專利名稱：旋轉柱系統(tǒng)和方法
技術領域：
本發(fā)明涉及被設計來進行測定的低床容積(low bed-volume)的旋轉柱(spincolumn)系統(tǒng)，這些測定可以涉及定量結合(binding)和從固相載體洗脫和/或溫度 受控的
化學反應。
背景技術：
在醫(yī)藥品、食品和飲料制造、臨床診斷和生命科學研究的領域中的許多應用需要準確且精確地確定特殊目標分析物的濃度。目標分析物經常與許多其它種類的相似分子一起包含在非常復雜的混合物中。包含目標分析物的常見樣品包括血液、細胞溶菌、細胞培養(yǎng)介質、處理流等。對于分析物在這種復雜樣品中的準確且精確的定量需要一種高選擇性的測定。用于這種類型的分析物的常見測定是免疫測定。在免疫測定中，使用抗體結合目標物并將其固定在固相表面上。這樣的結合通過將未結合的分子洗掉而使得目標物與液體樣品中的其它分子分離。在該分離之后，利用諸如酶、熒光染料等標記標記的對于目標物的第二種抗體用來產生信號，以便靈敏地指示結合到固相的目標物的量。在某些形式中，目標分析法本身可以進行標記以產生可探測的信號。免疫測定是選擇性的，即，能夠在目標物和樣品中的其它分子種類之間進行識別。它們還可以是高選擇性的，即，能夠測量ng/mL范圍內或更低范圍內的濃度。然而，免疫測定對于某些應用具有嚴重的缺點。免疫測定相對復雜，需要復雜且昂貴的試劑。其對于自動操作存在困難。在諸如生物制藥學的制造的大量領域中，在制造應用中極大地需要高精確度以跟蹤制造過程中的的產量或質量平衡。目標分析物可以是在處理流中的蛋白質產物本身。在這樣的制造應用中的產物濃度通?？赡茉趛g/mL至mg/mL的范圍內。因此，免疫測定的高靈敏度(典型地在ng/mL范圍內或更低范圍內)就是問題所在。通常需要進行數(shù)個量級的稀釋來使樣品濃度達到測定的范圍內。這實質上增加了測定的復雜性，并且使其難以實現(xiàn)所需的精確度或再現(xiàn)性。用于這種類型的應用的一種通常的方法是使用填充有樹脂的高性能色譜(HPLC)柱，該樹脂以高選擇性的方式結合目標分析物。典型的樹脂包括選擇性地結合目標分析物的固定化親和配體。可替代地，可以使用更為常規(guī)的色譜樹脂(例如離子交換或倒相)來選擇性地分離目標物。在將樣品注入到HPLC柱內之后，對該柱進行洗滌，并且利用從固定化配體釋放分析物的試劑對分析物進行洗脫?？梢岳肏PLC檢測器中的紫外線(UV)吸收率來確定分析物的數(shù)量。這種處理的實例是利用蛋白質A HPLC柱來測量來自細胞培養(yǎng)產物系統(tǒng)的樣品中的治療性單克隆抗體(IgG)的濃度。這樣的測試對于目標物(在此情況下為IgG)是高選擇性的，在不進行樣品稀釋的條件下在Ug-mg/mL的范圍內進行操作，并且具有非常高的精確度(通常具有<5%的變異系數(shù)(CV))。然而，親和HPLC需要復雜且昂貴的儀器系統(tǒng)。該系統(tǒng)每次只能夠運行一個樣品，并且每個樣品的運行典型地花費5-15分鐘。因此，該系統(tǒng)上的吞吐量被限制為每小時4-12個樣品。提高樣品吞吐量的一種方法是同時運行多個柱和樣品。利用常規(guī)HPLC系統(tǒng)進行大規(guī)模多路復用是困難且昂貴的，這是因為對于每個樣品通道或柱都需要單獨的泵、注射器、柱和檢測器。然而，通過能夠應用到這種類型的定量測定的固相萃取，已經開發(fā)出了用于樣品制備的大量相對高吞吐量的設備和方法。一種這樣的設備是移液吸頭柱，其利用空氣位移移液管來將液體經過一次性吸頭(tip)移入及移出，該一次性吸頭填充有選擇性結合樹脂。對于高吞吐量的應用能夠使用多通道移液管系統(tǒng)(高達96甚至384個通道)。然而，移液吸頭柱具有幾點不利之處。高吞 吐量的平臺需要昂貴的自動的機器人系統(tǒng)。此外，液體經過移液吸頭柱中的填充床的流動受限于在吸頭的遠端處進入和離開的單一端口。因此，由于在移液吸頭本身以及包含樣品或洗滌緩沖液的孔井(well)兩者中發(fā)生的混合而極難從填充床獲得定量的洗滌和稀釋。最后，移動液體的空氣位移方法會極難控制樣品的流速，特別是在需要相對低的流速來獲得定量結合時更是如此。因此，在對于定量樣品制備有用的同時，移液吸頭設備已證明對于目標分析物的定量分析是不可用的。替代類型的高吞吐量的提純設備使用真空歧管來使液體經過多個填充床而在向下方向上移動。這樣的設備通常用于固相萃取。如同移液吸頭柱一樣，對流速的控制是困難的，特別是在對于定量萃取所需的低流速下更是如此。另外，這樣的歧管必須具有存在于所有可用真空位置中的柱，否則所產生的真空泄漏將使設備無效。這就使得難以改變正在一批中運行的樣品的數(shù)量。使用重力來經過填充床向下汲取液體是另一種提純方法。對于許多應用而言，這種方法慢的不合實際。為了加速處理，可以將柱設置在離心機中來將有效g場升高到提供預期流速的水平。這樣的“旋轉柱”廣泛地用于在各種應用中從樣品萃取目標物，這是因為這些“旋轉柱”不需要大大地超出可用的實驗室離心機之外的復雜儀器或裝備。事實上，所有可商用的旋轉柱設計為與通用的微型離心機管道協(xié)作，該微型離心機管道的內徑(ID)為9mm,且容積為I. 5或2. OmL。這些設備的最大外徑必須遠遠大于9mm,以便防止包含樹脂的設備被驅動進入管道內。這些設備的樹脂床柱典型地為100 UL或更大。對于大數(shù)量的相對小的樣品的高吞吐量的分析以及便利的處理，非常希望能夠在生物分子科學協(xié)會/美國國家標準學會(the Society for Biomolecular Sciences/American National Standards Institute) (SBS/ANSI)微孔板格式標準之內進行工作。許多不同類型的標準微孔板可作為成型的塑料部件而以低成本得到。諸如移液管的液體處理設備也設計為在該標準之內工作。常規(guī)SBS/ANSI 96孔井的微孔板具有中心隔開9mm的孔井。其通常設計用于利用廣泛可得的測光板(optical plate reader)來快速地讀取所有孔井的吸光度。常規(guī)旋轉柱設備具有數(shù)個缺點。設計為與微型離心機管道單獨地工作的目前可得到的設備體積過大而不能與微孔板作用，無論是對于配合到9_間隔內而言還是對于具有適合于微孔板孔井的容積的床柱而言都是如此。大量多柱旋轉柱設備已經以在每個孔井中具有容積的微孔板的形式設立。如果使用者有96個樣品要運行，則這些旋轉柱的孔板工作良好。然而，如果有少于96個樣品要運行，則旋轉柱孔板在首次運行之后被丟棄，并且浪費了未使用的孔井?？商娲?，在二次運行中使用在旋轉柱的孔板上的未使用的孔井，但是其具有交叉污染的風險。其有利之處在于，每個樣品僅耗費一個旋轉柱，但是能夠在用于分析的常規(guī)微孔板的孔井中收集洗出液。常規(guī)旋轉柱設備的另一個缺點在于，這些設備易摻氣。摻入旋轉柱之內的空氣會具有數(shù)個有害后果。這些有害后果包括流速降低并且結合能力喪失，流速降低導致流速在給定的“x g”力下在柱管之間出現(xiàn)變化性，結合能力喪失是由于填充床的空氣阻塞部分引起的。這兩個問題導致分析結果中的變化性極大地升高，并且在極端情況下，會導致柱管的氣阻，其完全阻止了樣品的加載。拂過捕獲的氣泡足夠大，則這些氣泡還會減少或阻塞在離心的過程中經過床的流動，特別是在定量結合所需的低g場下更是如此。因此需要一種不易摻氣的旋轉柱設備。
常規(guī)旋轉柱設備的又一個缺點在于，這些設備易干燥。某些類型的固相載體的旋轉柱設備必須在濕潤條件下存儲和運送。這些載體包括通常凝膠類型的色譜介質(例如瓊脂糖、葡聚糖、纖維素)和各種合成聚合物水凝膠材料，例如聚(甲基丙烯酸酯)。這些材料在干燥時會經受凝膠結構不可逆的塌縮，這就極大地降低了性能。因此需要一種不易干燥的旋轉柱設備。

發(fā)明內容
本發(fā)明提供了的旋轉柱系統(tǒng)克服了上述常規(guī)系統(tǒng)的缺點。在示例性形式中，所述旋轉柱系統(tǒng)包括至少一個旋轉柱、支架和接收器孔板。所述支架具有穿過該支架的至少一個孔隙，所述孔隙的尺寸和構型設計為可釋放地接合所述旋轉柱。對于所述支架中的每個孔隙，所述接收器孔板都具有至少一個對應孔井。所述支架和接收器孔板的尺寸和構型設計為彼此接合，從而當所述支架和所述接收器孔板接合時使所述孔隙和所述孔井配準。當所述支架和所述接收器孔板接合并且所述旋轉柱設置在所述孔隙中時，所述旋轉柱的填充床完全設置在所述孔井的底部表面和所述孔井的孔井開口之間。在某些形式中，所述支架、所述旋轉柱和所述接收器孔板的尺寸和構型優(yōu)選地設計為將所述旋轉柱的出口吸頭懸掛在所述接收器孔板的孔井的底部表面的5mm之內。當所述支架和所述接收器孔板接合時，在所述接收器孔板上的頂部板的頂部表面優(yōu)選地接觸所述支架的頂部板的底部表面。另外，當所述支架和所述接收器孔板接合時，所述支架的側部板和邊沿優(yōu)選地分別接觸所述孔板的側部板和邊沿。當所述支架和所述接收器孔板接合時，所述支架的側部板還優(yōu)選地接觸所述接收器孔板的邊沿。在某些形式中，支架的尺寸和構型設計為與微孔板接合，所述微孔板例如為常規(guī)96孔井的微孔板或適合于分析樣品的另一種微孔板。在某些形式中，所述支架、所述旋轉柱和所述微孔板的尺寸和構型優(yōu)選地設計為將所述旋轉柱的出口吸頭懸掛在所述孔井的孔井開口的5_之內。這些形式可以與包括具有容量的填充床的旋轉柱進行組合，其中所述填充床的容量至多為所述微孔板的孔井的容量大約1/5，或者在某些情況下至多為所述微孔板的孔井的容量大約1/10。在一個特定實例中，所述填充床的容量為大約60yL或更少。本文所描述的容積比為系統(tǒng)提供了適合于以高吞吐量的方式進行分析的容量，其中所述分析涉及從所述旋轉柱進行定量洗脫并且增加體積等于分析溶液體積的分析試劑。在本發(fā)明的特定形式中，所述支架包括96個孔隙且所述接收器孔板包括96個孔井，并且所述孔隙和所述孔井以9mm中心距呈8X12陣列設置。這就能使該系統(tǒng)與常規(guī)SBS/ANSI96孔井的微孔板相兼容。本發(fā)明的某些形式還包括蓋子，所述蓋子的尺寸和構型設計為與所述支架接合，并接觸所述旋轉柱。當所述蓋子與所述支架接合并且正接觸所述旋轉柱，特別是正接觸所述旋轉柱的上輪緣時，并且當所述支架安裝在本文所述的接收器孔板上時，該組件優(yōu)選地形成基本密封的腔室。該腔室包括所述旋轉柱的樣品杯、所述填充床以及所述接收器孔板的孔井。在某些情況下，所述腔室借助于所述旋轉柱和所述支架、所述支架和所述孔板以及所述蓋子和所述旋轉柱的上輪緣之間的連續(xù)接觸而對來自所述腔室的過度蒸發(fā)基本地密封。本發(fā)明的某些形式還包括培養(yǎng)器塊體，所述培養(yǎng)器塊體的尺寸和構型設計為接觸 所述孔板的孔井外表面的實質部分。所述培養(yǎng)器塊體進一步構型為加熱及冷卻到特定溫度特定的時間量。所述蓋子、旋轉柱、接收器孔板和培養(yǎng)器塊體的構型和尺寸優(yōu)選地設計為以嵌套構型進行組裝。本發(fā)明還提供了利用本文所述的旋轉柱系統(tǒng)的方法。一個方法是對分析物進行分析的方法。所述方法包括作為第一步驟，將所述旋轉柱插入所述支架中的孔隙中，并且使所述支架與所述接收器孔板接合，其中所述旋轉柱、所述支架和所述接收器孔板形成組裝單元，并且其中所述旋轉柱與所述接收器孔板中的孔井配準。所述方法還包括以下步驟將樣品加載到所述旋轉柱中，使所述組裝單元旋轉，其中所述樣品中的分析物結合到所述旋轉柱中的填充床，對來自所述填充床的未結合的樣品成分進行洗滌，對來自所述填充床的分析物或該分析物的衍生物進行洗脫，并且分析所述分析物或該分析物的衍生物。該旋轉步驟優(yōu)選地包括使所述組裝單元在離心機中旋轉，從而在離心力下將增加到所述旋轉柱的液體推動經過所述旋轉柱的填充床，并且推動到所述可變的孔井內。按照本文的用法，“結合到填充床”包括將所述分析物結合到固定化親和試劑或吸附劑微粒的填充床中的其它選擇性結合表面，用于使所述分析物分離或對所述分析物提純。在所述旋轉步驟的過程中，所述分析物定量地結合并保留在所述填充床中。在某些形式中，洗滌或洗脫步驟包括將體積至少是所述填充床的容量的五倍的洗滌或洗脫緩沖液增加到所述旋轉柱，旋轉所述組裝單元，并且收集經過所述孔井中的流體，其中所述孔井的容量為所述填充床的容量的至少5倍。在其它形式中，所述孔井的容量為所述填充床的容量的至少10倍，并且分析包括將體積至少等于所述洗脫緩沖液的體積的分析試劑增加到所述孔井，將洗脫液和分析試劑混合以產生混合物，并且讀取該混合物。分析步驟優(yōu)選地包括對分析物的量進行定量。該實例中描述的分析物的其它類型、描述于本文其它位置的分析物或者本領域公知的分析物也是可接受的。在該方法中所用的系統(tǒng)構型為使得在所述分析步驟之后，能夠將所述旋轉柱從所述支架移走，并且能夠利用相同的支架并利用第二旋轉柱或第二套旋轉柱來重復所述方法。所述方法的某些形式在加載步驟之前還包括對所述填充床進行再濕潤，其中該再濕潤包括將一定量的液體增加到所述旋轉柱，并且利用所述接收器可變高速旋轉所述組裝單元，其中在旋轉步驟之后，以一定量的液體將所述接收器孔板的孔井填充到至少等于在所述旋轉柱中的所述填充床和所述樣品杯之間的界面的高度，其中一部分液體在旋轉之后保留在所述樣品杯中，并且其中從所述填充床中除去空氣。本發(fā)明的某些形式包括利用如本文所述的接收器孔板來執(zhí)行插入、加載和旋轉步驟。所述接收器孔板能夠隨后被移走并被常規(guī)96孔井的微孔板或適合于分析樣品的其它孔板替代，其中分析物在洗脫步驟的 過程中被收集在該微孔板的孔井中。隨后的分析步驟也利用該微孔板來執(zhí)行。本發(fā)明的某些形式包括利用如本文所述的接收器孔板來執(zhí)行插入、加載和旋轉步驟，以便將分析物結合到所述填充床。其隨后的步驟是將包含諸如酶的分析試劑的液體加載到所述旋轉柱內，將該液體旋轉到所述填充床內以使該酶暴露到所述填充床中的結合的分析物，在培養(yǎng)器塊體上對該組件進行培養(yǎng)以允許在受控溫度下發(fā)生酶促反應，并且將得到的諸如分析物衍生物的反應產物從所述旋轉柱洗脫到諸如接收器孔板的孔板內。在某些形式中，所述方法還包括使蓋子與所述支架接合以形成基本密封的腔室，該腔室包括所述旋轉柱的樣品杯、所述填充床和所述接收器孔板的孔井。形成這樣的腔室在運送該組件的過程中保護了所述旋轉柱。特別是在培養(yǎng)器塊體中培養(yǎng)所述接收器孔板的孔井的過程中，形成這樣的腔室還使來自該系統(tǒng)的蒸發(fā)最小化。在其它形式中，所述方法包括在洗脫步驟之后在培養(yǎng)器塊體中培養(yǎng)所述接收器孔板的孔井，以便促進洗脫緩沖液從該分析物的蒸發(fā)。本發(fā)明提供了一種用于以高吞吐量的方式在樣品中進行提純、化學反應和對分析物進行分析的模塊化系統(tǒng)。即使在使用小于96個樣品時，該系統(tǒng)也使得每個樣品只耗費一個旋轉柱，但是能夠利用通用的方法在常規(guī)96孔井的微孔板中對分析物進行收集和分析。本文所公開的所述填充床與孔井的容積比容許以定量且高吞吐量的方式通過大量通用的整套方法來對分析物進行分析。本文所述的方法還構型為防止填充床的干燥和摻氣。通過接下來與所附附圖相結合的本發(fā)明的優(yōu)選實施方案的具體描述將更為全面地呈現(xiàn)本發(fā)明的各目的和優(yōu)點。


圖I顯示了本發(fā)明的蓋子、旋轉柱、支架、接收器孔板和培養(yǎng)器塊體的分解的側視首1J視圖。圖2顯示了以嵌套構型組裝的本發(fā)明的蓋子、旋轉柱、支架和接收器孔板的側視首1J視圖。圖3顯示了以嵌套構型組裝的本發(fā)明的蓋子、旋轉柱、支架、接收器孔板和培養(yǎng)器塊體的側視剖視圖，其用于在受控制的溫度下進行培養(yǎng)。圖4顯示了以嵌套構型組裝的本發(fā)明的接收器孔板和培養(yǎng)器塊體的側視剖視圖，其用于從接收器孔板中蒸發(fā)液體。圖5顯示了本發(fā)明的旋轉柱、支架和接收器孔板的側視剖視圖，其中旋轉柱組裝在支架中。圖6顯示了在再濕潤之后以嵌套構型組裝的本發(fā)明的旋轉柱、支架和接收器孔板的側視剖視圖。
圖7顯示了在加載之后以嵌套構型組裝的本發(fā)明的旋轉柱、支架和接收器孔板的側視剖視圖。圖8顯示了在定量和/或分析之前與用于在其中洗脫的常規(guī)微孔板組裝的本發(fā)明的旋轉柱和支架的側視剖視圖。圖9為顯示通過本發(fā)明的旋轉柱系統(tǒng)提純并定量的人類IgG(hlgG)的恢復的圖表。圖10為顯示通過本發(fā)明的旋轉柱系統(tǒng)利用考馬斯藍(Coumassie Blue)提純并定量的hlgG的恢復的圖表。圖11顯示了利用本發(fā)明的旋轉柱系統(tǒng)通過增溶的肽N糖苷酶F酶而從固定化IgG釋放的N聯(lián)聚糖的HPLC色譜圖。
具體實施例方式旋轉柱系統(tǒng)大致包括下列項的組合或任意的部分組合形式旋轉柱10、微孔板20、接收器孔板30、支架50、蓋子70和培養(yǎng)器塊體80。旋轉柱10和填充床17 圖1-3和5-8中顯示了旋轉柱10的示例性形式。具體參考圖1，旋轉柱10包括與填充床17呈流體連通的樣品杯14。樣品杯14在一端處具有由旋轉柱10的上輪緣(upperrim) 12限定的入口，并且在相對端處具有與填充床17的界面16。樣品杯14限定空腔，并且具有的容量足以保持樣品、洗滌溶液、洗脫緩沖液或其它液體的體積。樣品杯14和/或樣品杯入口的尺寸和構型優(yōu)選地被設計為將移液吸頭容放在其中，以便于液體的運送。填充床17由液體可滲透的固相構成,例如微粒(凝膠微?；蚱渌?或薄膜等。適合的固相材料包括常見凝膠類型的色譜介質(例如瓊脂糖、葡聚糖、纖維素)、各種合成聚合物材料(例如聚(甲基丙烯酸酯)和聚(苯乙烯-二乙烯苯))以及各種無機材料(例如二氧化硅、氧化鋁、碳和玻璃)。填充床17在一端處經由界面16而與樣品杯14流體連通，并且在相對端處通向旋轉柱10的出口吸頭18。出口吸頭18限定開口以允許流體在離開填充床17時經其流動離開旋轉柱10。填充床17的液體容量優(yōu)選地介于大約0. 5和500 u L之間，更優(yōu)選地介于大約I和250 u L之間，最優(yōu)選地介于大約5和100 u L之間，例如大約5、10、20、30、40、50、60、70、80或90 y L或介于這些數(shù)值之間的范圍。填充床17構造為與目標分析物選擇性地結合。填充床17可以經過適合的選擇性結合表面或經過表面涂層而能夠靠其自身結合目標分析物，或者可以具有試劑(例如親和試劑)，該試劑能夠共軛(conjugated)結合到目標分析物。適合的選擇性結合表面或涂層包括疏水的或親水的表面(對于正相和反相，疏水作用和親水作用)和帶正電荷或帶負電荷的表面(對于離子交換)。適合的親和試劑包括經過親和識別和吸引力而特定地且選擇性地結合分析物的任何物質。親和識別通常類似于鎖和鑰匙之間的關系，其對于目標物是高度特定的，并且通常具有在KT8M以下的離解常數(shù)(Winzor D. J.，J Chromatogr. 20041037(1-2) :351-67 ；Chaiken I. M.，JChromatogr. 1986,376 :11-32)。適合的親和試劑包括抗體、蛋白質、肽、親和體、小體、適配子、核苷酸(RNA或DNA)、聚合物、金屬螯合配體、小分子等等。由選擇性吸附微粒的填充床17捕獲的分析物可以是樣品(該樣品需要進行分析、提純、表征、定量或化學改性)中的任何分子或物質。分析物的實例通常包括但不限于蛋白質、肽、核苷酸、碳水化合物、合成化合物和小分子，并且特別是包括抗原、RNA、DNA及其配合物等。在某些實例中，分析物可以包括亞細胞器、細胞和微生物。特定分析物通常在利用本文所述系統(tǒng)進行提純/或分析之前與其它非分析物物質在樣品中進行混合或配合。特定地結合到結合表面、表面涂層或親和試劑的分析物能夠利用本文所述的系統(tǒng)而與分析物和非分析物物質的給定化合物中的非分析物物質分離。按照本文的用法，“分析物”還包括結合到填充床17的反應物，并且“分析物的衍生物”包括源于反應物的反應產物?？尚械姆治鑫镉H和試劑結合對的實例包括但不限于抗體-抗原和抗體-半抗原對；受體-配體結合對；核酸雜交低聚物(例如DNA或RNA片段)；人造結合配對體(bindingpartner)(例如分子印跡——對小分子進行分子鑄型的工藝，通過如下步驟實現(xiàn)組合樹脂與小分子，對樹脂進行交聯(lián)或進行其它硬化，對樹脂進行研磨，并且萃取小分子而形成能夠
特定地結合該小分子的小分子特定鑄型)；以及RNA nexamers-能夠充當特定結合配對
體的官能化RNA低聚物。對于如本文所述地進行構造并構型的旋轉柱10，液體經由樣品杯入口而被導入到樣品杯14內。液體可以包含洗掉未結合樣品元素或從填充床洗脫已結合分析物所需的分析物或緩沖液成分。在施加離心力時，液體經過填充床17行進并經過出口吸頭18離開填充床。分析物變?yōu)榻Y合到填充床17。洗滌或洗脫液體以相似方式經過填充床而被導入并旋轉。微孔板20 圖8顯示了微孔板20的示例性形式。示例性微孔板20包括具有上表面22的頂部板21以及具有外表面24的側部板23。微孔板20還包括頂部板21之內限定的孔井25。在由頂部板21、孔井壁27和底部表面28限定的平面中，孔井25包括孔井開口 26。微孔板20的孔井25優(yōu)選地限定具有孔井壁27和底部表面28的圓柱形形狀，該孔井壁27限定的平面基本垂直于由微孔板頂部板21限定的平面，該底部表面28限定的平面基本平行于由微孔板頂部板21限定的平面。底部表面28還可以具有圓形或圓錐形的底部。微孔板20可以具有呈任意構型的、任意數(shù)量的孔井25。然而，優(yōu)選的微孔板20包括以8X12的二維矩形陣列、9mm的中心距分布在頂部板21上的96個孔井。與本發(fā)明一起使用的示例性微孔板包括常規(guī)SBS/ANSI格式的96孔井的微孔板。其它微孔板也是適合的。微孔板20構造為接收從旋轉柱10洗脫的液體90，并且在某些情況下，附加地構造并且/或者構型為執(zhí)行對從旋轉柱10洗脫的液體90中的分析物的下游分析。對于下游分析，微孔板20中的孔井25可以包括試劑。在某些情況下，試劑化學結合到孔井25的內表面，例如底部表面28。這樣的試劑可以包括在分析物檢測或分析中所涉及的目前公知的或將來發(fā)現(xiàn)的任何試劑，包括抗體、配體、酶、輔因子、共酶、蛋白質等。構型用于例如執(zhí)行酶鍵合免疫吸附劑測定(ELISAs)的微孔板在市場上從Greiner Bio-One (Kremsmiinster,Austria)可獲得。旋轉柱10和孔井25優(yōu)選地配準(in registration)地定位，即相對于彼此定位，使旋轉柱10的出口吸頭18定位在孔井25緊上方或者定位為相對于孔井25居中。這就能夠在洗脫液從填充床17洗脫時經過出口吸頭18對洗脫液進行收集。這樣的定位可以例如通過使用支架50 (在下文中將具體討論)來實現(xiàn)。
旋轉柱10和孔井25的尺寸和構型優(yōu)選地協(xié)調地涉及為能夠對分析物進行定量提純和分析。要想準確并可再現(xiàn)地進行定量提純和分析，則應當滿足兩個不同要求。首先，洗脫容積應當足以完全地洗脫所有的已結合分析物。對于色譜柱，應當使用洗脫緩沖液的至少五個床容積來完成定量洗脫。其次，來自填充床17的所有洗脫液加上任何色度或熒光測定試劑(如果使用的話)所需容積應當能夠配合在單一光微孔板孔井25的容積之內。這就免去了要將液體轉移到用于進行定量分析的分離孔井25內的需要，這樣的轉移將使測定變得復雜并使其可再現(xiàn)性降低。這兩個要求組合起來設定了旋轉柱10中的填充床17的容量相對于孔井25的容量的上限。如果直接對洗脫液進行分析，則孔井25的容量應當為填充床17的容量的大約或至少五倍，以允許從填充床17進行定量洗脫。下面將描述直接分析洗脫液的方法。如果在該分析中使用分析試劑(例如色度或熒光試劑)，則孔井25的容量相對于填充床17的容量的比值更大。通常，測定試劑的增加體積應當至少等于正在被分析的樣品溶液的體積。因此，在優(yōu)選形式中，孔井25的容量為填充床17的容量的大約或至少十倍，以便除了測定試劑之外還容納洗脫液(5X填充床17)。孔井25的其它容量也是可接受的，其中孔井25的容量為填充床17的容量的大約或至少大約0. 5倍、2倍、5倍、20倍、50倍或100倍。反 過來，本發(fā)明的填充床17的容量優(yōu)選地為孔井20的容量在至多大約1/5，例如容量為孔井25的容量的大約1/10，1/50或1/100。適合于在測光板中進行光檢測的常規(guī)SBS/ANSI格式的96孔井的微孔板具有的孔井的容量為大約300 y L或更小。本發(fā)明的示例性形式的格式設計為與這樣的常規(guī)微孔板可兼容。因而，本發(fā)明的填充床17 (被格式設計為在直接分析時與常規(guī)微孔板一起使用)的容量應當為大約60 u L或更小，例如為60、50、40、30、20、10、5、2. 5或I y L，或者介于這些數(shù)值之間的容量。在利用色度或熒光試劑的分析中與常規(guī)微孔板一起使用的本發(fā)明的填充床17的容量應當為大約30 U L或更小，例如為30、20、10、5、2. 5或I y L，或介于這些數(shù)值之間的容量。接收器孔板30 圖1-7顯示了示例性接收器孔板30。參考圖1，示例性接收器孔板30包括具有上表面32的頂部板31、具有外表面34的側部板33以及從側部板33偏移的邊沿(Iip) 35，該邊沿35具有上表面36和外表面37。接收器孔板30還包括頂部板31之內限定的孔井40?？拙?0在由頂部板31限定的平面中包括孔井開口 41，并且包括具有內表面43和外表面45的孔井壁42。內表面43包括作為其子部的底部表面44。接收器孔板30的孔井40優(yōu)選地限定截頭圓錐形形狀，其中孔井壁42以孔井40的橫截面直徑從孔井開口 41到底部表面44減小的方式形成角度。底部表面44限定的平面優(yōu)選地平行于由接收器孔板的頂部板31限定的平面，但也可以是圓形或凹面的。接收器孔板30可以具有呈任意構型的任意數(shù)量的孔井40。然而，優(yōu)選微孔板30包括以8X 12的二維矩形陣列、9mm的中心距分布在頂部板上的96個孔井。設計為一起使用的接收器孔板30和微孔板20具有同樣數(shù)量的孔井40、25，這些孔井40、25橫跨頂部板31、21具有同樣的分布和構型。接收器孔板30優(yōu)選地由薄壁塑料制成，但是可以由任何其它材料制成。如圖2、3、6和7所示，接收器孔板30被構造為將液體90存儲在孔井40中，將旋轉柱10的出口吸頭18浸沒在存儲于孔井40的液體90中，接收從旋轉柱10洗脫的液體90，并且在某些情況下，附加地構造并且/或者構型為對于從旋轉柱10洗脫的液體中的分析物執(zhí)行下游分析。接收器中的孔井40可以包括與如上對于微孔板20所述的同樣的試劑，并且可以具有與如上對于微孔板20所述的相對于填充床17的容量的同樣的容量。旋轉柱10和孔井40優(yōu)選地相對于彼此定位，從而使旋轉柱10的出口吸頭18對準地相對于孔井40居中。出口吸頭18優(yōu)選地定位在孔井40的底部表面44的略微上方。這就使得除了在從填充床17洗脫液體時經過出口吸頭18收集液體90之外，出口吸頭18浸沒存儲在孔井40的液體90的極小的體積中。這樣的定位可以通過使用支架50 (在下文中將具體討論)來實現(xiàn)。在某些形式中，旋轉柱10和孔井40可以協(xié)調地構造并構型為對分析物進行定量提純和分析，如本文對于微孔板20所述的那樣。支架50:圖1-3和5-8顯示了示例性支架50。具體參考圖1，示例性支架50包括具有上表面52和下表面53的頂部板51 ;限定在頂部板51之內的孔隙54 ;具有內表面56、夕卜表面57和底部表面58的側部板55 ;從側部板55偏移的邊沿60，該邊沿60具有內表面61和外表面62。支架50，更具體地為孔隙54構造為固定地但可松開地將旋轉柱10保持于其中。如圖2所示，環(huán)繞旋轉柱10的外周緣的脊部19提供了止擋件來防止旋轉柱10經過孔隙54掉落，并且能使旋轉柱10在懸掛在支架50之內。旋轉柱10的可選漸縮部與孔隙54的對應漸縮部一起便于將旋轉柱10固定支撐在支架50之內，并且優(yōu)選地便于在旋轉柱10和支架50之間形成連續(xù)接觸。按照本文中的用法，“連續(xù)接觸”意指兩個物體之間的在其之間不存在間隙的接觸。支架50構造為在接收器孔板30和/或微孔板20的孔井40、25的中心上配準地懸掛旋轉柱10的出口吸頭18。通過具有相同數(shù)量的孔隙54的支架50來實現(xiàn)這點，這些孔隙54橫跨頂部板51的分布和構型與接收器孔板30和/或微孔板20中的孔井40、25的分布和構型相同。因此，支架中的孔隙54還與接收器孔板30和/或微孔板20中的孔井40、25配準。支架50還可以包括任意構型的任意數(shù)量的孔隙54，包括一個、兩個或更多個。在優(yōu)選形式中，支架50包含8X 12的二維矩形陣列的、中心距為9mm的96個孔隙54，以便能與96常規(guī)96孔井的微孔板20和/或相似格式的接收器孔板30 —起使用。因而，與這樣的支架50 —起使用的旋轉柱10的大小設計為使旋轉柱10能夠以中心距為9mm的出口吸頭19的二維陣列布置在支架50之內。該構型中的旋轉柱10利用其豎直取向的縱向軸線進行定位。然而，支架50還可以構型為以任何預期構型或幾何形狀來保持旋轉柱10。支架50的構型和尺寸被設計為固定地并可松開地安裝在微孔板20和/或接收器 孔板30上，以便在孔井25的中心上對準地懸掛旋轉柱10。圖8中顯示了安裝在微孔板20上的支架50。為了能夠將支架50這樣安裝在微孔板20上，微孔板20和支架50優(yōu)選地協(xié)調地進行構造，其中檔支架50安裝在微孔板20上時，支架50的側部板55的底部表面58接觸微孔板20的上表面22，并被支撐在上表面22上。(參考圖I對于支架50的元件的編號。)這就優(yōu)選地在支架50的頂部板51和微孔板20的頂部板21之間產生間隔。此外，支架50的邊沿60的內表面56優(yōu)選地接觸微孔板20的側部板23的外表面24。支架50和微孔板20之間的接觸優(yōu)選地為連續(xù)接觸。如圖8所示，微孔板20、支架50和旋轉柱10優(yōu)選地構造為使得當旋轉柱10安裝在支架50中并且支架50安裝在微孔板20上時，旋轉柱10的出口吸頭18被大致懸在由微孔板20的頂部板21限定的平面中，懸掛成剛剛高于該平面，或者懸掛成剛剛低于該平面。例如，出口吸頭18可以被懸在離由微孔板20的頂部板21限定的平面小于或等于大約O、0. 01、0. 05、0. 1、0. 5、1、2. 5、5mm的距離處。這就防止了液體在從出口吸頭18洗脫的同時與孔井40錯開，并且允許在浸沒出口吸頭18的條件下將液體收集在孔井40中。支架50的構型和尺寸還設計為固定地并可松開地安裝在接收器孔板30上，以便在接收器孔板30的孔井40的中心上對準地懸掛旋轉柱10。為了能使支架50這樣安裝在接收器孔板30上，接收器孔板30和支架50優(yōu)選地協(xié)調地進行構造，其中接收器孔板30和支架50能夠以嵌套構型進行堆疊。圖2顯示了這樣的構型。(參考圖I對于支架50和接收器孔板30的元件的編號。)特別而言，支架50的頂部板51、側部板55和/或邊沿60優(yōu)選地能夠分別與接收器孔板30的頂部板31、側部板33和/或邊沿35接觸。更特別地，支架50上的頂部板51的下表面53、側部板55的內表面56、側部板55的底部表面58和/或邊沿60的內表面61優(yōu)選地能夠與接收器孔板30上的頂部板31的底部表面32、側部板33的外表面34、邊沿35的上表面36和/或邊沿35的外表面37分別接觸。支架50和接收器孔板30之間的接觸優(yōu)選為連續(xù)接觸。 如圖2具體所示，在本發(fā)明的優(yōu)選形式中，旋轉柱10在接收器孔板30之內懸掛到位，以便維持將出口吸頭18浸沒在接收器孔板30的空間40中包含的少量液體90中。減速器孔板30、支架50和旋轉柱10優(yōu)選地構造為使得當旋轉柱10安裝在支架50中并且支架50安裝在接收器孔板30上時，旋轉柱10的出口吸頭18恰好懸掛在接收器孔板孔井40的底部表面44上，以便在兩者之間限定最小間隙64。間隙64優(yōu)選地等于或小于介于大約 IOmm 和 0. OOOlmm 之間的距離，例如為大約 10mm、5mm、2. 5, lmm、0. 5mm、0. lmm、0. 05mm、
0.01mm、0. 005mm、0. 001mm、0. 0005mm或0. 0001mm，或者這些數(shù)值之間的范圍。同樣優(yōu)選地，旋轉柱10懸在孔井40中，使填充床17和樣品杯17之間的界面16低于由孔井開口 41限定的平面，進而使液體能夠將孔井40填充到高于由界面16限定的平面的點，而液體不會從孔井40溢出或流出，如圖6所示。當旋轉柱10安裝在支架50上并且支架50安裝在接收器孔板30上時，支架50優(yōu)選地能夠與旋轉柱10和接收器孔板30兩者產生連續(xù)接觸。特別而言，優(yōu)選地在旋轉柱10的外表面和孔隙54的內表面之間優(yōu)選地產生連續(xù)接觸。在支架50的頂部板51的下表面53和接收器孔板30的頂部板31的頂部表面32之間同樣優(yōu)選地產生連續(xù)接觸。本文所述的接收器孔板40和微孔板20優(yōu)選地能夠在具有微孔板轉子的標準臺式離心機中與支架50和旋轉柱10組合使用。蓋子70:圖1-3顯示了示例性蓋子70。具體參考圖I,示例性蓋子70包括具有下表面72的頂部板71、側部板73和延伸邊沿74。邊沿74從側部板73偏移并且包括內表面75。蓋子70配合在支架50的頂部上，其中旋轉柱10安裝在其中。優(yōu)選地，蓋子70在支架50上的配合是固定的但是足夠松動的，從而能夠在不拾取支架50的條件下例如利用機器人夾持器移走蓋子70。蓋子70并不通過其任何部分豎直地固定在包括側部板55的任何部分的支架50上。這使得當蓋子70安裝在支架50 (旋轉柱10安裝在其中)上時，蓋子70的下表面72能夠倚靠在旋轉柱10的上輪緣12上，從而優(yōu)選地在兩者之間產生連續(xù)接觸。
當蓋子70、支架50、旋轉柱10和接收器孔板30組裝為單一的嵌套單元(參見圖2和3)時，在蓋子70和旋轉柱10的上輪緣12之間、在支架50和接收器孔板30之間以及在旋轉柱10和支架50之間的連續(xù)接觸形成基本密封的“腔室”。該腔室包括旋轉柱樣品杯14、填充床17和接收器孔板孔井40，其限制了液體從該系統(tǒng)的蒸發(fā)或溢出。這對于存儲、運送或者在升高的溫度下培養(yǎng)的過程中是特別有用的，如下文所述并如圖3所示。該組裝的系統(tǒng)能夠堆疊在標準機器人孔板處理設備上，并且利用建立在自動液體處理器上的自動標準機器人夾持器系統(tǒng)來進行組裝或拆卸。培養(yǎng)器塊體80 圖I、3和4顯示了示例性培養(yǎng)器塊體80。具體參考圖I，示例性培養(yǎng)器塊體80包括培養(yǎng)器塊體孔井81。如在接收器孔板30中那樣，培養(yǎng)器塊體80優(yōu)選地具有同樣數(shù)量的具有同樣分布和構型的孔井81。培養(yǎng)器塊體孔井81成形為直接接觸接收器孔板孔井壁42的外表面45的實質部分，例如主要部分。培養(yǎng)器塊體80的孔井可以接觸接收器孔板30的孔井壁42的外表面45的大于或等于大約5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多，或者介于這些豎直之間的范圍。為了實現(xiàn)該接觸，構型為與具有截頭圓錐形孔井40的接收器孔板30 —起使用的培養(yǎng)器塊體80也將具有截頭圓錐形的孔井81。培養(yǎng)器塊體80優(yōu)選地包括諸如鋁或銅的金屬。培養(yǎng)器塊體80優(yōu)選地連接到控溫設備82。溫度設備82可以被構型為在特定溫度下對培養(yǎng)器塊體80加熱或冷卻設定的時間量，并且可以受到溫度控制器的控制。培養(yǎng)器塊體80的熱質量和導熱性遠大于薄壁塑料的微孔板30，并且經過接收器孔板孔井壁42的傳 遞路徑相對較短。因此，在孔井40中的任意液體經過熱傳遞快速地達到培養(yǎng)器塊體80的溫度。如圖3所示，蓋子70、支架50、旋轉柱10、接收器孔板30和培養(yǎng)器塊體80能夠以嵌套構型進行組裝。該構型的優(yōu)點在于，當接收器孔板30通過培養(yǎng)器塊體80進行加熱時，由蓋子70、支架50、旋轉柱10和接收器孔板30的嵌套產生的基本密封的腔室使液體從腔室的蒸發(fā)盡可能小。該系統(tǒng)可以包括任意數(shù)量的旋轉柱10和對應的接收器孔板孔井40、支架孔隙54、培養(yǎng)器塊體孔井81和微孔板孔井25。該數(shù)量少至一個，多至96或更多。該系統(tǒng)的優(yōu)選形式的尺寸和構型設計為要么手動地要么利用機器人系統(tǒng)來同時處理多達96個柱管，并且設計為與常規(guī)ANSI/SBS 96孔井的微孔板作用。對于分析物的選擇性提純和定量分析利用上述要素，本發(fā)明提供了對來自樣品的分析物進行選擇性提純和定量分析的方法。這樣的方法可以包括將包含分析物的樣品加載在樣品杯14中，在離心機中使旋轉柱10旋轉以促進分析物到填充床17中的親和試劑的定量結合，對來自填充床17的剩余樣品進行洗滌，將分析物從填充床17洗脫到孔井內，并且/或者對洗脫液中的分析物的量進
行定量。對于定量結合,旋轉步驟必須在特定離心力下執(zhí)行。離心力必須足夠高以產生充分的樣品流速，以便使樣品移動經過填充床17。然而，離心力必須足夠低以容許在分析物和親和試劑之間進行結合反應，以便達到平衡。如果該結合未達到平衡，則樣品將不會以定量方式結合并保留在填充床17中。能夠進行這樣的定量結合的離心力基本依賴于填充床17的容量，容量越大，則所使用的力越高，并且容量越小，則所使用的力越低。填充床17的諸如長度、半徑等的其它尺寸也會影響最佳的力。通常而言，容許用于定量結合的離心力能夠通過以下操作來確定將單個樣品分為相等部分，并且在旋轉步驟中利用各種升高的離心速度來執(zhí)行本發(fā)明。當分析物回收物顯示為離心速度的函數(shù)時，容許范圍由在給定離心力或力的范圍下分析物回收物的峰值來指示。洗滌步驟包括在樣品杯14中加載洗滌緩沖液，并且在離心機中使旋轉柱10旋轉?？梢詧?zhí)行數(shù)次洗滌。洗滌步驟從填充床17移走來自初始樣品的未結合到親和試劑的殘余物質。對于特定應用的可得到的洗滌緩沖液在本領域中是公知的。洗脫步驟包括增加優(yōu)選地為填充床17的容量的至少五倍的量的洗脫緩沖液，在離心機中使旋轉柱10旋轉，并且在容量為填充床17的容量的至少五倍的孔井中收集洗脫液。如果隨后需要進行定量分析，則關鍵是該步驟要形成為使得在平衡時還發(fā)生分析物與親和試劑的脫離。所用的洗脫緩沖液和洗脫緩沖液經過填充床17的流速是導致以定量方 式脫離的兩個因素。所使用的具體洗脫緩沖液依賴于具體的分析物-親和試劑的作用。用于特定分析物-親和作用的洗脫緩沖液在本領域中是公知的。流速由離心力確定。容許的離心力能夠以類似于對于定量結合所述方式的方式來確定。定量步驟可以通過任意數(shù)量的公知方法來執(zhí)行。定量優(yōu)選地使用測光板來執(zhí)行。測光板在本領域是公知的。常見的測光板具有檢測像如吸光率、熒光強度、冷光、時間分辨熒光和熒光偏振等的能力。對分析物進行定量的一種方法是在適合的波長下簡單地測量已知體積的所收集分析物的吸光率。例如，蛋白質吸收280nm的光，而DNA吸收260nm的光。該方法簡單且準確。然而，該方法的靈敏度和動態(tài)范圍受到限制。其可能不適合用于某些應用，特別是在旋轉柱10的容量受限制時。更高的靈敏度和動態(tài)范圍可以通過混合洗脫分析物與分析試劑(例如色度或熒光試劑)來進行增益，該分析試劑有效地“放大”了光信號。其實例是布拉德福試劑(Bradford Reagent),其通常用于確定樣品中的蛋白質濃度。當試劑之內包含的考馬斯藍結合到溶液中的蛋白質時，布拉德福試劑產生顏色變化。這些試劑用于對諸如蛋白質的分析物進行大致定量。利用與微量的高選擇性分析物分離系統(tǒng)(通過本文所述的旋轉柱設備來提供)組合的基于試劑的測定以高吞吐量的方式提供了得到提高的簡易性，吞吐量、靈敏度、范圍和可再現(xiàn)性。定量的預期方法確定了填充床17相對于收集有洗脫液的孔井的容量的容量。例如，如果直接經過吸光率來分析樣品，則填充床17的容量為孔井容量的大約或至少5倍。如果利用分析試劑來分析樣品，則填充床17的容量為孔井容量的大約或至少10倍。如果想要對常規(guī)微孔板20中的分析物進行定量，則當前方法可以與本文所述的支架一起使用。在這樣的情況下，旋轉柱10插入到支架50的孔隙54內，并且支架50在從填充床17洗脫分析物之前安裝在微孔板20上(參見圖9)。旋轉柱10、支架50和微孔板20 —起旋轉，并且分析物被收集在微孔板20的孔井25中用于進一步的分析。因為旋轉柱10能夠可拆卸地插入支架50之內，所以每次測定運行并不會使用支架50中的所有孔隙54。因此，支架50能夠容納對應于確切數(shù)量的待分析樣品的數(shù)量的旋轉柱10。這就避免了想要分析的樣品少于96個時對旋轉柱10造成浪費的消耗。而且，支架50能夠在進一步的測定運行中重新使用。旋轉柱10、支架50和微孔板20的組合提供了用于對來自樣品的分析物進行提純和分析的模塊化平臺。相似的模塊化能夠利用接收器孔板30來實現(xiàn)。能夠用于本發(fā)明中的與親和提純和/或分析相關的成分和方法的進一步的實例見于 U. S. Pub. No. 2008/0176254 中(U. S. Appl. No. 11/874884)，通過引用全文將其納入本文中。對固定化反應物進行化學反應本發(fā)明還提供了以高吞吐量的方式對樣品中的固定化反應物進行化學反應的方法。在這些應用中，通過疏水性和/或離子吸附性、共價結合或選擇性結合(例如通過親和配體)來將反應物固定在固相載體材料上。包含分析試劑的少量反應溶液被代換為填充床17的固相。反應溶液在填充床17中的代換容許將反應物轉換為產物。反應產物優(yōu)選地立即被釋放為液相。出于分析的目的，關鍵是恢復與填充床17流體連接的所有液體，特別是因為預期反應產物能夠潛在地散播到填充床17外。一旦完成反應，所釋放的反應產物和/
或固定化反應物就可以通過在一個或更多連續(xù)步驟中從旋轉柱10洗脫而得到恢復。如上所述，“分析物”包括反應物，并且“分析物的衍生物”包含反應產物。為了促進反應物和分析試劑之間的作用，反應物本身被固定在填充床17上，并且反應試劑以溶液被保持。該構型具有許多益處。首先，反應物的結合能夠是高選擇性的，從而能使其在反應之前從未處理樣品混合物中被提純。其次，反應時間能夠被控制為長到達到完成反應的必要時間(其通常長于由經過填充床17的旋轉液體能夠獲得的駐留時間)。最后，反應溫度(其通常也是關鍵的)能夠通過利用接收器孔板30和培養(yǎng)器塊體80而受到精確控制。在離心的過程中極難實現(xiàn)精確的溫度控制?？梢酝ㄟ^填充床17中的分析試劑來執(zhí)行的各種分析的化學反應包括但不限于酯化、異構化、氧化、還原、環(huán)化、水解反應和標記反應。適合的分析試劑包括酶、共酶、輔因子、金屬、離子和任何其它催化劑。在本發(fā)明中有用的酶包括已經用于合成目的的所有類別的酶，其要么利用合適的輔因子通過自身來合成，要么在多酶處理中與其它酶合成。已經用于合成目的的酶的實例包括但不限于肽N糖苷酶F、堿性磷酸酶、纖維素酶、過氧化氫酶、溶菌酶、脲酶、木瓜酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶、辣根過氧化物酶、黃嘌呤氧化酶、萄糖氧化酶、馬肝醇脫氫酶、轉化酶、無花果蛋白酶、菠蘿蛋白酶、胃蛋白酶、肝素酶、硫酸酯酶、蔗糖合成酶、醛縮酶、天門冬氨酸酶、延胡索酸酶、3半乳糖苷酶、豬胰脂肪酶、根霉脂肪酶、黑曲霉脂肪酶、柱狀假絲酵母脂肪酶、米赫毛霉脂肪酶、螢光假單胞菌脂肪酶、豬肝酯酶、青霉素酰化酶和馬肝酯酶。標記化合物或水解試劑也可以用作催化試劑。反應物能夠是能夠通過催化劑化學轉換為反應產物的任何有機或無機溶質。有機反應物包括核苷酸、核酸、氨基酸、蛋白質、肽、碳水化合物、糖類、糖蛋白和小分子。能夠單獨使用的有用反應物包括能夠異構化的各種碳水化合物，例如葡萄糖、蔗糖以及能夠環(huán)化的鯊烯類化合物。有用的反應物對包括酯-水、腈-水、酰胺-水、烯烴-水、酸-醇、酐-醇、酐-氨基酸、酯-胺、醛-羥基酮、醛-氰醇、氧化腈-烯烴、環(huán)氧乙烷-水和烯烴-胺。包含酶催化劑的輔因子介導的還原物包括酮、醛和烯烴物質。相似地，氧化物包含醇、醛、酮、硫化物和各種脂肪族和芳香族碳水化合物物質。洗滌和洗脫步驟可以包括增加為填充床17的容量的至少五倍的量的洗滌或洗脫緩沖液，在離心機中使旋轉柱10旋轉，并且在容量為填充床17的容量的至少五倍的孔井中收集洗脫液。使固定化反應物化學反應為如上所述的一種或更多者產物的方法能夠與對分析物進行選擇性地提純和/或定量分析的所述方法一起使用，其中來自反應的產物構成分析物的衍生物。溫度受控的培養(yǎng)以及因其而減少蒸發(fā)在受控制的(典型地為升高的)溫度下執(zhí)行如上所述的反應通常是有利的，并且有時是重要的。在這些情況下，必須控制安裝在支架50中的填充床17以及在填充床17之內并與填充床17接觸的任何液體90的溫度。已經發(fā)現(xiàn)，將組裝好的系統(tǒng)簡單地設置在烘爐或溫度受控的腔室中是無效的，這是因為由空氣到塑料部件內并由此到液體樣品和填充床17內的熱傳導非常低。例如在圖2和3中所示的本發(fā)明的示例性形式中，支架50和接收器孔板30的系統(tǒng)構型為將旋轉柱10保持在位，從而使旋轉柱10的出口吸頭18浸沒接收器孔板孔井40中的一定量的液體90中。根據(jù)實驗已經發(fā)現(xiàn)，熱量高效地經過孔井40中的液體90傳遞， 并高效地傳遞到填充床17內，從而快速且有效地控制填充床17中的溫度。即使孔井40中存在極少量的液體90也會發(fā)生這樣的高效熱傳遞。幾乎與孔井中的液體90 —樣快速，填充床17中的溫度與培養(yǎng)器塊體80平衡。填充床17中的容積以及用于大部分應用的相關液體體積優(yōu)選地相當小(典型地為5-lOOyL)。這就導致在溫度升高的培養(yǎng)的過程中可能產生蒸發(fā)。將系統(tǒng)構型為使旋轉柱10保持在位，使得旋轉柱10的出口吸頭18浸沒在接收器孔板40中的一定量的液體90中(參加圖2和3)，這有助于防止填充床17在溫度升高的培養(yǎng)的過程中變干。蒸發(fā)到填充床17的頂部外的液體將由虹吸自接收器孔板孔井40的液體代替。此外，形成基本密封的腔室的蓋子70和旋轉柱10的上輪緣12之間、支架50和接收器孔板30之間以及旋轉柱10和支架50之間的連續(xù)接觸(參加圖2和3)整體上限制了從該系統(tǒng)蒸發(fā)的量。使用時，反應溶液被置于旋轉柱樣品杯14內，并且在足夠低的力下利用安裝在支架50之下的接收器孔板30進行離心，從而使反應溶液進入填充床17之內，但由于毛細作用而并不會清空填充床。在該步驟中，該系統(tǒng)優(yōu)選地在接收器孔板孔井40之內包括一定量的液體(參見圖2)。組裝好的系統(tǒng)隨后利用處于培養(yǎng)位置的蓋子70而被安裝到培養(yǎng)器塊體80上(參見圖3)。在培養(yǎng)的過程中發(fā)生化學反應，其產生了反應產物。通過將洗脫溶液移液到旋轉柱樣品杯17內并離心到同樣或不同的接收器孔板30內，從而使反應產物能夠在不發(fā)生任何體積損失的條件下進行洗脫。所有這些操作能夠利用標準機器人可變和液體操作系統(tǒng)來直接執(zhí)行。在某些情況下，可望在已經發(fā)生反應之后從樣品中蒸發(fā)掉某些或全部液體。例如，洗脫的反應產物可能需要更換為來自反應溶液的不同溶質，用于隨后的清理步驟。本發(fā)明的系統(tǒng)能夠用于這些干燥步驟，例如，通過僅采用接收器孔板30和培養(yǎng)器塊體80來執(zhí)行，如圖4所示。這就有效地“解封” 了基本密封的腔室，并且容許進行蒸發(fā)。通過利用同樣的接收器孔板30，能夠免去液體轉移步驟，從而減少了樣品損失并使整個工作流程化。滯留空氣本發(fā)明還提供了在使用之前及使用的過程中減少滯留在填充床17之內的空氣的系統(tǒng)和方法?？諝饽軌蛞詳?shù)種方式進入旋轉柱10的填充床17。首先，在柱10的基本操作和運行中，空氣能夠滯留在填充床17中。其次，如果在使柱10旋轉時使用的“ X g”力超過特定的臨界值(其取決于填充微粒的直徑和珠上的液相的表面張力)，則離心g場將迫使液體在抵達床的頂部表面之后溢出床外，從而在之后吸入空氣。再次，旋轉柱10的樣品杯17在運行過程中一被排空，液體就開始從填充床17的頂部和底部兩處進行蒸發(fā)。因為床容積非常小(因此包含于床之內的液體體積非常小，其可以小至2至L)，因此僅由于10至15分鐘的該蒸發(fā)就會使大量空氣進入床17。最后，在本發(fā)明的非常小的設備中，在通過移液導入樣品和緩沖液的過程中還可以恰好在填充床17的頂部之上在樣品杯14的受限區(qū)域中捕獲氣泡。本文所述的旋轉柱系統(tǒng)和相關方法避免了這些問題。圖5中所示系統(tǒng)中的旋轉柱10例如能夠準備使用在再濕潤步驟中，以便除去在填充床17中會捕獲的空氣。在再濕潤步驟中 ，支架50、旋轉柱10和接收器孔板30組裝在一起，如圖6所示。將一定量的液體90加入到每一個旋轉柱10的樣品杯14,并且在離心機中使該組件旋轉。使該組件旋轉使得旋轉柱10中的液位與接收器孔板孔井40中的液位平衡，其中接收器孔板30的孔井40內側以及旋轉柱10的樣品杯14內側的液位是相同的(參見圖6)。增加到樣品杯14并旋轉的液體的量優(yōu)選地足以使已平衡的液位高于填充床17的界面16，并且使至少部分液體保留在樣品杯14中(參見圖6)。再濕潤步驟能夠在相對高的離心力下執(zhí)行(例如，大約IOOOXg或更大)。這就產生了足夠高的流速，從而除去在填充床17之內捕獲的所有空氣。將最終液面保持在填充床17的頂部之上(參見圖6)防止床被高離心力“旋轉干”，通過恒定地浸沒在液體中而始終保持其免于變干，并且以液體填充每一個旋轉柱10的樣品杯14的大部分受限制區(qū)域，以便防止在隨后將材料加載到旋轉柱10內的過程中使氣泡滯留在填充床17中。在再濕潤之后，液體樣品能夠被加載在包含在旋轉柱10的樣品杯的少量液體的頂部上。隨后從接收器孔板30移走支架50和旋轉柱10，并且清空或替換掉接收器孔板30。隨后將支架50和旋轉柱10設置在清空的接收器孔板30上，并且與設置在位的接收器孔板30—起旋轉。相似地執(zhí)行洗滌步驟。如圖7所示，孔井40的圓錐形狀確保了甚至在極少量的液體已經穿過床之后，出口吸頭18都能夠浸沒在孔板孔井40中的液體中。這就防止了在床內發(fā)生從填充床17的出口吸頭側18的蒸發(fā)。此外，如果從填充床17的界面16發(fā)生任何蒸發(fā)，則液體將由于毛細作用而從接收器孔板30的對應孔井40發(fā)生虹吸。該虹吸作用防止了填充床17由于從填充床17的界面16 —側發(fā)生蒸發(fā)而變干。在隨后所述步驟的過程中的任意點處，接收器孔板30都能夠容易地從支架50分離，并且被清空或替換掉。范圍較寬的不同體積的液體90能夠在加載步驟的過程中被加載到每一個旋轉柱10的樣品杯14內。如果對應接收器孔板孔井40中的液位并未填充到高于界面16的高度，則所有液體將穿過填充床17。參見圖7。利用該系統(tǒng)在任何測定中的最后步驟都包括從填充床17洗脫已分離的已提純的已隔離的或已反應的分析物或其衍生物(或預期部分)，并且將分析物或其衍生物(或部分)收集在微孔板孔井25中用于分析。對于該步驟，將包含旋轉柱10的支架50從接收器孔板30移走并組裝在微孔板20上，如圖8所示。將出口吸頭18定位在由微孔板20的頂部板21限定的平面處或恰好定位在該平面下能夠在增加到樣品杯14的液體洗脫緩沖液已經穿過填充床17之后將其清潔并且準確地對其進行收集。每一個旋轉柱10的填充床17在該階段都容易變干或滯留氣泡，但是其總是該處理中的最后步驟。在該步驟之后，能夠將旋轉柱10立即如上所述地再濕潤，并且將其存儲在完全濕潤的無空氣狀態(tài)下。
本發(fā)明包括本文所描述的任意單獨的要素或其組合。本文所述的要素能夠以任何組合進行使用，無論是否對其進行了明確描述。本發(fā)明的任何方法、要素或設備的任意形式都可以與本發(fā)明的任意的其它方法、要素或設備一起使用。本文所述的方法或處理步驟的所有組合都能夠以任意次序執(zhí)行，除非通過做出所參考組合的上下文另外指出或清楚地作出了相反的暗示。按照本文的用法，單數(shù)形式“一”、“一個”以及“該”包括復數(shù)指示物，除非該內容清楚地進行了其它陳述。術語“或(或者)”基本在其包括“和/或(以及/或者，并且/或者)”的意義上進行使用，除非該內容清楚地進行了其它陳述。本文所使用的數(shù)值范圍意在包括包含在該范圍之內的任何數(shù)值和數(shù)值的子集，無論是否對其進行了特別公開。另外，這些數(shù)值范圍應當被解釋為對于涉及該范圍中的任何數(shù)值或數(shù)值的子集的權利要求提供支持。例如，公開了從I至10，就應當解釋為支持從2至8、從3至7、從5至6、從I至9、從3. 6至4. 6、從3. 5至9. 9等等的范圍。
所有公開物、專利和專利申請通過引用明確地納入本文，引用的程度相當于對其每一個都通過引用進行了具體的且單獨的描述。在本發(fā)明以及所引入的公開物、專利和專利申請之間發(fā)生沖突的情況下，則應當以本發(fā)明為準。本文所描述的要素能夠包括本文所述的主要要素及限制以及本文所述的或者本領域中有用的任何附加或可選步驟、配料、成分或限制，由所有這些構成或者主要由這些構成。應當理解，本發(fā)明并不限制于本文所顯示和所描述的部件的具體結構和布置，而是包括例如處于權利要求書的范圍之內的這些具體結構和布置的修飾形式。實施例實施例I :旋轉柱利用模制的聚丙烯殼體進行構造，其中在成型的濾網(wǎng)支撐器和200 UL容積的樣品杯之間包含5 u L容積的填充床(AssayMAP cartridges, BioSystem Development,LLC, Madison, WI)。填充床由涂覆有親水聚合物的基于聚苯乙烯/ 二乙烯基苯的多孔珠構成，其具有固定化蛋白質 A 親和配體(P0R0S MAb Capture A, Applied Biosystems, Inc.，F(xiàn)oster City, CA)。旋轉柱安裝在根據(jù)本發(fā)明構造的支架中，該支架又安裝在接收器孔井上，該接收器孔井具有根據(jù)本發(fā)明構造的250 y L的圓錐底部的孔井。旋轉柱被提供為干的，因此在使用之前必須完全地進行再濕潤。為了實現(xiàn)這點，將200 u L的緩沖液(50mM磷酸鹽pH7. 2，150mM NaCl)移液到旋轉柱的樣品杯內。旋轉柱/支架/接收器孔板組件設置在配備有微孔板轉子(Model 5810, Eppendorf, Inc. , Hauppage,NY)的離心機中，并且在IOOOXg下離心2分鐘。在離心后，接收器孔板的孔井中的液位恰好處在旋轉柱樣品杯中的液位處。樣品杯包含約15 y L的液體，并且接收器孔板的孔井包含約185 u L0填充床的微觀檢查表明，微粒完全進行了水合，并且在填充床和樣品杯中均不存在氣泡。實施例2:實施例I中所述的旋轉柱利用該實施例中所述的過程來進行再濕潤。接收器孔板的孔井被清空，并且包含濃變化的已提純的人類IgG的25ii L的樣品溶液被移液到旋轉柱的樣品杯內。組件在50Xg下被離心5分鐘，從而在相對低的流速下將樣品中的IgG暴露到固定化蛋白質A，以便通過親和作用促進IgG到蛋白質A的選擇性定量結合。然后，將50uL緩沖液移液到每一個旋轉軸的樣品杯內，并且使組件在200 Xg下離心2分鐘以進行洗滌。隨后重復洗滌步驟。接收器可變隨后被移走，并且替換為具有175 UL的工作孔井容積的 96 孔井的半?yún)^(qū) UV 微孔板(Model 675801, Greiner GmbH, Frickenhausen, Germany)。隨后將50 ii L緩沖液(IOOmM甘氨酸，pH 2. 0)移液到每一個旋轉軸的樣品杯內，并且使組件在200 Xg下離心2分鐘以將已結合的IgG洗脫到微孔板內。隨后在280nm下在測光板(SpectraMAX 250, Molecular Devices, Inc. , Sunnyvale, CA)中讀取該孔板。結果顯不在下表中和圖9的圖表中。標準曲線是高度線性的(R2 = I. 00001)，其具有良好的精確度(CV
< 6% ) o
權利要求
1.一種旋轉柱系統(tǒng)，包括 至少ー個旋轉柱，其具有填充床； 支架，其具有穿過該支架的至少ー個孔隙，其中，所述孔隙的尺寸和構型被設計為可釋放地接合所述旋轉柱；以及 接收器孔板，其包括 頂部板； 至少ー個孔井，其限定在所述頂部板之內以對應于所述支架中的所述至少ー個孔隙，所述孔井具有底部表面；以及 孔井開ロ，其位于由所述頂部板限定的平面中， 其中，所述支架和接收器孔板的尺寸和構型被設計為彼此接合，使得當所述支架和所述接收器孔板接合時所述孔隙和所述孔井配準，并且，當所述支架和所述接收器孔板接合并且所述旋轉柱被布置在所述孔隙中時，所述填充床被完全布置在所述底部表面與所述孔井開ロ之間。
2.根據(jù)權利要求I所述的系統(tǒng)，其中，所述支架的尺寸和構型被設計為與微孔板接合，所述微孔板具有頂部板、孔井和位于由所述頂部板限定的平面中的孔井開ロ，其中，所述旋轉柱包括出ロ吸頭，并且，所述支架和所述旋轉柱的尺寸和構型被設計使將所述出ロ吸頭懸在離所述微孔板的孔井開ロ 5mm之內。
3.根據(jù)權利要求I所述的系統(tǒng)，其中，所述支架的尺寸和構型被設計為與微孔板接合，所述微孔板包括具有容量的孔井，其中，所述旋轉柱的填充床具有容量，并且，所述填充床的容量為所述微孔板的孔井的容量的至多大約1/5。
4.根據(jù)權利要求3所述的系統(tǒng)，其中，所述填充床的容量為所述微孔板的孔井的容量的至多大約1/10。
5.根據(jù)權利要求I所述的系統(tǒng)，其中，所述旋轉柱包括大約60y L或更小容量的填充床。
6.根據(jù)權利要求I所述的系統(tǒng)，其中，所述支架的尺寸和構型被設計為與微孔板接合，其中，所述支架包括具有底部表面的側部板以及從所述側部板偏移的邊沿，所述邊沿包括內表面，并且其中，當所述支架和所述孔板接合時，所述底部表面和所述內表面兩者均接觸所述微孔板。
7.根據(jù)權利要求I所述的系統(tǒng)，其中，所述支架的尺寸和構型被設計為與常規(guī)96孔井的微孔板接合，使得當所述支架與所述微孔板接合時，所述支架中的孔隙與所述微孔板的孔井配準。
8.根據(jù)權利要求I所述的系統(tǒng)，其中，所述旋轉柱包括出ロ吸頭，并且其中，所述支架、所述旋轉柱和所述接收器孔板的尺寸和構型被設計為使所述出口吸頭懸在離所述孔井的底部表面5mm之內。
9.根據(jù)權利要求I所述的系統(tǒng)，其中，所述接收器孔板的頂部板包括頂部表面，并且所述支架包括具有底部表面的頂部板，并且其中，當所述支架和所述接收器孔板接合時，所述接收器孔板的頂部表面與所述支架的底部表面接觸。
10.根據(jù)權利要求9所述的系統(tǒng)，其中，所述支架還包括側部板以及從所述側部板偏移的邊沿，所述接收器孔板還包括側部板以及從所述側部板偏移的邊沿，并且其中，當所述支架和接收器孔板接合時，所述支架的側部板和邊沿分別接觸所述接收器孔板的側部板和邊沿。
11.根據(jù)權利要求10所述的系統(tǒng)，其中，當所述支架和所述接收器孔板接合時，所述支架的側部板還接觸所述接收器孔板的所述邊沿。
12.根據(jù)權利要求I所述的系統(tǒng)，其中，所述支架包括96個孔隙且所述接收器孔板包括96個孔井，所述孔隙和所述孔井以9_的中心距設置成8X 12陣列。
13.根據(jù)權利要求I所述的系統(tǒng)，還包括蓋子，所述蓋子的尺寸和構型被設計為與所述支架接合并接觸所述旋轉柱。
14.根據(jù)權利要求13所述的系統(tǒng)，其中，所述旋轉柱還包括樣品杯，所述樣品杯與所述填充床呈流體連通并且具有上輪緣，并且其中，當所述支架與旋轉柱、所述支架與接收器孔板以及所述蓋子與支架接合吋，并且還當所述支架接觸所述旋轉柱的上輪緣時，所述樣品杯、所述填充床和所述孔井一起形成基本密封的腔室。
15.根據(jù)權利要求14所述的系統(tǒng)，其中，當所述旋轉柱插入所述支架中時所述旋轉柱與所述支架形成連續(xù)接觸，當所述支架與所述接收器孔板接合時所述支架與所述接收器孔板形成連續(xù)接觸，并且當所述蓋子與所述支架接合且所述蓋子接觸旋轉柱時所述蓋子與所述旋轉柱的上輪緣形成連續(xù)接觸。
16.根據(jù)權利要求I所述的系統(tǒng)，還包括培養(yǎng)器塊體，所述培養(yǎng)器塊體的尺寸和構型被設計為接觸所述接收器孔板的孔井的外表面，并且加熱和冷卻到特定溫度。
17.根據(jù)權利要求I所述的系統(tǒng)，還包括蓋子和培養(yǎng)器塊體，所述蓋子、所述旋轉柱、所述接收器孔板和所述培養(yǎng)器塊體的構型和尺寸被設計為組裝成嵌套構型。
18.ー種利用權利要求I所述的系統(tǒng)對分析物進行分析的方法，包括 (a)將所述旋轉柱插入所述支架中的孔隙中，并使所述支架與所述接收器孔板接合，其中，所述旋轉柱、所述支架和所述接收器孔板形成組裝單元，并且其中，所述旋轉柱與所述接收器孔板中的孔井配準； (b)將樣品加載在所述旋轉柱中；(C)使所述組裝単元旋轉，其中，所述樣品中的分析物被結合到所述旋轉柱中的填充床； (d)對來自所述填充床的分析物或該分析物的衍生物進行洗脫；并且 (e)對所述分析物或該分析物的衍生物進行分析。
19.根據(jù)權利要求18所述的方法，其中，旋轉步驟包括使所述組裝単元在離心カ下在離心機中旋轉，使得將所述分析物定量地結合并保留在所述填充床中。
20.根據(jù)權利要求18所述的方法，其中，洗脫步驟包括將體積是所述填充床的容量的至少五倍的洗脫緩沖液増加到所述旋轉柱，旋轉所述組裝単元，并且在孔井中收集洗脫液，其中，所述孔井的容量為所述填充床的容量的至少5倍。
21.根據(jù)權利要求20所述的方法，其中，所述孔井的容量為所述填充床的容量的至少10倍，并且其中，分析步驟包括將體積至少等于所述洗脫緩沖液的體積的分析試劑增加到所述孔井，將所述洗脫液和所述分析試劑混合以產生混合物，并且讀取該混合物。
22.根據(jù)權利要求18所述的方法，其中，分析步驟包括對所述分析物或者該分析物的衍生物的量進行定量。
23.根據(jù)權利要求18所述的方法，在分析步驟之后，還包括將所述旋轉柱從所述支架移走，利用該支架并利用第二旋轉柱來重復步驟(a)-(e)。
24.根據(jù)權利要求18所述的方法，還包括對所述填充床進行再濕潤，其中，再濕潤步驟包括將一定量的液體増加到所述旋轉柱，并且旋轉所述組裝單元，其中，這一定量的液體將所述孔井填充到至少等于在所述旋轉柱中的所述填充床與所述樣品杯之間的界面的高度，其中，部分液體在旋轉之后保留在所述樣品杯中，并且其中，從所述填充床中除去空氣。
25.根據(jù)權利要求18所述的方法，在旋轉步驟和洗脫步驟之間還包括從所述接收器孔板移走所述支架，并使所述支架與常規(guī)96孔井的微孔板接合，使得當所述支架與所述微孔板接合時，所述支架中的孔隙與所述微孔板的孔井配準，其中，洗脫步驟包括在所述微孔板的孔井中收集洗脫液。
26.根據(jù)權利要求18所述的方法，還包括使蓋子與所述支架接合以形成基本密封的腔室，該腔室包括所述旋轉柱的樣品杯、所述填充床和所述接收器孔板的孔井，其中，蒸發(fā)被最小化。
27.根據(jù)權利要求26所述的方法，還包括在培養(yǎng)器塊體中培養(yǎng)所述接收器孔板的填充床，其中，一定量的熱量從所述培養(yǎng)器塊體經過所述孔井中的孔井壁并經過所述孔井中包含的液體而傳遞到所述填充床，其中，所述填充床和所述培養(yǎng)器塊體的溫度是相同的，并且蒸發(fā)被最小化。
28.根據(jù)權利要求18所述的方法，在洗脫步驟之后還包括在培養(yǎng)器塊體中對所述接收器孔板的孔井進行培養(yǎng)以促進蒸發(fā)。
29.根據(jù)權利要求18所述的方法，在旋轉和洗脫步驟之間還包括將包括分析試劑的溶液更換到填充床內，其中，所述分析試劑對結合到所述填充床的分析物進行化學改性，以產生該分析物的衍生物。
30.根據(jù)權利要求29所述的方法，在更換和洗脫步驟之間還包括在培養(yǎng)器塊體中培養(yǎng)所述接收器孔板的填充床，其中，一定量的熱量從所述培養(yǎng)器塊體經過所述孔井中的孔井壁并經過所述孔井中包含的液體而傳遞到所述填充床，其中，所述填充床和所述培養(yǎng)器塊體的溫度是相同的，并且蒸發(fā)被最小化。
31.根據(jù)權利要求30所述的方法，在培養(yǎng)步驟之前還包括使蓋子與所述支架接合以形成基本密封的腔室，該腔室包括所述旋轉柱的樣品杯、所述填充床和所述接收器孔板的孔井，其中，蒸發(fā)被最小化。
32.根據(jù)權利要求29所述的方法，其中，在洗脫步驟之前，從所述填充床釋放所述分析物的衍生物。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種低床容量的旋轉柱系統(tǒng)及使用方法。該系統(tǒng)包括旋轉柱與填充床(17)、用于保持所述旋轉柱(10)的支架(50)、附接到所述支架(50)并具有與保持在所述支架(50)中的所述旋轉柱(10)配準的孔井(40)的接收器孔板(30)、附接到所述接收器孔板(30)并對所述旋轉柱(10)進行密封的蓋子(70)、以及容放所述接收器孔板(30)的孔井(40)并對填充床(17)進行培養(yǎng)的培養(yǎng)器塊體(80)的各種組合。所述蓋子(10)、旋轉柱(10)、支架(50)、接收器孔板(30)和培養(yǎng)器塊體(80)優(yōu)選地能夠以嵌套構型進行組裝。在本發(fā)明的優(yōu)選形式中，所述支架(50)與常規(guī)96孔井的微孔板(20)兼容并且可附接到該微孔板(20)。本發(fā)明進一步提供了利用該旋轉柱系統(tǒng)的方法，包括對分析物進行定量提純和分析，除去在所述填充床(17)之內滯留的空氣并防止空氣在其內滯留，并且在防止所述填充床變干的同時對所述填充床進行培養(yǎng)。
文檔編號G01N1/40GK102770769SQ201080041217
公開日2012年11月7日 申請日期2010年7月14日 優(yōu)先權日2009年7月15日
發(fā)明者斯科特·富爾頓, 羅伯特·薩科夫斯基 申請人:安捷倫科技有限公司