專(zhuān)利名稱(chēng)：治療骨丟失相關(guān)疾病的siglec 15抗體的制作方法
治療骨丟失相關(guān)疾病的SIGLEC 15抗體
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及與Siglec-15特異性結(jié)合的單克隆抗體和其抗原結(jié)合片段，及其用于治療某些疾病的用途，所述用途包括診斷、預(yù)防和治療癌癥或骨丟失，諸如與骨相關(guān)疾病有關(guān)的、或與破骨細(xì)胞分化或活性增高有關(guān)的嚴(yán)重的或過(guò)度的骨丟失。本發(fā)明還涉及這些抗體用于診斷、預(yù)防和治療其中破骨細(xì)胞的活性增高的多種其它類(lèi)型的疾病的用途。
背景技術(shù)：
骨是動(dòng)態(tài)的結(jié)締組織，由支持骨的結(jié)構(gòu)、機(jī)械和生化完整性和人體礦物質(zhì)平衡所需的功能上不同的細(xì)胞群組成。所涉及的主要細(xì)胞類(lèi)型包括負(fù)責(zé)骨形成并維持骨量(bonemass)的造骨細(xì)胞和負(fù)責(zé)骨再吸收的破骨細(xì)胞。造骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞在稱(chēng)作骨重建的動(dòng)態(tài) 過(guò)程中起作用。這些細(xì)胞從其祖細(xì)胞的發(fā)育和增殖受骨微環(huán)境中產(chǎn)生的生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子的網(wǎng)絡(luò)以及系統(tǒng)激素的控制。骨重建在個(gè)體一生中都進(jìn)行著，并且是維持健康的骨組織和礦物質(zhì)平衡所必需的。該過(guò)程在很大程度上保持著平衡，并受系統(tǒng)激素、肽和下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路蛋白、局部轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子和基質(zhì)重建基因的復(fù)雜的相互影響的控制。骨重建過(guò)程中出現(xiàn)的任何干擾或不平衡可產(chǎn)生骨骼疾病，其中最常見(jiàn)的骨骼病癥以骨量的凈減少為特征。該骨量減少的主要原因是破骨細(xì)胞數(shù)量和/或活性的增高。這種疾病最常見(jiàn)的和可能最熟知的是尤其在絕經(jīng)期開(kāi)始之后的婦女中發(fā)生的骨質(zhì)疏松癥。事實(shí)上，骨質(zhì)疏松癥在中老年和老年婦女中是骨折的最重要的根本原因。雖然雌激素缺乏已被強(qiáng)烈牽扯為絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的因素，但有長(zhǎng)期存在的證據(jù)一重建是局部受控的過(guò)程，因?yàn)槠浒l(fā)生在遍及骨骼中的不連續(xù)的小包(discrete packet)中，如40多年之前由Frost所首先描述的(Frost H. M. 1964)。因?yàn)楣侵亟òl(fā)生在不連續(xù)的小包中，所以局部產(chǎn)生的激素和酶對(duì)于骨再吸收的開(kāi)始和正常重建過(guò)程可能比系統(tǒng)激素更重要。該局部控制受微環(huán)境中的的造骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞所調(diào)節(jié)，其中造骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞在所述微環(huán)境中起作用。例如，破骨細(xì)胞附著于骨基質(zhì)并在其與骨表面之間形成獨(dú)立的區(qū)室，所述骨表面由皺折緣周?chē)囊蝗?dòng)蛋白形成的封閉區(qū)所限定。多個(gè)小囊泡朝向骨基質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)酶并使部分消化的骨基質(zhì)內(nèi)化。封閉區(qū)內(nèi)的微環(huán)境中富集溶酶體酶，且與機(jī)體的正常生理PH相比是高度酸性的。皺折緣膜還表達(dá)RANKL的受體RANK，和巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)受體(二者均負(fù)責(zé)破骨細(xì)胞分化)，以及能夠快速使破骨細(xì)胞失活的降鈣素受體(Baron，R. 2003)。在復(fù)雜的抑制和刺激方式中，生長(zhǎng)激素、胰島素樣生長(zhǎng)因子-I、性類(lèi)固醇、甲狀腺激素、降鈣素激素(諸如PTH和前列腺素E2)、多種細(xì)胞因子(諸如白介素-IP、白介素-6和腫瘤壞死因子a )和1，25-二羥維生素D(鈣三醇)在骨重建過(guò)程中共同協(xié)調(diào)作用(Jilka等 1992 ；Poli 等 1994 ；Srivastava 等 1998 ；de Vemejoul 1996)。因此，通過(guò)這些特化的細(xì)胞創(chuàng)建的獨(dú)特的局部環(huán)境是由于在其它組織中不表達(dá)的獨(dú)特的遺傳序列的表達(dá)和/或在其它組織中表達(dá)的多核苷酸和多肽的剪接變體的表達(dá)所導(dǎo)致是合乎情理的。對(duì)破骨細(xì)胞活性特異的多核苷酸、多肽和其變體和衍生物的分離和鑒定將允許重建過(guò)程的更清楚的理解，并為與骨重建相關(guān)的疾病狀態(tài)的治療提供了組織特異性治療靶標(biāo)。與骨重建相關(guān)聯(lián)的許多疾病未被充分認(rèn)識(shí)，通常是無(wú)法治療或僅可以有限的程度治療。例如，骨關(guān)節(jié)炎難以治療，因?yàn)闆](méi)有集中于減輕疼痛并防止受影響關(guān)節(jié)變形的療法和治療。通常使用非類(lèi)固醇抗炎藥物(NSAID)減輕疼痛。另一個(gè)實(shí)例是骨質(zhì)疏松癥，其中在美國(guó)通過(guò)FDA批準(zhǔn)使用的目前唯一藥物是抗再吸收劑，其防止骨斷裂。雌激素替代療法是抗再吸收劑的一個(gè)實(shí)例。另外包括阿倫膦酸鹽(福善美(Fosamax)—一種二磷酸鹽抗再吸收劑)、利塞膦酸鹽(Actonel—一種二磷酸鹽抗再吸收劑)、雷洛昔芬(Evista—選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERMS))、降鈣素(Calcimar—一種激素)和甲狀旁腺素/特立帕肽(teriparatide) (Forteo—人激素(甲狀旁腺素)的一種合成形式，其協(xié)助調(diào)節(jié)鈣代謝)。諸如阿倫膦酸鹽和利塞膦酸鹽的二磷酸鹽與骨的表面永久結(jié)合并干擾破骨細(xì)胞 活性。這允許造骨細(xì)胞超越再吸收的速度。最常見(jiàn)的副作用是惡心、腹痛和腹瀉。然而，阿倫膦酸鹽被報(bào)道還導(dǎo)致食道的刺激和炎癥，并且在一些情況下導(dǎo)致食道的潰瘍。利塞膦酸鹽在化學(xué)上不同于阿倫膦酸鹽，且較小可能地導(dǎo)致食道刺激。然而，某些食物、鈣、鐵補(bǔ)充物、維生素和礦物質(zhì)，或含鈣、鎂或鋁的抗酸劑可降低利塞膦酸鹽的吸收，從而導(dǎo)致效力的喪失。雷洛昔芬和其它SERMS(諸如他莫昔芬(Tamoxifen))的最常見(jiàn)的副作用是熱潮紅。然而，已顯示雷洛昔芬和其它激素替代療法增加了血塊的風(fēng)險(xiǎn)，包括深靜脈血栓癥和肺栓塞、心血管病和癌癥。降鈣素在增加骨密度和強(qiáng)化骨方面不如雌激素和其它抗再吸收劑一樣有效。注射的或鼻腔噴霧的降鈣素的常見(jiàn)副作用是惡心和發(fā)紅。患者可形成鼻刺激、流鼻涕或流鼻血。可注射的降鈣素可在注射部位導(dǎo)致局部皮膚發(fā)紅、皮疹和發(fā)紅。表明涉及骨重建的若干疾患或疾病狀態(tài)之間的關(guān)聯(lián)的情況是使用首次通過(guò)FDA批準(zhǔn)的依替膦酸鹽(Didronel)治療佩吉特氏病(Paget’ s disease)。佩吉特氏病是以失調(diào)和加速的骨重建為特征的骨病，導(dǎo)致了骨衰弱和疼痛。依替膦酸鹽已用于“未標(biāo)志用途(off-label) ”，且在一些研究中顯示在患有確定的骨質(zhì)疏松癥的絕經(jīng)后婦女中增加了骨密度。還已發(fā)現(xiàn)在需要長(zhǎng)期類(lèi)固醇藥物(諸如強(qiáng)的松(Prednisone)或可的松(Cortisone))的患者中有效防止骨丟失。然而，高劑量或連續(xù)使用依替膦酸鹽可導(dǎo)致稱(chēng)為骨軟化癥的另一骨病。如骨質(zhì)疏松癥一樣，骨軟化癥可導(dǎo)致衰弱的骨，具有增高的骨折風(fēng)險(xiǎn)。由于骨軟化癥憂(yōu)慮和仍缺少關(guān)于降低骨折速率的足夠的研究，美國(guó)FDA未批準(zhǔn)依替膦酸鹽用于骨質(zhì)疏松癥的治療。已主要將骨質(zhì)疏松癥治療集中于降低骨丟失速率的抗再吸收藥物，但新出現(xiàn)的療法顯示了增加骨礦物質(zhì)密度而非僅維持骨礦物質(zhì)密度或減慢其惡化的前景。骨質(zhì)疏松癥早期階段主要由新治療種類(lèi)中的藥物候選物組成，尤其是組織蛋白酶K抑制劑、骨保護(hù)素和隹丐敏感受體拮抗劑(calcilytics)以及新型二磷酸鹽。這些中的一些是這樣的實(shí)例其中基于骨生物學(xué)的更深的認(rèn)識(shí)正在開(kāi)發(fā)利用基因組學(xué)計(jì)劃的新型藥物，且長(zhǎng)期而言其具有改變治療骨疾患的面貌的可能性。
本發(fā)明描述了對(duì)Siglec-15特異的抗體用于診斷、預(yù)后和治療(包括預(yù)防)癌癥或骨丟失(例如，與骨相關(guān)疾病有關(guān)的、或與破骨細(xì)胞分化或活性的增高有關(guān)的嚴(yán)重的或過(guò)度的骨丟失)的用途。尤其是，本發(fā)明涉及抗Siglec-15抗體用于抑制破骨細(xì)胞的分化的用途。唾液酸結(jié)合免疫球蛋白樣凝集素(Siglec)是免疫球蛋白(Ig)超家族的成員，其具有與唾液酸相互作用的能力(McMillan和Crocker, 2008 ；Crocker等，2007)。存在一些Siglec家族成員，其均共有特定的結(jié)構(gòu)特征，尤其是，表現(xiàn)出結(jié)合唾液酸的氨基末端V-setIg結(jié)構(gòu)域和不同數(shù)目的C2_set Ig結(jié)構(gòu)域。這些膜受體一般以高度特異的方式表達(dá)，且家族成員中的許多在造血細(xì)胞中表達(dá)(McMillan和Crocker, 2008)。這些蛋白質(zhì)被認(rèn)為通過(guò)識(shí)別聚糖來(lái)促進(jìn)細(xì)胞-細(xì)胞相互作用、調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和調(diào)控免疫功能(Crocker等，2007)。唾液酸是通常位于細(xì)胞表面的復(fù)雜糖復(fù)合物的端部的九碳糖。其可與多種蛋白質(zhì)和脂質(zhì)連接(McMillan 和 Crocker, 2008)。Siglec-15是最近被描述的與Siglec_14具有高度同源性的Siglec家族成員之一(Angata等，2007)。這些作者報(bào)道了其優(yōu)先結(jié)合唾液酰Tn結(jié)構(gòu)，且其與DAP12和DAPlO相 互作用。這些相互作用的功能意義是未知的，但提出Siglec-15可能具有激活功能(Angata等，2007)。雖然這些初步洞察了 Siglec-15在哺乳動(dòng)物中的可能作用，但當(dāng)將序列鑒定為篩選的部分以發(fā)現(xiàn)破骨細(xì)胞分化的新型調(diào)節(jié)物時(shí)，促進(jìn)了對(duì)蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能的理解的重要進(jìn)展(Sooknanan等，2007)。在本專(zhuān)利申請(qǐng)中，揭示了在破骨細(xì)胞發(fā)生的小鼠模型中，通過(guò)RNA干擾對(duì)Siglec-15轉(zhuǎn)錄物的衰減導(dǎo)致了響應(yīng)于RANKL治療的前體的分化的顯著降低。在人破骨細(xì)胞中公開(kāi)了類(lèi)似的結(jié)果。并且，本公開(kāi)內(nèi)容中呈現(xiàn)的研究還顯示Siglec-15在細(xì)胞膜的定位對(duì)于其在破骨細(xì)胞分化中的作用是必需的。并且，最近的出版物顯示表面糖復(fù)合物的末端的唾液酸的存在是適當(dāng)?shù)钠乒羌?xì)胞分化所需的，且對(duì)于破骨細(xì)胞前體細(xì)胞的融合可能是重要的(Takahata等，2007)。該最新觀察創(chuàng)建了分化中的破骨細(xì)胞中唾液酸結(jié)合和Siglec-15的表達(dá)之間的直接功能關(guān)聯(lián)，并有力表明了 Siglec-15在破骨細(xì)胞前體的早期分化程序中具有作用。因此，Siglec-15的表達(dá)譜，其在破骨細(xì)胞分化過(guò)程中的強(qiáng)可誘導(dǎo)性、其在膜表面的定位和其結(jié)構(gòu)特征均有助于利用單克隆抗體在細(xì)胞表面靶向該蛋白質(zhì)的可行性。靶向破骨細(xì)胞的基于單克隆抗體的療法的唯一的另外實(shí)例是狄諾塞麥(denosumab)，對(duì)RANKL特異的人單克隆抗體(Ellis等2008)。本發(fā)明涉及抗Siglec-15抗體或抗原結(jié)合片段在骨丟失的檢測(cè)或治療中尤其在骨相關(guān)疾病的情況下或在增高的破骨細(xì)胞分化或活性的情況下作為破骨細(xì)胞分化的阻斷劑的用途。本發(fā)明還涉及抗體或抗原結(jié)合片段在癌癥的檢測(cè)或治療中的用途。附圖簡(jiǎn)述圖I顯示了在來(lái)自6個(gè)不同供體的人分化中破骨細(xì)胞樣本中Siglec-15mRNA的基于PCR的表達(dá)譜。還描繪了來(lái)自30個(gè)人正常組織的RNA樣本中的表達(dá)譜。作為對(duì)照，將Siglec-15表達(dá)模式與熟知的破骨細(xì)胞標(biāo)志物組織蛋白酶K(CATK)相比較，并包括管家基因甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)以用于每個(gè)樣本中的RNA的量的對(duì)照。圖2顯示了從癌細(xì)胞系的NCI-60組中分離的樣本中的Siglec_15mRNA的表達(dá)。圖3呈現(xiàn)了含有作為Fe融合蛋白在293-6E細(xì)胞中表達(dá)的純化的人重組Siglec-15的樣本的考馬斯染色的聚丙烯酰胺凝膠。該制備物被用以產(chǎn)生本專(zhuān)利中公開(kāi)的單克隆抗體。圖4顯示了選自來(lái)自含抗Siglec_15Fab的Omniclonal文庫(kù)#25的96孔板的單獨(dú)單克隆抗體的Fc-Siglec-15ELISA結(jié)果。通過(guò)粗體數(shù)字指示的孔含有示例性單克隆抗體25A1、25B4、25B8、25C1、25D8、25E5、25E6和25E9。還顯示了在同樣的板上單獨(dú)使用Fe部分進(jìn)行的ELISA以鑒定對(duì)Fc-Siglec-15融合蛋白的Fe部分特異的那些單克隆抗體。圖5呈現(xiàn)了示出將小鼠Fab轉(zhuǎn)化到IgG2小鼠-人嵌合mAb中所涉及的步驟的方案。圖6顯示了對(duì)于示例性抗體25B4、25B8、25C1、2 8、25E6和25E9，小鼠抗Siglec-15Fab的結(jié)合與對(duì)應(yīng)的IgG2嵌合單克隆抗體的結(jié)合相比較的圖。結(jié)果表明當(dāng)轉(zhuǎn)移至完全人IgG2支架時(shí)，保持了 Fab可變區(qū)的相關(guān)結(jié)合。
圖7顯示了用遞增濃度的抗Siglec-15IgG2嵌合單克隆抗體25B8、25E6和25E9治療后對(duì)人破骨細(xì)胞的分化的抑制。治療之后，關(guān)于TRAP表達(dá)對(duì)破骨細(xì)胞進(jìn)行染色。圖8顯示了用遞增濃度的抗Siglec_15IgG2嵌合單克隆抗體25B8、25E6和25D8治療后對(duì)小鼠破骨細(xì)胞的分化的抑制。治療之后，關(guān)于TRAP表達(dá)對(duì)破骨細(xì)胞進(jìn)行染色。圖9顯示了在示例性抗體25C8的存在下人和小鼠Siglec-15的比較性結(jié)合。結(jié)果表明針對(duì)人Siglec-15生成的抗體的結(jié)合還與小鼠Siglec-15相互作用。圖IOA、IOB和IOC是對(duì)于所選擇的⑶RLI、⑶RL2和⑶RL3序列(分別)利用Clustalff2程序獲得的比對(duì)結(jié)果的總結(jié)；其中“ * ”意為在比對(duì)中該欄中的殘基在所有序列中相同的，意為已觀察到的保守置換，和”意為所觀察的半保守置換。利用ClustalW程序產(chǎn)生共有 CDR (Larkin M. A.,等，(2007) ClustalW和 ClustalX 版本 2. Bioinformatics2007 23(21):2947-2948)。圖IlAUlB和IlC是對(duì)于所選擇的CDRHU CDRH2和CDRH3序列(分別)利用Clustalff2程序獲得的比對(duì)結(jié)果的總結(jié)；其中“ * ”意為在比對(duì)中該欄中的殘基在所有序列中相同的，意為已觀察到的保守置換，和”意為所觀察的半保守置換。利用ClustalW程序產(chǎn)生共有 CDR (Larkin M. A.,等，(2007) ClustalW 和 ClustalX 版本 2. Bioinformatics2007 23(21):2947-2948)。

圖12示出了對(duì)于Siglec-15特異的25E9候選抗體抑制破骨細(xì)胞的骨再吸收活性的能力。圖13A、13B、13C、13D和13E通過(guò)從過(guò)表達(dá)Siglec_15cDNA的細(xì)胞制備的裂解物的免疫印跡(13A)、從人破骨細(xì)胞中制備的裂解物的免疫印跡(13B)和從小鼠破骨細(xì)胞中制備的裂解物的免疫印跡(13C)，和從U87成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞中制備的裂解物的免疫印跡，和通過(guò)完整U87細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)，證明Siglec-15抗體可檢測(cè)蛋白。圖14A和14B顯示了針對(duì)Siglec-15產(chǎn)生的抗體不與包括Siglec_2和CD33的其它有關(guān)Siglec結(jié)合。圖15顯示了證明抗Siglec-15抗體可抑制Siglec-15和唾液酸之間的相互作用的 ELISA。發(fā)明概述本發(fā)明涉及用于治療(包括預(yù)防)、檢測(cè)和診斷骨丟失或癌癥的抗體和抗原結(jié)合片段以及試劑盒。所述抗體和抗原結(jié)合片段更具體地可用于檢測(cè)已分化的破骨細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、腎癌細(xì)胞、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、黑素瘤細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞或結(jié)腸癌細(xì)胞和診斷骨丟失、卵巢癌、腎癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的癌癥、前列腺癌、黑素瘤、乳腺癌、肺癌或結(jié)腸癌。本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段還可用于治療骨丟失、卵巢癌、腎癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的癌癥、前列腺癌、黑素瘤、乳腺癌、肺癌或結(jié)腸癌。本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可與Siglec-15 (SEQ ID NO: 2)的第20至259位氨基酸或與Siglec-15變體(例如，SEQ ID NO: 4)的對(duì)應(yīng)區(qū)結(jié)合。更具體地，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可與Siglec-15 (SEQ ID NO: 2)的第49至165位氨基酸或與Siglec-15變體(例如，SEQ ID NO:4)的對(duì)應(yīng)區(qū)結(jié)合。本發(fā)明更具體地涉及能夠與能促使破骨細(xì)胞分化的多肽結(jié)合且能夠抑制多肽的破骨細(xì)胞分化活性的分離的抗體或抗原結(jié)合片段。本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段涵蓋與SEQ ID NO: 2的第20至259位氨基酸結(jié)合或 與同SEQ ID NO: 2的第20至259位氨基酸具有至少80%序列同一性的變體結(jié)合的那些。更具體地，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可更具體地與SEQ ID N0:2的第49至165位氨基酸結(jié)合或與同SEQ ID NO: 2的第49至165位氨基酸具有至少80%序列同一性的
變體結(jié)合。更具體地，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可更具體地與同SEQ ID N0:2具有至少80%序列同一性的多肽結(jié)合。根據(jù)本發(fā)明，抗體或抗原結(jié)合片段可因此干擾多肽促使破骨細(xì)胞分化或促使腫瘤生長(zhǎng)的能力。更具體地涵蓋能夠與SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 2變體的胞外區(qū)結(jié)合的抗體或抗原結(jié)合片段。本發(fā)明因此提供了能夠與能促使破骨細(xì)胞分化的多肽結(jié)合并與SEQ ID NO:2或與唾液酸結(jié)合免疫球蛋白樣凝集素15 (Siglec-15 ;SEQ ID NO:2) SEQ ID N0:2的第20至259位氨基酸具有至少80%序列同一性(或與SEQ ID NO: 2的第49至165位氨基酸具有至少80%同一性)的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段能夠抑制破骨細(xì)胞分化、骨再吸收(降解)或能夠阻斷Siglec-15與唾液酸結(jié)合。本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可能夠干擾(抑制)破骨細(xì)胞前體細(xì)胞分化為已分化的破骨細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明，分離的抗體或抗原結(jié)合片段可以是例如，多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、人抗體或其片段。在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，分離的抗體或抗原結(jié)合片段可以是包含人抗體的恒定區(qū)或其片段的氨基酸的嵌合抗體或人抗體。恒定區(qū)或其片段可來(lái)自IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，恒定區(qū)可來(lái)自IgG2?？梢蕴貏e有用的抗原結(jié)合片段包括例如，F(xiàn)V(scFv)、Fab、Fab'或(Fab' )2?？贵w或抗原結(jié)合片段可在分離的哺乳動(dòng)物細(xì)胞(非雜交瘤細(xì)胞)中產(chǎn)生或從分離的哺乳動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)生，或在雜交瘤細(xì)胞中產(chǎn)生。分離的哺乳動(dòng)物細(xì)胞的一個(gè)示例性實(shí)施方案是人細(xì)胞。
特別涵蓋在分離的哺乳動(dòng)物細(xì)胞(例如，人細(xì)胞)中產(chǎn)生單克隆抗體、嵌合抗體、人抗體或其片段。這樣產(chǎn)生的嵌合抗體或人抗體可包含人抗體的恒定區(qū)或其片段的氨基酸，包括例如，來(lái)自IgGl、IgG2、IgG3或IgG4的恒定區(qū)或其片段。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，恒定區(qū)可來(lái)自IgG2。在本發(fā)明的一方面，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可干擾(抑制)人破骨細(xì)胞前體細(xì)胞分化為分化的人破骨細(xì)胞。在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可干擾(抑 制)原代人破骨細(xì)胞前體細(xì)胞分化為分化的人破骨細(xì)胞。具有所述活性的抗體或抗原結(jié)合片段可包括例如，多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、人抗體或其片段。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，可能夠具有所述活性的抗體或抗原結(jié)合片段包括例如，單克隆抗體、嵌合抗體、人抗體或其片段。在一個(gè)甚至更具體的實(shí)施方案中，可能夠具有所述活性的抗體或抗原結(jié)合片段包括例如，可包含人抗體的恒定區(qū)或其片段的氨基酸的嵌合抗體、人抗體或其片段。嵌合或人抗體的恒定區(qū)或其片段可來(lái)自IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。更具體地，恒定區(qū)可來(lái)自IgG2。本發(fā)明的抗體和抗原結(jié)合片段還可用于一般靶向表達(dá)或過(guò)表達(dá)Siglec-15的細(xì)胞，所述細(xì)胞包括骨細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞和腎癌細(xì)胞以及黑素瘤細(xì)胞和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的癌細(xì)胞。更具體地，抗體和抗原結(jié)合片段可用于靶向經(jīng)歷分化的破骨細(xì)胞。本發(fā)明在其一方面提供了可能夠與SEQ ID N0:2特異性結(jié)合的分離的或基本上純化的抗體或抗原結(jié)合片段。更具體地且根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可與位于SEQ IDNO:2的第20位氨基酸和第259位氨基酸之間的結(jié)構(gòu)域結(jié)合。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可能夠與SEQ ID N0:2的第20位氨基酸和第259位氨基酸內(nèi)包含的表位結(jié)合。這樣，本發(fā)明涵蓋對(duì)SEQ ID NO:2具有特異性的診斷性和/或治療性抗體或抗原結(jié)合片段。本發(fā)明還涵蓋具有與本發(fā)明的抗體相同的表位特異性的抗體或抗原結(jié)合片段。通過(guò)確定是否其將與本文所描述的抗體結(jié)合的表位結(jié)合和/或通過(guò)用已知與表位結(jié)合的抗體或抗原結(jié)合片段進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定可鑒定候選抗體。因此，本發(fā)明的另一方面提供了能夠與本文所描述的抗體或抗原結(jié)合片段競(jìng)爭(zhēng)的分離的抗體或抗原結(jié)合片段。在另外的方面，本發(fā)明提供了利用本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段進(jìn)行治療的方法和檢測(cè)的方法。術(shù)語(yǔ)“抗體”是指完整的抗體、單克隆抗體或多克隆抗體。術(shù)語(yǔ)“抗體”還涵蓋多特異性抗體，諸如雙特異性抗體。人抗體通常由兩條輕鏈和兩條重鏈組成，每條鏈包含可變區(qū)和恒定區(qū)。輕鏈可變區(qū)包含3個(gè)⑶R，本文認(rèn)定為⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3，兩側(cè)為框架區(qū)。重鏈可變區(qū)包括3個(gè)⑶R，本文認(rèn)定為⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3，兩側(cè)為框架區(qū)。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“抗原結(jié)合片段”，是指保留與抗原(例如，SEQ ID N0:2或其變體)結(jié)合的能力的抗體的一個(gè)或多個(gè)片段。已顯示抗體的抗原結(jié)合功能可由完整的抗體的片段來(lái)執(zhí)行。涵蓋在術(shù)語(yǔ)抗體的“抗原結(jié)合片段”中的結(jié)合片段的實(shí)例包括(i)Fab片段，由\、VH、(^和Cm結(jié)構(gòu)域組成的單價(jià)片段；(ii)F(ab' )2片段，包括兩個(gè)在鉸鏈區(qū)通過(guò)二硫橋連接的Fab片段的二價(jià)片段；(iii)Fd片段，由Vh和Cm結(jié)構(gòu)域組成；(iv)Fv片段，由抗體的單臂的Vlj和Vh結(jié)構(gòu)域組成，(v)dAb片段(Ward等，(1989) Nature 341:544-546),其由Vh結(jié)構(gòu)域組成；和(vi)分離的互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R)，例如，Vh⑶R3。并且，雖然Fv片段的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域'和Vh由獨(dú)立的基因所編碼，但可利用重組方法通過(guò)能使它們作為單一多肽鏈的合成連接子將它們結(jié)合，其中在所述單一多肽鏈中'和VHg配對(duì)以形成單價(jià)分子(稱(chēng)為單鏈Fv(scFv);參見(jiàn)，例如，Bird 等.(1988) Science 242:423-426 ;和 Huston 等.(1988)Proc.Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883)。所述單鏈抗體也意在涵蓋在術(shù)語(yǔ)抗體的“抗原結(jié)合片段”之中。并且，抗原結(jié)合片段包括結(jié)合結(jié)構(gòu)域免疫球蛋白融合蛋白，其包含(i)結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽(諸如重鏈可變區(qū)、輕鏈可變區(qū)或通過(guò)連接子肽與輕鏈可變區(qū)融合的重鏈可變區(qū))，其與免疫球蛋白鉸鏈區(qū)多肽融合，(ii)與鉸鏈區(qū)融合的免疫球蛋白重鏈CH2恒定區(qū)，和(iii)與CH2恒定區(qū)融合的免疫球蛋白重鏈CH3恒定區(qū)?？赏ㄟ^(guò)將一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基用絲氨酸殘基取代來(lái)修飾鉸鏈區(qū)以防止二聚化。US 2003/0118592和US 2003/0133939中也公開(kāi)了所述結(jié)合結(jié)構(gòu)域免疫球蛋白融合蛋白。利用本領(lǐng)域中的技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)獲得 這些抗體片段，并篩選所述片段的與完整的抗體相同的效用。典型抗原結(jié)合位點(diǎn)包括由免疫球蛋白輕鏈和免疫球蛋白重鏈的配對(duì)形成的可變區(qū)?？贵w可變區(qū)的結(jié)構(gòu)是非常一致的并表現(xiàn)出非常相似的結(jié)構(gòu)。這些可變區(qū)通常包括相對(duì)同源的框架區(qū)(FR)，其與稱(chēng)作互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的3個(gè)高變區(qū)間隔?？乖Y(jié)合片段的總結(jié)合活性通常受⑶R序列的支配。FR通常在對(duì)于最優(yōu)抗原結(jié)合的⑶R的適當(dāng)定位和三維排列中起作用。本發(fā)明的抗體和/或抗原結(jié)合片段可源于例如，小鼠、大鼠或任何其它哺乳動(dòng)物或源于諸如通過(guò)重組DNA技術(shù)的其它來(lái)源。本發(fā)明的另外的范圍、適用性和優(yōu)點(diǎn)將從下文給出的非限制性詳細(xì)描述中變得顯而易見(jiàn)。然而，應(yīng)理解地是，在表明本發(fā)明的示例性實(shí)施方案時(shí)，該詳細(xì)描述參照附圖僅以實(shí)例的方式給出。發(fā)明詳述破骨細(xì)胞和正常組織中Siglec-15的表達(dá)譜本發(fā)明涉及單克隆抗體靶向見(jiàn)于多種骨相關(guān)疾病中的破骨細(xì)胞的用途，其中在所述骨相關(guān)疾病中，觀察到由于破骨細(xì)胞增高的活性導(dǎo)致嚴(yán)重骨丟失。為了將抗體定向到破骨細(xì)胞，必須進(jìn)行在細(xì)胞的細(xì)胞表面表達(dá)的破骨細(xì)胞特異性抗原的鑒定。存在若干對(duì)于鑒定細(xì)胞特異性抗原可用的技術(shù)，并且用來(lái)在用RANKL處理的分化中的破骨細(xì)胞中鑒定Siglec-15的方法(稱(chēng)作基于消減轉(zhuǎn)錄的mRNA的擴(kuò)增(STAR)的創(chuàng)新性探索平臺(tái))描述在公布的專(zhuān)利申請(qǐng)第PCT/CA2007/000210號(hào)中。人破骨細(xì)胞STAR文庫(kù)的分析產(chǎn)生了編碼分泌蛋白和細(xì)胞表面蛋白的許多基因。這些其中之一稱(chēng)作AB-0326，含有編碼328個(gè)氨基酸的多肽的開(kāi)放閱讀框，所述多肽對(duì)應(yīng)于由具有SEQ ID NO: I所示的核苷酸序列的987個(gè)堿基對(duì)的cDNA編碼的SEQ ID NO:2。公眾可獲得的數(shù)據(jù)的研究顯示AB-0326核苷酸序列與稱(chēng)作⑶33抗原樣3 (⑶33L3)的人基因的核苷酸序列相同。后來(lái)發(fā)現(xiàn)CD33L3是唾液酸結(jié)合蛋白的Siglec家族的成員，且基于與其它Siglec的同源性被重命名為Siglec-15 (Crocker等，2007)?；谠撔畔?分離了小鼠直系同源基因并測(cè)序，發(fā)現(xiàn)其在氨基酸水平上與人序列約85%相同。SEQ ID N0:3和SEQ IDN0:4分別顯示了鼠類(lèi)Siglec-15的cDNA和多肽的序列。生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)了 I型膜錨定蛋白，其呈現(xiàn)了其對(duì)于胞外區(qū)室的功能性結(jié)構(gòu)域。與其它Siglec序列一樣,氨基末端信號(hào)肽(位于SEQ ID NO: 2的第I位和第19位氨基酸之間)將該蛋白靶向細(xì)胞的膜，且通過(guò)位于羧基末端的單個(gè)跨膜螺旋(位于SEQ ID NO: 2的第261位和第283位氨基酸之間)將最終加工過(guò)的蛋白質(zhì)錨定于膜。V-set Ig結(jié)構(gòu)域位于SEQ ID NO:2的第49位和第165位氨基酸之間，而C2-set Ig結(jié)構(gòu)域位于SEQ ID NO:2的第178位和第244位氨基酸之間。本發(fā)明涉及破骨細(xì)胞的分化過(guò)程中的Siglec-15的功能。先前的發(fā)現(xiàn)(Sooknanan等，2007)證實(shí)了響應(yīng)于RANKL的編碼人Siglec-15的轉(zhuǎn)錄物是顯著上調(diào)的。該測(cè)定在RNA宏陣列(macroarray)上進(jìn)行,其含有來(lái)自來(lái)自不同的人PBMNC供體的一些不同的人破骨細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)的點(diǎn)印的總RNA樣本。并且,這些研究(Sooknanan等.2007)揭示Siglec-15轉(zhuǎn)錄物在30個(gè)人正常組織的大組中僅在一個(gè)正常組織中表達(dá)，表明了 Siglec-15基因表達(dá) 的非常高的破骨細(xì)胞特異性。利用更靈敏的方法諸如半定量RT-PCR，在許多破骨細(xì)胞樣本中在RANKL處理一天之內(nèi)刺激了 Siglec-15mRNA的表達(dá)，表明該基因在細(xì)胞融合開(kāi)始之前在破骨細(xì)胞前體細(xì)胞中早期表達(dá)。最后，通過(guò)半定量RT-PCR評(píng)估了 Siglec-15的組織表達(dá)譜，并發(fā)現(xiàn)其僅在單一正常人組織中表達(dá)，因此驗(yàn)證了 Sooknanan等的宏陣列結(jié)果。總之，如通過(guò)Siglec-15所例證的，這些表達(dá)結(jié)果強(qiáng)調(diào)了申請(qǐng)人的探索方法在其鑒定高度限制于分化中的破骨細(xì)胞的靶標(biāo)的能力中的效力?；赟iglec-15在破骨細(xì)胞的分化的早期的表達(dá)、其在正常組織中的有限表達(dá)和Siglec-15在破骨細(xì)胞的活性中的關(guān)鍵的生物學(xué)作用，選擇Siglec-15作為治療靶標(biāo)以用于開(kāi)發(fā)用來(lái)檢測(cè)、預(yù)防和治療骨相關(guān)疾病(諸如癌癥誘導(dǎo)的骨丟失和骨質(zhì)疏松癥)的單克隆抗體。因此，提供了多種抗Siglec-15抗體和其具有免疫功能的片段，諸如用于靶向Siglec-15的嵌合單克隆抗體和人源化單克隆抗體、抗體片段、單鏈抗體、結(jié)構(gòu)域抗體和具有抗原結(jié)合區(qū)的多肽。[SEQ ID NO:2作為抗原和來(lái)源于SEQ ID NO:2的表位在國(guó)際申請(qǐng)第PCT/CA2007/000210號(hào)中，申請(qǐng)人意外地發(fā)現(xiàn)SEQ ID N0:2參與破骨細(xì)胞分化。因此該抗原可用來(lái)在體外或在體內(nèi)靶向表達(dá)抗原的細(xì)胞，和用于開(kāi)發(fā)用來(lái)在體外或在體內(nèi)測(cè)量抗原的檢測(cè)測(cè)定。因此本發(fā)明提供了用于產(chǎn)生特異性抗體和/或?qū)Ρ磉_(dá)SEQ ID N0:2的細(xì)胞特異的抗原。該抗原或表位可包含SEQ ID N0:2或SEQ ID NO:2變體的至少10個(gè)氨基酸(和高達(dá)總長(zhǎng)度)的片段。一個(gè)示例性的抗原是完全SEQ ID N0:2蛋白或與SEQ ID NO:2具有至少80%序列同一性的變體形式或包含SEQ ID N0:2或SEQ ID NO:2變體的至少10個(gè)氨基酸的片段。本文所描述的抗原或表位可與載體諸如匙孔血藍(lán)蛋白(KHL)、牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)或其它載體融合以產(chǎn)生抗體和抗原結(jié)合片段。本發(fā)明還提供了在SEQ ID NO:2的第20位至第259位氨基酸中包含的表位以產(chǎn)生本文所描述的抗體和抗原結(jié)合片段。表位可包含在SEQ ID NO:2的第20位至第259位氨基酸中或在SEQ ID NO:2變體的對(duì)應(yīng)部分中包含的至少10個(gè)氨基酸的片段。本發(fā)明還提供了用于產(chǎn)生針對(duì)SEQ ID NO: 2或針對(duì)SEQ ID NO: 2變體的抗體的組合物，該組合物可包含在SEQ ID NO:2的第20位至第259位氨基酸中或在SEQ I N0:2變體的對(duì)應(yīng)部分中包含的SEQID NO:2的表位和載體。組合物的示例性實(shí)施方案是用于產(chǎn)生針對(duì)SEQ ID NO: 2或針對(duì)SEQ ID NO: 2變體的抗體的藥物組合物。該藥物組合物可包含在SEQ ID NO: 2的第20位至第259位氨基酸中或在SEQ ID NO: 2變體的對(duì)應(yīng)部分中包含的SEQ ID NO: 2的表位和藥學(xué)上可接受的載體。在又一個(gè)另外的方面，本發(fā)明提供了用于產(chǎn)生針對(duì)SEQ ID NO:2或針對(duì)SEQ IDNO:2變體的抗體的方法。該方法可包括施用多肽，所述多肽包含在SEQ ID N0:2的第20位至第259位氨基酸中或在SEQ ID NO:2變體的對(duì)應(yīng)部分中包含的SEQ ID NO:2的表位。在再一方面，本發(fā)明提供了在SEQ ID N0:2的第20位至第259位氨基酸中或在 SEQ ID NO:2變體的對(duì)應(yīng)部分中包含的SEQ ID NO:2的表位用于產(chǎn)生針對(duì)SEQ ID N0:2或針對(duì)SEQ ID N0:2變體的抗體的用途。與SEQ ID NO:2具有80%同一性的SEQ ID NO:2變體的示例性實(shí)施方案包括例如但不限于，SEQ ID N0:4和以以下gene bank登錄號(hào)或NCBI參照序列公布于數(shù)據(jù)庫(kù)中的其它類(lèi)似物AAY40743. I、XP_512109. 2、XP_001089000. I、XP_601064. 4、NP_001094508. I、XP_855238. 1、XP_574176. 2 和 EAX01462. I。與SEQID NO:2或SEQ ID NO:2變體結(jié)合的抗體和抗原結(jié)合片段關(guān)于其對(duì)于目標(biāo)抗原的特異性首先從Fab文庫(kù)中分離抗體?？贵w的輕鏈可變域或重鏈可變域的氨基酸序列的比較所顯示的最突出的特征使我們?nèi)〉肅DR中和可變區(qū)中的共有序列。SEQ ID NO: 148-158 和 197-210 中提供了 CDR 的共有序列。SEQ ID NO: 191-196中提供了可變區(qū)的共有序列。本文所描述的可變區(qū)可與期望的物種的恒定區(qū)融合從而允許通過(guò)期望的物種的效應(yīng)細(xì)胞來(lái)識(shí)別抗體。恒定區(qū)可來(lái)源于，例如，IgGl、IgG2、IgG3或IgG4亞型。在框中克隆或合成恒定區(qū)與可變區(qū)在本領(lǐng)域技術(shù)人員的技術(shù)范圍內(nèi)，并且可例如通過(guò)重組DNA技術(shù)來(lái)進(jìn)行。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，與SEQ ID N0:2結(jié)合的抗體可以是IgGl、IgG2、IgG3或IgG4亞型。本發(fā)明的更具體的實(shí)施方案涉及IgGl亞型的抗體?？贵w可以是IgGl亞型的人源化抗體，其在調(diào)節(jié)抗體依賴(lài)性細(xì)胞毒性(ADCC)、補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(CMC)中具有生物活性，或與免疫復(fù)合物有關(guān)。典型的ADCC包括自然殺傷(NK)細(xì)胞的激活并依賴(lài)于NK細(xì)胞的表面上的Fe受體對(duì)抗體覆蓋的細(xì)胞的識(shí)別。Fe受體識(shí)別抗體的Fe結(jié)構(gòu)域,諸如存在于IgGl上的，其與靶細(xì)胞的表面結(jié)合，所述靶細(xì)胞特別是表達(dá)抗原諸如SEQ ID N0:2的骨細(xì)胞。一旦與IgG的Fe受體結(jié)合后，NK細(xì)胞釋放細(xì)胞因子和細(xì)胞毒性顆粒，其進(jìn)入靶細(xì)胞并通過(guò)觸發(fā)細(xì)胞凋亡來(lái)促使細(xì)胞死亡。本發(fā)明描述了一系列與SEQ ID NO:2結(jié)合的抗體。在某些實(shí)施方案中，抗體可選自由以下組成的組多克隆抗體、單克隆抗體(諸如嵌合抗體或人源化抗體)、抗體片段(諸如抗原結(jié)合片段)、單鏈抗體、結(jié)構(gòu)域抗體和具有抗原結(jié)合區(qū)的多肽。本發(fā)明因此在其另一方面提供了包含輕鏈可變域的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，所述輕鏈可變域具有a.選自由以下組成的組的 CDRLl 序列SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:75, SEQ IDN0:81、SEQ ID NO:87,SEQ ID NO:93,SEQ ID NO:99,SEQ ID NO: 105,SEQ ID NO: IlUSEQID NO:173、SEQ ID NO:179 和 SEQ ID NO:185 ；b.選自由以下組成的組的 CDRL2 序列SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:76. SEQ IDNO:82,SEQ ID NO:88,SEQ ID NO:94,SEQ ID NO:100,SEQ ID NO:106,SEQ ID NO:112,SEQID NO: 174、SEQ ID NO: 180 和 SEQ ID NO: 186 和 / 或；c.選自由以下組成的組的 CDRL3 序列SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:77, SEQ IDNO:83,SEQ ID NO:89,SEQ ID NO:95,SEQ ID NO: 10USEQ ID NO: 107,SEQ ID NO: 113,SEQID NO:175、SEQ ID NO:181 和 SEQ ID NO:187。
分離的抗體或抗原結(jié)合片段還可包括重鏈可變域，所述重鏈可變域具有a.選自由以下組成的組的 CDRHl 序列SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:78, SEQ IDNO:84,SEQ ID NO:90,SEQ ID NO:96,SEQ ID NO:102,SEQ ID NO:108,SEQ ID NO:I14,SEQID NO:176、SEQ ID NO:182 和 SEQ ID NO:188 ；b.選自由以下組成的組的 CDRH2 序列SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:79, SEQ IDNO:85,SEQ ID N0:91、SEQ ID NO:97,SEQ ID NO:103,SEQ ID NO:109,SEQ ID NO:115,SEQID NO: 177、SEQ ID NO: 183 和 SEQ ID NO: 189 和 / 或;c.選自由以下組成的組的 CDRH3 序列SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:80、SEQ IDNO:86,SEQ ID NO:92,SEQ ID NO:98,SEQ ID NO:104,SEQ ID NO:110,SEQ ID NO:116,SEQID NO:178、SEQ ID NO:184 和 SEQ ID NO:190。在另一方面，本發(fā)明提供了分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其可包含具有以下的輕鏈可變域a)CDRLl，所述 CDRLl 與選自由 SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO:69、SEQ ID N0:75 和SEQ ID NO: 105組成的組的⑶RLl序列可具有至少80%同一性b)CDRL2，所述CDRL2 與選自由 SEQ ID NO: 149、SEQ ID NO: 150、SEQ ID NO: 76、SEQID NO:82和SEQ ID NO: 106組成的組的CDRL2序列可具有至少80%同一性，或；c)CDRL3，所述CDRL3 與選自由 SEQ ID N0:151、SEQ ID NO: 152,SEQ ID NO: 77,SEQID NO:83,SEQ ID NO:95,SEQ ID NO: 107 和 SEQ ID NO: 152 組成的組的 CDRL3 序列可具有
至少80%同一性。在又一另外的方面，本發(fā)明提供了分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含具有以下的重鏈可變域a) CDRHl，所述CDRHl 與選自由 SEQ ID NO: 153,SEQ ID NO: 154,SEQ ID NO:84,SEQID NO:96和SEQ ID NO: 102組成的組的CDRHl序列可具有至少80%同一性；b)CDRH2，所述CDRH2 與選自由 SEQ ID NO: 155、SEQ ID NO: 156、SEQ ID NO: 157、SEQID NO:73、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:103 和 SEQ ID NO:109組成的組的⑶RH2序列可具有至少80%同一性，或；c)CDRH3，所述 CDRH3 與選自由 SEQ ID NO: 158,SEQ ID NO: 74,SEQ ID NO:98,SEQID NO: 104,SEQ ID NO: 110和SEQ ID NO: 116組成的組的CDRH3序列可具有至少80%同一性。
在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，抗體或抗原結(jié)合片段可包含輕鏈可變區(qū)的任何單獨(dú)的⑶R或⑶R1XDR2和/或⑶R3的組合。更具體地可選擇⑶R3。組合可包括例如，⑶RLl和CDRL3 ;CDRLI 和 CDRL2 ;CDRL2 和 CDRL3 和；CDRL2 和 CDRL3。在另一個(gè)示例性實(shí)施方案中，抗體或抗原結(jié)合片段可包含重鏈可變區(qū)的任何單獨(dú)的⑶R或⑶R1XDR2和/或⑶R3的組合。更具體地可選擇⑶R3。組合可包括例如，⑶RHl和 CDRH3 ;CDRH1 和 CDRH2 ;CDRH2 和 CDRH3 和；CDRH1、CDRH2 和 CDRH3。根據(jù)本發(fā)明，抗體或抗原結(jié)合片段可包含⑶RL1、⑶RL2或⑶RL3中的至少兩個(gè)CDR。還根據(jù)本發(fā)明，抗體或抗原結(jié)合片段可包含一個(gè)⑶RLl、一個(gè)⑶RL2和一個(gè)⑶RL3。再根據(jù)本發(fā)明，抗體或抗原結(jié)合片段可包含
a. CDRL1、CDRL2 或 CDRL3 中的至少兩個(gè) CDR，和；b.⑶RHl、一個(gè)⑶RH2或一個(gè)⑶RH3中的至少兩個(gè)⑶R。更優(yōu)選地，抗體或抗原結(jié)合片段可包含一個(gè)⑶RLl、一個(gè)⑶RL2和一個(gè)⑶RL3。更優(yōu)選地，抗體或抗原結(jié)合片段還可包含一個(gè)⑶RHl、一個(gè)⑶RH2和一個(gè)⑶RH3。在另一方面，本發(fā)明提供了分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其包含具有以下的重鏈可變域a.選自由以下組成的組的 CDRHl 序列SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:78, SEQ IDNO:84,SEQ ID NO:90,SEQ ID NO:96,SEQ ID NO:102,SEQ ID NO:108,SEQ ID NO:I14,SEQID NO:176、SEQ ID NO:182 和 SEQ ID NO:188 ；b.選自由以下組成的組的 CDRH2 序列SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:79, SEQ IDNO:85,SEQ ID N0:91、SEQ ID NO:97,SEQ ID NO:103,SEQ ID NO:109,SEQ ID NO:115,SEQID NO: 177、SEQ ID NO: 183 和 SEQ ID NO: 189 和 / 或;c.選自由以下組成的組的 CDRH3 序列SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:80、SEQ IDNO:86,SEQ ID NO:92,SEQ ID NO:98,SEQ ID NO:104,SEQ ID NO:110,SEQ ID NO:116,SEQID NO:178、SEQ ID NO:184 和 SEQ ID NO:190。根據(jù)本發(fā)明，抗體或抗原結(jié)合片段可包含一個(gè)⑶RHl、一個(gè)⑶RH2或一個(gè)⑶RH3。根據(jù)本發(fā)明，抗體或抗原結(jié)合片段還可包含一個(gè)⑶RHl、一個(gè)⑶RH2和一個(gè)⑶RH3。當(dāng)僅輕鏈可變域或重鏈可變域其中之一可用時(shí)，可利用本領(lǐng)域中已知的方法通過(guò)篩選互補(bǔ)可變域的文庫(kù)來(lái)重構(gòu)抗體或抗原結(jié)合片段(Portolano等，The Journal ofImmunology(1993) 150:880-887，Clarkson 等，Nature(1991)352:624-628)。本發(fā)明還涵蓋多肽或抗體，所述多肽或抗體包含在本文所描述的CDR的至少一個(gè)中具有至少一個(gè)保守氨基酸置換的可變鏈。本發(fā)明還涵蓋多肽或抗體，所述多肽或抗體包含在⑶R的至少兩個(gè)中具有至少一個(gè)保守氨基酸置換的可變鏈。本發(fā)明還涵蓋多肽或抗體，所述多肽或抗體包含在3個(gè)⑶R中具有至少一個(gè)保守氨基酸置換的可變鏈。本發(fā)明還涵蓋多肽或抗體，所述多肽或抗體包含在⑶R的至少一個(gè)中具有至少兩個(gè)保守氨基酸置換的可變鏈。本發(fā)明還涵蓋多肽或抗體，所述多肽或抗體包含在⑶R的至少兩個(gè)中具有至少兩個(gè)保守氨基酸置換的可變鏈。本發(fā)明還涵蓋多肽或抗體，所述多肽或抗體包含在3個(gè)CDR中具有至少兩個(gè)保守氨基酸置換的可變鏈。在另一方面，本發(fā)明涉及多肽、抗體或抗原結(jié)合片段，所述多肽、抗體或抗原結(jié)合片段(在單一多肽鏈上或在不同的多肽鏈上)包含本文所描述的抗體或抗原結(jié)合片段其中之一的輕鏈可變域的至少一個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)和重鏈可變域的至少一個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)。本發(fā)明在其另一方面涉及可(在單一多肽鏈上或在不同的多肽鏈上)包含本文所描述的抗體或抗原結(jié)合片段的全部6個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的抗體。本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段還可包含位于CDR的氨基區(qū)和/或羧基區(qū)兩側(cè)的另外的氨基酸。那些另外的氨基酸可與本文所描述的對(duì)應(yīng)的抗體的框架區(qū)相同或可包括例如，保守氨基酸置換。 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含CDRLl序列，該CDRLl序列包括或由下式組成RSXlaX2aSLLHSNGX3aTYLY(SEQ ID NO: 148)，其中Xla可以是例如，中性親水性氨基酸；其中X2a可以是例如，賴(lài)氨酸或谷氨酸。其中X3a可以是例如，疏水性氨基酸或天冬酰胺。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，Xla可以是例如，絲氨酸。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，X2a可以是例如，賴(lài)氨酸。更具體地，X3a可以是例如，異亮氨酸或纈氨酸。 在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，X3a可以是異亮氨酸。根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)另外的實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含CDRLl序列，該⑶RLl序列包括或由下式組成RASXaloNIXbloXcloYLA(SEQ ID NO: 197)其中Xaltl可以是任何氨基酸或例如G或E ;Xbltl可以是任何氨基酸或例如Y或H，和；Xcltl可以是任何氨基酸或例如S或N。根據(jù)本發(fā)明的又一另外的實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含CDRLl序列，該CDRLl 序列包括或由下式組成式 RSSX1xSLLHSNGX2xTYLY(SEQ ID N0:201)的 CDRL1，其中 Xlx和X2x如本文所定義。根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)另外的實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含CDRLl序列，該CDRLl序列包括或由下式組成式RSXa6KSLLHSNGNTYLY(SEQ ID NO:202)的CDRL1，其中Xa6如本文所定義?？贵w或抗原結(jié)合片段還可包含例如⑶RLl序列，所述⑶RLl序列選自包括或由SEQID N0:75、SEQ ID N0:69、SEQ ID NO: 105和表3或表5B中所列的其它CDRLl組成的那些序列。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含⑶RL2序列，該⑶RL2序列包括或由下式組成XlbMSNLAS(SEQ ID NO: 149)，
其中Xlb可以是例如，堿性氨基酸。更具體地，Xlb可以是例如，谷氨酰胺或天冬酰胺。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，Xlb可以是谷氨酰胺。根據(jù)又一個(gè)另外的實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含⑶RL2序列，該⑶RL2序列包括或由下式組成RXlcSNLX2cS(SEQ ID NO: 150)，其中X1。可以是例如，蛋氨酸或蘇氨酸并且其中X2?？梢允抢?，疏水性氨基酸。更具體地，X2?？梢允抢?，丙氨酸或纈氨酸。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，X1?？梢允抢?，蛋氨酸。 在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，X2。可以是例如，丙氨酸。根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)另外的實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含CDRL2序列，該⑶RL2序列包括或由下式組成NAKTLXallXbll (SEQ ID NO: 198)Xall可以是任何氨基酸或例如P或A，和；Xbll可以是任何氨基酸或例如酸性氨基酸諸如E或D?？贵w或抗原結(jié)合片段還可包含例如⑶RL2序列，所述⑶RL2序列選自包括或由SEQID NO:76, SEQ ID N0:82、SEQ ID NO: 106和表3或表5B中所列的其它CDRL2組成的那些序列。根據(jù)又一個(gè)另外的實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含CDRL3序列，該CDRL3序列包括或由下式組成XldQX2dLEX3dPX4dT(SEQ ID NO: 151)其中Xld可以是例如，疏水性氨基酸；其中X2d可以是例如，堿性氨基酸；其中X3d可以是例如，酪氨酸或亮氨酸，和；其中X4d可以是例如，芳香族氨基酸。更具體地，Xld可以是例如，蛋氨酸或丙氨酸。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，Xld可以是例如，蛋氨酸。更具體地，X2d可以是，例如組氨酸或天冬酰胺。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，乂2(1可以是例如，組氨酸。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，X3d可以是例如，酪氨酸。更具體地，X4d可以是例如，酪氨酸或苯丙氨酸。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，乂4(1可以是例如，酪氨酸。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含⑶RL3序列，該⑶RL3序列包括或由下式組成QQffSSNPXleT(SEQ ID NO: 152)其中Xle是脯氨酸或亮氨酸。根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)另外的實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含CDRL3序列，該⑶RL3序列包括或由下式組成QHYGXal2PLT(SEQ ID NO: 199)
Xal2可以是任何氨基酸或疏水性氨基酸諸如例如A或V。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含⑶RL3序列，該⑶RL3序列包括或由下式組成Xa8QXb8LEXe8PYT (SEQ ID NO: 203)，其中Xa8本文所定義。根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)另外的實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含CDRL3序列，該⑶RL3序列包括或由下式組成=QHHYGXa4PLT(SEQ ID NO:204)，其中Xa4如本文所定義?？贵w或抗原結(jié)合片段還可包括例如⑶RL3序列，所述⑶RL3序列選自包括或由SEQID NO:77,SEQ ID NO:83,SEQ ID NO:95,SEQ ID NO: 107,SEQ ID NO: 152 和表 3 和表 5B 中所列的其它CDRL3組成的那些序列。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含⑶RHl序列，該⑶RHl序列包括或由下式組成 GYTFXlfX2fYX3fMX4f(SEQ ID NO: 153)其中Xlf可以是例如，蘇氨酸或天冬酰胺；其中X2f可以是例如，蘇氨酸、精氨酸、絲氨酸或天冬氨酸；其中X3f可以是例如，色氨酸或天冬酰胺、天冬氨酸或谷氨酸，和；其中X4f可以是例如，酪氨酸、組氨酸或天冬氨酸。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，Xlf可以是例如，蘇氨酸。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，X2f可以是例如，絲氨酸。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，X3f可以是例如，色氨酸。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，X4f可以是例如，組氨酸。根據(jù)又一個(gè)另外的實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含CDRHl序列，該CDRHl序列包括或由下式組成GYTFTDYX5fMH(SEQ ID NO: 154)其中X5f可以是例如，酸性氨基酸。更具體地，X5f可以是例如，谷氨酸或天冬氨酸。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，X5f可以是例如，天冬氨酸。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含⑶RHl序列，該⑶RHl序列包括或由下式組成=Gytftx11YWmkseq id no:205)，其中X11如本文所定義。根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)另外的實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含CDRHl序列，該CDRHl序列包括或由下式組成GYTFTDYXlsMH(SEQ ID NO: 208)，其中Xls如本文所定義?？贵w或抗原結(jié)合片段還可包含例如⑶RHl序列，所述⑶RHl序列選自包括或由SEQID NO:84, SEQ ID N0:96、SEQ ID NO: 102和表3或表5A所列的其它CDRHl組成的那些序列。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含⑶RH2序列，該⑶RH2序列包括或由下式組成LINPXlgNX2gRX3gN(SEQ ID NO: 155)其中Xlg可以是例如，中性疏水性氨基酸；其中X2g可以是例如，丙氨酸或甘氨酸，和；其中X3g可以是例如，脯氨酸或蘇氨酸。更具體地，Xlg可以是例如，絲氨酸或蘇氨酸。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，Xlg可以是例如，蘇氨酸。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，X2g可以是例如，甘氨酸。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，X3g可以是例如，蘇氨酸。根據(jù)又一個(gè)另外的實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含CDRH2序列，該CDRH2序列包括或由下式組成XlhIDPETGGTA(SEQ ID NO: 156)其中Xlh可以是例如，丙氨酸或蘇氨酸。根據(jù)一個(gè)更具體的實(shí)施方案，Xlh可以是，例如，蘇氨酸。根據(jù)又一個(gè)另外的實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含CDRH2序列，該CDRH2序 列包括或由下式組成EIXliPX2iX3iSX4iX5iN(SEQ ID NO: 157)其中Xli可以是例如，天冬氨酸或天冬酰胺；其中X2i可以是例如，天冬氨酸或絲氨酸；其中X3i可以是例如，天冬氨酸或絲氨酸；其中X4i可以是例如，酪氨酸或蘇氨酸，和；其中X5i可以是例如，蘇氨酸或異亮氨酸。根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)另外的實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含CDRH2序列，該⑶RH2序列包括或由下式組成AXal3YPGNGDSR(SEQ ID NO:200)Xal3可以是任何氨基酸或疏水性氨基酸諸如I或V。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含⑶RH2序列，該⑶RH2序列包括或由下式組成=XltIDPETGGTA(SEQ ID NO:206)，其中Xlt如本文所定義。根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)另外的實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含CDRH2序列，該 CDRH2 序列包括或由下式組成LINPXlmNX2mRX3mN(SEQ ID NO: 207)，其中 Xlm、X2n^P X3m 如本文所定義。根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含⑶RH2序列，該⑶RH2序列包括或由下式組成=XltIDPETGGTA(SEQ ID NO:209)，其中Xlt如本文所定義。抗體或抗原結(jié)合片段還可包括例如⑶RH2序列,所述⑶RH2序列選自包括或由SEQID NO:73、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:103 和 SEQ ID NO:109和表3或表5A所列的其它⑶RH2組成的那些序列。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含⑶RH3序列，該⑶RH3序列包括或由下式組成TXljFYYX2jX3jX4jNYDVGFAY(SEQ ID NO: 158)其中Xlj可以是例如，中性親水性氨基酸；其中X2j可以是例如，中性親水性氨基酸；其中X3j可以是例如，酪氨酸或組氨酸，和；其中X4j可以是例如，酪氨酸或絲氨酸。更具體地，Xlj可以是例如，絲氨酸或蘇氨酸。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，XuI以是例如，絲氨酸。
更具體地，X2j可以是例如，絲氨酸或蘇氨酸。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，X2j可以是例如，蘇氨酸。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，X3j可以是例如，酪氨酸。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，X4j可以是例如，絲氨酸。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，抗體或抗原結(jié)合片段可包含⑶RH3序列，該⑶RH3序列包括或由下式組成TX1vFYYX2vX3vX4vNYDVGFAY(SEQ ID NO: 210)，其中 Xlv、X2v、X3v 和 X4v如本文所定義?？贵w或抗原結(jié)合片段可包括例如⑶RH3序列，所述⑶RH3序列選自包括或由SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO: 104、SEQ ID NO: 110、SEQ ID NO: 116 和表 3 或表 5A所列的其它CDRH3組成的那些序列。本文所描述的重鏈和/或輕鏈的框架區(qū)可來(lái)源于本文所示出的框架區(qū)中的一個(gè)或多個(gè)。因此抗體或抗原結(jié)合片段可包含本文所描述的CDR中的一個(gè)或多個(gè)(例如，選自特異性的⑶R或選自共有⑶R SEQ ID NO: 148-158和197-210)和來(lái)源于本文所示出的輕鏈可變區(qū)或重鏈可變區(qū)的框架區(qū)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可包含具有下式的重鏈可變區(qū)(或片段)XlkX2kQxaQQx4kX5kX6kEx7kVx8kPGASVKLSCKASGYTFTx11 YWMHWVKQRPGQGLEWIGLINPXlmNX2niRX3niNYNEXlnFX2nX3nKATLTVDKSSSTAYMX4nLSSLTSEDSAVYYCARG⑶⑶YFDYWGQGTTLTVSS (SEQ IDNO:191)其中Xlk可以是例如Q或E ;X2k可以是任何氨基酸或疏水性氨基酸諸如例如V或I ;X3k可以是任何氨基酸或疏水性氨基酸諸如例如V或L ;X4k可以是任何氨基酸或例如P或S ;X5k可以是任何氨基酸或例如R或G ;X6k可以是任何氨基酸或例如A或T ;X7k可以是任何氨基酸或疏水性氨基酸諸如例如L或I ;X8k可以是任何氨基酸或堿性氨基酸諸如例如R或K ;X11可以是任何氨基酸或中性親水性氨基酸諸如例如例如S或T ;Xlni可以是任何氨基酸或中性親水性氨基酸諸如例如T或S ;X2m可以是任何氨基酸或例如G或A ;X3m可以是任何氨基酸或例如P或T ;Xln可以是任何氨基酸或堿性氨基酸諸如例如K或R ;X2n可以是任何氨基酸或堿性氨基酸諸如例如N或K ;X3n可以是任何氨基酸或例如N或中性親水性氨基酸諸如S或T，和；X4n可以是任何氨基酸或堿性氨基酸諸如例如Q或H。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可包含具有下式的重鏈可變區(qū)(或片段)Xl0VX20LQQSGAELARPGASVKFSCKASGYTFTRNWIQWVKQRPGQGLEWIGAXal3YPGNGDSRYTQKFKGKATLTADKSSXlqTAYMQLX2qX3qLX4qSEDSAVYYCARLAGNYAYYFDYWGQGTALTVSS(SEQ ID NO: 192)
其中X1。可以是例如Q或D ;X2。可以是任何氨基酸或堿性氨基酸諸如例如K或Q ;Xal3可以是任何氨基酸或疏水性氨基酸諸如例如I或V ;Xlq可以是任何氨基酸或例如S或N ;X2q可以是任何氨基酸或例如S或N ;X3q可以是任何氨基酸或例如G或S，和；X4q可以是任何氨基酸或例如A或S。在本發(fā)明的又一個(gè)另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可包含具有下式的重鏈可變區(qū)(或片段) XlrX2rX3rLQQSGX4rELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYXlsMHWVKQTPVHGLEWIGXltIDPETGGTAYNQKFKGKATLTADX1uSSX2uTAYMELSSLTSEDSAVYYCTX1vFYYX2vX3vX4vNYDVGFAYWGQGTLVTVSA(SEQ idNO:193)其中Xk可以是例如E或Q ;X&可以是任何氨基酸或疏水性氨基酸諸如例如A或I ;X3r可以是任何氨基酸或例如Y或Q ;X#可以是任何氨基酸或疏水性氨基酸諸如例如A或V ;Xls可以是任何氨基酸或酸性氨基酸諸如例如D或E ;Xlt可以是任何氨基酸或例如A或T ;Xlu可以是任何氨基酸或堿性氨基酸諸如例如K或R ;X2u可以是任何氨基酸或中性親水性氨基酸諸如例如S或T ;Xlv可以是任何氨基酸或中性親水性氨基酸諸如例如S或T ;X2v可以是任何氨基酸或中性親水性氨基酸諸如例如T或S ;X3v可以是任何氨基酸或例如Y或H，和；X4v可以是任何氨基酸或例如S或Y。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可包含具有下式的輕鏈可變區(qū)(或片段)DIVMTX1wAX2wFSNPVX3wLGTX4wASISCRSSX1xSLLHSNGX2xTYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSXlySGSGTX2yFTLRISRVEAEDVGVYYCXa8QXb8LEXc8PYTFGXa9GTKLEIK(SEQ ID NO: 194)其中Xlw可以是任何氨基酸或堿性氨基酸諸如例如Q或H ;X2w可以是任何氨基酸或疏水性氨基酸諸如例如V或A ;X3w可以是任何氨基酸或例如T或I ;X4w可以是任何氨基酸或例如S或P ;Xlx可以是任何氨基酸或例如E或K ;X2x可以是任何氨基酸或疏水性氨基酸諸如例如V或I ;Xly可以是任何氨基酸或例如S或G ;X2y可以是任何氨基酸或例如D或A ;Xa8可以是任何氨基酸或疏水性氨基酸諸如例如M或A ;Xb8可以是任何氨基酸或堿性氨基酸諸如例如N或H ;Xe8可以是任何氨基酸或例如Y或L，和；
Xa9可以是任何氨基酸或例如G或S。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可包含具有下式的輕鏈可變區(qū)(或片段)XlzIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASXal0NIXbl0Xcl0YLAWY QQKQGKSPQLLVYNAKTLXallXbllGVXa3Xb3RFSGSGSGTQXc3SL KINXd3LQPEDFGSYXe3CQHHYGXa4PLTFGXa5GTKXb5ELK(SEQ ID NO: 195)其中Xlz可以是任何氨基酸或例如D或N ;Xaltl可以是任何氨基酸或例如E或G ;Xbltl可以是任何氨基酸或例如Y或H ;Xeltl可以是任何氨基酸或例如S或N ; Xallll可以是任何氨基酸或例如P或A ;Xbll可以是任何氨基酸或酸性氨基酸諸如例如E或D ;Xa3可以是任何氨基酸或例如P或S ;Xb3可以是任何氨基酸或例如V或S ;Xe3可以是任何氨基酸或芳香族氨基酸諸如例如F或Y ;Xd3可以是任何氨基酸或例如N或S ;Xe3可以是任何氨基酸或例如H或Y ;Xa4可以是任何氨基酸或疏水性氨基酸諸如例如A或V ;Xa5可以是任何氨基酸或例如S或A，和；Xb5可以是任何氨基酸或疏水性氨基酸諸如例如V或L。在又一個(gè)另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可包含具有下式的輕鏈可變區(qū)(或片段)DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSXa6KSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRXa7SRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:196)其中Xa6可以是任何氨基酸或中性親水性氨基酸諸如例如S或T，和；Xa7可以是任何氨基酸或疏水性氨基酸諸如例如I或L。與Siglec-15結(jié)合的抗體在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，與Siglec-15結(jié)合的抗體是IgGl、IgG2、IgG3或IgG4亞型。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗體是IgG2亞型的抗體。在本實(shí)施方案中，抗體是IgG2亞型的人源化抗體，其在阻斷破骨細(xì)胞表面上正常Siglec-15功能的生物活性中具有生物學(xué)活性。所述阻斷，例如，可防止Siglec-15與其底物、其配體、其自身或相鄰細(xì)胞上的其它蛋白質(zhì)締合。本發(fā)明公開(kāi)了一系列與Siglec-15結(jié)合的抗體。在某些實(shí)施方案中，抗體由單克隆抗體和其具有免疫學(xué)功能的片段組成，諸如嵌合和人源化單克隆抗體、抗體片段、單鏈抗體、結(jié)構(gòu)域抗體和具有抗原結(jié)合區(qū)的多肽。典型的抗原結(jié)合位點(diǎn)包括由免疫球蛋白輕鏈和免疫球蛋白重鏈的配對(duì)形成的可變區(qū)?？贵w可變區(qū)的結(jié)構(gòu)是非常一致的并表現(xiàn)出非常相似的結(jié)構(gòu)。這些可變區(qū)通常包括相對(duì)同源的框架區(qū)(FR)，其與稱(chēng)作互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的3個(gè)高變區(qū)間隔。雖然抗原結(jié)合片段的總結(jié)合活性受CDR序列的支配，但FR在對(duì)于最優(yōu)抗原結(jié)合的CDR的合適的定位和三維排列中起關(guān)鍵作用。
表I公開(kāi)了與抗Siglec-15抗體的特定實(shí)例的完整的免疫球蛋白輕鏈和免疫球蛋白重鏈對(duì)應(yīng)的核苷酸和氨基酸的序列。表I-與Siglec-15結(jié)合的免疫球蛋白輕鏈和免疫球蛋白重鏈的完整序列
權(quán)利要求
1.一種分離的抗體或抗原結(jié)合片段，所述分離的抗體或抗原結(jié)合片段能夠與能促進(jìn)破骨細(xì)胞分化的多肽結(jié)合并具有與唾液酸結(jié)合免疫球蛋白樣凝集素15(Siglec-15 ；SEQ IDNO:2)的第20位至第259位氨基酸至少80%相同的序列，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段能夠抑制破骨細(xì)胞分化、骨再吸收或能夠阻斷Siglec-15與唾液酸結(jié)合。
2.如權(quán)利要求I所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段能夠抑制破骨細(xì)胞前體細(xì)胞分化成分化的破骨細(xì)胞。
3.如權(quán)利要求2所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述分離的抗體或抗原結(jié)合片段是多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、人抗體或其片段。
4.如權(quán)利要求3所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，特征在于其從分離的哺乳動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)生。
5.如權(quán)利要求4所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述分離的哺乳動(dòng)物細(xì)胞是人細(xì)胞。
6.如權(quán)利要求5所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述分離的抗體是單克隆抗體、嵌合抗體、人抗體或其片段。
7.如權(quán)利要求6所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，特征在于其為包含人抗體的恒定區(qū)或其片段的氨基酸的嵌合抗體或人抗體。
8.如權(quán)利要求7所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述恒定區(qū)或其片段來(lái)自IgGU IgG2、IgG3 或 IgG4。
9.如權(quán)利要求8所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述恒定區(qū)來(lái)自IgG2。
10.如權(quán)利要求3所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，特征在于其為包含人抗體的恒定區(qū)或其片段的氨基酸的嵌合抗體或人抗體。
11.如權(quán)利要求10所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述恒定區(qū)或其片段來(lái)自IgGU IgG2、IgG3 或 IgG4。
12.如權(quán)利要求11所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述恒定區(qū)來(lái)自IgG2。
13.如權(quán)利要求2所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗原結(jié)合片段是FV (scFv) > Fab> Fab'或(Fab' )2。
14.如權(quán)利要求2所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述破骨細(xì)胞前體細(xì)胞是人破骨細(xì)胞前體細(xì)胞。
15.如權(quán)利要求8所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述人破骨細(xì)胞前體細(xì)胞是原代人破骨細(xì)胞前體細(xì)胞。
16.如權(quán)利要求9所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述分離的抗體或抗原結(jié)合片段是多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、人抗體或其片段。
17.如權(quán)利要求16所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述分離的抗體或抗原結(jié)合片段是單克隆抗體、嵌合抗體、人抗體或其片段。
18.如權(quán)利要求17所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，特征在于其為包含人抗體的恒定區(qū)或其片段的氨基酸的嵌合抗體或人抗體。
19.如權(quán)利要求18所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述恒定區(qū)或其片段來(lái)自IgGU IgG2、IgG3 或 IgG4。
20.如權(quán)利要求19所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述恒定區(qū)來(lái)自IgG2。
21.如權(quán)利要求I至20中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，特征在于與非變性的Siglec-15結(jié)合。
22.如權(quán)利要求21所述的抗體或抗原結(jié)合片段，特征在于其與Siglec-15而非Siglec-2或CD33特異性結(jié)合。
23.如權(quán)利要求I至22中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，特征在于Ing的抗體能夠與少于500ng的SEQ ID NO:2結(jié)合。
24.一種分離的抗體或抗原結(jié)合片段，所述分離的抗體或抗原結(jié)合片段能夠與SEQ IDNO: 2或與同SEQ ID NO: 2的第20位至第259位氨基酸具有至少80%序列同一性的變體特異性結(jié)合，且能夠在卵巢癌細(xì)胞、腎癌細(xì)胞、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、黑素瘤細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞或結(jié)腸癌細(xì)胞中檢測(cè)所述SEQ ID NO:2或變體。
25.一種分離的抗體或抗原結(jié)合片段，所述分離的抗體或抗原結(jié)合片段能夠與SEQ IDNO: 2或與同SEQ ID NO: 2的第20位至第259位氨基酸具有至少80%序列同一性的變體特異性結(jié)合，且能夠抑制卵巢癌細(xì)胞、腎癌細(xì)胞、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、黑素瘤細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞或結(jié)腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。
26.如權(quán)利要求I至25中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含輕鏈可變域，所述輕鏈可變域包含選自由以下組成的組的序列與SEQ ID NO: 38至少70%相同的序列、與SEQ ID NO:42至少70%相同的序列、與SEQ ID NO:46至少70%相同的序列、與SEQ ID NO: 50至少70%相同的序列、與SEQ ID NO: 54至少70%相同的序列、與SEQID NO: 58至少70%相同的序列、與SEQ ID NO:62至少70%相同的序列、與SEQ ID NO:66至少70%相同的序列、與SEQ ID NO: 162至少70%相同的序列、與SEQ ID NO: 166至少70%相同的序列和與SEQ ID NO: 170至少70%相同的序列。
27.如權(quán)利要求I至26所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含重鏈可變域，所述重鏈可變域包含選自由以下組成的組的序列與SEQ ID NO:40至少70%相同的序列、與SEQ ID NO:44至少70%相同的序列、與SEQ ID NO:48至少70%相同的序列、與SEQID NO: 52至少70%相同的序列、與SEQ ID NO: 56至少70%相同的序列、與SEQ ID NO:60至少70%相同的序列、與SEQ ID NO: 64至少70%相同的序列、與SEQ ID NO: 68至少70%相同的序列、與SEQ ID NO: 164至少70%相同的序列、與SEQ ID NO: 168至少70%相同的序列和與SEQ ID NO: 172至少70%相同的序列。
28.一種分離的抗體或抗原結(jié)合片段，所述分離的抗體或抗原結(jié)合片段能夠與Siglec-15或與其變體特異性結(jié)合,所述抗體包含 a)SEQ ID NO: 38中限定的輕鏈可變域的3個(gè)⑶R和SEQ ID NO: 40中限定的重鏈可變域的3個(gè)CDR， b)SEQID NO: 42中限定的輕鏈可變域的3個(gè)⑶R和SEQ ID NO: 44中限定的重鏈可變域的3個(gè)CDR ; c)SEQID NO: 46中限定的輕鏈可變域的3個(gè)CDR和SEQ ID NO: 48中限定的重鏈可變域的3個(gè)CDR ; d)SEQ ID NO: 50中限定的輕鏈可變域的3個(gè)⑶R和SEQ ID NO: 52中限定的重鏈可變域的3個(gè)CDR ; e)SEQID NO: 54中限定的輕鏈可變域的3個(gè)⑶R和SEQ ID NO: 56中限定的重鏈可變域的3個(gè)CDR ; f)SEQ ID NO: 58中限定的輕鏈可變域的3個(gè)⑶R和SEQ ID N0:60中限定的重鏈可變域的3個(gè)CDR ; g)SEQ ID NO:62中限定的輕鏈可變域的3個(gè)⑶R和SEQ ID N0:64中限定的重鏈可變域的3個(gè)CDR， h)SEQ ID NO:66中限定的輕鏈可變域的3個(gè)⑶R和SEQ ID N0:68中限定的重鏈可變域的3個(gè)CDR， i)SEQID NO: 162中限定的輕鏈可變域的3個(gè)⑶R和SEQ ID NO: 164中限定的重鏈可變域的3個(gè)⑶R， j) SEQ ID NO: 166中限定的輕鏈可變域的3個(gè)⑶R和SEQ ID NO: 168中限定的重鏈可變域的3個(gè)⑶R，和； k) SEQ ID NO: 170中限定的輕鏈可變域的3個(gè)CDR和SEQ ID NO: 172中限定的重鏈可變域的3個(gè)⑶R。
29.一種分離的抗體或抗原結(jié)合片段，所述分離的抗體或抗原結(jié)合片段能夠與Siglec-15或與其變體特異性結(jié)合,所述抗體包含 a)與SEQID NO: 194具有至少70%序列同一性的輕鏈可變域和與SEQ ID NO: 191具有至少70%序列同一性的重鏈可變域； b)與SEQID NO: 195具有至少70%序列同一性的輕鏈可變域和與SEQ ID NO: 192具有至少70%序列同一性的重鏈可變域； c)與SEQID NO: 196具有至少70%序列同一性的輕鏈可變域和與SEQ ID NO: 193具有至少70%序列同一性的重鏈可變域； d)與SEQID NO:38具有至少70%序列同一性的輕鏈可變域和與SEQ ID N0:40具有至少70%序列同一性的重鏈可變域； e)與SEQID NO: 42具有至少70%序列同一性的輕鏈可變域和與SEQ ID NO: 44具有至少70%序列同一性的重鏈可變域； f)與SEQID NO:46具有至少70%序列同一性的輕鏈可變域和與SEQ ID N0:48具有至少70%序列同一性的重鏈可變域； g)與SEQID NO: 50具有至少70%序列同一性的輕鏈可變域和與SEQ ID NO: 52具有至少70%序列同一性的重鏈可變域； h)與SEQID NO: 54具有至少70%序列同一性的輕鏈可變域和與SEQ ID NO: 56具有至少70%序列同一性的重鏈可變域； i)與SEQID NO: 58具有至少70%序列同一性的輕鏈可變域和與SEQ ID NO:60具有至少70%序列同一性的重鏈可變域； j)與SEQ ID NO: 62具有至少70%序列同一性的輕鏈可變域和與SEQ ID NO: 64具有至少70%序列同一性的重鏈可變域， k)與SEQ ID NO:66具有至少70%序列同一性的輕鏈可變域和與SEQ ID NO:68具有至少70%序列同一性的重鏈可變域， I)與SEQ ID NO: 162具有至少70%序列同一性的輕鏈可變域和與SEQ ID NO: 164具有至少70%序列同一性的重鏈可變域，m)與SEQ ID NO: 166具有至少70%序列同一性的輕鏈可變域和與SEQ ID NO: 168具有至少70%序列同一性的重鏈可變域，和； n)與SEQ ID NO: 170具有至少70%序列同一性的輕鏈可變域和與SEQ ID NO: 172具有至少70%序列同一性的重鏈可變域。
30.如權(quán)利要求29所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，特征在于其包含 a)輕鏈可變域，所述輕鏈可變域與SEQID NO: 194具有至少70%序列同一性且具有如SEQ ID N0:148 或 SEQ ID N0:201 中限定的 CDRL1、如 SEQ ID NO: 149 中限定的 CDRL2 和如SEQ ID NO: 151 或 SEQ ID NO:203 中限定的 CDRL3 和； b)重鏈可變域，所述重鏈可變域與SEQID NO: 191具有至少70%序列同一性且具有如SEQ ID NO: 153 或 SEQ ID NO: 205 中限定的 CDRHl、如 SEQ ID NO: 155 或 SEQ ID NO: 207 中限定的CDRH2和具有序列ARG⑶⑶YFDY的CDRH3。
31.如權(quán)利要求30所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRLl選自由RSSKSLLHSNGITYLY、RSSKSLLHSNGVTYLY 或 RSSESLLHSNGITYLY 組成的組。
32.如權(quán)利要求29或30所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL2是QMSNLAS。
33.如權(quán)利要求29至32中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL3選自由 AQNLELPYT、MQHLEYPYT 或 AQNLEYPYT 組成的組。
34.如權(quán)利要求29至33中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRHl選自由GYTFTSYWMH和GYTFITYWMH組成的組。
35.如權(quán)利要求29至34中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH2選自由 LINPTNGRTN、LINPSNARTN 和 LINPSNGRPN 組成的組。
36.如權(quán)利要求29所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，特征在于其包含 a)輕鏈可變域，所述輕鏈可變域與SEQID NO: 195具有至少70%序列同一性且具有如SEQ ID NO: 197 中限定的 CDRL1、如 SEQID NO: 198 中限定的 CDRL2 和如 SEQ ID NO:204 ^限定的⑶RL3和； b)重鏈可變域，所述重鏈可變域與SEQID NO: 192具有至少70%序列同一性且具有具有序列 GYTFTRNWIQ 的 CDRHlJn SEQID NO: 200 中限定的 CDRH2 和具有序列 ARLAGNYAYYFDY的 CDRH3。
37.如權(quán)利要求36所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRLl選自由RASGNIHNYLA 和 RASENIYSYLA 組成的組。
38.如權(quán)利要求36或37所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL2選自由NAKTLPE和NAKTLAD組成的組。
39.如權(quán)利要求36至38中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL3選自由QHHYGVPLT和QHHYGAPLT組成的組。
40.如權(quán)利要求36至39中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH2選自由AIYPGNGDSR和AVYPGNGDSR組成的組。
41.如權(quán)利要求29所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，特征在于其包含 a)輕鏈可變域，所述輕鏈可變域與SEQ ID NO: 196具有至少70%序列同一性且具有如SEQ ID NO:202 中限定的 CDRLl、如 SEQID NO: 150 中限定的 CDRL2 和如 SEQ ID NO: 151 或SEQ ID NO :203 中限定的 CDRL3，和； b)重鏈可變域，所述重鏈可變域與SEQ ID NO: 193具有至少70%序列同一性且具有如SEQ ID NO: 154 或 SEQ ID NO: 208 中限定的 CDRHl、如 SEQ ID NO: 156 或 SEQ ID NO: 209 中限定的 CDRH2 和如 SEQ ID NO: 158 或 SEQ ID N0:210 中限定的 CDRH3。
42.如權(quán)利要求41中所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRLl選自由RSSKSLLHSNGNTYLY 和 RSTKSLLHSNGNTYLY 組成的組。
43.如權(quán)利要求41或42所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL2是RMSNLASO
44.如權(quán)利要求41至43中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRL3是 MQHLEYPFT。
45.如權(quán)利要求41至44中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRHl選自由GYTFTDYDMH和GYTFTDYEMH組成的組。
46.如權(quán)利要求41至45中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH2選自由TIDPETGGTA和AIDPETGGTA組成的組。
47.如權(quán)利要求41至46中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述CDRH3選自由 TSFYYTYSNYDVGFAY、TSFYYTYYNYDVGFAY 和 TTFYYSHYNYDVGFAY 組成的組。
48.一種分離的抗體或抗原結(jié)合片段，所述分離的抗體或抗原結(jié)合片段能夠與如權(quán)利要求I至47中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段競(jìng)爭(zhēng)。
49.如權(quán)利要求I至48中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含恒定區(qū)或其片段。
50.如權(quán)利要求I至48中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其為scFv、Fab、Fab'或(Fab' )2。
51.如權(quán)利要求I至49中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體是單克隆抗體。
52.如權(quán)利要求I至49中任一項(xiàng)所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體是多克隆抗體。
53.如權(quán)利要求I至52中任一項(xiàng)所述的分離的抗體，其中所述抗體與可檢測(cè)部分或細(xì)胞毒性部分偶聯(lián)。
54.一種核酸，所述核酸編碼如權(quán)利要求26至47中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段的輕鏈可變域和/或重鏈可變域。
55.—種載體,所述載體包含如權(quán)利要求54所述的核酸。
56.如權(quán)利要求55所述的載體,其中所述載體是表達(dá)載體。
57.一種分離的細(xì)胞，所述分離的細(xì)胞包含如權(quán)利要求54所述的核酸。
58.如權(quán)利要求57所述的分離的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞包含編碼輕鏈可變域的核酸和編碼重鏈可變域的核酸。
59.如權(quán)利要求58所述的分離的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞能夠表達(dá)、組裝和/或分泌抗體或其抗原結(jié)合片段。
60.一種分離的細(xì)胞，所述分離的細(xì)胞包含或表達(dá)如權(quán)利要求I至53中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段。
61.如權(quán)利要求60所述的分離的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞包含編碼輕鏈可變域的核酸和編碼重鏈可變域的核酸。
62.如權(quán)利要求61所述的分離的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞能夠表達(dá)、組裝和/或分泌抗體或其抗原結(jié)合片段。
63.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含如權(quán)利要求I至53中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段中的至少一種和藥學(xué)上可接受的載體。
64.—種組合物，所述組合物包含如權(quán)利要求I至53中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段中的至少一種和載體。
65.如權(quán)利要求I至53中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段中的至少一種用于治療骨丟失的用途。
66.如權(quán)利要求I至53中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段用于治療卵巢癌、腎癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的癌癥、前列腺癌、黑素瘤、乳腺癌、肺癌或結(jié)腸癌的用途。
67.如權(quán)利要求I至53中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段中的至少一種用于診斷骨丟失或骨病的用途。
68.如權(quán)利要求I至53中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段中的至少一種用于診斷卵巢癌、腎癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的癌癥、前列腺癌、黑素瘤、乳腺癌、肺癌或結(jié)腸癌的用途。
69.一種治療骨丟失的方法，所述方法包括將如權(quán)利要求I至53中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段中的至少一種施用于有需要的哺乳動(dòng)物。
70.一種治療卵巢癌、腎癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的癌癥、前列腺癌、黑素瘤、乳腺癌、肺癌或結(jié)腸癌的方法，所述方法包括將如權(quán)利要求I至53中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段中的至少一種施用于有需要的哺乳動(dòng)物。
71.—種檢測(cè)骨丟失或骨病的方法，所述方法包括將如權(quán)利要求I至53中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段中的至少一種施用于有需要的哺乳動(dòng)物。
72.—種檢測(cè)卵巢癌、腎癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的癌癥、前列腺癌、黑素瘤、乳腺癌、肺癌或結(jié)腸癌的方法，所述方法包括將如權(quán)利要求I至53中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段施用于有需要的哺乳動(dòng)物。
73.一種檢測(cè)SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 2變體的方法，所述SEQ ID NO: 2變體與SEQID NO: 2的第20位至第259位氨基酸具有至少80%序列同一性，所述方法包括使表達(dá)SEQID NO:2或SEQ ID NO:2變體的細(xì)胞或包含或懷疑包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:2變體的樣本與如權(quán)利要求I至53中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段中的至少一種接觸并測(cè)量結(jié)合。
74.如權(quán)利要求73所述的方法，其中所述樣本來(lái)自哺乳動(dòng)物。
75.如權(quán)利要求74所述的方法，其中所述哺乳動(dòng)物患有或懷疑患有骨丟失。
76.如權(quán)利要求74所述的方法，其中所述哺乳動(dòng)物患有或懷疑患有卵巢癌、腎癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的癌癥、前列腺癌、黑素瘤、乳腺癌、肺癌或結(jié)腸癌。
77.如權(quán)利要求73至76中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述樣本是獲自所述哺乳動(dòng)物的血清樣本、血漿樣本或血液樣本。
78.如權(quán)利要求73至76中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述樣本是獲自所述哺乳動(dòng)物的組織樣本。
79.如權(quán)利要求73所述的方法，其中所述樣本是細(xì)胞培養(yǎng)上清液。
80.如權(quán)利要求78至79中任一項(xiàng)所述的方法，所述方法包括定量與SEQID NO: 2或與所述SEQ ID NO:2變體結(jié)合的抗體的量。
81.—種試劑盒，所述試劑盒包含如權(quán)利要求I至53中任一項(xiàng)所述的抗體。
82.SEQ ID NO:2或其至少10個(gè)氨基酸的片段用于產(chǎn)生用來(lái)診斷或治療骨丟失、卵巢癌、腎癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的癌癥、前列腺癌、黑素瘤、乳腺癌、肺癌或結(jié)腸癌的抗體的用途。
83.根據(jù)權(quán)利要求82所述的用途，其中所述片段包含在SEQID NO: 2的第20位至第259位氨基酸中。
84.—種產(chǎn)生抗體或抗原結(jié)合片段的方法，所述抗體或抗原結(jié)合片段能夠抑制破骨細(xì)胞前體細(xì)胞的分化(成為分化的破骨細(xì)胞)或能夠抑制破骨細(xì)胞的再吸收活性，所述方法包括將SEQ ID NO:2、與SEQ ID NO:2具有至少80%同一性的變體或其至少10個(gè)氨基酸的片段施用于哺乳動(dòng)物。
85.如權(quán)利要求84所述的方法，所述方法還包括分離或純化所述抗體或抗原結(jié)合片 段。
86.根據(jù)權(quán)利要求85所述的方法，其中所述片段包含在SEQID NO: 2的第20位至第259位氨基酸中。
87.一種鑒定能夠抑制卵巢癌細(xì)胞、腎癌細(xì)胞、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、黑素瘤細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞和結(jié)腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)的化合物的方法，所述方法包括向包含與SEQ ID NO: 2的第20位至第259位氨基酸至少80%相同的區(qū)的多肽或表達(dá)所述多肽的細(xì)胞提供候選化合物并測(cè)量所述多肽的所述活性或表達(dá)，根據(jù)所述多肽的降低的活性或表達(dá)確實(shí)地鑒定適宜的抑制性化合物。
88.如權(quán)利要求87所述的方法，其中所述候選化合物與所述多肽特異性地結(jié)合。
89.如權(quán)利要求88所述的方法，其中所述候選化合物是抗體或抗原結(jié)合片段。
90.如權(quán)利要求89所述的方法，其中所述候選化合物是siRNA或反義核酸。
91.一種抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)的方法，所述癌細(xì)胞選自由以下組成的組卵巢癌細(xì)胞、腎癌細(xì)胞、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、黑素瘤細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞或結(jié)腸癌細(xì)胞，所述方法包括向所述癌細(xì)胞提供能夠削弱與SEQ ID NO:2至少80%相同的多肽的表達(dá)的核酸，其中所述癌細(xì)胞表達(dá)與SEQ ID NO:2至少80%相同的所述多肽。
92.如權(quán)利要求90所述的方法，其中所述核酸是siRNA或反義核酸。
全文摘要
本文描述了與Siglec-15特異性結(jié)合的新型抗體和抗原結(jié)合片段。在一些實(shí)施方案中，抗體或抗原結(jié)合片段可阻斷Siglec-15的生物活性，并適用于治療骨丟失的組合物，且更具體為適用于具有增高的Siglec-15細(xì)胞表面表達(dá)的骨病，諸如其中存在破骨細(xì)胞的骨降解活性增高的病癥。本發(fā)明還涉及表達(dá)抗體或抗原結(jié)合片段(諸如單克隆抗體、人源化抗體或嵌合抗體)的細(xì)胞。此外，還公開(kāi)了利用所述抗體和片段檢測(cè)和治療骨丟失、骨相關(guān)疾病或癌癥的方法。
文檔編號(hào)G01N33/53GK102803293SQ201080053103
公開(kāi)日2012年11月28日 申請(qǐng)日期2010年10月6日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月6日
發(fā)明者G·B·特雷姆勃雷, M·菲利昂, M·司徒伯雷 申請(qǐng)人:阿萊斯亞生物療法股份有限公司