專利名稱：檢測寵物過敏的免疫膠體金層析檢測試紙條的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型涉及一種檢測寵物過敏的免疫膠體金層析檢測試紙條，該檢測試紙條 主要是針對貓毛、狗毛過敏的免疫膠體金層析檢測，適用于家庭自檢。
背景技術(shù)：
過敏性疾病是現(xiàn)代社會中最常見的一種疾病，是機體受抗原物質(zhì)(也稱變應(yīng)原或 過敏原)刺激后，引起的組織損傷或生理功能紊亂。而寵物皮屑(如貓毛、狗毛)是重要的 過敏原之一。當(dāng)機體再受同類過敏原刺激時，過敏原使人體內(nèi)IgE分子交聯(lián)，引起嗜堿性 粒細胞和肥大細胞脫顆粒釋放組胺、白三烯、細胞因子等生物活性物質(zhì)，使機體產(chǎn)生過敏反 應(yīng)、導(dǎo)致機體毛細血管擴張、水腫、平滑肌痙攣、內(nèi)分泌亢進等過敏癥狀。根據(jù)美國寵物產(chǎn)品制造商協(xié)會APPMA的統(tǒng)計，近三分之二的美國家庭擁有至少一 只寵物。中國大約有7000到8000千萬寵物愛好者，這是國家統(tǒng)計局2007年的一個統(tǒng)計數(shù) 據(jù)，并不包括農(nóng)村和無法統(tǒng)計的養(yǎng)寵物人數(shù).比例估計是1 5。因此，在養(yǎng)寵物之前，進行 寵物過敏的檢測是非常有意義的，早診斷，早預(yù)防。對于寵物過敏目前無特別的治療方法，嚴格避免接觸寵物是最有效的方法。常用 的檢測過敏原方法有體內(nèi)過敏原點刺試驗、體外檢測特異性IgE抗體。體內(nèi)檢測假陽性高 并受藥物的影響，現(xiàn)行的體外檢測如酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試驗步驟多、時間長。而免 疫膠體金層析技術(shù)是20世紀80年代發(fā)展起來的快速免疫分析方法。其原理是以條狀纖維 層析材料為固相，借助毛細作用使樣品溶液在層析條上泳動，同時使樣品中的待測物與層 析材料上的受體(金標抗體)發(fā)生高特異性、高親和性的免疫反應(yīng)，層析過程中免疫復(fù)合物 被富集或截留在層析材料的檢測帶上，膠體金聚集形成明顯條帶，5-lOmin內(nèi)便可得到直觀 的結(jié)果。省去了繁瑣的加樣、洗滌、孵育等步驟。因而這種分析技術(shù)操作簡單快速，分析結(jié) 果清楚，易于判斷，無需儀器設(shè)備，成本低廉，適用于家庭自檢。目前市場上還沒有出現(xiàn)檢測 寵物過敏的免疫膠體金層析檢測試紙條。
發(fā)明內(nèi)容本實用新型的目的是提供一種使用方便、快速檢測人血清或鼻分泌物中的檢測寵 物過敏的免疫膠體金層析檢測試紙條。本實用新型為解決上述提出的問題所采用解決方案為檢測寵物過敏的免疫膠體 金層析檢測試紙條，其特征在于包括有樣本墊、膠體金試劑墊、硝酸纖維素膜、吸水墊、粘膠 層和聚苯乙烯底板，硝酸纖維素膜上設(shè)置有質(zhì)控線和檢測線，聚苯乙烯底板上通過粘膠層 連接有硝酸纖維素膜、吸水墊和膠體金試劑墊，膠體金試劑墊上還連有樣本墊，其中膠體金 試劑墊中噴有膠體金標記的鼠抗人IgE，質(zhì)控線為兔抗鼠IgG，檢測線為標準化變應(yīng)原。按上述方案，還包括有一 PVC外殼，所述的PVC外殼包括有殼體，殼體上對應(yīng)樣本 墊處設(shè)置有滴入孔，殼體上對應(yīng)質(zhì)控線和檢測線處設(shè)置有觀察孔。本實用新型具有如下特點(1)本實用新型使用鼻分泌物檢測，對人無創(chuàng)傷；(2)操作簡單、方便，5-15分鐘完成全部檢測；(3)敏感度高、特異性強；(4)檢測成本較低，便于 推廣和使用。

圖1是本實用新型的整體結(jié)構(gòu)示意圖；圖2為圖1的側(cè)視圖；圖3為PVC外殼的結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實施方式
以下結(jié)合附圖和實施例對本實用新型做進一步的說明，但是此說明不能構(gòu)成對本 實用新型的限制。如圖1-2所示，檢測寵物過敏的免疫膠體金層析檢測試紙條，包括有樣本墊2、膠 體金試劑墊3、硝酸纖維素膜4、吸水墊1、粘膠層7和聚苯乙烯底板8，硝酸纖維素膜上設(shè) 置有質(zhì)控線5和檢測線6，聚苯乙烯底板上通過粘膠層連接有硝酸纖維素膜、吸水墊和膠體 金試劑墊，膠體金試劑墊上還連有樣本墊，其中膠體金試劑墊中噴有膠體金標記的鼠抗人 IgE，質(zhì)控線為兔抗鼠IgG，檢測線為標準化變應(yīng)原，如圖3所示，還可以包括有一與試紙條 相配的PVC外殼，所述的PVC外殼包括有殼體11，殼體上對應(yīng)樣本墊處設(shè)置有滴入孔9，殼 體上對應(yīng)質(zhì)控線和檢測線處設(shè)置有觀察孔10。本實用新型的制備方法1.變應(yīng)原的制備用梳子梳理動物毛皮，將梳理下來的毛發(fā)皮屑用2倍丙酮溶劑浸泡2小時，期間經(jīng) 常攪拌，倒掉溶劑，將揮發(fā)除盡的脫脂后的粉末以1 20(w/v)的量加入0.3mol/l的碳酸 氫鈉_氯化鈉緩沖液(PH8. 2)，含0. 01%疊氮鈉的提取液中，磁力攪拌器轉(zhuǎn)速250轉(zhuǎn)分鐘， 置于冰箱4°C過夜。取上清液-20°C下保存。2.制備膠體金稱取0. Olg氯金酸加到IOOml超純水中，加熱至沸騰后加入Iml 檸檬酸三鈉溶 液，加熱煮沸8min，獲得透明、酒紅色的膠體金溶液。3.膠體金標記蛋白質(zhì)邊攪拌邊逐滴加入蛋白溶液(抗體)至膠體金溶液中，將待標記的抗體蛋白Img 加入IOOml膠體金溶液中混合，室溫攪拌30min ；邊攪拌邊逐滴加入IOmg牛血清白蛋白 (BSA)，繼續(xù)攪拌lOmin，靜置過夜；于8000r/min，4°C下離心45min ；吸取上清液，將沉淀溶 于2ml磷酸緩沖液中，備用，也可加甘油混勻于-20°C保存；4.噴樣選用millipore公司的中等流速的硝酸纖維膜。蛋白濃度為2mg/ml的標準化變 應(yīng)原以及兔抗屬IgG蛋白(質(zhì)控)用5-50Mm的PBS進行1 30的稀釋。將稀釋后的變應(yīng) 原及兔抗屬IgG蛋白(質(zhì)控)各IOOul加到噴樣儲液瓶內(nèi)，應(yīng)用微量噴膜機(BioDot)Jf 變應(yīng)原溶液噴線于硝酸纖維膜的相應(yīng)位置，噴墨的體積控制在lul/cm，噴樣結(jié)束后，室溫真 空抽干或37°C干燥2小時，使抗體牢固的結(jié)合在硝酸纖維膜的表面。噴樣后的膜應(yīng)保存于 4°C、干燥的環(huán)境，封閉時用2% BSA封閉液，于保濕盒內(nèi)，37°C下保溫1小時；[0023]5.試紙條制備噴樣結(jié)束后，將膠體金試劑墊、吸水墊和硝酸纖維膜通過粘膠層固定連接于聚苯 乙烯底板上，并在膠體金試劑墊上貼上樣本墊組成檢測寵物過敏的免疫膠體金層析檢測試 紙條。采用切割機將復(fù)合好的膜片切成所需的形狀和規(guī)格，制成完整的檢測裝置，將其裝于 含有干燥劑的鋁箔袋中。本實用新型的使用方法(1)收集檢測樣本；(2)將試紙條有箭頭的一端浸入被檢 測的鼻分泌物樣本中；(3)3-5秒后取出試紙條，平放。5-10分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。出現(xiàn)兩條紅 線(檢測線和質(zhì)控線)，表明過敏原陽性；僅出現(xiàn)一條質(zhì)控線，則表明過敏原陰性。僅出現(xiàn) 一條檢測線，應(yīng)重新檢測。
權(quán)利要求檢測寵物過敏的免疫膠體金層析檢測試紙條，其特征在于包括有樣本墊(2)、膠體金試劑墊(3)、硝酸纖維素膜(4)、吸水墊(1)、粘膠層(7)和聚苯乙烯底板(8)，硝酸纖維素膜上設(shè)置有質(zhì)控線(5)和檢測線(6)，聚苯乙烯底板上通過粘膠層連接有硝酸纖維素膜、吸水墊和膠體金試劑墊，膠體金試劑墊上還連有樣本墊，其中膠體金試劑墊中噴有膠體金標記的鼠抗人IgE，質(zhì)控線為兔抗鼠IgG，檢測線為標準化變應(yīng)原。
2.按權(quán)利要求1所述的檢測寵物過敏的免疫膠體金層析檢測試紙條，其特征在于還 包括有一 PVC外殼，所述的PVC外殼包括有殼體(11)，殼體上設(shè)置有滴入孔(9)和觀察孔 (10)。
專利摘要本實用新型涉及一種檢測寵物過敏的免疫膠體金層析檢測試紙條，該檢測試紙條主要是針對貓毛、狗毛過敏的免疫膠體金層析檢測，適用于家庭自檢，包括有樣本墊、膠體金試劑墊、硝酸纖維素膜、吸水墊、粘膠層和聚苯乙烯底板，硝酸纖維素膜上設(shè)置有質(zhì)控線和檢測線，聚苯乙烯底板上通過粘膠層連接有硝酸纖維素膜、吸水墊和膠體金試劑墊，膠體金試劑墊上還連有樣本墊，其中膠體金試劑墊中噴有膠體金標記的鼠抗人IgE，質(zhì)控線為兔抗鼠IgG，檢測線為標準化變應(yīng)原。本實用新型具有如下特點(1)本實用新型使用鼻分泌物檢測，對人無創(chuàng)傷；(2)操作簡單、方便，5-15分鐘完成全部檢測；(3)敏感度高、特異性強；(4)檢測成本較低，便于推廣和使用。
文檔編號G01N33/558GK201654043SQ201020133558
公開日2010年11月24日 申請日期2010年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月16日
發(fā)明者尹玉敏, 梁智輝, 梅亞紅, 王幫洲, 祝戎飛, 陳建軍, 陳琰, 龔鎮(zhèn)奎 申請人:湖北楚冠生物藥業(yè)有限公司