專利名稱：在患有呼吸困難的對(duì)象中檢測(cè)細(xì)菌感染的制作方法
在患有呼吸困難的對(duì)象中檢測(cè)細(xì)菌感染本發(fā)明的領(lǐng)域是在患有呼吸困難的對(duì)象中對(duì)細(xì)菌感染的診斷和/或預(yù)測(cè)和/或后續(xù)治療。本發(fā)明的主題是提供用于在患有呼吸困難的對(duì)象中對(duì)細(xì)菌感染進(jìn)行診斷和/或預(yù)測(cè)和/或后續(xù)治療的方法。心力衰竭(HF)是常見的、與高發(fā)病率和死亡率相關(guān)的、并且難以診斷的，在急診科(ED)尤其如此(Cheland等《歐洲心力衰竭調(diào)查方案在歐洲的心力衰竭患者中對(duì)于護(hù)理質(zhì)量的調(diào)查〉〉(The EuroHeartFailure survey programme-a survey on the quality of care amongpatients with heart failure in Europe).《部分 1 患者白勺特征禾口診斷》(Parti :patient characteristics and diagnosis). Eur Heart J 2003,24 :442-63 ； Mosterd Α. , Hoes Α. W.:《)1>力|立f 白勺I臨;^ ^ (Clinicalepidemiology of heart failure). Heart 2007,93 :1137-46)。呼吸困難是大多數(shù)HF患者的主要癥狀。相應(yīng)地，這些患者的主要風(fēng)險(xiǎn)是可能存在的細(xì)菌感染。遺憾的是，病歷和體格檢查都不能準(zhǔn)確地區(qū)分由HF所致的呼吸困難與由其它原因如肺部疾病所致的呼吸困難(Mueller C.等《充血性心力衰竭的急診診斷體征和癥狀的影響》(Emergency diagnosis ofcongestive heart failure impact of signs and symptoms). Can J Cardiol2005,21 :921-4 ；Wang C. S. ^ 《急診科的這名呼吸困難患者患有充血性心力衰竭嗎？》(Does this dyspneic patient in the emergency departmenthave congestive heart failure ？ )JAMA 2005,294: 1944-56)。然而，準(zhǔn)確的診斷對(duì)于大多數(shù)適當(dāng)治療的選擇來說是必須的。降鈣素原(PCT)已成為大家接受的用于敗血癥診斷的生物標(biāo)志物PCT反映了細(xì)菌感染的嚴(yán)重度，且特別地用于監(jiān)測(cè)感染向敗血癥、嚴(yán)重?cái)⊙Y、或敗血性休克的進(jìn)展。使用PCT來測(cè)量全身炎癥反應(yīng)的活性、控制治療的成功、以及估計(jì)預(yù)后是可能的(Assicot M等《敗血癥和感染患者中的高血清降鈣素原濃度》(High serum procalcitoninconcentrations in patients with sepsis and infection.) Lancet 1993,341 :515-8 ；Clec' h C等《降鈣素原在敗血性休克患者中的診斷和預(yù)后價(jià)值》 (Diagnostic and prognostic value of procalcitonin in patients withseptic shock). Crit Care Med 2004 ；32 :1166-9 ；Lee YJ 等《降鈣素原(PCT)水平、動(dòng)脈血中酮體比率(AKBR)、APACHEIII評(píng)分、以及多器官功能障礙評(píng)分(MODS)在全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)中的預(yù)測(cè)性比較》(Predictive comparisons of procalcitonin (PCT) level, arterial ketone bodyratio(AKBR),APACHE III score and multiple organ dysfunction score(MODS)in systemic inflammatory response syndrome(SIRS)), Yonsei MedJ 2004,45,29-37 ；Meisner Μ.:《敗血癥的生物標(biāo)志物在臨床上有用嗎？》(Biomarkers of sepsis :clinically useful ？ )Curr Opin Crit Care 2005,11,473-480 ；Wunder C 等 《IL-6、IL-10、以及PCT的血漿濃度對(duì)于嚴(yán)重?cái)⊙Y的后果預(yù)測(cè)來說可靠嗎？與APA CHE III 禾口 SAPS II 的對(duì)比》(AreIL-6，IL-10 and PCT plasma concentrations reliable for outcomeprediction in severe sepsis ？ A comparison with APACHE III and SAPS II). Inflamm Res 2004，53，158-163)。在敗血癥患者中PCT水平的增加與死亡相關(guān)(Oberhoffer M等《在敗血癥患者中通過傳統(tǒng)和新的炎癥標(biāo)志物進(jìn)行的后果預(yù)測(cè)》(Outcome predictionby traditional and new markers ofinflammation in patients with sepsis). Clin Chem Lab Med 1999 ；37 :363-368)。為數(shù)越來越多的研究討論了 PCT在其它感染性疾病如肺炎、細(xì)菌性腦膜炎、 以及瘧疾中的潛在作用(Bugden SA, Coles C, Mills⑶.《在持續(xù)性腦膜炎球菌流行病期間降鈣素原在發(fā)燒青壯年的急診科管理中的潛在作用》(The potential role of procalcitonin in the emergencydepartment management of febrile young adults during a sustainedmeningococcal epidemic). Emerg Med Australas 2004，16，114-119 ; Chiwakata CB等《降鈣素原在惡性瘧原蟲致瘧癥的患者中作為疾病嚴(yán)重度和死亡風(fēng)險(xiǎn)的 ^ ))(procalcitonin as a parameter of diseaseseverity and risk of mortality in patients with Plasmodium falciparummalaria). J Infect Dis 2001，183，1161-1164 ； Schwarz S等《細(xì)菌性腦膜炎中的血清降鈣素原水平》(Serum procalcitonin levels in bacterial and abacterial meningitis)，Crit Care Med 2000，28，1828-1832)。期望在本技術(shù)領(lǐng)域中能夠?qū)υ诔踉\日時(shí)單獨(dú)使用PCT無法檢測(cè)到的細(xì)菌感染或敗血癥進(jìn)行預(yù)測(cè)。選擇> 0. lng/ml的PCT水平作為細(xì)菌感染或敗血癥存在的臨界值 (cut-off)O已知患者體液中的新蝶呤濃度的升高與細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)在其中發(fā)揮作用的疾病相關(guān)。在免疫反應(yīng)的進(jìn)程中產(chǎn)生了 Y干擾素，且其刺激了新蝶呤的產(chǎn)生和釋放。(Fuchs D.等.《新蝶呤作為細(xì)胞免疫反應(yīng)標(biāo)志物的生化和臨床應(yīng)用》(Neopterin，biochemistry and clinical use as amarker for cellular immune reactions). Int Arch Allergy Immunol 1993,101:1-6)。新蝶呤的測(cè)定反映了在不同疾病的初始和后續(xù)階段期間細(xì)胞免疫系統(tǒng)的激活狀態(tài)，且具有重要的意義。在人類體液中新蝶呤水平的測(cè)定提供了用于監(jiān)測(cè)與細(xì)胞介導(dǎo)免疫的激活相關(guān)的疾病的有用創(chuàng)新工具。新蝶呤的實(shí)驗(yàn)室測(cè)定在自身免疫病和免疫刺激治療監(jiān)測(cè)中有價(jià)值，同樣其亦有助于HIV感染的預(yù)后以及獻(xiàn)血者樣本的篩查(Murr C.等《新蝶呤作為免疫系統(tǒng)激活的標(biāo)志物》(Neopterin as a marker for immunesystem activation). Curr Drug Metab 2002，3:175_87)。新蝶呤是細(xì)胞免疫系統(tǒng)激活的常規(guī)標(biāo)志物。本發(fā)明的主題是在患有呼吸困難的對(duì)象中對(duì)細(xì)菌感染進(jìn)行診斷和/或預(yù)測(cè)和/或后續(xù)治療的體外方法，其包含新蝶呤與一種或多種心血管或神經(jīng)體液或細(xì)胞因子標(biāo)志物的組合使用。特別優(yōu)選的是用于在患有呼吸困難的對(duì)象中對(duì)細(xì)菌感染進(jìn)行預(yù)測(cè)、或用于在患有呼吸困難的對(duì)象中對(duì)細(xì)胞感染進(jìn)行預(yù)后、和/或后續(xù)預(yù)測(cè)或預(yù)后的所述體外方法。本發(fā)明的優(yōu)選主題是在患有呼吸困難的對(duì)象中對(duì)細(xì)菌感染進(jìn)行預(yù)測(cè)、或在患有呼吸困難的對(duì)象中對(duì)細(xì)胞感染進(jìn)行預(yù)后、和/或后續(xù)預(yù)測(cè)或預(yù)后的體外方法，其包含組合使用作為標(biāo)志物的新蝶呤與選自如下的一種或多種標(biāo)志物細(xì)胞因子以及心血管標(biāo)志物或神經(jīng)體液標(biāo)志物或其前體或片段或所述前體的片段。對(duì)于上述方法來說，可對(duì)所述對(duì)象進(jìn)行樣本采集以測(cè)定各個(gè)標(biāo)志物。在涉及預(yù)后或預(yù)測(cè)的體外方法中，在從所述對(duì)象取樣時(shí)，所述對(duì)象不具有細(xì)菌感
^fe O如果取自對(duì)象的選自血液、血清、以及血漿的樣本中降鈣素原的濃度等于或小于0. lng/ml的話，則認(rèn)為所述對(duì)象不具有細(xì)菌感染。用于測(cè)定樣本中降鈣素原水平的分析在本技術(shù)領(lǐng)域中是公知的。根據(jù)本發(fā)明，出乎意料地顯示了，與現(xiàn)有技術(shù)狀態(tài)對(duì)患有呼吸困難的對(duì)象中細(xì)菌感染的診斷和/或預(yù)測(cè)和/或后續(xù)治療相比，新蝶呤與一種或多種心血管或神經(jīng)體液或細(xì)胞因子標(biāo)志物的組合可顯著地增強(qiáng)對(duì)所述對(duì)象中細(xì)胞感染的診斷和/或預(yù)測(cè)和/或后續(xù)治療的效率。新蝶呤與一種或多種心血管或神經(jīng)體液或細(xì)胞因子標(biāo)志物的組合在所有涉及預(yù)后和預(yù)測(cè)的方法中尤其有效。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的體外方法包含在取自所述對(duì)象的樣本中測(cè)定新蝶呤和所述一種或多種心血管標(biāo)志物的水平。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的體外方法包含使用一種或多種免疫分析在取自所述對(duì)象的樣本中測(cè)定新蝶呤和所述一種或多種心血管標(biāo)志物的水平。根據(jù)本發(fā)明，所述樣本可優(yōu)選地選自血液樣本、血清樣本、以及血漿樣本。在本發(fā)明的一個(gè)方面中，所述一種或多種心血管標(biāo)志物選自MR-proADM、 MR-proANP、CT-ProET-U CT-proAVP, BNP和NT-proBNP及其片段和/或其前體或所述前體的至少12個(gè)氨基酸的片段。根據(jù)本發(fā)明的體外方法可包含使新蝶呤的水平與所述一種或多種心血管標(biāo)志物相關(guān)聯(lián)，并基于所述關(guān)聯(lián)的結(jié)果來確定是否所述患者患有細(xì)菌感染。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)菌感染表現(xiàn)為肺炎。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)菌感染表現(xiàn)為敗血癥。敗血癥的一個(gè)癥狀可以是氣促，這在本技術(shù)領(lǐng)域中是公知的 (Bozkurt 和 Mann 2003，Circulation, 108，ell_el3，第二頁(yè)右列，行 5ff)。在根據(jù)本發(fā)明的體外方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，新蝶呤的臨界值(cutoff value)是
>10nmol/l 的水平。在根據(jù)本發(fā)明的體外方法的特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，MR-proADM的臨界值為
>lnmol/1、CT-proAVP 的臨界值為 > 10pmol/l、CT-proET-1 的臨界值為 > 100pmol/l、 MR-proANP的臨界值為> 100pmol/l、NT-proBNP的臨界值為> 600pg/ml、以及BNP的臨界值為 > 280pg/ml。本發(fā)明的另一個(gè)主題是使用測(cè)定樣本中新蝶呤和一種或多種心血管標(biāo)志物的水平的分析、或測(cè)定新蝶呤水平的分析連同測(cè)定一種或多種心血管標(biāo)志物水平的一種或多種分析來檢測(cè)細(xì)菌感染。本發(fā)明的另一個(gè)主題是用于在患有呼吸困難的患者中檢測(cè)細(xì)菌感染的上文中所說明的應(yīng)用。本發(fā)明的另一個(gè)主題是用于檢測(cè)細(xì)菌感染的上文中所說明的應(yīng)用，其中所述細(xì)菌感染表現(xiàn)為肺炎。本發(fā)明的另一個(gè)主題是用于檢測(cè)細(xì)菌感染的上文中所說明的應(yīng)用，其中所述細(xì)菌感染表現(xiàn)為敗血癥。在用于檢測(cè)細(xì)菌感染的上述應(yīng)用的優(yōu)選實(shí)施方案中，新蝶呤的臨界值為> 10nmol/l的水平。根據(jù)所述應(yīng)用的所述一種或多種心血管標(biāo)志物優(yōu)選地選自MR-proADM、MR-proANP、CT-ProET-l、CT-proAVP、BNPJP / 或 NT-proBNP 和 / 或其前體或所述前體的至少12個(gè)氨基酸的片段。優(yōu)選地，MR-proADM的臨界值為 > lnmol/1、CT-proAVP 的臨界值為 > 10pmol/l、 CT-proET-1 的臨界值為> 100pmol/l、MR-proANP 的臨界值為> 100pmol/l、NT-proBNP 的臨界值為> 600pg/ml、以及BNP的臨界值為> 280pg/ml。如表1中所示，就比值比(odds ratio)來說，作為標(biāo)志物的新蝶呤(> lOnmol/1) 與 MR-proADM、CT-proET-l、CT-proAVP、MR-proANP、BNP、或 NT-proBNP 的組合導(dǎo)致了在患有呼吸困難的對(duì)象中對(duì)細(xì)菌感染的診斷和/或預(yù)測(cè)和/或后續(xù)治療的顯著增加的效率(參見表1)。新蝶呤與選自細(xì)胞因子和心血管標(biāo)志物或神經(jīng)體液標(biāo)志物或其前體或片段或所述前體的片段的組合，尤其是作為標(biāo)志物的新蝶呤與選自MR-proADM、MR-proANP、 CT-proET-1、CT-proAVP、BNP,以及NT-proBNP和/或其片段和/或其前體或所述前體的具有至少12個(gè)氨基酸的片段的一種或多種標(biāo)志物的組合在涉及預(yù)測(cè)和預(yù)后的根據(jù)本發(fā)明的方法中特別有效，參見表2。表2中所示的值基于與表1中所示的值相同的原始數(shù)據(jù)。根據(jù)表2所挑選的臨界值導(dǎo)致了對(duì)于所有標(biāo)志物和標(biāo)志物組合來說基本上相同的陰性預(yù)測(cè)值， 而與單獨(dú)的新蝶呤相比,新蝶呤與 MR-proADM、MR-proANP、CT-proET-1、CT-proAVP、BNP、或 NT-proBNP的組合的陽性預(yù)測(cè)值顯著增加。因此，相應(yīng)地獲得的陽性預(yù)測(cè)值表明了所述標(biāo)志物與所述標(biāo)志物組合的預(yù)后能力。如可在表2中看出的，所述標(biāo)志物組合的預(yù)測(cè)能力高于單獨(dú)作為標(biāo)志物的新蝶呤。當(dāng)考慮比值比或相對(duì)比值比時(shí)，所述標(biāo)志物組合的預(yù)測(cè)能力也可以從表1中獲得。根據(jù)表1計(jì)算出的靈敏度和特異性不能完全表示預(yù)測(cè)能力，因?yàn)殪`敏度和特異性都是可變的。診斷性分析或分析或免疫分析可以是在診斷學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用的任何類型，其包括但不限于基于如下的分析方法-酶促反應(yīng)-發(fā)光-熒光-放射化學(xué)優(yōu)選的檢測(cè)方法包含試紙條測(cè)試(strip tests)、放射性免疫分析、化學(xué)發(fā)光-和熒光-免疫分析、免疫印跡分析、酶聯(lián)免疫分析(ELISA)、液相芯片基珠陣列 (Luminex-based bead array)、以及蛋白質(zhì)微陣列分析。分析類型還可以是微量滴定板基、芯片基(chip-based)、珠基的，其中生物標(biāo)志物蛋白可以附著在表面上或在溶液中。所述分析可以是同質(zhì)性或異質(zhì)性分析、競(jìng)爭(zhēng)性和非競(jìng)爭(zhēng)性分析。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述分析的形式是夾心式分析(sandwichassay)，其是非競(jìng)爭(zhēng)性免疫分析，其中將待檢測(cè)和/或量化的分子與第一抗體以及第二抗體結(jié)合。所述第一抗體可以與固相如珠子、孔或其它容器的表面、芯片或試紙條結(jié)合，且第二抗體是例如使用染料、放射性同位素、或反應(yīng)性或催化活性部分標(biāo)記的抗體。然后通過適當(dāng)?shù)姆椒▉頊y(cè)量與分析物結(jié)合的標(biāo)記抗體的量。與“夾心式分析”相關(guān)的常規(guī)組合物和程序是已為大家接受的，且是專業(yè)人員所了解的。(《免疫分析手冊(cè)》(The Immunoassay Handbook), David Wild 編輯，ElsevierLTD, Oxford ；第三版.(2005 年 5 月)，ISBN-13 978-0080445267 ；Hultschig C 等，Curr Opin Chem Biol. 2006 年 2 月；10(1) :4_10· PMID 16376134，遇過參考被納入本文)。在本發(fā)明的情況中，捕獲分子是可用于結(jié)合來自樣本的靶分子或目標(biāo)分子、即分析物(在本發(fā)明的情況中即為心血管肽)的分子。因此捕獲分子必須要在空間上并且根據(jù)表面特征如表面電荷、疏水性、親水性、lewis供體和/或受體的存在或缺乏來進(jìn)行充分的塑造以特異性地與靶分子或目標(biāo)分子結(jié)合。在此，所述結(jié)合可以例如通過如下進(jìn)行調(diào)節(jié)離子、范德華 (van-der-ffaals), π - ji、σ - π、疏水或氫鍵相互作用、或捕獲分子與靶分子或目標(biāo)分子之間兩種以上上述相互作用的組合。在本發(fā)明的情況中，捕獲分子可例如選自核酸分子、碳水化合物分子、PNA分子、蛋白質(zhì)、抗體、肽、或糖蛋白。優(yōu)選地，捕獲分子是抗體，包括對(duì)靶或目標(biāo)分子具有充分親和力的其片段，并且包括重組抗體或重組抗體片段、以及所述抗體以化學(xué)和/或生化方法修飾的衍生物或來源于變異鏈的長(zhǎng)度為至少12個(gè)氨基酸的其片段。在本發(fā)明的含義中，樣本可以是生物流體如淋巴液、尿、腦脊液、血液、血清、血漿、 唾液、糞便、精液。所述樣本采集自患者或接受根據(jù)本發(fā)明的診斷。在適當(dāng)?shù)那闆r下，樣本在應(yīng)用于本發(fā)明之前可能需要被均質(zhì)化、或使用溶劑提取以便獲得液體樣本。在此，液體樣本可以是溶液或懸浮液。在應(yīng)用于本發(fā)明之前可對(duì)液體樣本進(jìn)行一種或多種預(yù)處理。這類預(yù)處理包括但不限于稀釋、過濾、離心、濃縮、沉降、沉淀、透析。預(yù)處理還可包括向溶液中添加化學(xué)或生化物質(zhì)，例如酸、堿、緩沖劑、鹽、溶劑、活性染料、去垢劑、乳化劑、螯合劑。在本發(fā)明的含義中，除非另有說明，否則可將“患者”或“對(duì)象”理解為是所有的人， 無論他們是否表現(xiàn)出病理改變。在本發(fā)明的含義中，采集自細(xì)胞、組織、器官等的任何樣本都可以是待診斷的患者樣本。在優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的患者是人。在本發(fā)明的更優(yōu)選的實(shí)施方案中，患者是患有呼吸困難的人。在本發(fā)明中，術(shù)語預(yù)測(cè)表示對(duì)象(例如患者)的健康狀況將如何進(jìn)展的預(yù)后。這可包括對(duì)所述對(duì)象的康復(fù)幾率或不良后果幾率的估計(jì)。診斷和/或預(yù)后測(cè)試的靈敏度和特異性不僅取決于所述測(cè)試的分析“質(zhì)量”，它們還取決于是什么構(gòu)成了異常結(jié)果的定義。實(shí)際上，接受者操作特征曲線(R0C曲線)典型地通過將變量值相對(duì)于其在“正?！?即表觀健康的)和“患病”人群(即患有細(xì)菌感染的患者)中的相對(duì)頻率進(jìn)行作圖來計(jì)算。對(duì)于任何特定的標(biāo)志物來說，有和沒有患病的對(duì)象的標(biāo)志物水平的分布將可能會(huì)重疊。在這樣的情況下，測(cè)試不會(huì)以100%的精確度來絕對(duì)地區(qū)分正常與患病的，且重疊的區(qū)域表明在那里測(cè)試不能區(qū)分正常與患病的。挑選一個(gè)閾值， 高于其(或低于其，取決于標(biāo)志物如何隨著疾病而改變)則認(rèn)為測(cè)試是異常的，且低于其則認(rèn)為測(cè)試是正常的。ROC曲線下面積是對(duì)觀察到的測(cè)量結(jié)果將可以正確鑒別病況的概率的度量。甚至當(dāng)測(cè)試結(jié)果不一定會(huì)給出精確數(shù)值時(shí)也可以使用ROC曲線。只要人們可以對(duì)結(jié)果進(jìn)行等級(jí)評(píng)定，則人們就可以創(chuàng)建ROC曲線。例如，“患病”樣本的測(cè)試結(jié)果可以根據(jù)程度(例如1 =低、2 =正常、以及3 =高)來評(píng)定等級(jí)。這一等級(jí)評(píng)定可以與“正?！比巳褐械慕Y(jié)果以及創(chuàng)建的ROC曲線相關(guān)聯(lián)。這些方法在本技術(shù)領(lǐng)域中是公知的(Hanley等1982. Radiology 143 :29_36)。優(yōu)選地，挑選一個(gè)閾值以提供大于約0. 5、更優(yōu)選大于約0. 7、還更優(yōu)選大于約0. 8、甚至更優(yōu)選大于約0. 85、以及最優(yōu)選大于約0. 9的ROC曲線面積。在這種情況中術(shù)語“約”是指給出的測(cè)量結(jié)果的。ROC曲線的橫軸代表(1-特異性)，其隨著假陽性率而增加。所述曲線的縱軸代表靈敏度，其隨著真陽性率而增加。因此，對(duì)于所挑選的具體臨界值來說，可以確定(ι-特異性)的值，并可獲得相應(yīng)的靈敏度。ROC曲線下面積是對(duì)所測(cè)得的標(biāo)志物水平將可以正確鑒別疾病或病況的概率的度量。因此，ROC曲線下面積可用于確定所述測(cè)試的有效性。比值比是對(duì)效果大小的度量，其描述了兩個(gè)二元數(shù)據(jù)值之間的聯(lián)系或非獨(dú)立性的強(qiáng)度(例如事件在測(cè)試陰性組中發(fā)生的可能性與其在測(cè)試陽性組中發(fā)生的可能性的比率)。陽性預(yù)測(cè)值(PPV)，或準(zhǔn)確率，是具有陽性測(cè)試結(jié)果的患者被正確地診斷和/或預(yù)測(cè)的比例。它反映了陽性測(cè)試可反映出被測(cè)試的潛在病況的概率。陰性預(yù)測(cè)值(NPV)是具有陰性測(cè)試結(jié)果的患者被正確地診斷和/或預(yù)測(cè)的比例?？偩_度是使用所述測(cè)試正確分類的所有患者的百分率。在本發(fā)明的情況中，術(shù)語“神經(jīng)體液標(biāo)志物”用于影響神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的包括它們的前體及其片段在內(nèi)的激素和肽，其包括但不限于腦啡肽、速激肽、內(nèi)啡肽、強(qiáng)啡肽、后葉催產(chǎn)素、血管升壓素、促腎上腺皮質(zhì)激素、膽囊收縮素、腎素、血管緊張素、血管活性腸多肽、 神經(jīng)肽Y、降鈣素基因相關(guān)肽、降鈣素、生長(zhǎng)抑素、蛙皮素、神經(jīng)緊張素、促腎上腺皮質(zhì)素釋放激素、促甲狀腺素釋放激素、促性腺激素釋放激素、兒茶酚胺(例如去甲腎上腺素、腎上腺素、多巴胺)。術(shù)語“神經(jīng)體液標(biāo)志物”包括所有其前體、其片段、以及所述前體的片段。在本發(fā)明中術(shù)語“心血管標(biāo)志物”被定義為與心血管疾病的診斷和/或預(yù)后相關(guān)的標(biāo)志物例如肌紅蛋白；肌鈣蛋白T (cTnT)和I (cTnl)；肌酸激酶MB (CK-MB)； FABP ；⑶F-15 ；ST-2 ；降鈣素原(PCT) ；C反應(yīng)蛋白(CRP)；腎上腺髓質(zhì)素原及其片段， 包括中間區(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM)、腎上腺髓質(zhì)素、PAMP, C端腎上腺髓質(zhì)素原 (CT-proADM)；內(nèi)皮素原_1及其片段，包括C端內(nèi)皮素原_1 (CT-proET-Ι)、大-內(nèi)皮素_1、 內(nèi)皮素-1、NT-內(nèi)皮素原-1 ；proANP及其片段，包括中間區(qū)心房利鈉肽原(MP-proANP)、 N端proANP (NT-proANP)、ANP ；血管升壓素原及其片段，包括C端精氨酸加壓素肽原 (pro-arginine vasopressin peptide) (CT-proAVP)、血管升壓素；后葉激素運(yùn)載蛋白 II ； proBNP及其片段，包括BNP、以及N端proBNP (NT-proBNP)。術(shù)語“心血管標(biāo)志物”包括所有其前體、其片段、以及所述前體的片段。標(biāo)志物可以歸屬于這兩個(gè)組，假如這個(gè)標(biāo)志物影響了神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)且與心血管疾病的診斷和/或預(yù)后相關(guān)，那么它可以是神經(jīng)體液標(biāo)志物和心血管標(biāo)志物。在本發(fā)明中，術(shù)語“細(xì)胞因子”被定義為由發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能的免疫系統(tǒng)的特定細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)，其包括選自但不限于IL-6、IL-8、IL-10、TNF-a、IFN-γ、以及IL-1 β的淋巴因子、白細(xì)胞介素、以及趨化因子。


圖1至圖7顯示了新蝶呤以及新蝶呤與其它標(biāo)志物的組合的接受者操作特征 (ROC)圖。真陽性率對(duì)應(yīng)于靈敏度，而假陽性率對(duì)應(yīng)于對(duì)“_特異性”的表述。圖1 新蝶呤的ROC圖。曲線下面積(AUC) = 0. 625 (ρ < 0. 05)。圖 2 新蝶呤加上(CT-proAVP)的 ROC 圖。AUC = 0. 701 (ρ < 0. 05)。
圖3新蝶呤加上MR-proANP的ROC圖。AUC =0. 647 (ρ < 0. 05)。
圖4新蝶呤加上MR-proADM的ROC圖。AUC =0. 660 (ρ < 0. 05)。
圖5新蝶呤加上CT-proET-Ι的ROC圖,3 AUC ==0. 668 (ρ < 0. 05)
圖6新蝶呤加上BNP的ROC圖。AUC =0. 640 (ρ < 0. 05)。
圖7新蝶呤加上NT-proBNP的ROC圖。AUC =0. 646 (ρ < 0. 05)。
實(shí)施例964名在ED就診的急診病人有呼吸困難的癥狀，且隨后被接收入院，主要是因?yàn)槌溲孕牧λソ吆头窝?。在ED就診時(shí)采集第一份血液樣本，并在住院期間再采集一至三份血液樣本。應(yīng)用PCT測(cè)量來診斷細(xì)菌感染，臨界值為0. lng/ml。在ED就診時(shí)有呼吸困難癥狀的964名患者中，有428名從去ED就診直至出院時(shí)都沒有發(fā)展為細(xì)菌感染(組A)，因?yàn)樵诖似陂g所有測(cè)得的PCT值都<0. lng/ml。在剩下的 536名患者中有416例(77.6%，組B)，在初診時(shí)通過使用PCT測(cè)量已檢測(cè)出了感染(PCT水平> 0. lng/ml)。在所述536名患者組中剩下的120名患者(22. 4%，組C)在就診時(shí)具有低PCT水平(< 0. lng/ml PCT)，且至少在一個(gè)后續(xù)測(cè)量時(shí)間點(diǎn)(第1天、3天、5天、出院時(shí))上PCT的水平高于0. lng/ml，且因此被確定為發(fā)展為細(xì)菌感染的患者。新蝶呤是免疫激活的非特異性標(biāo)志物。在ED就診時(shí)測(cè)得的新蝶呤水平在60%的 C組患者中是增加的(> lOnmol/Ι)。然而，相同的增加導(dǎo)致了 A組患者中感染預(yù)測(cè)的假陽性結(jié)果數(shù)(42%/176假陽性)。出乎意料地，已顯示出作為標(biāo)志物且臨界值為> lOnmol/Ι的新蝶呤與在急診科就診時(shí)測(cè)量且選自中間區(qū)腎上腺髓質(zhì)素原(MR-proADM)、C端內(nèi)皮素原_1 (CT-proET-1)、C 端血管加壓素原(CT-proAVP)、中間區(qū)心房利鈉肽原(MR-proANP)、B型利鈉肽(BNP)、或N 端B型利鈉肽原(NT-proBNP)的其它標(biāo)志物的組合導(dǎo)致就比值比、陽性預(yù)測(cè)值(PPV)、以及總精確度來說，感染預(yù)測(cè)效率顯著增加(參見表1和2)。表1
權(quán)利要求
1.一種在患有呼吸困難的對(duì)象中對(duì)細(xì)菌感染進(jìn)行預(yù)測(cè)或在患有呼吸困難的對(duì)象中對(duì)細(xì)菌感染進(jìn)行預(yù)后和/或后續(xù)預(yù)測(cè)或預(yù)后的體外方法，所述方法包含作為標(biāo)志物的新蝶呤與一種或多種選自下面的標(biāo)志物的組合應(yīng)用細(xì)胞因子和心血管標(biāo)志物和神經(jīng)體液標(biāo)志物及其前體和片段以及所述前體的片段。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的體外方法，其中從所述對(duì)象采集樣本。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的體外方法，其包含在采集自所述對(duì)象的樣本中測(cè)定新蝶呤和所述一種或多種心血管標(biāo)志物的水平。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的體外方法，其包含使用一種或多種免疫分析在采集自所述對(duì)象的樣本中測(cè)定新蝶呤和所述一種或多種心血管標(biāo)志物的水平。
5.根據(jù)權(quán)利要求2、3或4的體外方法，其中所述樣本選自血液樣本、血清樣本、以及血漿樣本。
6.根據(jù)權(quán)利要求2至5中任一項(xiàng)的體外方法，其中在從所述對(duì)象采集樣本時(shí)所述對(duì)象不具有細(xì)菌感染。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的體外方法，其中在從所述對(duì)象采集的選自血液、血清、以及血漿的樣本中的降鈣素原濃度為等于或小于0. lng/ml。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的體外方法，其中所述一種或多種心血管標(biāo)志物選自 MR-proADM、MR-proANP、CT-ProET-l、CT-proAVP、BNP 和 / 或 NT-proBNP 和 / 或其片段以及其前體，或所述前體至少12個(gè)氨基酸的片段。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的體外方法，其中所述細(xì)菌感染表現(xiàn)為肺炎。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的體外方法，其中所述細(xì)菌感染表現(xiàn)為敗血癥。
11.根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)的體外方法，其中新蝶呤的臨界值為>lOnmol/Ι的水平。
12.根據(jù)權(quán)利要求8至11中任一項(xiàng)的體外方法，其中MR-proADM的臨界值為> lnmol/1、CT-proAVP 的臨界值為 > 10pmol/l、CT-proETl 的臨界值為 > 100pmol/l、 MR-proANP的臨界值為> 100pmol/l、NT-proBNP的臨界值為> 600pg/ml、以及BNP的臨界值為 > ^Opg/ml。
13.測(cè)定樣本中新蝶呤和一種或多種心血管標(biāo)志物的水平的分析、或測(cè)定新蝶呤水平的分析連同測(cè)定一種或多種心血管標(biāo)志物水平的一種或多種分析在預(yù)后或預(yù)測(cè)細(xì)菌感染中的應(yīng)用。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的應(yīng)用，其用于預(yù)后或預(yù)測(cè)患有呼吸困難的患者的細(xì)菌感染。
15.根據(jù)權(quán)利要求13的應(yīng)用，其用于預(yù)后或預(yù)測(cè)細(xì)菌感染，其中所述細(xì)菌感染表現(xiàn)為肺炎。
16.根據(jù)權(quán)利要求13的應(yīng)用，其用于預(yù)后或預(yù)測(cè)細(xì)菌感染，其中所述細(xì)菌感染表現(xiàn)為敗血癥。
17.根據(jù)權(quán)利要求13的應(yīng)用，其用于檢測(cè)細(xì)菌感染，其中新蝶呤的臨界值為>IOnmol/ 1的水平。
18.根據(jù)權(quán)利要求13的應(yīng)用，其用于預(yù)后或預(yù)測(cè)細(xì)菌感染，其中所述一種或多種心血管標(biāo)志物選自 MR-proADM、MR-proANP、CT-ProET-1、CT-proAVP、BNP 和 / 或 NT-proBNP 和 / 或其片段以及其前體，或所述前體具有至少12個(gè)氨基酸的片段。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的應(yīng)用，其用于檢測(cè)細(xì)菌感染，其中MR-proADM的臨界值為 > lnmol/1、CT-proAVP 的臨界值為 > 10pmol/l、CT-proET-1 的臨界值為 > 100pmol/l、 MR-proANP的臨界值為> 100pmol/l、NT-proBNP的臨界值為> 600pg/ml、以及BNP的臨界值為 > 280pg/ml。
全文摘要
本發(fā)明的領(lǐng)域是在患有呼吸困難的對(duì)象中對(duì)細(xì)菌感染的診斷和/或預(yù)測(cè)和/或后續(xù)治療。本發(fā)明的主題是提供用于在患有呼吸困難的對(duì)象中對(duì)細(xì)菌感染進(jìn)行診斷和/或預(yù)測(cè)和/或后續(xù)治療的方法。
文檔編號(hào)G01N33/68GK102449486SQ201080024210
公開日2012年5月9日 申請(qǐng)日期2010年6月4日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月5日
發(fā)明者奧利弗·哈特曼, 安德列亞斯·貝格曼 申請(qǐng)人:B.R.A.H.M.S 有限公司