專利名稱：液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜同位素稀釋法同時測定蜂蜜中多類藥物殘留的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蜂蜜中多類藥物殘留的檢測方法，尤其涉及一種液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜同 位素稀釋法同時測定蜂蜜中多類藥物殘留的方法。
背景技術(shù)：
上世紀(jì)90年代，隨著全球經(jīng)濟一體化和食品貿(mào)易國際化，食品安全已成為一個全 世界關(guān)注的焦點、世界性的挑戰(zhàn)和全球重要的公共衛(wèi)生問題，其中藥物殘留問題是影響動 物性食品安全的最主要因素之一，它直接影響到人類健康和進出口貿(mào)易，對藥物殘留進行 監(jiān)控已成為當(dāng)務(wù)之急，世界各國紛紛制定相應(yīng)的法律法規(guī)來限制藥物的濫用情況。蜂蜜是我國重要的出口產(chǎn)品之一，也一直是各國對各種藥物殘留檢測的重點產(chǎn) 品。近幾年來抗生素濫用的情況日益嚴(yán)重，在蜂蜜中的檢出率也逐年增高，對我國的蜂蜜出 口造成不利影響，蜂蜜的質(zhì)量受到日本、歐盟以及美國等國家的特別關(guān)注。目前國內(nèi)外監(jiān)控蜂蜜中主要殘留藥物有磺胺類、硝基咪唑類、大環(huán)內(nèi)酯類、氯霉素 類、硝基呋喃代謝物、四環(huán)素類和氟喹諾酮類等。由于各類藥物物理化學(xué)性質(zhì)差別較大，現(xiàn) 有蜂蜜中藥物殘留分析方法一般按照化學(xué)結(jié)構(gòu)相類似的同族藥物開發(fā)，檢測方法專屬性 強、靈敏度高以滿足蜂蜜中藥物殘留限量不斷降低的要求。國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和大量文獻 已報道通過篩選法、光譜法、氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜法和液相色譜 串聯(lián)質(zhì)譜法等測定技術(shù)針對蜂蜜中各類藥物殘留的情況分類進行測定。隨著人們的食品安全意識提高，一批蜂蜜經(jīng)常需檢測許多種類的藥物殘留，因此 按照傳統(tǒng)的分析方法，需要較長的檢測周期，較多的人力和物力，檢測成本高，不能滿足目 前藥物種類不斷增加，分析通量不斷提高的需求。隨著檢測技術(shù)的快速發(fā)展，蜂蜜中的獸藥 多殘留檢測范圍目前正逐步從單一類別發(fā)展為多種不同類別獸藥的同時定性與定量分析。關(guān)于蜂蜜中多類藥物同時測定的方法有中國發(fā)明專利申請(申請?zhí)?200810195887. 9)公開了蜂產(chǎn)品中多類農(nóng)獸藥殘留同時檢測的方法，樣品加入提取液三氯 乙酸或高氯酸和提取液醋酸鹽、磷酸鹽或硼酸鹽溶液，控制PH值4. 5-9. 0 ；離心，濾液再用 固相萃取柱凈化，淋洗并抽干固相萃取柱，用草酸-甲醇溶液洗柱，洗脫液用甲醇水溶液定 容，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析測試，所得的色譜峰與各已知藥物的標(biāo)準(zhǔn)色譜峰對照，根據(jù)保 留時間和質(zhì)譜離子的豐度確定所檢出藥物的具體名稱。該方法對樣品進行一次前處理，即 可同時提取磺胺類、喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯類、林可胺類、硝基咪唑類、內(nèi)酰胺類、四環(huán)素 類、氯霉素類、磺胺增效劑類、殺蟲脒，三唑醇等11大類60多種獸藥的藥物殘留，分析效率 高，檢測成本大降低。文獻《中國衛(wèi)生檢驗雜志》2010，20，959通過乙酸銨水溶液調(diào)節(jié)ρΗ，甲醇提取，超 高液相色譜三重四級桿質(zhì)譜法快速測定蜂蜜中12種大環(huán)內(nèi)酯和林可酰胺類藥物殘留，定 量限處于 0. 3-3. Oyg/kg。((Journal of Agricultural and Food Chemistry》，2009，57，1760通過EDTA緩沖溶液提取，OASIS HLB固相萃取柱凈化，超高液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測定蜂蜜中大環(huán)內(nèi)酯 類、四環(huán)素類、喹諾酮類和磺胺類共計17種藥物，該方法測定低限為4 μ g/kg。為了保證我國蜂蜜產(chǎn)品的質(zhì)量，建立針對蜂蜜中磺胺類、硝基咪唑類、喹諾酮類、 大環(huán)內(nèi)酯類、林可酰胺類和吡喹酮共計6大類M種藥物(表1)殘留同時檢測的方法是非
常重要的。表1各類藥物的基本信息
權(quán)利要求
1.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜同位素稀釋法同時測定蜂蜜中多類藥物殘留的方法，其特征在于 該方法包括以下的步驟一、提取稱取5g試樣，精確到0. Olg,置于50mL具塞離心管中，加0. ImL同位素內(nèi)標(biāo)溶液，加 20mL磷酸鹽緩沖溶液稀釋，混勻，待凈化；二、凈化將蜂蜜稀釋溶液轉(zhuǎn)移至HLB固相萃取小柱中，棄去流出液，加20mL水淋洗，抽干，6mL甲 醇洗脫，控制流速lmL/min 2mL/min，收集洗脫液，在40°C以下水浴中減壓濃縮至近干，用 2. OmL甲醇水溶液定容，混勻，溶液過0. 22 μ m濾膜，供液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測定；三、測定①標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣品溶液在設(shè)定的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜條件下進樣，以質(zhì)量濃度X為橫 坐標(biāo)，峰面積的比值Y為縱坐標(biāo)，繪制5點標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對樣品進行定量， 樣品溶液中藥物的響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測的線性范圍內(nèi)；②在上述色譜條件下，判斷樣品中是否存在相應(yīng)的被測物，需要滿足如下條件樣品溶 液中出現(xiàn)的質(zhì)量色譜峰保留時間與混合基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液一致，允許偏差小于士2. 5%，該色 譜峰所對應(yīng)的藥物在設(shè)定的質(zhì)譜定性離子的相對豐度與濃度相當(dāng)?shù)幕旌匣|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液 的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過設(shè)定的規(guī)定，則可確定含有該藥物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜同位素稀釋法同時測定蜂蜜中多類藥物 殘留的方法，其特征在于步驟一同位素內(nèi)標(biāo)溶液的加入為磺胺類同位素內(nèi)標(biāo)8ng ；硝基咪 唑類同位素內(nèi)標(biāo)40ng ；喹諾酮類同位素內(nèi)標(biāo)30ng。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜同位素稀釋法同時測定蜂蜜中多類藥物 殘留的方法，其特征在于步驟三設(shè)定的各類藥物的母離子、子離子和碰撞能量等質(zhì)譜參數(shù) 如下號化合物離子對 (m/z)去簇 電ff (DP)/V ss I ^ ‘ 12 U碰撞室 出口電壓 (CXP)/V內(nèi)標(biāo) 化合物保留時間 /min1磺胺嘧啶251.1/156.3* 251.1/108.26522 3310磺胺嘧啶 -D44.352磺胺噻唑255.8/156.3* 255.8/108.27022 3010磺胺噻唑 -D64.903磺胺吡啶249.9/156.2* 249.9/184.4702410磺胺吡啶 -D65.294磺胺甲基嘧啶265.1/156.3* 265.1/172.26525 2310磺胺嘧啶 -D46.065磺胺二甲基嘧 啶279.2/156.3* 279.2/186.1702610磺胺二甲 基嘧啶-D47.78
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜同位素稀釋法同時測定蜂蜜中多類藥物 殘留的方法，其特征在于步驟三設(shè)定的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的儀器條件參數(shù)如下
全文摘要
本發(fā)明涉及蜂蜜中多類藥物殘留的檢測方法，尤其涉及一種液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜同位素稀釋法同時測定蜂蜜中多類藥物殘留的方法。該方法通過磷酸鹽緩沖溶液(pH=8)直接稀釋，HLB固相萃取凈化，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)測定，同位素內(nèi)標(biāo)稀釋內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法定量。測定低限磺胺類藥物1.0μg/kg，硝基咪唑類藥物1.0μg/kg，喹諾酮類藥物2.0μg/kg，大環(huán)內(nèi)酯類藥物3.0μg/kg，林可胺類藥物2.0μg/kg和吡喹酮0.3μg/kg。該方法簡便快捷，消耗資源小，檢測成本低，所提及的前處理過程、涉及藥物類別以及測定所用儀器可以與已有方法進行很好的互補，適用于蜂蜜中多類藥物的同時測定要求，可以為維護食品安全和保障我國蜂蜜順利出口提供有力的技術(shù)保障。
文檔編號G01N30/02GK102141551SQ20111002249
公開日2011年8月3日 申請日期2011年1月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月19日
發(fā)明者侯建波, 奚君陽, 王峰, 謝文, 錢艷, 陳笑梅 申請人:浙江出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心