋白和三 聚氰胺金標(biāo)抗體，從而制備檢測線和金標(biāo)抗體纖維。其次需制備羊抗或兔抗小鼠IgG(或羊 抗兔IgG)抗體，用于制備對(duì)照線。(1)三聚氰胺與載體蛋白偶聯(lián)采用戊二醛法，將三聚氰胺與載體蛋白進(jìn)行偶聯(lián)制備人工結(jié)合抗原。戊二醛法反應(yīng)偶聯(lián)，取2mgMEL溶于lmLlmol/LPBS溶液中，加入30 μ L戊二醛，常 溫下攪拌反應(yīng)lh。然后加入含IOmgBSA或OVA或KLH的PBS溶液，RT攪拌反應(yīng)過夜。反應(yīng)液 用葡聚糖凝膠S印hadexG-25過柱純化，制得人工結(jié)合抗原BSA-MEL或OVA-MEL或HSA-MEL， 凍干，-20°C保存?zhèn)溆谩?2)抗三聚氰胺單克隆抗體或多克隆抗體的制備單抗制備以50 μ g 100 μ g/只的三聚氰胺載體蛋白偶聯(lián)物免疫6 8周齡 Balb/C小鼠3 4次，每次免疫間隔時(shí)間3 5周，確定抗體效價(jià)符合要求后超強(qiáng)免疫，之 后3 4天，將免疫小鼠眶下竇采血，分離陽性血清；脫頸致死，用75%酒精浸泡小鼠5 IOmin消毒體表，無菌取其脾臟，將脾臟剪碎并研磨，經(jīng)120目尼龍紗布過濾，IOOOrpm離心 lOmin，收集脾細(xì)胞。將1X108的脾細(xì)胞與NSO骨髓瘤細(xì)胞按10 1的比例混合，IOOOrpm 離心IOmin棄上清，細(xì)胞沉淀物于37°C水浴中緩緩加入0. 7 1. OmL的50% PEG4000作 用lmin，然后緩緩加入無血清1640培養(yǎng)基15mL，以終止PEG的作用，37°C水浴5 lOmin， IOOOrpm離心IOmin棄上清，將細(xì)胞沉淀物重懸于HAT選擇培養(yǎng)基中，并加入96孔細(xì)胞培 養(yǎng)板孔(IOOyL 200yL/孔)，置于37°C、5% C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)10 14天，用間 接ELISA法進(jìn)行陽性孔篩選，選擇強(qiáng)陽性、抑制率高、細(xì)胞生長旺盛的孔進(jìn)行3次有限稀釋 克隆化，而后擴(kuò)大培養(yǎng)，建立雜交瘤細(xì)胞株。所制備的雜交瘤細(xì)胞分泌的單克隆抗體可特異 地與三聚氰胺反應(yīng)，親和力常數(shù)達(dá)到109 1010，輕鏈亞型為κ或λ，重鏈亞型為IgGl、 IgG2a、IgG2b、IgG3，針對(duì)三聚氰胺特異抗原決定簇的單克隆抗體，用于制備金標(biāo)抗體玻璃 纖維棉。多抗制備用三聚氰胺載體蛋白偶聯(lián)物免疫新西蘭白兔，免疫劑量為200yg 500 μ g/次，背部皮下分4 6點(diǎn)注射。首免，用無菌PBS溶解三聚氰胺載體蛋白偶聯(lián)物，與 等量FCA混合，充分乳化；加強(qiáng)免疫，用無菌PBS溶解三聚氰胺載體蛋白偶聯(lián)物，與等量FIA 混合，充分乳化，首免后2 3周進(jìn)行，連續(xù)免疫4 5次，每次間隔2 3周，最后一次免疫 后10 15天，以ELISA法測定其效價(jià)達(dá)到105以上時(shí)，采血并分離收集高免血清。以飽和 硫酸銨鹽析法提取IgG抗體，即取1份高免血清加2份PBS (pH7. 2)混勻，加等體積飽和硫酸銨溶液混勻，置4°C冰箱12h，4°C、2500rpm離心15min，棄上清，再以適量PBS (pH7. 2)溶 解沉淀，加飽和硫酸銨溶液至終濃度33%，置4°C冰箱2h，4°C、2500rpm離心15min，棄上清， 以適量PBS (pH7. 2)溶解沉淀，置4°C冰箱內(nèi)用PBS (pH7. 2)透析48 72h，中間換液數(shù)次， 40C、12000rpm離心15min，收集上清，得純化的抗三聚氰胺多克隆抗體，_20°C凍存，用于制 備金標(biāo)抗體玻璃纖維棉。(3)三聚氰胺金標(biāo)抗體和金標(biāo)抗體玻璃纖維棉的制備采用檸檬酸鈉還原法制備膠體金溶液，即在沸騰的200ML0. 01 0. 02%氯金酸溶 液中加入新鮮配制的檸檬酸鈉8mL，獲得直徑約15nm的膠體金溶液，用0. lmol/LK2C03 調(diào)PH值至8. 5 9. 5，置2 8°C保存?zhèn)溆?。? 2000的標(biāo)記比將待標(biāo)記的三聚氰胺單 克隆抗體或多克隆抗體加入PH8. 5 9. 5的金溶膠中，標(biāo)記IOmin后，加入20 %的PEG10000 至終濃度為0. 05%,40C>1500 3000rpm離心20min，除去未結(jié)合的膠體金顆粒，4°C、 15000rpm離心lh，棄上清，獲初步純化的金標(biāo)抗體蛋白混合物，再用丙烯葡聚糖S-400柱層 析進(jìn)行分離純化，獲得三聚氰胺膠體金標(biāo)記抗體。將1 100 1 500稀釋的膠體金標(biāo) 記抗體吸附于精制玻璃纖維棉中，4°C低溫真空干燥，制備三聚氰胺金標(biāo)抗體玻璃纖維棉。(4)羊抗或兔抗小鼠IgG抗體的制備羊抗或兔抗小鼠IgG(或羊抗兔IgG)抗體的制備以飽和硫酸銨提取三聚氰胺陰性 小鼠血清IgG (或陰性兔血清IgG)，即取1份小鼠血清(或兔血清)加2份PBS (pH7. 2)混 勻，加等體積飽和硫酸銨溶液混勻，置4°C冰箱12h，4°C、2500rpm離心15min，棄上清，再以 適量PBS (pH7. 2)溶解沉淀，加飽和硫酸銨溶液至終濃度33%，置4°C冰箱2h，4°C、2500rpm 離心15min，棄上清，以適量PBS(pH7. 2)溶解沉淀，置4°C冰箱內(nèi)用PBS (pH7. 2)透析48h， 中間換液3次，40C、12000rpm離心15min，收集上清，以紫外分光光度計(jì)測定其蛋白濃度，以 50 μ g 100 μ g/kg體重的小鼠血清(或兔血清)IgG經(jīng)皮下和肌肉注射健康山羊或家兔 3 4次，末次注射10天后，以ELISA測定其血清效價(jià)達(dá)到1 2000以上時(shí)，心臟或動(dòng)脈采 血，分離收集高免血清，以飽和硫酸銨提取羊抗或兔抗小鼠IgG (或羊抗兔IgG)抗體(方法 與提取小鼠血清IgG相同，不再重述)，用于三聚氰胺快速檢測試紙條對(duì)照線的制備。(5)三聚氰胺快速檢測試紙反應(yīng)原理當(dāng)三聚氰胺快速檢測試紙測試端加入待測樣品溶液后，待測溶液通過虹吸作用帶 動(dòng)待測三聚氰胺及金標(biāo)抗體玻璃纖維棉中的金標(biāo)抗體一起向包被膜擴(kuò)散，并最終滲入手柄 端吸水墊。在擴(kuò)散過程中，待測三聚氰胺可與金標(biāo)抗體相結(jié)合，進(jìn)而封閉金標(biāo)抗體上三聚氰 胺的抗原結(jié)合點(diǎn)，阻止金標(biāo)抗體與纖維素膜上偶聯(lián)三聚氰胺載體蛋白的檢測線結(jié)合，不顯 示檢測線，而羊或兔抗小鼠IgG(或羊抗兔IgG)抗體則可與金標(biāo)抗體結(jié)合，形成棕紅色對(duì)照 線“ I ”，即顯示一條棕紅色線“ I ”為陽性表示。反之樣品溶液中無三聚氰胺則不能阻止金標(biāo) 抗體與纖維素膜上偶聯(lián)三聚氰胺載體蛋白的檢測線結(jié)合，顯示棕紅色檢測線“ I ”，同樣羊抗 或兔抗小鼠IgG (或羊抗兔IgG)抗體也與金標(biāo)抗體結(jié)合，顯示棕紅色對(duì)照線“ I ”，形成兩條 棕紅色線“I I”為陰性表示。如果纖維素膜上沒有棕紅色線顯示，則表明試紙條已失效。實(shí)施例一 MEL快速檢測試紙條，參見圖1和圖2。圖中襯板1用硬質(zhì)塑膠條制成； 樣品墊2用玻璃纖維棉制成；金標(biāo)結(jié)合墊3采用具體實(shí)施方式
“5”中所述的方法制備，采用 有膠體金標(biāo)記的抗MEL單克隆抗體玻璃纖維棉；包被膜4采用硝酸纖維素膜；隱形檢測線 5用MEL-載體蛋白偶聯(lián)物在包被膜4上印制，載體蛋白為牛血清白蛋白BSA ；隱形對(duì)照線6用兔抗小鼠IgG抗體溶液在包被膜4上印制，兩條線平行排列組合為“| |”;手柄端的吸水 墊7用吸水濾紙制成。將樣品墊2、金標(biāo)結(jié)合墊3、包被膜4、手柄端的吸水墊7從右至左依 次粘貼固定在塑膠條1上，彼此之間交界處纖維互相搭接。樣品端白色保護(hù)膜8-1覆蓋在 樣品墊2和金標(biāo)結(jié)合墊3上，黃色保護(hù)膜8-2覆蓋在手柄端吸水墊7上，測試樣品標(biāo)示線9 位于樣品墊2與金標(biāo)結(jié)合墊3交界處，即位于對(duì)應(yīng)的白色保護(hù)膜8-1上且偏向樣品墊2 — 側(cè)約0. 5cm處，在標(biāo)示線9右側(cè)保護(hù)膜上印有箭頭及MAX字樣，以方便使用。檢測樣品制備①飼料樣將樣品磨細(xì)，以生理鹽水進(jìn)行1 2 1 5稀釋，靜置沉淀后取上清液， 用于檢測分析。②奶樣取奶樣2ml在15°C條件下3000r/min離心5min，除去上層脂肪，取下層液 用生理鹽水作1 2 1 5稀釋，靜置沉淀或5000r/min離心5min，取上清液，用于檢測 分析。檢測方法將MEL檢測試紙條樣品端插入待測樣品液中，插入深度不超過標(biāo)記線， 約10 20秒鐘取出檢測試紙條，水平放置，10分鐘內(nèi)觀察檢測結(jié)果。結(jié)果判定①陽性如果在包被膜上顯示有一條棕紅色線“ I ”，表示檢測結(jié)果為陽 性，說明在待測樣品中含有MEL ；②陰性如果在包被膜上顯示有兩條棕紅色線“ I I ”，表示檢 測結(jié)果為陰性，說明在待測樣品中不含MEL;③失效如果在包被膜上沒有棕紅色線顯示，則 表明試紙條已失效。實(shí)施例二 檢測試紙條結(jié)構(gòu)和實(shí)施例一基本相同，不同之處在于以抗MEL多克隆 抗體替代抗MEL單克隆抗體，制備MEL金標(biāo)抗體和金標(biāo)結(jié)合墊；偶聯(lián)MEL的載體蛋白為雞卯 清白蛋白0VA，用羊抗兔IgG替代兔抗小鼠IgG抗體溶液在包被膜上制備對(duì)照印跡。隱形檢 測印跡和隱形對(duì)照印跡排列為“ + ”，或者隱形檢測印跡和隱形對(duì)照印跡排列為“ · · ”。其它包括檢測樣品、操作方法和結(jié)果判定等均同實(shí)施例一，不再重述。實(shí)施例三檢測試紙條結(jié)構(gòu)和實(shí)施例一基本相同，不同之處在于圖中襯板1用硬 質(zhì)塑膠條制成；樣品墊2用尼龍膜制成；包被膜4采用純硝酸纖維素膜；MEL載體蛋白為雞 卵清白蛋白；隱形對(duì)照線6用羊抗小鼠IgG抗體溶液在包被膜上印制。其它包括檢測樣品、操作方法和結(jié)果判定等均同實(shí)施例一，不再重述。實(shí)施例四檢測試紙條結(jié)構(gòu)和實(shí)施例一基本相同，不同之處在于圖中襯板1用不 吸水的硬紙條制成；樣品墊2用聚偏二氟乙烯膜制成；包被膜4采用純硝酸纖維素膜；MEL 載體蛋白為人血清白蛋白；隱形對(duì)照線6用羊抗小鼠IgG抗體溶液在包被膜上印制。其它包括檢測樣品、操作方法和結(jié)果判定等均同實(shí)施例一，不再重述。實(shí)施例五檢測試紙條結(jié)構(gòu)和實(shí)施例一基本相同，不同之處在于圖中襯板1用不 吸水的硬紙條制成；樣品墊2用聚酯膜制成；以抗MEL多克隆抗體替代抗MEL單克隆抗體， 制備MEL金標(biāo)抗體和金標(biāo)結(jié)合墊；包被膜4采用羧化纖維素膜；MEL載體蛋白為人血清白蛋 白；隱形對(duì)照線6用羊抗兔IgG抗體溶液在包被膜上印制。其它包括檢測樣品、操作方法和結(jié)果判定等均同實(shí)施例一，不再重述。實(shí)施例六MEL快速檢測試紙卡，參見圖3、圖4。圖中襯板1、樣品墊2、金標(biāo)結(jié)合 墊3、包被膜4、隱形檢測線5、隱形對(duì)照線6和吸水墊7，其制備方法與實(shí)施例一相同，共同 組成試紙芯；試紙卡殼體材料為塑料，殼體底座14上設(shè)有固定試紙芯的固定槽13 ；面板12上的加樣孔10與試紙芯的樣品墊2相對(duì)應(yīng)，加樣孔10是滴加待檢樣品的位置；面板12上 設(shè)有和底座相結(jié)合的凹槽15，在面板12上的觀察窗11與試紙芯的包被膜4相對(duì)應(yīng)，是觀察 判定結(jié)果的窗口，其旁邊印有T和C，分別與包被膜4上的隱形檢測線5和隱形對(duì)照線6相 對(duì)應(yīng)。檢測樣品及檢測樣品制備和實(shí)施例一相同。檢測時(shí)，將試紙卡平放，從加樣孔滴加待測樣品液，10分鐘內(nèi)從觀察窗判定檢測結(jié)果ο結(jié)果判定如在包被膜4上對(duì)應(yīng)T的位置顯示有一條棕紅色線“ I ”時(shí)，表示檢測結(jié) 果為陽性，說明在待測樣品中含有MEL ；如在包被膜4上對(duì)應(yīng)T、C的位置顯示有兩條棕紅色 線“ I I，，時(shí)，表示檢測結(jié)果為陰性，說明待測樣品不含MEL ；如在包被膜4上沒有棕紅色線顯 示，則表明試紙條已失效。實(shí)施例七檢測試紙卡結(jié)構(gòu)和實(shí)施例六基本相同，不同之處在于以抗MEL多克隆 抗體替代MEL單克隆抗體，制備MEL金標(biāo)抗體和金標(biāo)結(jié)合墊；偶聯(lián)MEL的載體蛋白為雞卵清 白蛋白0VA，用羊抗兔IgG替代兔抗小鼠IgG抗體溶液在包被膜上制備對(duì)照線“ I ”。另外，本實(shí)用新型試紙卡的試紙芯中襯板1、樣品墊2、金標(biāo)結(jié)合墊3、包被膜4、隱 形檢測線5、隱形對(duì)照線6和吸水墊7，可為實(shí)施例一 五的任意一種，試紙卡殼體除塑料 外，還可用不吸水的木質(zhì)或金屬等材料制作，以及與本實(shí)用新型構(gòu)思相同的其他類似變換 均屬于本實(shí)用新型的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求一種三聚氰胺快速檢測試紙條，其特征在于，包括襯板、包被膜、樣品墊、金標(biāo)結(jié)合墊、吸水墊和玻璃纖維膜，試紙條兩端設(shè)有保護(hù)層，包被膜設(shè)置在襯板上，樣品墊和吸水墊設(shè)置在襯板兩端，金標(biāo)結(jié)合墊設(shè)置在包被膜的一側(cè)，所述金標(biāo)結(jié)合墊為吸附三聚氰胺金標(biāo)抗體的玻璃纖維棉，所述包被膜上設(shè)有用三聚氰胺偶聯(lián)載體蛋白溶液印制的隱形檢測印跡，包被膜上設(shè)有用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG溶液印制的隱形對(duì)照印跡，所述玻璃纖維膜遮蓋包被膜或遮蓋試紙條進(jìn)行保護(hù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是所述襯板為硬質(zhì)塑膠條或不吸水的硬紙 條；所述樣品墊為玻璃纖維棉、尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜；所述吸水墊為吸水濾紙 或?yàn)V油紙；所述包被膜為硝酸纖維素膜、純纖維素膜或羧化纖維素膜。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是所述三聚氰胺金標(biāo)抗體為膠體金標(biāo)記的 三聚氰胺單克隆抗體或多克隆抗體，所述三聚氰胺偶聯(lián)載體蛋白為牛血清白蛋白、雞卵清 白蛋白或人血清白蛋白。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是所述保護(hù)層為保護(hù)膜，該保護(hù)膜覆蓋在 樣品墊、金標(biāo)結(jié)合墊和吸水墊上，保護(hù)膜上印制有樣品標(biāo)記線，該標(biāo)記線偏向樣品墊一側(cè)約 0. 5cm 處。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的試紙條，其特征是所述隱形檢測印跡和隱形對(duì)照 印跡排列方式為“ 11 ”，或者為“+”，或者為“ · · ”。
6.一種三聚氰胺快速檢測試紙卡，其特征在于，含有殼體和位于殼體內(nèi)的試紙芯，試紙 芯包括襯板以及襯板上依次固定銜接的樣品墊、金標(biāo)結(jié)合墊、包被膜和吸水墊和玻璃纖維 膜，所述金標(biāo)結(jié)合墊為吸附三聚氰胺金標(biāo)抗體的玻璃纖維棉，所述包被膜上設(shè)有用三聚氰 胺偶聯(lián)載體蛋白溶液印制的隱形檢測印跡，包被膜上還設(shè)有用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG 或羊抗兔IgG溶液印制的隱形對(duì)照印跡，所述玻璃纖維膜遮蓋包被膜或遮蓋試紙芯進(jìn)行保 護(hù)。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試紙卡，其特征是所述三聚氰胺金標(biāo)抗體為膠體金標(biāo)記的 三聚氰胺單克隆抗體或多克隆抗體，所述三聚氰胺偶聯(lián)載體蛋白為牛血清白蛋白、雞卵清 白蛋白或人血清白蛋白。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試紙卡，其特征是所述襯板為硬質(zhì)塑膠條或不吸水的硬紙 條；所述樣品墊為玻璃纖維棉、尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜；所述吸水墊為吸水濾紙 或?yàn)V油紙；所述包被膜為硝酸纖維素膜、純纖維素膜或羧化纖維素膜。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試紙卡，其特征是所述殼體由底座和面蓋構(gòu)成，底座和面蓋 通過嵌合連在一起，底座上設(shè)有放置試紙芯的凹槽，面蓋上設(shè)有觀察窗、加樣孔，觀察窗與 試紙芯的包被膜相對(duì)應(yīng)，加樣孔與試紙芯的樣品墊相對(duì)應(yīng)。
10.根據(jù)權(quán)利要求6-9任一項(xiàng)所述的試紙卡，其特征是所述隱形檢測印跡和隱形對(duì)照 印跡排列方式為“ 11 ”，或者為“+”，或者為“ · · ”。
專利摘要本實(shí)用新型公開一種三聚氰胺快速檢測試紙，包括試紙條和試紙卡。試紙條含有襯板、樣品墊、金標(biāo)結(jié)合墊、纖維素膜、吸水墊，試紙條兩端粘貼有保護(hù)膜，金標(biāo)結(jié)合墊為吸附三聚氰胺金標(biāo)抗體的玻璃纖維棉，在纖維素膜上有用三聚氰胺-載體蛋白偶聯(lián)物印制的隱形檢測印跡，用羊抗或兔抗小鼠IgG、或羊抗兔IgG印制的隱形對(duì)照印跡。將不帶保護(hù)膜的試紙芯放在特制的殼體中即得到試紙卡，殼體面板上設(shè)有加樣孔和觀察窗。本實(shí)用新型的試紙條和試紙卡可現(xiàn)場操作，無需任何其它試劑和儀器，試紙條上加入被檢樣品液后，在10分鐘內(nèi)即可判定檢測結(jié)果，并且特異性強(qiáng)、靈敏度高，使用簡便、快速、直觀、準(zhǔn)確，適用范圍廣、成本較低，易推廣應(yīng)用。
文檔編號(hào)G01N33/577GK201654042SQ20102010743
公開日2010年11月24日 申請(qǐng)日期2010年1月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月29日
發(fā)明者高海崗 申請(qǐng)人:蘇州艾瑞德生物科技有限公司