專利名稱：用于軟組織疾病診斷和作為口腔護(hù)理干預(yù)的治療性靶標(biāo)的蛋白質(zhì)生物標(biāo)記的制作方法
用于軟組織疾病診斷和作為口腔護(hù)理干預(yù)的治療性靶標(biāo)的
蛋白質(zhì)生物標(biāo)記盤牙周病的部分特征是牙周有機(jī)基質(zhì)的異常和過度降解。該基質(zhì)包括牙齦、牙周韌帶、牙骨質(zhì)和牙槽骨。這些事件導(dǎo)致牙周炎的臨床表現(xiàn)，包括牙齦退縮、袋形成(pocket formation)、附著喪失和最終牙丟失。許多不同炎性介導(dǎo)物都由牙周病累及的牙周組織產(chǎn)生。這些介導(dǎo)物中的某些看來似乎在牙周病病例中所觀察到的破壞過程中起到重要作用，這使得一些研究人員檢查使用某些炎性介導(dǎo)物作為進(jìn)行性損傷的生物標(biāo)記的可能性 (Sorsa, T.等.Arch. Oral. Biol. 35 :193S-196S, 1990 ；Page, R. C. ， J. Periodont. Res. 26 230-242，1991)。MM本發(fā)明包括在哺乳動(dòng)物中診斷牙周病的方法，所述方法包括獲取所述哺乳動(dòng)物的牙齦和/或唾液樣品，檢測所述牙齦樣品中生物標(biāo)記的存在情況，檢測所述樣品中所述生物標(biāo)記的水平，并根據(jù)所檢測的生物標(biāo)記水平來診斷出該生物體患有牙周病。生物標(biāo)記是選自以下的至少一個(gè)成員FAS、IL-1B、IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS, IL-17B、CARD 10, BGN、BE、IL-12A、IL-6、LCN8、LPO 和 MMP-13。本發(fā)明也包括在哺乳動(dòng)物中診斷牙周病的方法，所述方法包括獲取所述哺乳動(dòng)物的牙齦和/或唾液樣品，檢測所述樣品中生物標(biāo)記的存在情況，檢測所述樣品中所述生物標(biāo)記的水平，將所述樣品中的生物標(biāo)記水平與將生物標(biāo)記水平與牙周病相關(guān)聯(lián)的預(yù)定參考值進(jìn)行比較，并且當(dāng)所述樣品中的生物標(biāo)記水平符合其中所述參考值將生物標(biāo)記水平與牙周病相關(guān)聯(lián)的生物標(biāo)記水平時(shí)，診斷出所述哺乳動(dòng)物患有牙周病。本發(fā)明也包括在哺乳動(dòng)物中診斷牙周病的方法，所述方法包括獲取所述哺乳動(dòng)物的牙齦和/或唾液樣品，檢測所述樣品中生物標(biāo)記的存在情況，檢測所述樣品中所述生物標(biāo)記的水平，將所述樣品中的生物標(biāo)記水平與對(duì)照樣品中同一生物標(biāo)記的水平進(jìn)行比較，其中當(dāng)相對(duì)于所述對(duì)照樣品而言，在所述樣品中檢測到所述生物標(biāo)記的水平改變時(shí)，就診斷出所述哺乳動(dòng)物患有牙周病。一方面，樣品中的生物標(biāo)記水平高于對(duì)照樣品中的水平。本發(fā)明包括用于在哺乳動(dòng)物中檢測牙周病的生物標(biāo)記組，其包含選自FAS、IL_1B、 IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS、IL-17B、CARD 10, BGN、BE、IL-12A、IL-6, LCN8、LPO 和 MMP-13 的兩種以上生物標(biāo)記，其中所述生物標(biāo)記得自經(jīng)診斷患有牙周病的哺乳動(dòng)物的牙齦和/或唾液樣品。本發(fā)明還包括在哺乳動(dòng)物中監(jiān)測牙周病的方法，所述方法包括在第一時(shí)間點(diǎn)獲取所述哺乳動(dòng)物的第一牙齦和/或唾液樣品，在第二時(shí)間點(diǎn)獲取所述哺乳動(dòng)物的第二牙齦和/或唾液樣品，在第一和第二樣品中檢測至少一種生物標(biāo)記的存在情況，在第一和第二樣品中檢測至少一種生物標(biāo)記的水平，并比較第一和第二樣品中的生物標(biāo)記水平，其中與第一樣品相比，第二樣品中生物標(biāo)記水平下降表明在所述哺乳動(dòng)物中牙周病減少。本發(fā)明包括在哺乳動(dòng)物中治療牙周病的方法，所述方法包括使細(xì)胞與減量調(diào)節(jié)選自以下的至少一種生物標(biāo)記的物質(zhì)接觸FAS、IL-1B、IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS、IL-17B、 CARD 10, BGN、BE、IL-12A、IL_6、LCN8、LPO和MMP-13，其中所述生物標(biāo)記的減量調(diào)節(jié)與牙周病相關(guān)的至少一種癥狀的減少相關(guān)。本發(fā)明也包括可用于在哺乳動(dòng)物中治療牙周病的化合物的鑒定方法，所述方法包括使細(xì)胞與試驗(yàn)化合物接觸并檢測所述試驗(yàn)化合物是否減量調(diào)節(jié)選自以下的至少一種生物標(biāo)記FAS、IL-1B、IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS、IL-17B、CARD 10, BGN、BE、IL-12A、IL-6、 LCN8、LPO和MMP-13，其中生物標(biāo)記的減量調(diào)節(jié)表明所述試驗(yàn)化合物可用于治療牙周病。本發(fā)明還包括在哺乳動(dòng)物中診斷齦炎的方法，所述方法包括獲取所述哺乳動(dòng)物的牙齦和/或唾液樣品，檢測所述樣品中生物標(biāo)記的存在情況，檢測所述樣品中所述生物標(biāo)記的水平，根據(jù)所檢測的生物標(biāo)記水平而診斷出所述生物體患有齦炎。本發(fā)明也包括在哺乳動(dòng)物中診斷齦炎的方法，所述方法包括獲取所述哺乳動(dòng)物的牙齦和/或唾液樣品，檢測所述樣品中生物標(biāo)記的存在情況，檢測所述樣品中所述生物標(biāo)記的水平，將所述樣品中的生物標(biāo)記水平與將生物標(biāo)記水平與齦炎相關(guān)聯(lián)的預(yù)定參考值進(jìn)行比較，并且當(dāng)所述樣品中的生物標(biāo)記水平符合其中所述參考值將生物標(biāo)記水平與齦炎相關(guān)聯(lián)的生物標(biāo)記水平時(shí)，診斷出所述哺乳動(dòng)物患有齦炎。本發(fā)明也包括在哺乳動(dòng)物中診斷齦炎的方法，所述方法包括獲取所述哺乳動(dòng)物的牙齦和/或唾液樣品，檢測所述樣品中生物標(biāo)記的存在情況，檢測所述樣品中所述生物標(biāo)記的水平，并將所述樣品中的生物標(biāo)記水平與對(duì)照樣品中同一生物標(biāo)記的水平進(jìn)行比較，其中當(dāng)相對(duì)于所述對(duì)照樣品而言，在所述牙齦和/或唾液樣品中檢測到所述生物標(biāo)記水平上升時(shí)，診斷出所述哺乳動(dòng)物患有齦炎。本發(fā)明包括在哺乳動(dòng)物中監(jiān)測齦炎的方法，所述方法包括在第一時(shí)間點(diǎn)獲取所述哺乳動(dòng)物的第一牙齦和/或唾液樣品，在第二時(shí)間點(diǎn)獲取所述哺乳動(dòng)物的第二牙齦和/ 或唾液樣品，在第一和第二樣品中檢測至少一種生物標(biāo)記的存在情況，在第一和第二樣品中檢測所述至少一種生物標(biāo)記的水平，并比較第一和第二樣品中的生物標(biāo)記水平，其中與第一樣品相比，第二樣品中生物標(biāo)記水平下降表明在所述哺乳動(dòng)物中的齦炎減少。本發(fā)明也包括在哺乳動(dòng)物中治療齦炎的方法，所述方法包括使細(xì)胞與減量調(diào)節(jié)選自以下的至少一種生物標(biāo)記的物質(zhì)接觸FAS、IL-1B、IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS、IL-17B、 CARD 10, BGN、BE、IL-12A、IL-6, LCN8、LPO和MMP-13，其中所述至少一種生物標(biāo)記的減量調(diào)節(jié)與齦炎相關(guān)的至少一種癥狀的減少相關(guān)。一方面，所述生物標(biāo)記水平恢復(fù)到視為正常的水平。另一方面，所述生物標(biāo)記水平恢復(fù)到基線水平。本發(fā)明還包括可用于在哺乳動(dòng)物中治療齦炎的化合物的鑒定方法，所述方法包括使細(xì)胞與試驗(yàn)化合物接觸并檢測所述試驗(yàn)化合物是否減量調(diào)節(jié)選自以下的至少一種生物標(biāo)記FAS、IL-1B、IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS、IL-17B、CARD10、BGN、BE、IL-12A、IL-6、LCN8、 LPO和MMP-13，其中所述至少一種生物標(biāo)記的減量調(diào)節(jié)表明所述試驗(yàn)化合物可用于治療齦炎。附圖簡述

圖1表明2，4，4’ -三氯-2’ -羥基二苯醚對(duì)單核細(xì)胞的TNF α誘導(dǎo)性ΜΜΡ-9生成的影響。發(fā)明詳述
本領(lǐng)域所需要的是生物標(biāo)記水平的診斷性和/或預(yù)后測試，所述生物標(biāo)記包括在牙周病狀態(tài)中升高的生物標(biāo)記。這樣的生物標(biāo)記包括FAS、IL-1B、IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS、 IL-17B、CARD10、BGN、BE、IL-12A、IL-6、LCN8、LPO 和 MMP-13。本領(lǐng)域還需要的是牙周病的診斷性和/或預(yù)后測試，其評(píng)價(jià)牙齦樣品例如齦溝液(gingival crevicular fluid, GCF) 或唾液樣品中的炎性介導(dǎo)物水平。此外，也需要在有需要的患者中治療牙周病，包括抑制 FAS、IL-IB、IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS、IL-17B、CARD10、BGN、BE、IL-12A、IL-6、LCN8、LPO 和 MMP-13中的一種或多種水平上升。例如，基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP_13 ；也稱為CLG3)在牙周炎和牙周病中是主要的破壞性膠原酶。MMP-13可在患病的牙周組織和齦溝液、以及唾液中發(fā)現(xiàn)。該酶水平與牙周炎臨床指標(biāo)呈正相關(guān)。也就是說，升高或“高于正?！彼降腗MP-13指示牙周病。測定可由 MMP-13酶、RNA或生物活性構(gòu)成。對(duì)MMP-13的活性和/或存在的抑制可用于治療牙周病。使用相應(yīng)的酶、蛋白質(zhì)、RNA或生物活性，也可檢測如本文給出的以下牙周病生物標(biāo)記和/或測定其水平。升高或“高于正?！彼降囊韵律飿?biāo)記單獨(dú)或與一種或多種其它生物標(biāo)記彼此聯(lián)合，也指示牙周病。對(duì)于MMP-13，對(duì)MMP-13的活性和/或存在的抑制可用于治療牙周病。FAS (也稱為ALPSlA和AP0-1)參與細(xì)胞凋亡，并在結(jié)合配體時(shí)形成“DISC”，一種
誘導(dǎo)死亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)復(fù)合物。白介素l-β (IL-IB)是一種炎性細(xì)胞因子，參與對(duì)抗感染的哺乳動(dòng)物免疫應(yīng)答。白介素8(IL_8 ；也稱為3-10C和AMCF-1)是C-X-C趨化因子家族的一個(gè)成員，并參與目標(biāo)嗜中性粒細(xì)胞趨化性的誘導(dǎo)，作為先天免疫應(yīng)答的組成部分。基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP_9 ；也稱為GELB和CLG4B)是一種明膠酶，其也是牙周病中的一種主要的破壞性基質(zhì)金屬蛋白酶。防衛(wèi)素β 4(DEFB4 ；也稱為B2和DEFB-2)是一種防衛(wèi)素。DEFB4是受炎癥局部調(diào)節(jié)的一種抗菌肽。組織蛋白酶S(CTSS ；也稱為MGC3886)，Cl肽酶家族的一個(gè)成員，是在將抗原蛋白 /肽呈遞給MHC II類分子中起作用的一種半胱氨酸蛋白酶。白介素17B(IL-17B ；也稱為IL-20)是一種IL-17相關(guān)的細(xì)胞因子。IL-17B刺激 IL-IB和TNF-α從單核細(xì)胞中釋放出來。胱天蛋白酶(Casspase)募集域家族成員10 (CARD 10 ；也稱為BIMPl和CARMA3)參與細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。CARDlO也激活NF-K-B并且屬于膜締合的鳥苷酸激酶家族。雙糖鏈蛋白聚糖(BGN ；也稱為DSPGl和PG-S1)是含有兩條連接的糖胺聚糖鏈的一種基質(zhì)蛋白聚糖，并且涉及飾膠蛋白聚糖。據(jù)信它與膠原原纖維結(jié)合并轉(zhuǎn)移生長因子β。B-因子，備解素(BF ；也稱為CFAB和GBG)是補(bǔ)體激活旁路途徑的一種組分?；钚詠喕菂⑴c預(yù)活化B淋巴細(xì)胞增殖的一種絲氨酸蛋白酶。白介素12A(IL_12A ；也稱為CLMF)是對(duì)T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞起作用的一種細(xì)胞因子，并且參與Thl細(xì)胞和Th2細(xì)胞的分化，以及干擾素γ的T細(xì)胞非依賴性誘導(dǎo)。白介素6 (IL-6 ；也稱為BSF2和HGF)是激活細(xì)胞表面信號(hào)傳導(dǎo)復(fù)合物的一種免疫調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子。它的作用是作為促炎細(xì)胞因子和抗炎細(xì)胞因子兩者，并刺激針對(duì)創(chuàng)傷的免疫應(yīng)答，包括響應(yīng)外源病原體。
脂質(zhì)運(yùn)載蛋白8(LCN8)屬于參與由哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)激活而導(dǎo)致的炎癥和解毒過程的蛋白質(zhì)家族。乳過氧化物酶(LP0 ；也稱為SP0)是參與針對(duì)感染的宿主防御的一種抗氧化酶。如全文所用，范圍用作描述該范圍內(nèi)的每個(gè)數(shù)值和所有數(shù)值的簡寫形式。范圍內(nèi)的任何數(shù)值都可選做該范圍的終點(diǎn)。另外，本文所引用的所有參考資料都通過引用以其整體結(jié)合到本文中。當(dāng)本公開內(nèi)容中的定義和所引用參考資料有矛盾時(shí)，以本公開內(nèi)容為準(zhǔn)。本文所用的術(shù)語“牙周病”包括牙周炎、齦炎和牙齦疾病。本文所用“齦炎”意指牙齦組織的炎癥，是其中炎癥位于牙齦內(nèi)且骨和牙周韌帶內(nèi)無損傷的一種病癥。本文所用的術(shù)語“牙周炎”是指牙周有機(jī)基質(zhì)的異常和過度降解，該基質(zhì)包括牙齦、牙周韌帶、牙骨質(zhì)和牙槽骨。牙周炎的臨床表現(xiàn)包括但不限于牙齦退縮、袋形成、基質(zhì)附著喪失、牙和骨丟失。牙周炎可表征為早期牙周炎、中期牙周炎或晚期牙周炎。然而，正如技術(shù)人員所理解的，牙周炎不應(yīng)僅限于本文所給出的那些癥狀和后遺癥。除了其它癥狀，早期牙周炎的臨床表現(xiàn)是以下的一種或多種探診時(shí)出血；存在袋(3至4mm)；局限性退縮區(qū)域；附著喪失(3至4mm)；骨丟失(例如水平的)；和I級(jí)分叉侵襲面積。除了其它癥狀，中期牙周炎的臨床表現(xiàn)是以下的一種或多種存在袋0至6!11111)；存在附著喪失0至6!11111)； 探診時(shí)出血；I級(jí)和/或II級(jí)分叉侵襲面積；I級(jí)牙齒松動(dòng)；骨丟失(例如水平和/或垂直的)；和1/3支持性牙槽骨丟失(即冠根比為1 1)。晚期牙周炎的臨床表現(xiàn)是以下的一種或多種探診時(shí)出血；存在袋(超過6mm)；附著喪失(超過6mm) ；II級(jí)和/或III級(jí)分叉侵襲面積；II級(jí)和/或III級(jí)牙齒松動(dòng)；骨丟失(例如水平和/或垂直的)；和超過1/3 支持性牙槽骨丟失(即冠根比為2 1以上)。牙周炎細(xì)分為包括但不限于成人牙周炎 (例如斑塊相關(guān)的)；早發(fā)性牙周炎(例如青春期前牙周炎、青少年牙周炎、快速進(jìn)展性牙周炎等)；全身性疾病相關(guān)性牙周炎；壞死性潰瘍性牙周炎；難治性牙周炎；種植體牙周炎 (peri-imp Iant it is)等。本文所用的術(shù)語“治療，，是指在哺乳動(dòng)物接觸本發(fā)明口腔組合物和/或依據(jù)本發(fā)明方法時(shí)，不良病況的可檢測性改善和/或病況癥狀的減輕。術(shù)語“對(duì)牙周炎的治療”應(yīng)理解為包括對(duì)哺乳動(dòng)物牙周炎的預(yù)防，以及抑制哺乳動(dòng)物中牙周炎相關(guān)的一種或多種已有病況的進(jìn)展。本文所用的術(shù)語“抑制”是指與無治療病況相比，部分抑制或完全抑制牙周炎，從而達(dá)到治療性治療和/或預(yù)防結(jié)果。因此，依照本發(fā)明對(duì)牙周炎的治療包括降低、抑制、改善、減輕、縮減、停止或消除本文所給出的一種或多種癥狀和/或后遺癥。本文所用的“病理性過度”是指活性超過所接受的正常水平。例如，基質(zhì)金屬蛋白酶活性的“病理性過度”是超過非疾病狀態(tài)中正常存在的水平的基質(zhì)金屬蛋白酶活性水平。 本文所用的“基質(zhì)金屬蛋白酶活性的病理性過度”是牙周炎相關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶活性水平。本文所用的術(shù)語“基線”是指在不良事件之前存在于受試者內(nèi)的某物質(zhì)(例如生物標(biāo)記)的水平或在治療性治療之后存在的水平。生物標(biāo)記的“基線”水平可以是例如據(jù)認(rèn)為反映了 “正?！被颉敖】怠笔茉囌叩纳飿?biāo)記水平?；蛘?，生物標(biāo)記的“基線”水平可反映出牙周病發(fā)作之前存在的生物標(biāo)記水平，其中在牙周病發(fā)作之前，生物標(biāo)記水平已經(jīng)升高到超過“正?！被颉敖】怠彼?，由于可能與牙周病無關(guān)的病況。在第二個(gè)實(shí)例中，治療受試者使生物標(biāo)記水平恢復(fù)到“基線”水平，可反映出“對(duì)牙周病的治療”，盡管有這樣的事實(shí) 該實(shí)例中的基線水平升高到超過所接受的“健康”水平。本文所用的術(shù)語“減量調(diào)節(jié)”是指酶活性降低、酶活性水平降低、蛋白質(zhì)水平和/ 或編碼所述蛋白質(zhì)的核酸的水平的降低、或蛋白質(zhì)(例如MMP-8、MMP-9和MMP-13中的一種或多種)的存在的生化效應(yīng)降低。本文所用的術(shù)語“牙齦樣品”是指從牙齦上或附近所獲取的組織、細(xì)胞、液體。本文所用的“齦溝液”和“GCF”是指由游離齦的毛細(xì)血管滲漏產(chǎn)生的在齦溝中匯集的血漿滲出液。本文所用的術(shù)語“診斷”是指確定或檢測特定疾病、病癥、醫(yī)學(xué)病況或危險(xiǎn)的存在情況。本文所用的術(shù)語“前齦炎狀態(tài)”是指并非完全陷于齦炎的狀態(tài)，但是除“正?！敝獾内呄蛴邶l炎的任何狀態(tài)，而且是如放任不管則將會(huì)發(fā)展成齦炎的狀態(tài)。本文所用的術(shù)語“檢測試劑”是指生物實(shí)體或化學(xué)實(shí)體?！皺z測劑”可以是添加到組合物中的額外試劑，或者它可以是用作檢測劑的組合物的起始組分(例如可視FRET抗體技術(shù))。本發(fā)明的某些實(shí)施方案提供可用于治療口腔疾病或病況的化合物的鑒定方法， 所述方法包括獲取患有口腔疾病或病況的哺乳動(dòng)物的第一牙齦樣品；獲取所述哺乳動(dòng)物口腔的第二牙齦樣品；使所述第一樣品與試驗(yàn)化合物接觸；使所述第二樣品與陽性對(duì)照接觸，其中所述陽性對(duì)照是已知減量調(diào)節(jié)一種或多種生物標(biāo)記表達(dá)的化合物；檢測所述試驗(yàn)化合物減量調(diào)節(jié)一種或多種所述生物標(biāo)記表達(dá)的程度；檢測所述陽性對(duì)照減量調(diào)節(jié)一種或多種所述生物標(biāo)記表達(dá)的程度；和將所述試驗(yàn)化合物減量調(diào)節(jié)一種或多種所述生物標(biāo)記表達(dá)的程度，與所述陽性對(duì)照減量調(diào)節(jié)一種或多種所述生物標(biāo)記表達(dá)的程度進(jìn)行比較；其中減量調(diào)節(jié)一種或多種所述生物標(biāo)記表達(dá)的程度等于或大于所述陽性對(duì)照的試驗(yàn)化合物，是可用于治療口腔疾病或病況的化合物。在某些實(shí)施方案中，所述一種或多種生物標(biāo)記選自FAS、IL-1B、IL_8、MMP_9、 DEFB4、CTSS、IL-17B、CARD 10、BGN、BE、IL-12A、IL_6、LCN8、LPO 和 MMP-13。在又一些實(shí)施方案中，所述陽性對(duì)照減量調(diào)節(jié)以下生物標(biāo)記的表達(dá)FAS、IL-1B、IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS、 IL-17B、CARD 10, BGN、BE、IL-12A、IL-6、LCN8、LPO 和 MMP-13。在某些實(shí)施方案中，所述口腔疾病或病況是齦炎或牙周炎。在某些實(shí)施方案中，所述陽性對(duì)照是鹵化二苯醚。在其它實(shí)施方案中，所述陽性對(duì)照是三氯生。再一些實(shí)施方案提供這樣的方法其中所述試驗(yàn)化合物減量調(diào)節(jié)一種或多種所述生物標(biāo)記表達(dá)的程度大于所述陽性對(duì)照。在某些實(shí)施方案中，所述試驗(yàn)化合物減量調(diào)節(jié) FAS、IL-1B、IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS、IL-17B、CARD 10, BGN、BE、IL-12A、IL-6, LCN8、LPO 和MMP-13表達(dá)的程度大于所述陽性對(duì)照。在又一些實(shí)施方案中，所述陽性對(duì)照減量調(diào)節(jié) MMP-9的表達(dá)。在再一些實(shí)施方案中，所述陽性對(duì)照減量調(diào)節(jié)MMP-13的表達(dá)。一方面，本發(fā)明的特征在于在哺乳動(dòng)物中診斷牙周病的方法，所述方法包括獲取所述哺乳動(dòng)物的牙齦樣品，檢測所述牙齦樣品中生物標(biāo)記的存在情況，檢測所述牙齦樣品中所述生物標(biāo)記的水平，根據(jù)所檢測生物標(biāo)記水平來診斷該生物體患有牙周病。所述生物標(biāo)記是選自以下的至少一個(gè)成員FAS、IL-1B、IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS、IL-17B、CARD 10, BGN、BE、IL-12A、IL_6、LCN8、LPO和MMP-13。在一個(gè)實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物是人?？赏ㄟ^本領(lǐng)域目前已知的或尚待發(fā)現(xiàn)的任何方法來獲取牙齦樣品。也就是說，本發(fā)明并不限于獲取牙齦樣品的方法。作為非限制性實(shí)例，可通過從口腔獲取口腔組織樣品而獲取牙齦樣品。通過常規(guī)牙科步驟就可獲取牙齦樣品，包括牙齦活檢物?？谇唤M織包括但不限于從口腔中獲取的成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞，以及得自牙周組織(periodontum)和牙齦的組織樣品和/或細(xì)胞樣品。技術(shù)人員將會(huì)理解在牙齦樣品中如何鑒定生物標(biāo)記，包括與牙齦樣品相關(guān)的和/ 或由牙齦樣品所分泌的生物標(biāo)記。檢測生物標(biāo)記存在情況的一種例示性方法包括獲取試驗(yàn)受試者口腔的牙齦樣品，并將所述樣品與以下化合物或物質(zhì)接觸使得在生物樣品中檢測出生物標(biāo)記核酸或由該核酸所編碼的生物標(biāo)記肽的存在情況，所述化合物或物質(zhì)能夠檢測本文所述的一種或多種生物標(biāo)記(例如MMP-9或MMP-13)，例如生物標(biāo)記核酸(例如mRNA、基因組DNA等)或由生物標(biāo)記核酸所編碼的生物標(biāo)記肽(例如肽片段或蛋白質(zhì)等)。在一個(gè)實(shí)施方案中，用于檢測生物標(biāo)記mRNA或生物標(biāo)記基因組DNA的物質(zhì)是能夠與生物標(biāo)記mRNA 或基因組DNA雜交的標(biāo)記的核酸探針。核酸探針可以是例如全長生物標(biāo)記核酸或其部分。 本文描述了用于本發(fā)明診斷測定的其它合適的探針。在另一個(gè)實(shí)施方案中，用于檢測生物標(biāo)記肽的物質(zhì)是能夠與生物標(biāo)記肽結(jié)合的抗體，例如帶有可檢測標(biāo)記的抗體?？贵w可以是多克隆或單克隆的?？墒褂猛暾贵w或其片段(例如Fab或F(ab' )2)。對(duì)于探針或抗體，術(shù)語“標(biāo)記的”意在包括通過將可檢測物與探針或抗體偶聯(lián)(即物理連接)而直接標(biāo)記該探針或抗體，以及通過與直接標(biāo)記的另一試劑的反應(yīng)而間接標(biāo)記探針或抗體。間接標(biāo)記的實(shí)例包括使用熒光標(biāo)記的第二抗體和用生物素末端標(biāo)記的DNA探針來檢測第一抗體，使其可用熒光標(biāo)記的鏈霉抗生物素來檢測。本文所用的術(shù)語“牙齦樣品”(以及術(shù)語“生物樣品”)旨在包括分離自受試者口腔的組織、細(xì)胞和生物液體，以及受試者口腔內(nèi)存在的組織、細(xì)胞和液體。唾液樣品可含有或不含與牙齦相同的某些或全部成分。也就是說，本發(fā)明的檢測方法可用于在體外生物樣品中以及體內(nèi)檢測生物標(biāo)記mRNA、肽(例如蛋白質(zhì))或基因組DNA。作為非限制性實(shí)例，用于檢測生物標(biāo)記mRNA的體外技術(shù)包括RNA雜交和原位雜交。用于檢測生物標(biāo)記肽的體外技術(shù)包括酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、蛋白質(zhì)印跡、免疫沉淀和免疫熒光。用于檢測生物標(biāo)記基因組DNA的體外技術(shù)包括DNA雜交。用于檢測生物標(biāo)記肽的體內(nèi)技術(shù)包括將標(biāo)記的抗生物標(biāo)記抗體引入受試者口腔。例如，抗體可用放射性生物標(biāo)記來標(biāo)記，所述生物標(biāo)記的存在情況和在受試者體內(nèi)的位置可通過標(biāo)準(zhǔn)成像技術(shù)來檢測。使用本領(lǐng)域現(xiàn)已知的或尚待發(fā)現(xiàn)的任何方法可定量測定生物標(biāo)記水平。也就是說，本發(fā)明并不限于定量測定生物標(biāo)記的方法。定量測定生物標(biāo)記的方法可包括本文在別處給出的用于檢測生物標(biāo)記的那些方法，或所述方法的合適的改良方法，正如技術(shù)人員將會(huì)理解的那樣。在一個(gè)實(shí)施方案中，基于ELISA的測定用于定量測定生物標(biāo)記(例如使用 PG&來定量測定IL-1B)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，基于流式細(xì)胞術(shù)的方法用于定量測定生物標(biāo)記(例如LUMINEX技術(shù)，包括基于流式細(xì)胞術(shù)和激光的檢測)。一方面，當(dāng)選自 FAS、IL-1B、IL-8, MMP-9、DEFB4、CTSS、IL-17B、CARD 10, BGN、BE、
8IL-12A、IL-6、LCN8、LP0和MMP-13的生物標(biāo)記升高到超過本領(lǐng)域認(rèn)為“正?！钡乃綍r(shí)，就診斷哺乳動(dòng)物患有牙周病。理解的是，任何給定生物標(biāo)記的“正?！彼娇梢允瞧娈愔担?qū)嶋H上可以是生物標(biāo)記的濃度范圍。生物標(biāo)記的“正?！彼骄褪墙】禒顟B(tài)相關(guān)水平，或者是沒有或基本沒有牙周病的健康狀態(tài)相關(guān)水平。這樣的數(shù)值和范圍可以是本領(lǐng)域已知的， 或者可由技術(shù)人員使用本領(lǐng)域已知方法而確定，包括但不限于對(duì)得自已知無牙周病或牙周病癥狀的哺乳動(dòng)物受試者群體的牙齦樣品進(jìn)行生物標(biāo)記檢測測定。在另一個(gè)實(shí)施方案中， 對(duì)特定哺乳動(dòng)物受試者而言，在所述哺乳動(dòng)物受試者已知無牙周病或牙周病癥狀的時(shí)候， 可測定該特定哺乳動(dòng)物受試者生物標(biāo)記的“正?！彼?范圍。生物標(biāo)記的“正?！彼?、數(shù)值或范圍可用作哺乳動(dòng)物沒有或基本沒有牙周病的預(yù)定參考值。另一方面，超過生物標(biāo)記正常值或范圍的數(shù)值可用作哺乳動(dòng)物患有牙周病的預(yù)定參考值。在一個(gè)實(shí)施方案中，在哺乳動(dòng)物中診斷牙周病的方法包括獲取所述哺乳動(dòng)物的牙齦和/或唾液樣品，檢測所述樣品中生物標(biāo)記的存在情況，檢測所述樣品中所述生物標(biāo)記的水平，并將所述樣品中的生物標(biāo)記水平與將生物標(biāo)記水平與牙周病相關(guān)聯(lián)的預(yù)定參考值進(jìn)行比較；并且當(dāng)所述樣品中的所述生物標(biāo)記水平符合其中所述參考值將生物標(biāo)記水平與牙周病相關(guān)聯(lián)的生物標(biāo)記水平時(shí)，診斷出所述哺乳動(dòng)物患有牙周病，其中所述生物標(biāo)記是選自以下的至少一個(gè)成員FAS、IL-1B、IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS、IL-17B、CARD10、BGN、BE、 IL-12A、IL-6、LCN8、LPO和MMP-13。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述牙周病是牙周炎。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述牙周病是齦炎。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在哺乳動(dòng)物中診斷牙周病的方法包括獲取所述哺乳動(dòng)物的牙齦和/或唾液樣品，檢測所述樣品中生物標(biāo)記的存在情況，檢測所述樣品中所述生物標(biāo)記的水平，將所述牙齦和/或唾液樣品中的生物標(biāo)記水平與對(duì)照樣品中同一生物標(biāo)記的水平進(jìn)行比較，其中當(dāng)相對(duì)于所述對(duì)照樣品而言，在所述牙齦和/或唾液樣品中檢測到所述生物標(biāo)記的水平改變時(shí)，診斷出所述哺乳動(dòng)物患有牙周病，其中所述生物標(biāo)記是選自以下的至少一個(gè)成員FAS、IL-1B、IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS、IL-17B、CARD10、BGN、BE、IL-12A、 IL-6、LCN8、LPO和MMP-13。一方面，牙齦和/或唾液樣品中的生物標(biāo)記水平高于對(duì)照樣品中的水平。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述牙周病是牙周炎。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述牙周病是告艮炎。本發(fā)明也提供用于在哺乳動(dòng)物中檢測牙周病的生物標(biāo)記組，其包含選自FAS、 IL-1B、IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS、IL-17B、CARD 10, BGN、BE、IL-12A、IL-6, LCN8、LPO 和 MMP-13的兩種以上生物標(biāo)記，其中所述生物標(biāo)記得自經(jīng)診斷患有牙周病的哺乳動(dòng)物的牙齦和/或唾液樣品。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述牙周病是牙周炎。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述牙周病是齦炎。本發(fā)明也包括在哺乳動(dòng)物中監(jiān)測牙周病的方法，所述方法包括在第一時(shí)間點(diǎn)獲取所述哺乳動(dòng)物的第一牙齦和/或唾液樣品，在第二時(shí)間點(diǎn)獲取所述哺乳動(dòng)物的第二牙齦和/或唾液樣品，在第一和第二樣品中檢測至少一種生物標(biāo)記的存在情況，在第一和第二樣品中檢測所述至少一種生物標(biāo)記的水平，并比較第一和第二樣品中的生物標(biāo)記水平， 其中與第一樣品相比，第二樣品中的生物標(biāo)記水平下降表明在所述哺乳動(dòng)物中牙周病減少，并且其中所述至少一種生物標(biāo)記選自FAS、IL-1B、IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS、IL-17B、CARD 10, BGN, BE、IL-12A、IL_6、LCN8、LPO和MMP-13。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述牙周病是牙周炎。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述牙周病是齦炎?！矫?，本發(fā)明的特征在于在哺乳動(dòng)物中治療牙周病的方法，其中所述哺乳動(dòng)物具有升高水平的選自以下的至少一種生物標(biāo)記FAS、IL-1B、IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS, IL-17B、CARD10、BGN、BE、IL-12A、IL-6、LCN8、LP0 和 MMP-13。正如本文在別處所述，可使用本文所公開的或本領(lǐng)域已知的任何方法來檢測一種或多種所述生物標(biāo)記超出正常的水平， 并在恰當(dāng)時(shí)使其與牙周病相關(guān)聯(lián)。因此，本發(fā)明的特征在于在患有牙周病的哺乳動(dòng)物中治療牙周病的方法，所述方法包括使細(xì)胞與減量調(diào)節(jié)選自以下的至少一種生物標(biāo)記的物質(zhì)接觸FAS、IL-1B、IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS、IL-17B、CARD10、BGN、BE、IL-12A、IL_6、LCN8、 LPO和MMP-13，其中所述生物標(biāo)記的減量調(diào)節(jié)與牙周病相關(guān)的至少一種癥狀的減輕相關(guān)。在一個(gè)實(shí)施方案中，生物標(biāo)記減量調(diào)節(jié)物質(zhì)包含在口腔組合物中，并將所述口腔組合物給予哺乳動(dòng)物以治療牙周病。在通過將口腔組合物給予至哺乳動(dòng)物口腔而治療牙周炎的方法中，可如本文別處所述地降低一種或多種生物標(biāo)記的活性?？扇绫疚膭e處所述地降低一種或多種生物標(biāo)記， 例如，如針對(duì)降低哺乳動(dòng)物口腔中MMP-9的量對(duì)降低哺乳動(dòng)物口腔中MMP-9的量所提出的。 也就是說，可在核酸和蛋白質(zhì)水平之一或兩方面上降低MMP，從而降低口腔中MMP-9的活性。類似地，正如本文別處詳細(xì)描述的，可通過對(duì)核酸和蛋白質(zhì)水平任一種或兩者的作用來實(shí)現(xiàn)MMP-9的減量調(diào)節(jié)或MMP-9水平下降。另一方面，本發(fā)明提供可用于在有需要的哺乳動(dòng)物中治療牙周病的化合物的鑒定方法，所述方法包括使細(xì)胞與試驗(yàn)化合物接觸并測定所述試驗(yàn)化合物是否減量調(diào)節(jié)一種或多種以下生物標(biāo)記FAS、IL-1B、IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS、IL-17B、CARD 10, BGN、BE、 IL-12A、IL-6、LCN8、LPO和MMP-13。至少一種生物標(biāo)記的減量調(diào)節(jié)表明該試驗(yàn)化合物可用于在患有牙周病的哺乳動(dòng)物中治療牙周病，其中所述生物標(biāo)記水平增加與牙周病相關(guān)和/ 或是牙周病的癥態(tài)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述牙周病是牙周炎。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述牙周病是齦炎。在一個(gè)實(shí)施方案中，治療牙周病的方法包括給予經(jīng)本文所述的篩選測定鑒定的物質(zhì)，或者抑制牙周病的一種或多種生物標(biāo)記的物質(zhì)的組合，其中至少一種所述物質(zhì)是經(jīng)本文所述的篩選測定鑒定的物質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供治療牙周病的方法，所述方法包括將治療有效量的抑制牙周病的物質(zhì)給予需要所述治療的受試者的步驟。如本文所定義，物質(zhì)的治療有效量(即有效劑量)范圍為0. 001至30mg/kg體重，優(yōu)選0. 01至25mg/kg體重，更優(yōu)選0. 1 至20mg/kg體重，和甚至更優(yōu)選1至10mg/kg、2至9mg/kg、3至8mg/kg、4至7mg/kg、或5至 6mg/kg體重。技術(shù)人員理解的是，某些因素可能影響有效治療受試者所需的劑量，所述因素包括但不限于疾病或病癥的嚴(yán)重程度、前期的治療、受試者的一般健康狀況和/或年齡以及所患有的其它疾病。此外，用治療有效量的抑制劑對(duì)受試者進(jìn)行治療可包括單次治療，或者優(yōu)選可包括一系列治療。也理解的是，用于治療的有效劑量可隨具體治療過程而增加或降低。可因本文所述的診斷性測定結(jié)果而導(dǎo)致劑量的改變。作為實(shí)例，可將物質(zhì)單獨(dú)給予， 作為藥物組合物的組成部分而給予，或作為口腔組合物等其它組合物的組成部分來給予。作為非限制性實(shí)例，可通過使細(xì)胞與TNF α接觸而在體外確定ΜΜΡ_9水平。在一個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)胞是單核細(xì)胞。在細(xì)胞與TNFa接觸之后，在蛋白質(zhì)水平或者核酸水平上測定MMP-9水平。一方面，也在抗菌劑存在的情況下，通過使細(xì)胞與TNF α接觸而在體外確定ΜΜΡ-9水平。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗菌劑是2，4，4’ -三氯-2’ -羥基二苯醚。在本發(fā)明的一方面，2，4，4’ -三氯_2’ -羥基二苯醚是可用于減量調(diào)節(jié)本文所提出的生物標(biāo)記的物質(zhì)。可用于測定生物標(biāo)記水平的測定包括可用于結(jié)合和/或功能活性測定等的任何測定。這類測定的實(shí)例包括但不限于基于LUMINEX的測定、抗體-抗原測定、肽裂解測定、比色測定。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，如下在體外確定經(jīng)由檢測ΜΜΡ-9水平對(duì)ΜΜΡ-9的減量調(diào)節(jié)的測定通過在抗菌劑存在的情況下，使細(xì)胞與TNFa接觸，并與通過在抗菌劑(例如2，4，4’ -三氯-2’ -羥基二苯醚)不存在的情況下，細(xì)胞與TNF α接觸而在體外確定的 ΜΜΡ-9水平進(jìn)行比較，其中實(shí)驗(yàn)條件在其它方面都是相同的。與抗菌劑不存在時(shí)相比，在抗菌劑存在時(shí)，ΜΜΡ-9蛋白質(zhì)、核酸或酶活性水平較低，表明該抗細(xì)菌化合物減量調(diào)節(jié)ΜΜΡ-9。 理解的是，可以類似方式測定本發(fā)明的其它生物標(biāo)記。另外，可使用可用于該目的的任何物質(zhì)來測定ΜΜΡ-9或任何其它生物標(biāo)記的減量調(diào)節(jié)，所述物質(zhì)包括但不限于本文在別處提出的經(jīng)鑒定可用于治療牙周炎的物質(zhì)。理解的是，可將生物標(biāo)記減量調(diào)節(jié)的體外測定與體內(nèi)效應(yīng)、觀察或結(jié)果關(guān)聯(lián)起來。 作為非限制性實(shí)例，理解的是，可將ΜΜΡ-9減量調(diào)節(jié)的體外測定與體內(nèi)效應(yīng)、觀察或結(jié)果關(guān)聯(lián)起來。一方面，體外所測的ΜΜΡ-9減量調(diào)節(jié)證實(shí)了體內(nèi)觀察，包括但不限于對(duì)牙周病的治療，在體內(nèi)降低生物標(biāo)記和/或生物標(biāo)記活性的病理性過度的方法，以及可用于治療牙周病和/或在體內(nèi)降低生物標(biāo)記和/或生物標(biāo)記活性的病理性過度的化合物的鑒定方法。參見例如Modeer等(1996) J. Clin. Periodont. ,23 :927_933。另一方面，體外所測的生物標(biāo)記減量調(diào)節(jié)預(yù)測了體內(nèi)結(jié)果，包括但不限于對(duì)牙周病的治療，在體內(nèi)降低生物標(biāo)記和/或生物標(biāo)記活性的病理性過度的方法，以及可用于治療牙周病和/或在體內(nèi)降低生物標(biāo)記和 /或生物標(biāo)記活性的病理性過度的化合物的鑒定方法?！矫?，本發(fā)明提供在有需要的哺乳動(dòng)物口腔中降低至少一種生物標(biāo)記的病理性過度的方法，所述方法包括以這樣的量將包含減量調(diào)節(jié)選自以下的至少一種生物標(biāo)記的物質(zhì)的口腔組合物給予所述哺乳動(dòng)物口腔FAS、IL-1B、IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS、IL-17B、 CARD 10, BGN、BE、IL-12A、IL_6、LCN8、LPO和MMP-13，所述量有效降低所述哺乳動(dòng)物口腔中的所述生物標(biāo)記水平，其中對(duì)所述生物標(biāo)記水平的抑制導(dǎo)致對(duì)牙周病的治療。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供在有需要的哺乳動(dòng)物口腔中減少至少一種生物標(biāo)記例如MMP-9或 MMP-13的病理性過度的方法，所述方法包括以以下量將包含2，4，4’ -三氯-2’ -羥基二苯醚的口腔組合物給予所述哺乳動(dòng)物口腔，所述量有效降低所述哺乳動(dòng)物口腔中的MMP-9或 MMP-13水平，其中對(duì)MMP-9或MMP-13水平的抑制導(dǎo)致對(duì)結(jié)締組織基質(zhì)蛋白組分過度降解的抑制?？砂凑毡疚乃岢龅亩喾N方式之一來降低口腔中的生物標(biāo)記。在一個(gè)實(shí)施方案中，正如本文在別處提出的，可通過在核酸水平減量調(diào)節(jié)生物標(biāo)記而降低口腔中的所述生物標(biāo)記。這樣的降低可導(dǎo)致一種或多種編碼生物標(biāo)記的核酸Gf^nmRNA)及表達(dá)到口腔中的生物標(biāo)記蛋白/酶的減少。正如技術(shù)人員所理解的，當(dāng)備有本文所給出的公開內(nèi)容時(shí)，可通過眾多技術(shù)中的一種或多種實(shí)現(xiàn)例如減少編碼生物標(biāo)記的mRNA。實(shí)例包括降低編碼生物標(biāo)記的mRNA的轉(zhuǎn)錄和降解/消除編碼生物標(biāo)記的mRNA。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可通過直接降低生物標(biāo)記蛋白的量而降低口腔中的生物標(biāo)記。正如技術(shù)人員所理解的，當(dāng)備有本文所給出的公開內(nèi)容時(shí)，可通過眾多技術(shù)中的一種或多種可實(shí)現(xiàn)減少生物標(biāo)記蛋白。實(shí)例包括通過小分子抑制劑的生物標(biāo)記的結(jié)合/配合，通過天然或生物來源分子的抑制，生物標(biāo)記的蛋白水解降解以及基于親和力的生物標(biāo)記從口腔中的清除等。減少生物標(biāo)記的物質(zhì)可以是本文所述的物質(zhì)，例如2，4，4’ -三氯-2’ -羥基二苯醚(三氯生)，或它可以是另一種抗菌劑。因此，本發(fā)明提供治療患有牙周病個(gè)體的方法。另一方面，本發(fā)明提供在有需要的哺乳動(dòng)物中治療牙周病的方法，所述方法包括使哺乳動(dòng)物口腔中的細(xì)胞與減量調(diào)節(jié)本文所給出的生物標(biāo)記的物質(zhì)接觸。依照本發(fā)明，生物標(biāo)記的減量調(diào)節(jié)與牙周病相關(guān)的至少一種癥狀的減少相關(guān)。一方面，通過將2，4，4’ -三氯-2’ -羥基二苯醚對(duì)生物標(biāo)記減量調(diào)節(jié)的效果與本文所給出的口腔組合物對(duì)生物標(biāo)記減量調(diào)節(jié)的效果進(jìn)行比較，確定該口腔組合物治療牙周病的能力。另一方面，通過在體外或體內(nèi)將任何口腔組合物的效果與本文所給出的口腔組合物的效果進(jìn)行比較，確定該口腔組合物治療牙周炎的能力。一方面，體外所測的生物標(biāo)記(例如金屬蛋白酶)減量調(diào)節(jié)證實(shí)了體內(nèi)觀察，包括但不限于對(duì)牙周炎的治療，在體內(nèi)降低生物標(biāo)記(例如金屬蛋白酶和/或金屬蛋白酶活性) 的病理性過度的方法，以及可用于治療牙周炎和/或在體內(nèi)降低生物標(biāo)記或生物標(biāo)記活性的病理性過度的化合物的鑒定方法。參見例如Golub等，Inflamm. Res. (1997)46:310-9， Preshaw 等，J. Clin. Periodontol. (2004)31 :697-707 ；Mantyla 等，J. Periodontal. Res. (2003) 38 :436-439 ；Lorencini 等，Histol. Histopathol. (2009) 24 157-166 ；和 Pozo 等， J. Periodontal Res. (2005)40:199-207。本發(fā)明還包括用于本發(fā)明方法的口腔組合物，例如潔齒劑。一方面，口腔組合物包含可用于治療牙周病的物質(zhì)。在一個(gè)示例性的實(shí)施方案中，所述物質(zhì)為非陽離子型抗菌劑。 參見例如美國專利號(hào)5，288, 480，其通過引用以其整體結(jié)合到本文中。非陽離子型抗菌劑在口腔組合物中存在的有效防牙斑量為0. 25-0. 35%重量，優(yōu)選0. 3%?？咕鷦┗旧鲜撬蝗苄缘模馕吨湓?5°C時(shí)在水中的溶解度小于重量并且甚至可能小于0. 1%。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗菌劑是2，4，4’ -三氯-2’ -羥基二苯醚。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗菌劑是強(qiáng)力霉素。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述口腔組合物包含兩種或更多種抗菌劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述口腔組合物包含并非抗菌劑的物質(zhì)，并且可包含或不含作為抗菌劑的一種或多種額外物質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗細(xì)菌增強(qiáng)劑(AEA)增強(qiáng)了抗菌劑向口腔表面的遞送和滯留。一方面，AEA包含粘合材料。參見美國專利號(hào)5，觀8，480關(guān)于對(duì)可用于本發(fā)明AEA材料材料和組合物的描述以及關(guān)于可用于本發(fā)明的口腔組合物例如潔齒劑組合物的一般性描述。作為非限制性實(shí)例，組合物中的粘合材料是數(shù)均分子量介于100，000與2，500，000之間(包括端值)的聚合物。一方面，粘合材料選自以下聚合物聚乙烯膦酸、聚(ι-膦酰丙烯)磺酸、聚(β苯乙烯膦酸)、α苯乙烯膦酸、合成陰離子型聚合聚羧酸鹽、馬來酸酐、馬來酸和甲基乙烯醚。另一方面，粘合分子是甲基乙烯醚和馬來酸酐的聚合物。本文所用的“遞送增強(qiáng)基團(tuán)”是指這樣的基團(tuán)其將AEA (攜帶抗菌劑)附著于或者實(shí)質(zhì)上粘附地、膠著地或以其它方式結(jié)合到口腔(例如牙齒和牙齦)表面，由此將抗菌劑 “遞送”到這樣的表面。在另一個(gè)實(shí)施方案中，“遞送增強(qiáng)基團(tuán)”是指這樣的基團(tuán)其任選將并非抗菌劑的物質(zhì)附著或者實(shí)質(zhì)上、粘附地、膠著地或以其它方式結(jié)合到口腔表面，由此將抗菌劑“遞送”到這樣的表面。在又一個(gè)實(shí)施方案中，“遞送增強(qiáng)基團(tuán)”將至少一種抗菌劑和至少一種非抗菌劑遞送到牙齒。有機(jī)滯留增強(qiáng)基團(tuán)(通常是疏水性的)將物質(zhì)和/或抗菌劑附著或以其它方式結(jié)合到AEA上，從而促進(jìn)抗菌劑滯留在AEA和間接滯留在口腔表面。在某些情況下，抗菌劑的附著通過其被AEA物理捕獲而發(fā)生，尤其是當(dāng)AEA是交聯(lián)聚合物時(shí)， 其結(jié)構(gòu)固有地提供了用于這類捕獲的更多位點(diǎn)。在交聯(lián)聚合物中的更高分子量、更高疏水性交聯(lián)部分的存在也進(jìn)一步促進(jìn)將抗菌劑物理捕獲到交聯(lián)AEA聚合物上或促進(jìn)交聯(lián)AEA聚合物對(duì)抗菌劑的物理捕獲。在示例性的潔齒劑中，含有口腔可接受的溶媒，包括具有保濕劑的水相。水的含量一般為至少3%重量，通常為3-35%，而保濕劑(優(yōu)選甘油和/或山梨醇)一般總量占潔齒劑重量的6. 5-75 %或80 %，更一般為10-75 %。盡管并非本發(fā)明所必需，其中0-25-0. 35 % 水不溶性非陽離子型抗菌劑任選存在，可將有助于抗菌劑在唾液中溶解的額外成分摻入水濕潤性溶媒中。這樣的任選增溶劑包括濕潤性多元醇，例如丙二醇、二丙二醇和己二醇；溶纖劑，例如甲基溶纖劑和乙基溶纖劑；在直鏈中含有至少12個(gè)碳的植物油和蠟，例如橄欖油、蓖麻油和凡士林；以及酯類，例如乙酸戊酯、乙酸乙酯和苯甲酸芐酯。本文所用的“丙二醇”包括1，2_丙二醇和1，3_丙二醇。應(yīng)避免大量聚乙二醇，尤其是分子量在600以上的聚乙二醇，因?yàn)榫垡叶加行б种品顷栯x子型抗菌劑的抗菌活性。例如，當(dāng)聚乙二醇(PEG)600 與三氯生的重量比為25份三氯生1份PEG 600時(shí)，聚乙二醇(PEG) 600降低三氯生的抗菌活性至主要不含聚乙二醇的三氯生抗菌活性的1/10-20?？谇唤M合物的pH范圍通常為4. 5-10，而另一方面，6. 5-7. 5。值得注意的是，本發(fā)明組合物可在PH小于5時(shí)口腔施用，而基本不會(huì)使牙釉質(zhì)脫鈣或以其它方式遭到破壞。pH 可用酸(例如檸檬酸或苯甲酸)或堿(例如氫氧化鈉)來控制或者緩沖(例如用檸檬酸鈉、 苯甲酸鈉、碳酸鈉或碳酸氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉等)。任何摩擦微粒都可使用并可選自碳酸氫鈉、磷酸鈣(例如磷酸鈣二水合物)、硫酸鈣、沉淀的碳酸鈣、二氧化硅(例如水合二氧化硅)、氧化鐵、氧化鋁、珍珠巖、塑料顆粒例如聚乙烯、及其組合。具體地講，摩擦劑可選自磷酸鈣(例如磷酸氫鈣二水合物)、硫酸鈣、沉淀的碳酸鈣、二氧化硅(例如水合二氧化硅)、焦磷酸鈣和組合。任何類型的二氧化硅都可使用，例如沉淀的二氧化硅或硅膠。優(yōu)選的是市售二氧化硅，例如INEOS AC43，可得自Ineos Silicas, Warrington, United Kingdom。其它摩擦劑也可依據(jù)本發(fā)明使用。正如美國專利號(hào)4，358，437所述，呈摩擦劑形式的碳酸鈣的粉末形式構(gòu)成這些摩擦劑中的重要一類。這些摩擦劑是實(shí)例的磨碎的石灰石或大理石、白堊例如文石、方解石或其混合物、以及合成的沉淀的白堊例如供水系統(tǒng)白堊(waterworks chalk)。通常，碳酸鈣的重量中位粒徑應(yīng)小于 40微米，優(yōu)選小于15微米。第二類摩擦劑是粉狀二氧化硅，尤其是美國專利號(hào)3，538，230 中定義的二氧化硅干凝膠(silica xerogel)。硅基成分可包括平均粒度為1_100 μ m的二氧化硅顆粒，包括該范圍內(nèi)的任何具體粒度。在一個(gè)實(shí)施方案中，口腔組合物任選包含硅質(zhì)拋光劑。拋光劑可以是硅質(zhì)材料 (例如水合硅膠、二氧化硅干凝膠)或復(fù)雜無定形堿金屬硅鋁酸鹽或硅鋯酸鹽或沉淀的二氧化硅。膠態(tài)二氧化硅材料包括以商標(biāo)SYLOID出售的材料，例如以商標(biāo)SYLOID 72和 SYLOID 74出售的材料。沉淀的二氧化硅包括以商標(biāo)RODENT例如RODENT 113和RODENT 115和RODENT 119出售的那些?？谇唤M合物可以0-36%的量包含硅質(zhì)拋光劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，口腔組合物可以0. 01-36%的量包含硅質(zhì)拋光劑。在不受藉此達(dá)到本發(fā)明優(yōu)勢(shì)的理論所束縛的情況下，據(jù)信甚至在抗菌劑(例如2， 4，4’_三氯-2’-羥基二苯醚)的特定增溶材料不存在時(shí)，當(dāng)物質(zhì)的量為0. 25% -0. 35%重量且存在聚羧酸鹽時(shí)，存在足夠的物質(zhì)以通過減量調(diào)節(jié)MMP-8、MMP_9或MMP-13中的至少一種實(shí)現(xiàn)對(duì)牙周炎的治療。這同樣適用于本文所述的其它水不溶性非陽離子型抗菌劑?？谇唤M合物(例如潔齒劑)也可含有以下量的氟化物離子源或提供氟的成分作為防齲劑，所述量足以提供25ppm至5，OOOppm氟化物離子。這些化合物可微溶于水或者可以完全溶于水。它們的特征在于其在水中釋放氟化物離子的能力和基本上不與口腔制劑中的其它化合物發(fā)生不需要的反應(yīng)。在這些材料中的是無機(jī)氟化物鹽類，例如可溶性堿金屬鹽、堿土金屬鹽或者例如氟化鈉、氟化鉀、氟化銨、氟化鈣、氟化銅例如氟化亞銅、氟化鋅、氟化鋇、氟硅酸鈉、氟硅酸銨、氟鋯酸鈉、氟鋯酸銨、單氟磷酸鈉、單氟磷酸鋁、二氟磷酸鋁和氟化焦磷酸鈉鈣。堿金屬和錫的氟化物，例如氟化鈉、氟化亞錫、單氟磷酸鈉(MFP)及其混合物是優(yōu)選的。通常，就堿金屬氟化物而言，該成分以至多2%重量(基于制劑重量)，優(yōu)選 0. 的量存在。就單氟磷酸鈉而言，該化合物可以0. 1-3%的量存在，而在一個(gè)實(shí)施方案中，以0. 7-0. 8%的量存在。一方面，組合物還包含選自以下的物質(zhì)亞錫離子作用劑；含氟化合物；氟化鈉； 氯己定；阿來西定；海克替啶；血根堿；苯扎氯銨；水楊苯胺；度米芬；氯化十六烷基吡啶鍋t (CPC)；氯化十四烷基吡啶餘〗(TPC)；氯化N-十四烷基-4-乙基吡啶鍋t (TDEPC)；奧替尼啶； 地莫匹醇；辛哌醇；乳鏈菌肽；鋅離子作用劑；銅離子作用劑；精油；呋喃酮類；細(xì)菌素、月桂酰精氨酸乙酯、木蘭提取物、金屬離子源、精氨酸碳酸氫鹽、和厚樸酚(honokiol)、厚樸酚 (magonol)、熊果酸、松蘿酸、桑色素、沙棘提取物、過氧化物、酶、山茶提取物、黃酮類、黃烷、 鹵化二苯醚、肌酸和蜂膠。
實(shí)施例以下實(shí)施例進(jìn)一步描述了本發(fā)明。所述實(shí)施例僅僅是說明性的并且不得以任何方式限制所述的和要求保護(hù)的本發(fā)明范圍。實(shí)施例1 :MMP-9的制備和表征U937 細(xì)胞和 RPMI 1640 培養(yǎng)基得自 ATCC。人 MMP-9ELISA Kit (QUANTIKINE)得自 R&D Systems。胎牛血清(FBS)得自VWR，青霉素-鏈霉素溶液和腫瘤壞死因子α (TNFa) 得自Sigma。將人白血病U937單核細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞培養(yǎng)在補(bǔ)充有10% FBS和青霉素-鏈霉素溶液的RPMI 1640培養(yǎng)基中。將細(xì)胞在37°C在加濕并含有5% C02和95%空氣的氣氛中孵育。處理之前，將細(xì)胞移至含F(xiàn)BS的RPMI中過夜。將細(xì)胞接種到48孔板中。細(xì)胞培養(yǎng)基包含TNFa O50ng/mL)、三氯生(Ippm)、或者同時(shí)包含這兩種物質(zhì)或兩種物質(zhì)都不含(對(duì)照)。處理之后，將細(xì)胞孵育M小時(shí)。收集條件培養(yǎng)基并貯存于-80°C直到進(jìn)行分析。按照市售ELISA方案(圖1)，對(duì)條件培養(yǎng)基樣品進(jìn)行針對(duì)MMP-9的酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)。用TNF α刺激的U937細(xì)胞產(chǎn)生增加水平的ΜΜΡ-9。Ippm的三氯生在TNF α刺激的U937細(xì)胞中顯著降低ΜΜΡ-9水平。表1 圖1的數(shù)據(jù)，表明三氯生對(duì)ΜΜΡ-9生成的影響。
權(quán)利要求
1.一種可用于治療口腔疾病或病況的化合物的鑒定方法，所述方法包括獲取患有口腔疾病或病況的哺乳動(dòng)物的第一牙齦樣品；獲取所述哺乳動(dòng)物口腔的第二牙齦樣品；使所述第一樣品與試驗(yàn)化合物接觸；使所述第二樣品與陽性對(duì)照接觸，其中所述陽性對(duì)照是已知減量調(diào)節(jié)一種或多種生物標(biāo)記表達(dá)的化合物；檢測所述試驗(yàn)化合物減量調(diào)節(jié)一種或多種所述生物標(biāo)記表達(dá)的程度；檢測所述陽性對(duì)照減量調(diào)節(jié)一種或多種所述生物標(biāo)記表達(dá)的程度；和將所述試驗(yàn)化合物減量調(diào)節(jié)一種或多種所述生物標(biāo)記表達(dá)的程度，與所述陽性對(duì)照減量調(diào)節(jié)一種或多種所述生物標(biāo)記表達(dá)的程度進(jìn)行比較；其中減量調(diào)節(jié)一種或多種所述生物標(biāo)記表達(dá)的程度等于或大于所述陽性對(duì)照的試驗(yàn)化合物，是可用于治療口腔疾病或病況的化合物。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述一種或多種生物標(biāo)記選自FAS、IL-1B、IL_8、MMP-9、 DEFB4、CTSS、IL-17B、CARD 10, BGN、BE、IL-12A、IL-6、LCN8、LPO 和 MMP-13。
3.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述陽性對(duì)照減量調(diào)節(jié)以下生物標(biāo)記的表達(dá)FAS、 IL-1B、IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS、IL-17B、CARD 10, BGN、BE、IL-12A、IL-6, LCN8、LPO 和 MMP-13ο
4.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中所述口腔疾病或病況是齦炎或牙周炎。
5.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中所述陽性對(duì)照是鹵化二苯醚。
6.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中所述陽性對(duì)照是三氯生。
7.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中所述試驗(yàn)化合物減量調(diào)節(jié)一種或多種所述生物標(biāo)記表達(dá)的程度大于所述陽性對(duì)照。
8.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中所述試驗(yàn)化合物減量調(diào)節(jié)以下生物標(biāo)記表達(dá)的程度大于所述陽性對(duì)照FAS、IL-1B、IL-8、MMP-9、DEFB4、CTSS、IL-17B、CARD 10, BGN、BE、 IL-12A、IL-6、LCN8、LPO 和 MMP-13
9.權(quán)利要求2的方法，其中所述陽性對(duì)照減量調(diào)節(jié)MMP-9的表達(dá)。
10.權(quán)利要求2的方法，其中所述陽性對(duì)照減量調(diào)節(jié)MMP-13的表達(dá)。
全文摘要
本文描述了可用于治療口腔疾病或病況的化合物的鑒定方法。
文檔編號(hào)G01N33/569GK102549432SQ201080015874
公開日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2010年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月1日
發(fā)明者H·M·特里維迪, 徐韜, 楊英 申請(qǐng)人:高露潔-棕欖公司