專利名稱：快速橫向流動的聚糖檢測裝置的制作方法
快速橫向流動的聚糖檢測裝置相關(guān)申請本申請要求于2009年3月6日提交的美國臨時申請第61/157，933號的優(yōu)先權(quán)， 通過弓丨用將其全部內(nèi)容并入本文。
背景技術(shù)：
由分泌型基因FUT2編碼的半乳糖苷2- α -L-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶2 (FUT2)負責α 1， 2-巖藻糖基化(分泌型)聚糖的合成。非洲、美洲、亞洲和歐洲中大約20-25%的個體缺乏活性FUT2基因，并且因此不能表達分泌型聚糖。發(fā)明概述本發(fā)明的一方面涉及用于檢測聚糖的快速橫向流動裝置。該裝置包括樣品墊、與所述樣品墊連通的膜(例如，硝酸纖維素膜)、凝集素-標記物偶聯(lián)物、固定的凝集素和固定的抗凝集素抗體。偶聯(lián)物中的凝集素與固定的凝集素相同。同樣，固定的抗體與該凝集素特異結(jié)合。用于本裝置的合適的凝集素包括但不限于，UEA1、ΑΙΑ、GSA II、WGA、sWGA、SNA、 MAL-II, PWA、SJA、LEA和I-PHA。固定的凝集素和固定的抗凝集素抗體位于膜的第一區(qū)域和第二區(qū)域上，所述第一區(qū)域和第二區(qū)域不重疊。所述偶聯(lián)物位于樣品墊和固定的凝集素或固定的抗凝集素抗體之間。在一個實例中，以這樣的順序組織這四種組分；樣品墊、偶聯(lián)物、固定的凝集素和固定的抗凝集素抗體。本發(fā)明的裝置還可以包括支持構(gòu)件，其上用于安裝所述樣品墊和所述膜。該裝置還可以包括接收墊(sink pad)，其通過所述膜與所述樣品墊分開。在一個實例中，將樣品墊、膜和接收墊順序安裝在所述支持構(gòu)件上。同樣在本發(fā)明范圍內(nèi)的是利用上述裝置鑒定個體中聚糖表達表型的方法。所述方法包括(i)將來自個體的體液(例如唾液)分配于裝置中的樣品墊中，( )檢驗裝置中第一區(qū)域和第二區(qū)域處的信號，和(iii)基于第一區(qū)域和第二區(qū)域是否存在信號來確定個體中的聚糖表達表型。當在兩個區(qū)域處均可檢測到信號時，其表明個體表達能與裝置中的凝集素結(jié)合的聚糖。如果僅在第二區(qū)域處可檢測到信號，其表明個體不表達該聚糖。當使用含有凝集素UEAl的裝置時，(i)在第一區(qū)域和第二區(qū)域處均檢測到信號表明個體是分泌型聚糖陽性的；和(ii)僅在第二區(qū)域處檢測到信號表明個體是分泌型聚糖陰性的。以下的描述中將詳述本發(fā)明的一個或多個實施方案。從以下的附圖和實際的實例，以及還從所附的權(quán)利要求書中明顯可見本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點。附圖簡要說明首先描述附圖。

圖1是用于測定分泌狀態(tài)的快速橫向流動裝置的簡圖。圖2是用于檢測唾液中分泌狀態(tài)的免疫層析試條檢測裝置的數(shù)字圖像。發(fā)明的詳細描述本文所公開的是用于在快速診斷檢驗中確定個體的聚糖表達表型，尤其是分泌型聚糖狀況的聚糖檢測裝置。如圖1所示，本發(fā)明的裝置包括樣品墊100、膜200和任選地接收墊600，所有這些可以順序安裝在支持構(gòu)件700上。樣品墊100與膜200連通。也就是說，置于樣品墊上的流體能遷移至膜。如果需要，所述裝置還可以包括芯墊(wick pad) 310，其被置于膜200之上，用于從樣品墊100吸收溢出的流體。樣品墊100、接收墊600和芯墊310均可以由能吸收流體的材料制成，例如濾紙 (例如Whatman GF/DVA膜)或海綿。膜200允許生物分子移動，所述生物分子例如，蛋白質(zhì)、核酸和多糖。適于制備膜 200的材料包括但不限于，硝酸纖維素、尼龍、纖維素、聚偏氟乙烯(PVDF)、聚碳酸酯、聚丙烯、聚乙烯、特氟龍(Teflon)和凱夫拉爾(Kevlar)。薄片或厚片形式的支持構(gòu)件700可以由(即包含)金屬或塑料(例如苯乙烯、聚碳酸酯、聚丙烯、聚乙烯、聚氯乙烯)制成。本發(fā)明的裝置還包括凝集素400、抗凝集素抗體500和凝集素-標記物偶聯(lián)物 300。凝集素400和抗凝集素抗體500兩者都是固定的，位于膜200上的兩個單獨的區(qū)域 420和520(即區(qū)域1和區(qū)域2、。位于樣品墊100和凝集素400或抗凝集素抗體500之間的凝集素-標記物偶聯(lián)物300包含與凝集素400相同類型的凝集素和標記物，所述標記物可以是任何可檢測的標志物。所述標記物的實例包括但不限于，膠體金、熒光素及其衍生物 (例如FITC-熒光素異硫氰酸酯)、羅丹明及其衍生物、綠色熒光蛋白(GFP)及其衍生物、量子點和其它熒光或生色團分子(例如二硝基苯胼)。凝集素是與特定糖配體具有高特異性的糖結(jié)合蛋白。下面的表1列舉了適用于本文所描述的裝置的示例性的凝集素和它們所結(jié)合的糖配體表1.示例性的凝集素和它們所結(jié)合的糖配體
權(quán)利要求
1.用于檢測聚糖的裝置，包括樣品墊，與所述樣品墊連通的膜， 含有第一凝集素和標記物的偶聯(lián)物，位于所述膜的第一區(qū)域上的固定的第二凝集素，所述第二凝集素與第一凝集素相同，和固定的對所述凝集素特異的抗體，所述抗體位于所述膜的第二區(qū)域上， 其中所述第一區(qū)域和所述第二區(qū)域是分開的，并且所述偶聯(lián)物位于所述樣品墊和所述第一區(qū)域或第二區(qū)域之間。
2.如權(quán)利要求1所述的裝置，其中所述膜選自硝酸纖維素膜、尼龍膜、纖維素膜、聚偏氟乙烯膜、聚碳酸酯膜、聚丙烯膜、聚乙烯膜、特氟龍膜和凱夫拉爾膜。
3.如權(quán)利要求2所述的裝置，其中所述膜是硝酸纖維素膜。
4.如權(quán)利要求1所述的裝置，其中所述凝集素選自UEAl、ΑΙΑ、GSAII、WGA、sWGA、SNA、 MAL-II, PffA, SJA, LEA 和 I-PHA。
5.如權(quán)利要求4所述的裝置，其中所述凝集素是UEAl。
6.如權(quán)利要求5所述的裝置，其中所述膜是硝酸纖維素膜。
7.如權(quán)利要求1所述的裝置，其中所述標記物選自膠體金、熒光素、羅丹明、綠色熒光蛋白、量子點和生色團。
8.如權(quán)利要求7所述的裝置，其中所述標記物是膠體金。
9.如權(quán)利要求1所述的裝置，還包括與所述膜連通的接收墊，其中所述樣品墊和所述接收墊被所述膜分開。
10.如權(quán)利要求1所述的裝置，還包括支持構(gòu)件，在所述支持構(gòu)件上安裝所述樣品墊和所述膜。
11.如權(quán)利要求10所述的裝置，還包括接收墊，其中所述樣品墊、所述膜和所述接收墊順序安裝在所述支持構(gòu)件上。
12.如權(quán)利要求11所述的裝置，其中所述裝置順序包括樣品墊、偶聯(lián)物、固定的第二凝集素、對所述凝集素特異的抗體和接收墊。
13.如權(quán)利要求12所述的裝置，其中所述凝集素選自UEA1、ΑΙΑ、GSAII、WGA、sWGA、 SNA、MAL-II、PWA、SJA, LEA 和 I-PHA。
14.如權(quán)利要求13所述的裝置，其中所述凝集素是UEAl。
15.如權(quán)利要求10所述的裝置，其中所述支持構(gòu)件是塑料的或金屬的。
16.如權(quán)利要求15所述的裝置，其中所述支持構(gòu)件由苯乙烯制成。
17.鑒定個體中聚糖表達表型的方法，包括將來自個體的體液分配于權(quán)利要求1所述的裝置的樣品墊中， 檢驗所述裝置中第一區(qū)域和第二區(qū)域處的信號，和基于所述第一區(qū)域和第二區(qū)域是否存在信號來確定個體中的聚糖表達表型， 其中(i)所述第一區(qū)域和第二區(qū)域均存在信號表明所述個體表達與權(quán)利要求1所述的裝置中含有的凝集素特異結(jié)合的聚糖和(ii)僅在第二區(qū)域處存在信號表明所述個體不表達所述聚糖。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中權(quán)利要求1所述的裝置中含有的凝集素選自 UEAl、ΑΙΑ、GSA II、WGA、sWGA、5SNA、MAL-II、PWA、SJA、LEA 禾口 I-PHA0
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述凝集素是UEA1，并且⑴所述第一區(qū)域和所述第二區(qū)域處均存在信號表明所述個體具有分泌型聚糖陽性表型和(ii)僅在所述第二區(qū)域處存在信號表明所述個體具有分泌型聚糖陰性表型。
全文摘要
聚糖檢測裝置，包括樣品墊、與所述樣品墊連通的膜、標記的凝集素、固定的相同類型的凝集素和固定的對所述凝集素特異的抗體。
文檔編號G01N33/53GK102439443SQ201080010411
公開日2012年5月2日 申請日期2010年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月6日
發(fā)明者吉耶爾莫·M·魯伊斯-帕拉西奧斯, 大衛(wèi)·S·紐伯格, 阿爾迪斯·L·莫羅 申請人:兒童醫(yī)院醫(yī)療中心, 國立醫(yī)學與營養(yǎng)研究所, 綜合醫(yī)院股份有限公司