專利名稱：過敏原特異性抗體IgE免疫印跡法檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型涉及在一種定性和定量檢測人血清或鼻分泌物中過敏原特異性抗體 IgE的免疫印跡檢測試劑盒。
背景技術(shù)：
過敏性疾病是現(xiàn)代社會中最常見的一種疾病，是機體受抗原物質(zhì)(也稱變應(yīng)原或 過敏原)，如粉塵、花粉、食物、寄生蟲等刺激后，引起的組織損傷或生理功能紊亂。我國大約 5-10%、美國和歐洲約有5-25%的人受過敏性疾病侵擾，2005年世界變態(tài)反應(yīng)組織(WAO) 公布了對30個國家進行的過敏性疾病流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果在這些國家的12億總?cè)丝谥校?22% (2億5千萬人)患有IgE介導(dǎo)的過敏性疾病。IgE分子的Fc段同嗜堿性粒細胞和肥大 細胞表面Fc受體結(jié)合，使機體處于致敏狀態(tài)，當(dāng)機體再受同類過敏原刺激時，過敏原使IgE 分子交聯(lián)，引起嗜堿性粒細胞和肥大細胞脫顆粒釋放組胺、白三烯、細胞因子等生物活性物 質(zhì)，使機體產(chǎn)生過敏反應(yīng)、導(dǎo)致機體毛細血管擴張、水腫、平滑肌痙攣、內(nèi)分泌亢進等過敏癥 狀，如花粉癥、枯草熱(過敏性鼻炎)、過敏性哮喘、過敏性休克。對于變態(tài)反應(yīng)性疾病，除了要做疾病診斷外，還力求查明過敏原，因此，檢測發(fā)現(xiàn) 過敏原并采取有效措施避免與之接觸，是過敏性疾病防治的基本原則。目前對過敏性疾病 的診斷分為兩大類體內(nèi)診斷和體外診斷，其中一、體內(nèi)試驗包括皮內(nèi)試驗、點刺試驗、劃痕試驗、斑貼試驗、眼結(jié)膜激發(fā)試驗、鼻黏膜激發(fā)試驗 及支氣管激發(fā)試驗等。皮內(nèi)試驗和點刺試驗最常用，將含有少量過敏原的提取物注入皮內(nèi)， 如出現(xiàn)類似蚊蟲叮咬的風(fēng)團則為過敏，一般半小時即可獲得檢測結(jié)果，具有簡便、快速、價 廉的優(yōu)點。但假陽性高并受藥物的影響，如試驗前24小時內(nèi)服用抗過敏藥物會影響測定結(jié) 果，有嚴重過敏反應(yīng)的患者如進行皮膚試驗，還會有一定的生命危險。二、體外試驗通過抽取少量血清或采集鼻分泌物，檢測樣品中對某些過敏原產(chǎn)生的特異性IgE 的含量，完成過敏原篩查及特異性過敏原的檢測。尤其適用于皮膚病變無法作皮膚試驗者； 皮膚試驗有一定危險者；服用抗過敏藥后皮膚試驗結(jié)果不準確者。在過敏原疾病的診斷上 極具推廣價值。
發(fā)明內(nèi)容本實用新型的目的是提供一種使用方便、快速定量檢測人血清中的過敏原特異性 抗體IgE免疫印跡法檢測試劑盒，用以篩查患者致敏的過敏原并確定患者致敏反應(yīng)的程度。本實用新型為解決上述提出的問題所采用解決方案為過敏原特異性抗體IgE免 疫印跡法檢測試劑盒，其特征在于包括有已包被有吸入性過敏原或食入性過敏原的試紙 條、生物素標記的抗人IgE試劑瓶、親和素-辣根過氧化物酶試劑瓶和DBA底物顯色液試劑瓶，所述的已包被有吸入性過敏原或食入性過敏原的試紙條包括有試紙條本體和反應(yīng)槽， 試紙條本體位于反應(yīng)槽的底部。本實用新型具有如下特點(1)操作簡單、方便；(2)檢測成本較低，便于推廣和使用。
圖1是本實用新型的整體結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實施方式

以下結(jié)合附圖和實施例對本實用新型做進一步的說明，但是此說明不能構(gòu)成對本 實用新型的限制。本實用新型的過敏原特異性抗體IgE免疫印跡法檢測試劑盒，其包括有已包被有 螨蟲類、動物皮屑類、蟑螂類、霉菌類、花粉類等吸入性過敏原或奶類、蛋類等食入性過敏原 的試紙條、生物素標記的抗人IgE試劑瓶1、親和素-辣根過氧化物酶試劑瓶2、DBA底物顯 色液試劑瓶5，所述的已包被有吸入性過敏原或食入性過敏原的試紙條包括有試紙條本體 4和反應(yīng)槽3，試紙條本體位于反應(yīng)槽的底部。本實用新型的制備采取常規(guī)方法制備，下面對制備方法進行簡單描述(1)過敏原蛋白的制備將含過敏原蛋白的材料經(jīng)粉碎、脫脂、提取、濃縮、 SDS-PAGE電泳鑒定；(2)生物素標記抗體的制備用長臂活化生物素sulfo-NHS-LC-LC-biotin標記純 化的抗人IgE抗體；(3)配制親和素-辣根過氧化物酶、DBA底物顯色液，并分裝；(4)試紙條制備用抗人IgE抗體和過敏原蛋白包被硝酸纖維膜，并封閉，將處理 后的試紙條置于反應(yīng)槽內(nèi)；本實用新型的使用方法，包括如下操作步驟(1)加樣品(人血清或鼻分泌物)到反應(yīng)槽內(nèi)，使樣品中的過敏原特異性IgE抗體 各自與相應(yīng)的固相過敏原蛋白結(jié)合，洗去未結(jié)合上的雜蛋白和其他物質(zhì)。(2)再加入生物素標記的抗人IgE抗體，使之與已結(jié)合的人IgE抗體結(jié)合。洗去多 余的生物素標記的抗人IgE抗體。(3)接著加入親和素-辣根過氧化物酶，利用生物素_親和素之間的特異性結(jié)合形 成復(fù)合物，形成過敏原-IgE-抗人IgE-生物素-親和素-辣根過氧化物酶。(4)加入DBA底物顯色液，在辣根過氧化物酶的作用下，使顯色液產(chǎn)生顏色變化， 根據(jù)顏色有無判斷過敏原特異性IgE抗體的有無，根據(jù)顏色的深淺判定標本中過敏原特異 性IgE抗體的濃度強弱。結(jié)果判斷方法根據(jù)條帶顏色的深淺對照比色卡進行定級，分級方法見下表
權(quán)利要求過敏原特異性抗體IgE免疫印跡法檢測試劑盒，其特征在于包括有已包被有吸入性過敏原或食入性過敏原的試紙條、生物素標記的抗人IgE試劑瓶(1)、親和素 辣根過氧化物酶試劑瓶(2)和DBA底物顯色液試劑瓶(5)，所述的已包被有吸入性過敏原或食入性過敏原的試紙條包括有試紙條本體(4)和反應(yīng)槽(3)，試紙條本體位于反應(yīng)槽的底部。
專利摘要本實用新型涉及在一種定性和定量檢測人血清或鼻分泌物中過敏原特異性抗體IgE的免疫印跡檢測試劑盒，包括有已包被有吸入性過敏原或食入性過敏原的試紙條、生物素標記的抗人IgE試劑瓶、親和素-辣根過氧化物酶試劑瓶和DBA底物顯色液試劑瓶，所述的已包被有吸入性過敏原或食入性過敏原的試紙條包括有試紙條本體和反應(yīng)槽，試紙條本體位于反應(yīng)槽的底部。本實用新型具有如下特點(1)操作簡單、方便；(2)檢測成本較低，便于推廣和使用。
文檔編號G01N33/52GK201654038SQ201020133559
公開日2010年11月24日 申請日期2010年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月16日
發(fā)明者尹玉敏, 梁智輝, 梅亞紅, 王幫洲, 祝戎飛, 陳建軍, 陳琰, 龔鎮(zhèn)奎 申請人:湖北楚冠生物藥業(yè)有限公司