專利名稱：心肌梗死的風(fēng)險(xiǎn)因子和預(yù)測的制作方法
心肌梗死的風(fēng)險(xiǎn)因子和預(yù)測對(duì)相關(guān)申請(qǐng)的引用本申請(qǐng)要求2009年11月13日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)第61/261，155號(hào)的優(yōu)先權(quán)和權(quán)益,其全部內(nèi)容通過引用并入本文。
背景技術(shù)：
心肌梗死(MI)，通常稱為心臟病發(fā)作，與可修飾的風(fēng)險(xiǎn)因子有夫，但是盡管如此，仍然是世界范圍內(nèi)死亡和重度殘疾的主要原因(Yusuf S, Hawken S，Ounpuu S，etal.Efiect of potentially modifiable risk factors associated with MI in52countries(the INTERHEART study) :case-controlstudy. Lancet. 364:937-52 (2004))。為了預(yù)防，美國和歐洲的現(xiàn)代指導(dǎo)方針都推薦整合的兩步法，在所述方法中，如果需要，在風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估(預(yù)測)后，進(jìn)行個(gè)體化風(fēng)險(xiǎn)降低(治療)；風(fēng)險(xiǎn)越高，則規(guī)定的預(yù)防性護(hù)理越激進(jìn)(Third Report of tne National Cnolesterol Education Program(NCEP)Expert Panel on Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol inA dults (Adult Treatment Panel III)final report Circulation 106:3143-421(2002);Europeanguidelines on cardiovascular disease prevention in clinical practice:executivesummary. Eur. Heart J. 28:2375-414(2007))。在最近40年，MI初級(jí)預(yù)防的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，并未發(fā)生顯著變化。其仍然基于20世紀(jì)60年代弗雷明漢心臟研究所引入的風(fēng)險(xiǎn)因子概念(Kannel WBj Dawber TRj KaganA, Revotskie N，Stokes Jj 3rd.Factors oi risk in the development oi coronaryheart disease—six year follow-up experience. The FraminghamStudy. AnnInternMed. 55:33-50(1961)) o因?yàn)閭€(gè)體風(fēng)險(xiǎn)因子，如血漿膽固醇和血壓，具有較低的獨(dú)立預(yù)測會(huì)泛力(Ware JH. Thelimitations of risk factors as prognostic tools. N. Engl.I. Med. 355:2615-7(2006))，因此已將它們聯(lián)合來產(chǎn)生全局風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估尺度，如弗雷明漢風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分(Framingham Risk Score, FRS)和歐洲評(píng)分(European SCORE)(系統(tǒng)性冠狀動(dòng)脈風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估(Systematic Coronary Risk Evaluation)). (Third Report of the NationalCholesterol Education Program(NCEP)Expert Panel on Detection,Evaluation,andTreatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panel III)finalreport. Circulation 106:3143-421 (2002);European guidelines on cardiovasculardisease prevention in clinical practice:executive summary.Eur.HeartJ. 28:2375-414(2007)) o這些多變量風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測模型提供了 10年的絕對(duì)風(fēng)險(xiǎn)和相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)。絕對(duì)風(fēng)險(xiǎn)主要用于評(píng)估藥理風(fēng)險(xiǎn)降低的需要，而相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)則更常用于鑒定生活方式發(fā)生改變的較年輕個(gè)體以減少他們其他的高的終身風(fēng)險(xiǎn)。盡管該兩步預(yù)防法是可靠的，但是就其目前的形式而言，其遠(yuǎn)不是完美的，因?yàn)榻⒌娘L(fēng)險(xiǎn)因子，即使在組合時(shí)，也具有優(yōu)先的預(yù)測能力(Wald NJj Morris JKj Rish
The efficacy oi combining several risk factors as a screeningtest. J. Med.Screen. 12:197-201 (2005))，且不管推薦的“最佳”治療的開始如何，亞臨床疾病向臨床 MI 事件的進(jìn)展仍然發(fā)生(Koenig W. Treating residual cardiovascular risk:willlipoprotein-associated phospho lipase A2 inhibit ion live up to its promise .!.Am. Coll. Cardiol. 51:1642-4 (2008))。大多數(shù) MI 事件發(fā)生在分類于 FRS/SC0RE 低和中等風(fēng)險(xiǎn)類別的個(gè)體，即錯(cuò)誤分類的個(gè)體中。此外，即使在最有效的醫(yī)藥治療的情況下，實(shí)質(zhì)性剩余風(fēng)險(xiǎn)仍然存在(Koenig W. Treating residual cardiovascular risk: willlipoprotein-associated phospholipase A2innibitionlive up to its promise .!.Am.ColI.Cardiol. 51:1642-4(2008) ;Naghavi M，F(xiàn)alk E，Hecht HS，et al.Fromvulnerable plaque to vulnerable patient—Part III!Executive summary of theScreening for Heart Attack Prevention and Education (SHAPE)Task Force report.Am. J. Cardiol. 98:2H~15H (2006);Lauer MS. Primary prevention of atheroscleroticcardiovascular disease: the high public burden of low individual risk. TAMA. 297:1376-8 (2007))。因此，需要提高處于最高M(jìn)I事件風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的檢測和治療。 發(fā)明概述已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了能預(yù)測個(gè)體在將來會(huì)經(jīng)歷MI或心臟病發(fā)作風(fēng)險(xiǎn)的生物標(biāo)志物組。特別是，本文所鑒定的生物標(biāo)志物組，與傳統(tǒng)臨床風(fēng)險(xiǎn)因子(如年齡、抽煙狀況以及膽固醇水平)相比，為預(yù)測個(gè)體是否會(huì)經(jīng)歷MI，提供了優(yōu)越的辨別能力。具體而言，在本發(fā)明教導(dǎo)的多種實(shí)施方案中，ー組生物標(biāo)志物包括癌胚抗原和￠2微球蛋白。在某些實(shí)施方案中，生物標(biāo)志物組還包括N末端B型鈉尿肽前體、a I抗胰蛋白酶以及C反應(yīng)蛋白中的至少ー種。另夕卜，提供了用于測量本文所鑒定的ー種或多種生物標(biāo)志物來預(yù)測個(gè)體會(huì)經(jīng)歷MI的可能性的試劑盒。因此，在多種實(shí)施方案中，診斷個(gè)體MI風(fēng)險(xiǎn)的方法通常包括，測量個(gè)體的樣品中ー組生物標(biāo)志物的水平；諸如通過使所述生物標(biāo)志物的測量水平加權(quán)，計(jì)算個(gè)體的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分；以及利用風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分確定個(gè)體會(huì)經(jīng)歷心肌梗死的可能性。樣品可以包括血液，且個(gè)體可以是人。所述方法可以包括將與個(gè)體中心肌梗死可能性有關(guān)的信息傳輸、顯示、存儲(chǔ)或打印或輸出至用戶界面裝置、計(jì)算機(jī)可讀存儲(chǔ)介質(zhì)、本地計(jì)算機(jī)系統(tǒng)或遠(yuǎn)端計(jì)算機(jī)系統(tǒng)。本教導(dǎo)方法的各個(gè)特征和步驟可以用合適的程控計(jì)算機(jī)或在合適的程控計(jì)算機(jī)的輔助下進(jìn)行，特別是經(jīng)設(shè)計(jì)和/或構(gòu)造而如此的計(jì)算機(jī)。在本教導(dǎo)的方法中，生物標(biāo)志物的水平，可以通過本領(lǐng)域已知的多種技術(shù)測定,例如通過免疫測定、比色測定、濁度測定以及流式細(xì)胞術(shù)中的至少ー種。當(dāng)然，所用的具體技術(shù)將部分取決于待測量的生物標(biāo)志物的屬性。在本教導(dǎo)的某些實(shí)施方案中，計(jì)算風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分包括，對(duì)生物標(biāo)志物的測量水平進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換，以便產(chǎn)生每ー種測量的生物標(biāo)志物的轉(zhuǎn)換值；將每ー種生物標(biāo)志物的轉(zhuǎn)換值乘以生物標(biāo)志物常數(shù)，以便產(chǎn)生每ー種生物標(biāo)志物的相乘值(multiplied value);以及將每ー種生物標(biāo)志物的相乘值求和，以產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分?？梢詫L(fēng)險(xiǎn)評(píng)分與標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分或參照風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分進(jìn)行比較。參照風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分可以是標(biāo)準(zhǔn)或閾值。鑒定的生物標(biāo)志物(即包括于本教導(dǎo)的數(shù)組生物標(biāo)志物的那些生物標(biāo)志物)廣泛包括堿性磷酸酶、a I抗胰蛋白酶、甲胎蛋白、載脂蛋白Al、載脂蛋白B、載脂蛋白E、P 2微球蛋白、癌胚抗原、補(bǔ)體成分3、肌酸酐、纖維蛋白原、Y-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、C反應(yīng)蛋白(其包括高敏感性C反應(yīng)蛋白)、鐵、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、N末端B型鈉尿肽前體(其包括B型鈉尿肽)、轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度以及血管內(nèi)皮生長因子A。根據(jù)本教導(dǎo)，可以使用這些生物標(biāo)志物中兩種或更多種的任意組合。例如,生物標(biāo)志物組可以包括這些生物標(biāo)志物中的至少2種、至少3種、至少4種、至少5種、至少6種、至少7種、至少8種、至少9種、至少10種、至少11種、至少12種、至少13種、至少14種、至少15種、至少16種、至少17種、至少18種或至少19種。在某些實(shí)施方案中，所述方法使用包括3種生物標(biāo)志物的ー組生物標(biāo)志物。包括3種生物標(biāo)志物的生物標(biāo)志物組的實(shí)例是癌胚抗原、P 2微球蛋白和a I抗胰蛋白酶；癌胚抗原、P 2微球蛋白和C反應(yīng)蛋白；以及癌胚抗原、P 2微球蛋白和N末端B型納尿妝如體。如果ー組生物標(biāo)志物包括3種生物標(biāo)志物即癌胚抗原、P 2微球蛋白和a I抗胰蛋白酶，則本教導(dǎo)方法的多種實(shí)施方案使用還包括除了那3種生物標(biāo)志物外的生物標(biāo)志物的ー組生物標(biāo)志物。例如，某些實(shí)施方案使用ー組還包括N末端B型鈉尿肽前體的4種生物標(biāo)志物；一些實(shí)施方案使用ー組還包括載脂蛋白Al和載脂蛋白B的5種生物標(biāo)志物；具體實(shí)施方案使用ー組還包括載脂蛋白Al、載脂蛋白B、甲胎蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白的7種生物標(biāo)志物；以及多種實(shí)施方案使用ー組還包載脂蛋白Al、載脂蛋白B、甲胎蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和血管內(nèi)皮生長因子A的8種生物標(biāo)志物。如果ー組生物標(biāo)志物括3種生物標(biāo)志物即癌胚抗原、^ 2微球蛋白和C反應(yīng)蛋白，則本教導(dǎo)方法的多種實(shí)施方案使用一組除了上文直接所列的3種外還包括載脂蛋白Al、載脂蛋白B和N末端B型鈉尿肽前體的6種生物標(biāo)志物。在具體實(shí)施方案中，所述方法使用包括7種生物標(biāo)志物的ー組生物標(biāo)志物即a I抗胰蛋白酶、C反應(yīng)蛋白、載脂蛋白Al、載脂蛋白B、肌酸酐、堿性磷酸酶和轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度。相關(guān)地，本教導(dǎo)方法的多種實(shí)施方案使用一組除了上文直接所列的7種外還包括載脂蛋白E、纖維蛋白原、Y-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、補(bǔ)體C3、嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的13種生物標(biāo)志物。在另一方面，提供了用于診斷個(gè)體的MI風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒。試劑盒可以包括一套特異 性測量個(gè)體樣品中ー組生物標(biāo)志物的水平的試劑和使用所述試劑盒診斷心肌梗死風(fēng)險(xiǎn)的說明書。在一些實(shí)施方案中，所述試劑測量蛋白水平。附圖
簡要說明當(dāng)與附圖一起閱讀時(shí)，根據(jù)多種示例性實(shí)施方案的下列描述，將會(huì)獲得對(duì)本文所公開的本教導(dǎo)更全面的了解。應(yīng)當(dāng)了解到，下文所述附圖僅用于說明的目的，并非意圖以任何方式限制本教導(dǎo)的范圍。圖I是示例性實(shí)施方案的表，其顯示了根據(jù)推斷的生物標(biāo)志物的五分值基線水平的五分值(quintile),追蹤4年過程中的優(yōu)勢(shì)比(odds ratio)。圖2是示例性實(shí)施方案的表，其顯示了無效事件(對(duì)照)個(gè)體中所選的風(fēng)險(xiǎn)因子之間的斯皮爾曼相關(guān)系數(shù)(Spearman correlation coefficient)。圖3表示根據(jù)示例性實(shí)施方案，基于風(fēng)險(xiǎn)模型發(fā)生MI的接受者工作特征曲線，所述風(fēng)險(xiǎn)模型僅包括建立的風(fēng)險(xiǎn)因子以及包括建立的風(fēng)險(xiǎn)因子和13種推斷的風(fēng)險(xiǎn)因子。圖4是根據(jù)示例性實(shí)施方案，從僅包含建立的風(fēng)險(xiǎn)因子(左軸)的模型和從包含建立的風(fēng)險(xiǎn)因子和13種推斷的生物標(biāo)志物(橫軸)的模型，為每ー個(gè)個(gè)體的近期MI計(jì)算的病例對(duì)照概率的散點(diǎn)圖。圖5表示根據(jù)示例性實(shí)施方案，MI病例個(gè)體和對(duì)照個(gè)體中，13種推斷的生物標(biāo)志物多標(biāo)志物綜合評(píng)分的基線頻數(shù)分布和C反應(yīng)蛋白的類似頻數(shù)分布。顯示了(a)C反應(yīng)蛋白和(b)包括13種生物標(biāo)志物的多標(biāo)志物評(píng)分的基線頻數(shù)分布。圖6是根據(jù)示例性實(shí)施方案的接受者工作特征曲線，其證明模型風(fēng)險(xiǎn)分析在751名個(gè)體中預(yù)測未來MI的性能。圖7是根據(jù)示例性實(shí)施方案的接受者工作特征曲線，其顯示模型風(fēng)險(xiǎn)分析在751名個(gè)體中預(yù)測未來MI的性能。圖8是根據(jù)示例性實(shí)施方案的接受者工作特征曲線，其顯示模型風(fēng)險(xiǎn)分析在751名個(gè)體中預(yù)測未來MI的性能。 圖9是根據(jù)示例性實(shí)施方案，根據(jù)本教導(dǎo)而得到的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分與在4年內(nèi)經(jīng)歷MI的相對(duì)概率之間的相互關(guān)系曲線。圖IOA是根據(jù)示例性實(shí)施方案，根據(jù)751名個(gè)體的研究，病例和對(duì)照間風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分的分布圖，751名個(gè)體中有252名在4年的血液測試中經(jīng)歷了 MI。圖IOB是根據(jù)示例性實(shí)施方案，對(duì)于751名個(gè)體研究中的個(gè)體，基于每ー個(gè)體的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分值，預(yù)測的4年內(nèi)MI相對(duì)概率的分布圖，在751名個(gè)體中有252名在4年的血液測試中經(jīng)歷了 MI。詳細(xì)描述已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了能預(yù)測個(gè)體會(huì)患有未來心肌梗死(MI)或心臟病發(fā)作的風(fēng)險(xiǎn)的生物標(biāo)志物組?！吧飿?biāo)志物”可以是任何生物特征或變量，其在如人類的個(gè)體的生物系統(tǒng)中的定性或定量存在、不存在或水平，是所述系統(tǒng)生物狀態(tài)的標(biāo)志。因此，生物標(biāo)志物可以用于評(píng)估個(gè)體的健康狀況或狀態(tài)。例如，可以利用加權(quán)分析或算法分析多種生物標(biāo)志物的水平，以產(chǎn)生個(gè)體的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分。風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分可以表示個(gè)體會(huì)患有未來MI事件的可能性。在一些實(shí)施方案中，風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分的大小可能與該個(gè)體的風(fēng)險(xiǎn)水平相關(guān)。例如，風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分較高可以表示未來MI事件的可能性較高，而風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分較低可以表示未來MI事件的可能性較低。如實(shí)施例所詳細(xì)描述的，本教導(dǎo)可以用于鑒定看起來健康但是可能處于經(jīng)歷未來MI風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體。提供了這種信息后，處于風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體可以采取主動(dòng)步驟如鍛煉、節(jié)食和/或?qū)で筢t(yī)藥干預(yù)來減低在未來患有MI的可能性。因此，本教導(dǎo)可以更準(zhǔn)確地用于預(yù)測未來MI以及可能挽救生命。另外，本教導(dǎo)可以用于監(jiān)測個(gè)體的疾病狀態(tài)或疾病進(jìn)展。本文所述的生物標(biāo)志物組可以單獨(dú)使用或與其他生物標(biāo)志物和/或臨床風(fēng)險(xiǎn)因子聯(lián)合使用，來測量與MI有關(guān)的ー個(gè)或多個(gè)生物過程、致病過程、疾病或?qū)χ委煾深A(yù)的響應(yīng)的開始、進(jìn)展、嚴(yán)重程度、病理、侵入性、等級(jí)、活性、殘疾、死亡率、發(fā)病率、疾病亞分類或其他潛在的特征。實(shí)際上，存在于樣品中且可以從所述樣品分離或在所述樣品中測量的任何生物化合物都可以用作生物標(biāo)志物。生物標(biāo)志物種類的非限制實(shí)例包括多肽、蛋白、蛋白聚糖、糖蛋白、脂蛋白、碳水化合物、脂質(zhì)、核酸、有機(jī)或無機(jī)化學(xué)品、天然多聚體、代謝物以及小分子。生物標(biāo)志物還可以包括人體的物理測量，如血壓和細(xì)胞計(jì)數(shù)，以及兩種或多種生物特征或變量的比率或比例。在一些實(shí)施方案中，可以選擇不同生物類別的生物標(biāo)志物來產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分。不同生物類別的非限制實(shí)例包括炎癥敏感性血漿蛋白、載脂蛋白、鐵超載標(biāo)志物、生長因子以及白細(xì)胞計(jì)數(shù)。
生物標(biāo)志物的“水平”或“量”，可以通過本領(lǐng)域已知的任何方法測定，并且會(huì)部分取決于生物標(biāo)志物的屬性。例如，生物標(biāo)志物水平可以通過免疫測定、比色測定、濁度測定以及流式細(xì)胞術(shù)中的ー種或多種測量。應(yīng)當(dāng)理解到，不必測定生物標(biāo)志物的絕對(duì)量，而是可以測定相對(duì)量。另外，可以通過生物樣品中生物標(biāo)志物的濃度、與生物標(biāo)志物結(jié)合的抗體的濃度或生物標(biāo)志物的功能活性(即結(jié)合活性或酶促活性)來表示生物標(biāo)志物的量。如本文所用的，“參照”或“對(duì)照”或“標(biāo)準(zhǔn)”每個(gè)都表示健康個(gè)體或?qū)φ杖后w中生物標(biāo)志物的量或表示來源于健康個(gè)體或?qū)φ杖后w中ー種或多種生物標(biāo)志物的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分。生物標(biāo)志物的量可以由健康個(gè)體的樣品測定，或可以由對(duì)照群體的樣品測定。如本文所用的，“樣品”指采自個(gè)體的任何生物樣品，包括血液、血漿、血清、腦脊液、膽汁酸、唾液、滑液、胸膜液、心包液、腹水、汗、糞便、鼻液、眼液、細(xì)胞內(nèi)液、細(xì)胞間液、淋巴、尿、組織、肝細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、腎細(xì)胞、前列腺細(xì)胞、血細(xì)胞、肺細(xì)胞、腦細(xì)胞、月旨肪細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞以及乳腺細(xì)胞。生物樣品類型的來源可以是不同的個(gè)體；不同時(shí)間的同一個(gè)體；不同狀態(tài)的同一個(gè)體，例如在藥物治療前以及藥物治療后；不同性別；不同種類，例 如，人類和非人類哺乳動(dòng)物；以及多種其他組合。此外，在評(píng)估之前，可以差異性地處理生物樣品類型，例如利用不同的診斷檢查方案(work-up protocol)。本教導(dǎo)通常提供診斷個(gè)體如人類或患者的MI風(fēng)險(xiǎn)(例如MI的近期風(fēng)險(xiǎn))的方法。本文所用的“近期(near-term) ”表示從基線開始的約0到約6年，其中基線被定義為從個(gè)體采集樣品用于分析的日期。例如，近期包括從基線開始的約I周、約I個(gè)月、約2個(gè)月、約3個(gè)月、約6個(gè)月、約9個(gè)月、約I年、約2年、約3年、約4年、約5年或約6年。本文所用的“近期風(fēng)險(xiǎn)”表示在近期內(nèi)個(gè)體會(huì)經(jīng)歷MI事件的風(fēng)險(xiǎn)。在多種實(shí)施方案中，所述方法通常包括，測量個(gè)體的樣品中多種生物標(biāo)志物(例如ー組生物標(biāo)志物)的水平(或利用所測量的水平)；通過諸如使所測量的生物標(biāo)志物的測量水平加權(quán)，計(jì)算個(gè)體的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分；以及利用風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分確定個(gè)體會(huì)經(jīng)歷心肌梗死的可能性(例如基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分，確定個(gè)體中MI事件的可能性)。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括，利用合適的程控計(jì)算機(jī)，基于ー種或多種生物標(biāo)志物的測量水平，計(jì)算風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分。在某些實(shí)施方案中，所述方法包括將與個(gè)體中MI可能性有關(guān)的信息傳輸、顯示、存儲(chǔ)或打印或輸出至用戶界面裝置、計(jì)算機(jī)可讀存儲(chǔ)介質(zhì)、本地計(jì)算機(jī)系統(tǒng)或遠(yuǎn)端計(jì)算機(jī)系統(tǒng)。在多種實(shí)施方案中，所述方法使用ー組生物標(biāo)志物，其包括但不限于癌胚抗原、
32微球蛋白和a I抗胰蛋白酶；癌胚抗原、P 2微球蛋白和C反應(yīng)蛋白；以及癌胚抗原、^ 2微球蛋白和N末端B型納尿妝如體；癌胚抗原、^2微球蛋白和a I抗膜蛋白酶以及N末端B型納尿妝如體；癌胚抗原、^ 2微球蛋白和a I抗膜蛋白酶、載脂蛋白Al以及載脂蛋白B ；癌胚抗原、P 2微球蛋白、a I抗膜蛋白酶、載脂蛋白Al、載脂蛋白B、甲胎蛋白以及轉(zhuǎn)鐵蛋白；癌胚抗原、￠2微球蛋白、a I抗胰蛋白酶、載脂蛋白Al、載脂蛋白B、甲胎蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白以及血管內(nèi)皮生長因子A ;癌胚抗原、P 2微球蛋白、C反應(yīng)蛋白、載脂蛋白Al、載脂蛋白B以及N末端B型鈉尿肽前體；a I抗胰蛋白酶、C反應(yīng)蛋白、載脂蛋白Al、載脂蛋白B、肌酸酐、堿性磷酸酶以及轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度；以及a I抗胰蛋白酶、C反應(yīng)蛋白、載脂蛋白Al、載脂蛋白B、肌酸酐、堿性磷酸酶、轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度、載脂蛋白E、纖維蛋白原、Y谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、補(bǔ)體C3、嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)以及淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)。在某些實(shí)施方案中，ー組生物標(biāo)志物包括選自a I抗胰蛋白酶、鉄、C反應(yīng)蛋白、肌酸酐以及纖維蛋白原中的兩種或更多種生物標(biāo)志物。在具體實(shí)施方案中，ー組生物標(biāo)志物包括選自a I抗胰蛋白酶、鉄、C反應(yīng)蛋白、肌酸酐以及纖維蛋白原中的3種或更多種、4種或更多種或5種生物標(biāo)志物。生物標(biāo)志物的水平，可以通過本領(lǐng)域已知的多種技術(shù)進(jìn)行測定，這部分取決于生物標(biāo)志物的屬性。例如，生物標(biāo)志物的水平可以通過免疫測定、分光光度法、酶促測定、紫外線測定、動(dòng)力學(xué)測定、電化學(xué)測定、比色測定、濁度測定、原子吸附測定以及流式細(xì)胞術(shù)中的至少ー種進(jìn)行測定。如果合適，可以使用其他分析技木，如質(zhì)譜分析，諸如高效/壓液相色譜分析(HPLC)的液相色譜分析、氣相色譜分析、核磁共振光譜分析、其相關(guān)技術(shù)和組合以及雜合，例如，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析(LC-MS)儀器。 在一些實(shí)施方案中，計(jì)算風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分包括對(duì)生物標(biāo)志物的測量水平進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換，以便產(chǎn)生每ー種測量的生物標(biāo)志物的轉(zhuǎn)換值；將每ー種生物標(biāo)志物的轉(zhuǎn)換值乘以生物標(biāo)志物常數(shù)，以便產(chǎn)生每ー種生物標(biāo)志物的相乘值；以及將每ー種生物標(biāo)志物的相乘值求和，以產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分。當(dāng)然，基于ー組生物標(biāo)志物的測量水平，本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其他方式也可以用于計(jì)算風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分或相似評(píng)分，所述評(píng)分能夠預(yù)測個(gè)體經(jīng)歷MI事件的可能性?？梢詫L(fēng)險(xiǎn)評(píng)分與標(biāo)準(zhǔn)或參照風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分進(jìn)行比較。參照風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分可以是標(biāo)準(zhǔn)(例如數(shù)值)或閾值(例如圖表中的線)。在某些實(shí)施方案中，如果風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分大于參照風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分，則個(gè)體經(jīng)歷MI例如未來MI事件的可能性增加。在一些實(shí)施方案中，如果風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分小于參照風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分，則個(gè)體經(jīng)歷MI例如未來MI事件的可能性降低。在一些實(shí)施方案中，個(gè)體風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分的大小，或其超過參照風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分的量，可以表示該個(gè)體的風(fēng)險(xiǎn)水平或與該個(gè)體的風(fēng)險(xiǎn)水平相關(guān)。例如，風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分較高可以表示未來MI事件的可能性較高，而風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分較低可以表示未來MI事件的可能性較低。相反，如果個(gè)體的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分低于參照風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分，則個(gè)體不可能處于經(jīng)歷未來MI事件的顯著風(fēng)險(xiǎn)中。為ー組具體的生物標(biāo)志物建立參照風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分、標(biāo)準(zhǔn)、閾值、判別界限或“截止”評(píng)分(統(tǒng)ー為“參照風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分”)，在本領(lǐng)域中是已知的(Szklo, Moyses and Nieto, F.Javier. Epidemiology:beyond the basics. Second Edition, ^udburyjMA:Jones andBartlett Publishers (2007) ;Schlesselman，James J. Case-Control Studies. NewYork:0xford University Press (1982);Anderson KM，Odell PM, Wilson PWj KannelWB. Cardiovascular disease risk profiles. Am Heart J. 121:293-8 (1991);EichlerK，Puhan MA，Steurer J，Bachmann LM. Prediction of first coronary events withthe Framingham score : a systematic review. Am Heart J. 153 (5):722-31,731.el-8 (2007) ; Hoffmann U, Massaro JMj Fox C S，Manders E，O’Donnell CJ. Defining normaldistributions of coronary artery calcium in women and men from the FraminghamHeart Study. Am ,I Cardiol. 102(9) :1136-41, 1141. el. (2008))。本教導(dǎo)的方法不僅允許診斷未來MI事件例如近期MI事件的可能性或風(fēng)險(xiǎn)，而且如果個(gè)體被鑒定為心肌梗死的可能性増加，還可以包括推薦、授權(quán)或?qū)嵤┲委?。在所述方法的一些?shí)施方案中，可以將與個(gè)體MI事件的可能性有關(guān)的信息傳輸給醫(yī)療企業(yè)、醫(yī)療保險(xiǎn)供應(yīng)商、健康護(hù)理供應(yīng)商的員エ或傳輸給醫(yī)師。而且，用于將個(gè)體鑒定為經(jīng)歷MI的可能性増加的相同的方法，可以適用于其他用途。例如，風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分可以用于篩選能夠減輕導(dǎo)致MI的致病因素的候選藥物。在這種情況下，通過監(jiān)測生物標(biāo)志物水平和/或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分，可以監(jiān)測候選藥物的治療。而且，利用已經(jīng)發(fā)現(xiàn)能夠有效降低未來MI可能性的任何藥物，可能的是，某些個(gè)體是響應(yīng)者而有些個(gè)體可能是非響應(yīng)者。因此，可以在治療過程中監(jiān)測個(gè)體的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分，來確定藥物是否有效。例如，如果個(gè)體的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分響應(yīng)治療而降低，則個(gè)體可以響應(yīng)治療，并因此經(jīng)歷未來事件的風(fēng)險(xiǎn)可以降低。當(dāng)然，可能不存在響應(yīng)者和非響應(yīng)者的任何現(xiàn)有的、已知的群體，使得應(yīng)當(dāng)且可以隨時(shí)間監(jiān)測有關(guān)個(gè)體的任何未來MI事件的藥物治療的功效。就藥物無效而言，可以停止其使用，并供應(yīng)另ー種藥物來代替它。可以利用包括其他電子裝置的合適的程控計(jì)算機(jī)，如本文所述，計(jì)算風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分。另夕卜，該合適的程控計(jì)算機(jī)或另ー個(gè)合適的程控計(jì)算機(jī)，可以將風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分與參照風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分進(jìn)行比較，用于確定個(gè)體會(huì)經(jīng)歷MI的可能性的目的。合適的程序設(shè)計(jì)可以包括例如能使計(jì)算機(jī)處理、分析和/或?qū)y量的生物標(biāo)志物水平轉(zhuǎn)化為風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分并基于所述風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分解釋MI的可能性的軟件、固件或其他程序代碼。這類程序設(shè)計(jì)可以包括于計(jì)算機(jī)內(nèi)或可以植入計(jì)算機(jī)可讀介質(zhì)如便攜式計(jì)算機(jī)可讀介質(zhì)。當(dāng)然，本教導(dǎo)的其他步驟或方法可以利用合適的程控計(jì)算機(jī)來實(shí)施或由合適的程控計(jì)算機(jī)輔助進(jìn)行，例如測量生物標(biāo)志物的水平、 使用風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分、推薦和/或授權(quán)治療，以及傳輸、顯示、存儲(chǔ)、打印和/輸出信息。在確定風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分和/或MI可能性后，可以將有關(guān)個(gè)體的未來MI的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分和/或可能性的信息顯示于或輸出至用戶界面裝置、計(jì)算機(jī)可讀存儲(chǔ)介質(zhì)或本地或遠(yuǎn)端計(jì)算機(jī)系統(tǒng)。這類信息可以包括例如，ー種或多種生物標(biāo)志物的測量水平、其風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分或其等同項(xiàng)(如圖表、數(shù)字、符號(hào)等)，以及與本文所述方法有關(guān)的任何其他數(shù)據(jù)。顯示或輸出信息表示，利用任何介質(zhì)，例如ロ頭、書面或打印輸出，通過可視的顯像計(jì)算機(jī)可讀介質(zhì)、計(jì)算機(jī)系統(tǒng)或其他電子裝置(例如智能手機(jī)、個(gè)人數(shù)字助理(PAD)、便攜式電腦等)，將所述信息傳達(dá)給用戶。對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員顯然的是，輸出信息并非限于向用戶或相連的外部元件，如計(jì)算機(jī)系統(tǒng)或計(jì)算機(jī)內(nèi)存輸出，而是可選地或另外地輸出到諸如任何計(jì)算機(jī)可讀介質(zhì)的內(nèi)部元件。計(jì)算機(jī)可讀介質(zhì)可以包括但不限于硬盤、軟盤、⑶_R0M、DVD以及DAT。計(jì)算機(jī)可讀介質(zhì)不包括載波或用于數(shù)據(jù)傳輸?shù)钠渌ㄐ问?。?duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員顯然的是，本文公開和請(qǐng)求保護(hù)的各種樣品評(píng)估和診斷方法，可以但不必是計(jì)算機(jī)執(zhí)行的，并且例如，可以通過例如ロ頭或書面(例如書寫)傳達(dá)給人，而進(jìn)行顯示或輸出步驟。根據(jù)多種實(shí)施方案，可以將風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分、MI的可能性、測量的生物標(biāo)志物的水平、參照風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分以及以上的等同項(xiàng)中的至少ー種顯示于屏幕或可觸摸介質(zhì)上。在某些實(shí)施方案中，可以將這類信息傳輸給醫(yī)藥企業(yè)、醫(yī)療保險(xiǎn)供應(yīng)商、健康護(hù)理供應(yīng)商的員エ或傳輸給醫(yī)師。本教導(dǎo)還包括可用于進(jìn)行本文所述診斷方法的試劑盒和系統(tǒng)。本文所述方法可以通過例如診斷實(shí)驗(yàn)室、服務(wù)供應(yīng)商、實(shí)驗(yàn)室以及個(gè)體進(jìn)行。除了這些環(huán)境以外，試劑盒還可以用于其他環(huán)境中。試劑盒可以包括用于測量個(gè)體的樣品中ー種或多種生物標(biāo)志物、分析測量水平以及鑒定個(gè)體是否處于MI風(fēng)險(xiǎn)中的試劑和材料。例如，在一些實(shí)施方案中，試劑盒可以包括針、注射器、小瓶或用于獲得和/或含有個(gè)體的樣品的其他儀器。在一些實(shí)施方案中，試劑盒可以包括至少ー種用于特異性檢測或定量本文所公開的生物標(biāo)志物的試劑。換而言之，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以很容易地選擇合適的試劑和技術(shù)，用于包括于檢測或定量那些生物標(biāo)志物的試劑盒中。例如，如果生物標(biāo)志物是蛋白，則試劑盒可以包括適合利用例如免疫測定(如化學(xué)發(fā)光免疫測定)、比色測定或濁度測定檢測蛋白的試劑(如抗體)。如果生物標(biāo)志物是細(xì)胞，則試劑盒可以包括適合利用例如流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的試劑。如果生物標(biāo)志物是有機(jī)或無機(jī)化學(xué)品、脂質(zhì)或小分子，則試劑盒可以包括適合利用例如HPLC、酶促測定、分光光度法、紫外線測定、動(dòng)力學(xué)測定、電化學(xué)測定、比色測定、原子吸附測定以及質(zhì)譜分析檢測此類生物標(biāo)志物的試劑。如果生物標(biāo)志物是核酸(如RNA)或核酸編碼的蛋白，則試劑盒可以包括適合利用例如PCR、雜交技術(shù)以及微陣列檢測核酸的試劑。取決于待測量的生物標(biāo)志物，試劑盒可以包括提取緩沖液或試劑、擴(kuò)增緩沖液或試劑、反應(yīng)緩沖液或試劑、雜交緩沖液或試劑、免疫檢測緩沖液或試劑、標(biāo)記緩沖液或試劑以及檢測工具。試劑盒也可以包括對(duì)照，其可以是對(duì)照樣品、參照樣品、內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)或以前產(chǎn)生的經(jīng)驗(yàn)數(shù)據(jù)。對(duì)照可以對(duì)應(yīng)于正常、健康個(gè)體或患有已知的MI疾病狀態(tài)的個(gè)體。另外，可以為 每ー生物標(biāo)志物提供對(duì)照，或?qū)φ湛梢允菂⒄诊L(fēng)險(xiǎn)評(píng)分。試劑盒可以包括每種個(gè)體試劑的ー個(gè)或多個(gè)容器。根據(jù)管理機(jī)構(gòu)的要求，試劑盒還可以包括進(jìn)行本文所述方法和/或解釋結(jié)果的說明書。另外，軟件可以包括于試劑盒中，用于分析檢測的生物標(biāo)志物水平、計(jì)算風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分和/或確定MI的可能性。優(yōu)選地，將試劑盒包裝于適合商業(yè)配送、銷售和/或使用的容器中。進(jìn)行本文公開的方法的系統(tǒng)可以包括，用于測量ー組生物標(biāo)志物的水平的分析儀器，以及用于進(jìn)行所述方法的一個(gè)或多個(gè)步驟的合適的程控計(jì)算機(jī)。例如，合適的程控計(jì)算機(jī)可以進(jìn)行或輔助下述中的ー個(gè)或多個(gè)測量個(gè)體的樣品中ー組生物標(biāo)志物的水平；通過本領(lǐng)域已知的或本文所教導(dǎo)的各種技術(shù)計(jì)算風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分；利用風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分確定個(gè)體會(huì)經(jīng)歷心肌梗死的可能性；以及顯示與MI的可能性有關(guān)的信息，如測量的生物標(biāo)志物水平、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分、MI的可能性、參照分析評(píng)分以及以上的等同項(xiàng)。為了舉例說明而非限制，提供了下述實(shí)施例。實(shí)施例I :推斷的生物標(biāo)志物的鑒定方法研究群體本研究的目的是，通過專注于在風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估后的4年內(nèi)發(fā)展MI的個(gè)體，改善處于最高風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的檢測。以前并未報(bào)道這類近期MI的風(fēng)險(xiǎn)因子和預(yù)測物(predictor)，主要是因?yàn)榇蠖鄶?shù)研究都太小，而不能累積充足數(shù)量的近期MI事件。顯然，以疊加于發(fā)炎和破裂的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊上的血栓形成為主導(dǎo)的如同MI —祥的近期事件的風(fēng)險(xiǎn)因子，不同于以動(dòng)脈粥樣硬化的緩慢發(fā)展為主導(dǎo)的較長期事件的風(fēng)險(xiǎn)因子。為此，使用基于大社區(qū)的前瞻性巢式病例對(duì)照研究，即利用45，735名男子和女子的哥本哈根一般群體研究(Copenhagen General Population Study)與哥本哈根市心臟研究(Copenhagen CityHeart Study)的聯(lián)合。參與者來自哥本哈根市心臟研究2001-2003年檢查以及來自哥本哈根一般群體研究2003-2007年檢查。哥本哈根市心臟研究是在1976年發(fā)起的丹麥一般群體的前瞻性心血管群體研究，包括參與ー項(xiàng)或幾項(xiàng)檢查的丹麥后裔的白種男人和女人(NordestgaardBGjBenn M，Schnohr P，Tybjaerg-Hansen A. Nonfasting triglycerides and risk ofMI，ischemic heart diseaseand death inmenand women. JAMA. 298:299-308 (2007))0在2001-2003年的檢查中，從5907名個(gè)體(50%的參與率)中釆集血液樣品。哥本哈根一般群體研究(CGPS)是2003年發(fā)起且仍然還在招募的丹麥一般群體的前瞻性研究(Noraestgaard BG, Benn M, Schnohr P，Tybaerg-Hansen A. Nonfastmg triglyceridesand risk of MI, iscnemic heart disease, and death in men and women. TAMA. 298:299-308(2007);Frikke-Schmidt R, Nordestgaard BG, Stene MC, et al. Association ofIoss-of-function mutations in the ABCA lgene with high-density lipoproteincholesterol levels and risk of ischemic heart disease. TAMA. 299:2524-32(2008)),目標(biāo)是精確查明哥本哈根市心臟研究中的總計(jì)100，000名參與者。在2003年至2007年間，哥本哈根一般群體研究的39，828名個(gè)體返回了血液樣品(45%參與率)。在聯(lián)合研究中在抽血的4年內(nèi)，鑒定了發(fā)生非致命或致命MI的252名參與者。使對(duì)照與同一研究的病例匹配，以2:1的比值從具有血液樣品而無MI歷史(但是他們以前可能經(jīng)歷其他心血管疾病或血管再生木)的參與者中隨機(jī)選擇，并且匹配年齡(I年內(nèi))、性別、檢查和抽血的年份(I年 內(nèi))以及HMG-CoA還原酶抑制劑使用(使用或不使用)。收集MI 的診斷信息(World Health Organization; InternationalClassification of Diseases, 8th edition: codes 410; 10th edition: codes 121-122),并通過回顧輸入丹麥國家患者登記(national Danish Patient Registry)中的所有住院和診斷來證實(shí)；使用醫(yī)院和全科醫(yī)師的醫(yī)療記錄來證實(shí)需要至少兩種下述標(biāo)準(zhǔn)的存在的MI診斷表示MI的特征性胸痛、心肌酶升高以及心電圖變化。5個(gè)病例僅能匹配一個(gè)對(duì)照而不是兩個(gè)。因此，總計(jì)252個(gè)病例和499個(gè)對(duì)照可用于分析。這些研究獲得海萊烏醫(yī)院(Herlev Hospital)和丹麥倫理委員會(huì)的許可。參與者給出了書面知情同意。津立的風(fēng)險(xiǎn)因子測量新鮮血漿的非空腹總膽固醇、高密度脂蛋白(HDL)膽固醇以及甘油三酯(Boehringer Mannheim, Mannheim, Germany)。如果甘油三酯小于 4mmol/L,則根據(jù)Friedewald計(jì)算低密度脂蛋白(LDL)膽固醇，但是如果甘油三酯的水平較高，則直接測量。抽煙狀況被限定為從來不抽煙、過去是煙民或目前是煙民。糖尿病是自我報(bào)道疾病，使用胰島素或ロ服降血糖藥和/或非空腹血漿葡萄糖大于llmmol/L。身體不活動(dòng)是業(yè)余時(shí)間活動(dòng)每周小于4小時(shí)，且主要從事久坐的工作。身體質(zhì)量指數(shù)是體重除以身高的平方(m2)。在休息5分鐘且個(gè)體采用坐姿后，測量血壓。早期MI家族史被定義為MI存在于55歲前的一級(jí)男性親屬中或者M(jìn)I存在于65歲前的ー級(jí)女性親屬中。推斷的牛物標(biāo)志物由非空腹新鮮血液樣品，利用比色測定和濁度測定(Konelab, Helsinki, Finland, Dade Behring, Deerfield, Illinois, USA, ILS LaooratoriesScandinavia, Allcrod, Denmark or Dako, Glostrup, Denmark)或流式細(xì)胞術(shù)(Bayer, Germany),測量14種生物標(biāo)志物，即高敏感性C反應(yīng)蛋白(CRP)、纖維蛋白原、a I抗胰蛋白酶、補(bǔ)體成分3 (補(bǔ)體C3)、載脂蛋白Al、載脂蛋白B、載脂蛋白E、鐵、轉(zhuǎn)鐵蛋白(轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度)、肌酸酐、堿性磷酸酶、Y -谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)和嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)。通過用血清鐵水平(umol/L)除以兩倍的轉(zhuǎn)鐵蛋白水平(umol/L)，計(jì)算轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度(%)。除非另有理解，如本文所用，“高敏感性C反應(yīng)蛋白”和“ C反應(yīng)蛋白”(和“ CRP”)交換使用，并表示相同的蛋白。冷凍751名個(gè)體的血液樣品，用于隨后的分析。隨后解凍這些冷凍的血液樣品，用于按如下測量其他蛋白和其他生物化學(xué)度量。利用Rules Based Medicine, Inc.(Austin, TX)的HumanMAP I. 6版本的Luminex多元免疫測定技術(shù)，測量751份血漿樣品中每ー份的下列蛋白甲胎蛋白、￠2微球蛋白、癌胚抗原以及血管內(nèi)皮生長因子A。利用Searchlight SearchLight化學(xué)發(fā)光免疫測定測量技術(shù)(ThermoScientific, Rockford, IL),測量751份血衆(zhòng)樣品中姆ー份的蛋白N末端鈉尿肽前體(NT-proBNP)。除非另有理解，本文所用的“N末端B型鈉尿肽前體”和“B型鈉尿蛋白”(和"NT-proBNP")交換使用，并表示相同的蛋白。
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統(tǒng)計(jì)分析對(duì)于連續(xù)測量，利用斯氏不配對(duì)t檢驗(yàn)，對(duì)于比例，利用Fisher精確檢驗(yàn)，比較病例和對(duì)照個(gè)體之間基線時(shí)的變量。基線被定義為為每個(gè)個(gè)體抽血的日期。利用斯皮爾曼相關(guān)性，計(jì)算變量之間的相關(guān)性?；谒鼈?cè)趯?duì)照個(gè)體中的分布，將連續(xù)變量的水平分為五分值。用條件邏輯回歸檢查基線變量水平與MI發(fā)生率之間的相關(guān)性。評(píng)估17種基線生物標(biāo)志物變量a I抗胰蛋白酶、堿性磷酸酶、載脂蛋白Al、載脂蛋白B、載脂蛋白E、補(bǔ)體C3、肌酸酐、纖維蛋白原、Y-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、鐵、轉(zhuǎn)鐵蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度、C反應(yīng)蛋白、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)與淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的比以及載脂蛋白B與載脂蛋白Al的比。構(gòu)建2個(gè)統(tǒng)計(jì)模型。ー個(gè)模型考慮了在沒有調(diào)整其他風(fēng)險(xiǎn)因子的情況下進(jìn)行評(píng)估時(shí)的變量。另ー個(gè)模型是多變量的，并且對(duì)如下9種建立的基線風(fēng)險(xiǎn)因子進(jìn)行調(diào)整總膽固醇(以基于對(duì)照個(gè)體的五分值)、HDL膽固醇(以基于對(duì)照個(gè)體的五分值)、甘油三酯(以基于對(duì)照個(gè)體的五分值)、5種血壓類別(收縮壓/舒張壓小于120/80mmHg、^ 120/80和<130/85mmHg、彡 130/85 和 <140/90mmHg、彡 140/90 和 <160/100mmHg、或彡 160/100mmHg 或使用抗高血壓治療)、抽煙狀況(從來不抽煙、目前是煙民、以前是煙民)、糖尿病(有/無)、早期MI的家族史(有/無)、身體質(zhì)量指數(shù)(作為連續(xù)變量治療)和身體活動(dòng)(對(duì)分，每周活動(dòng)少于4小時(shí)且從事久坐的工作，或每周的活動(dòng)大于4小時(shí)和/或不從事久坐的工作)。還評(píng)估了不同的統(tǒng)計(jì)模型，其未考慮任何生物標(biāo)志物并僅包括如上文所述分類的9種建立的基線風(fēng)險(xiǎn)因子。用似然比檢驗(yàn)確定包括目的變量的邏輯回歸模型是否比無變量的邏輯回歸模型提供更好的擬合(fit)。為了檢驗(yàn)類別間的線性趨勢(shì)，用五分值內(nèi)的中值水平作為連續(xù)測量。在単獨(dú)的二次分析中，評(píng)估了包括上文所列舉的9種建立的基線風(fēng)險(xiǎn)因子和17種生物標(biāo)志物中的13種的條件邏輯回歸模型，以發(fā)生MI作為結(jié)果。4種生物標(biāo)志物并未包括于該分析中，這是因?yàn)榕c其他生物標(biāo)志物的高相關(guān)性除去了血清鐵和轉(zhuǎn)鐵蛋白以轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度來替代，除去了嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)與淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的比，并且單獨(dú)保留了嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，除去了載脂蛋白B與載脂蛋白Al的比，并單獨(dú)保留了載脂蛋白B和載脂蛋白Al。按照以前，對(duì)建立的風(fēng)險(xiǎn)因子進(jìn)行分類，并且對(duì)這種分析的生物標(biāo)志物水平進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換，并視為連續(xù)變量。用條件邏輯回歸模型和為每ー個(gè)體計(jì)算的MI的相關(guān)概率構(gòu)建接受者工作特征(ROC)曲線，和MI發(fā)生的ニ元結(jié)果。作為評(píng)價(jià)風(fēng)險(xiǎn)模型性能改善的ROC曲線下面積的補(bǔ)充，計(jì)算綜合區(qū)別改善(integrated discriminationimprovement)或 IDI、統(tǒng)計(jì)數(shù)值或相對(duì) IDI 統(tǒng)計(jì)數(shù)值(AHA Scientific Statement,criteria for evaluation oi novel markers oi cardiovascular risk. Circulation119:2408-2416(2009);Pencina MJ, D’Agostino RB Sr,D'Agostino RB Jr, VasanRS. Evaluating the added predictive ability of a new marker:from area under theROC curve to reclassfication and beyond Stat Med Jan 30;27 (2):157-72 (2008))。IDI檢驗(yàn)測量風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測模型的性能，并且與ROC曲線下面積互補(bǔ)。相對(duì)IDI等同于發(fā)展了事件的個(gè)體的平均預(yù)測風(fēng)險(xiǎn)與未發(fā)展事件的個(gè)體的平均預(yù)測風(fēng)險(xiǎn)之間差異的改善。另外，按照如下構(gòu)建包括13種生物標(biāo)志物的對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換水平的“多標(biāo)志物評(píng)分”:多標(biāo)志物評(píng)分=(P i X生物標(biāo)志物i) + ( P 2 X生物標(biāo)志物2) + ( P i X生物標(biāo)志物i)等，其中表示與條件邏輯回歸模型中第i個(gè)生物標(biāo)志物相關(guān)的0系數(shù)的估計(jì)，所述條件邏輯回歸模型也包括9種建立的風(fēng)險(xiǎn)因子。不包括在17個(gè)基于血液的目的生物標(biāo)志物變量中的任意變量或9種建立的基線 風(fēng)險(xiǎn)因子中的任何因子中測量結(jié)果缺失的個(gè)體。因此統(tǒng)計(jì)分析的最終數(shù)據(jù)集由699個(gè)個(gè)體構(gòu)成，包括236個(gè)病例和463個(gè)匹配的對(duì)照。所有的P值都是雙尾的。概率值小于0.05，視為顯著。在95%的水平，計(jì)算所有置信區(qū)間。使用9. I版的SAS軟件(SAS Institute)和2. 6版的R軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果利用弗雷明漢心臟研究(WilsonPff, D' Agostino RB, Levy D, BelangerAM, Silbershatz H，Kannel #B. Prediction oi coronary heart disease using riskfactor cateRories. Circulation 97:1837-47 (1998))公開的性別特異性風(fēng)險(xiǎn)方程式，計(jì)算基線時(shí)全部研究群體的10年絕對(duì)風(fēng)險(xiǎn)。所有近期MI事件中只有36%發(fā)生于分類為高風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體中(表I)。換而言之，64%實(shí)際上經(jīng)歷了近期MI事件的個(gè)體未被鑒定為處于高風(fēng)險(xiǎn)中。風(fēng)險(xiǎn)因子表I顯示了研究群體的基線特征，包括在較長期研究中鑒定的ー些主要的心血管風(fēng)險(xiǎn)因子。在包含這些建立的風(fēng)險(xiǎn)因子中的9種因子的模型中，HDL膽固醇、抽煙狀況(目前抽煙)以及糖尿病的存在與近期發(fā)生MI顯著相關(guān)(表2)。在本研究中病例和対照的年齡和性別匹配，因此年齡和性別并未包括于該模型中。表I.病例和対照的基線特征
權(quán)利要求
1.診斷個(gè)體的心肌梗死風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括 測量個(gè)體的樣品中ー組生物標(biāo)志物的水平，其中所述ー組生物標(biāo)志物包括 (i)癌胚抗原和￠2微球蛋白；以及 (ii)N末端B型鈉尿肽前體、aI抗胰蛋白酶和C反應(yīng)蛋白中的至少ー種 通過使所述生物標(biāo)志物的測量水平加權(quán)，計(jì)算所述個(gè)體的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分；以及 利用所述風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分確定所述個(gè)體會(huì)經(jīng)歷心肌梗死的可能性。
2.如權(quán)利要求I所述的方法，其中所述ー組生物標(biāo)志物包括N末端B型鈉尿肽前體。
3.如權(quán)利要求I所述的方法，其中所述ー組生物標(biāo)志物包括aI抗胰蛋白酶。
4.如權(quán)利要求I所述的方法，其中所述ー組生物標(biāo)志物包括C反應(yīng)蛋白。
5.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述ー組生物標(biāo)志物包括N末端B型鈉尿肽前體。
6.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述ー組生物標(biāo)志物還包括載脂蛋白Al和載脂蛋白B0
7.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述ー組生物標(biāo)志物還包括N末端B型鈉尿肽前體、載脂蛋白Al以及載脂蛋白B。
8.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述ー組生物標(biāo)志物還包括甲胎蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述ー組生物標(biāo)志物還包括血管內(nèi)皮生長因子。
10.如權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述計(jì)算風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分的步驟包括 對(duì)所述生物標(biāo)志物的測量水平進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換，以便產(chǎn)生每ー種測量的生物標(biāo)志物的轉(zhuǎn)換值； 將所述每ー種生物標(biāo)志物的轉(zhuǎn)換值乘以生物標(biāo)志物常數(shù)，以便產(chǎn)生每ー種生物標(biāo)志物的相乘值；以及 將所述每ー種生物標(biāo)志物的相乘值求和，以便產(chǎn)生所述風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分。
11.如權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)所述的方法，包括將與所述個(gè)體的心肌梗死的可能性有關(guān)的信息傳輸、顯示、存儲(chǔ)或打印或輸出于用戶界面裝置、計(jì)算機(jī)可讀存儲(chǔ)介質(zhì)、本地計(jì)算機(jī)系統(tǒng)或遠(yuǎn)端計(jì)算機(jī)系統(tǒng)的步驟。
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其中所述信息是所述風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分或其等同項(xiàng)。
13.如權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的方法，包括如果所述個(gè)體被鑒定為心肌梗死的可能性増加，推薦、授權(quán)或?qū)嵤┲委煛?br> 14.如權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)所述的方法，包括如果所述風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分大于參照風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分，將所述個(gè)體鑒定為患有心肌梗死事件的可能性増加，并且如果所述風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分小于所述參照風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分，將所述個(gè)體鑒定為患有心肌梗死事件的可能性降低。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述參照風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分是標(biāo)準(zhǔn)或閾值。
16.如權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述計(jì)算利用合適的程控計(jì)算機(jī)進(jìn)行。
17.如權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)所述的方法，其中通過免疫測定、比色測定、濁度測定以及流式細(xì)胞術(shù)中的至少ー種，測定所述測量的生物標(biāo)志物水平。
18.如權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述樣品包括血液。
19.如權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述個(gè)體是人。
20.如權(quán)利要求1-19中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述心肌梗死風(fēng)險(xiǎn)是近期風(fēng)險(xiǎn)。
21.如權(quán)利要求1-20中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分包括所述個(gè)體年齡的加權(quán)度量。
22.如權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分包括所述個(gè)體的ー種或多種臨床風(fēng)險(xiǎn)因子的加權(quán)度量，其中所ー種或多種臨床風(fēng)險(xiǎn)因子選自抽煙狀況、糖尿病、早期心肌梗死家族史、身體質(zhì)量指數(shù)、身體活動(dòng)、非空腹總膽固醇、HDL膽固醇、LDL膽固醇以及甘油三酷。
23.診斷個(gè)體的心肌梗死風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括 測量個(gè)體的樣品中ー組生物標(biāo)志物的水平，其中所述ー組生物標(biāo)志物包括a I抗胰蛋白酶、C反應(yīng)蛋白、載脂蛋白Al、載脂蛋白B、肌酸酐、堿性磷酸酶以及轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度；通過使所述生物標(biāo)志物的測量水平加權(quán)，計(jì)算所述個(gè)體的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分；以及利用所述風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分確定所述個(gè)體會(huì)經(jīng)歷心肌梗死的可能性。
24.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述ー組生物標(biāo)志物還包括載脂蛋白E、纖維蛋白原、Y谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、補(bǔ)體C3、嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)以及淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)。
25.如權(quán)利要求23或24所述的方法，其中通過用血清鐵水平除以兩倍的轉(zhuǎn)鐵蛋白水平，計(jì)算所述轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度。
26.診斷個(gè)體的心肌梗死風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒，所述試劑盒包含 一套特異性測量個(gè)體的樣品中ー組生物標(biāo)志物的水平的試劑，其中所述ー組生物標(biāo)志物包括 a)癌胚抗原和￠2微球蛋白；以及 (ii)N末端B型鈉尿肽前體、a I抗胰蛋白酶和高敏感性C反應(yīng)蛋白中的至少ー種；以及 使用所述試劑盒診斷所個(gè)體的心肌梗死風(fēng)險(xiǎn)的說明書。
27.如權(quán)利要求26所述的試劑盒，其包含參照風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分。
28.如權(quán)利要求27所述的試劑盒，其中所述參照風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分是標(biāo)準(zhǔn)或閾值。
29.如權(quán)利要求26-28中任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中所述試劑測量蛋白水平。
全文摘要
本發(fā)明公開了通過測量個(gè)體的樣品中一組生物標(biāo)志物的水平，診斷個(gè)體的心肌梗死風(fēng)險(xiǎn)的生物標(biāo)志物和方法。通過使生物標(biāo)志物的測量水平加權(quán)，計(jì)算個(gè)體的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分。然后用風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分確定個(gè)體是否可能經(jīng)歷心肌梗死。另外，公開了包括一套用于特異性測量個(gè)體的樣品中生物標(biāo)志物水平的試劑的試劑盒。
文檔編號(hào)G01N33/50GK102812359SQ201080060373
公開日2012年12月5日 申請(qǐng)日期2010年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月13日
發(fā)明者阿拉姆·S·阿多立安, 郭昱, 李曉紅, 皮爾特·曼特恩戴姆 申請(qǐng)人:Bg醫(yī)藥公司