專利名稱：地榆皂苷i的含量測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥地榆藥材及其提取物和制劑中地榆皂苷I的含量測定方法，屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
中藥地榆為薔薇科植物地榆Sanguisorba officinalis L.或長葉地榆Sanguisorba officinalis L. var. Iongifolia(Bert.)YiietLi 的干燥根。中國藥典2005版收載該品種，其中記載了鞣質(zhì)的含量測定方法，具體含量測定項(xiàng)下內(nèi)容為“取本品粉末(過四號篩)約0.4g，精密稱定，照鞣質(zhì)含量測定法(附錄X B)測定，即得。按干燥品計(jì)算，不得少于10.0%?！薄Ｖ腥A人民共和國國家藥品監(jiān)督管理局WS-11020(ZD-1020)_2002地榆升白片標(biāo)準(zhǔn)(試行)記載了地榆升白片中的沒食子酸的含量的測定方法“照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相；甲醇-乙腈-0.05mol/L磷酸溶液(5 6 89)為流動相；檢測波長為270nm。理論塔板數(shù)按沒食子酸峰計(jì)算應(yīng)不低于6000。對照品溶液的制備精密稱取沒食子酸對照品適量，加50%甲醇制成每Iml含20 y g的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取適量(約相當(dāng)于10片的重量)，精密稱定，精密加入50%甲醇25ml，稱定重量，加熱回流I小時(shí)，放冷至室溫，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5 Ul 10iU，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每片含地榆以沒食子酸(C7H5O5)計(jì)，不得少于24iig?！币陨蠘?biāo)準(zhǔn)分別公開了地榆藥材及地榆制劑——地榆升白片中鞣質(zhì)和沒食子酸的含量測定。而地榆藥材應(yīng)用廣泛、適應(yīng)癥較多，而不同的適應(yīng)癥其所發(fā)揮作用的有效成分也是不同的，特別是針對地榆在升高白細(xì)胞水平的適應(yīng)癥方面，僅通過檢測地榆制劑中的鞣質(zhì)或沒食子酸來判定制劑的是否合格是不適宜的，原因?yàn)楝F(xiàn)有研究已證明地榆皂苷是地榆發(fā)揮升高白細(xì)胞作用的活性成分，特別是地榆皂苷I，而鞣質(zhì)和沒食子酸并不起升高白細(xì)胞水平的主要作用高小平等，地榆促造血作用的有效部位篩選.中國天然藥物，2006 (2)137-140;成都地奧制藥集團(tuán)有限公司.地榆總皂苷提取物及其制備方法和用途[P].中國專利200310119248. 1，2004-11-25 ;成都地奧制藥集團(tuán)有限公司.烏索烷型三萜皂苷在制備升高白細(xì)胞和/或血小板藥物中的應(yīng)用[P].中國專利03135776. 8，20030908ZL03135776. 8，因此，通過檢測地榆制劑中地榆皂苷I的含量則更為合理，也更能反應(yīng)產(chǎn)品的質(zhì)量。然而實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有的鞣質(zhì)和/或沒食子酸含量的檢測方法并不適于地榆皂苷I的檢測。鄒盛勤等公開了地榆中的烏索酸和齊墩果酸含量的高效液相色譜測定法鄒盛勤，陳武.地榆中烏索酸和齊墩果酸含量的高效液相色譜測定，時(shí)珍國醫(yī)國藥，2006，17(8) :1373 1374；解軍波等公開了用HPLC-ELSD法四季青中3種三萜及其皂苷，包括地榆皂苷I的含量測定方法解軍波，畢志明，李萍.HPLC-ELSD法測定四季青中三萜及其皂苷的含量，雖然四季青中也含有地榆皂苷I，但是由于四季青與地榆為不同的植物，除地榆皂苷I外，二者含有的其他化學(xué)成分不同，因此適用于四季青中地榆皂苷I的含量測定方法并不適用于地榆藥材、地榆提取物或地榆制劑中地榆皂苷I的含量測定；沙明等公開了地榆皂苷類成分、黃酮類成分的HPLC指紋圖譜，其中地榆皂苷類成分的HPLC色譜條件為色譜柱Shim-pack CLC ODS 柱(6. OmmX 150mm, 5 y m),流動相:乙腈-水(30 : 70)檢測波長:206nm，流速:I. Oml/min，柱溫:25°C。沙明，張東方，孟憲生等.DNA指紋譜與HPLC指紋譜對中藥地榆質(zhì)量評價(jià)研究，中國藥學(xué)雜志，2002，37 (11) :815 818，但使用該方法出峰時(shí)間過長(20min)，分析效率較低，且不能將地榆皂苷I與其結(jié)構(gòu)相近的皂苷類成分有效的分離。以上報(bào)道的分析方法均存在出峰時(shí)間長達(dá)20min，分析效率較低，且不能將地榆皂苷I與其結(jié)構(gòu)相近的皂苷類成分有效分離的技術(shù)缺陷因此，到目前為止，國內(nèi)外尚無能夠快速、準(zhǔn)確測定地榆藥材及其提取物或制劑中地榆阜苷I含量的方法。

發(fā)明內(nèi)容
針對以上技術(shù)缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種能夠快速、準(zhǔn)確測定地榆藥材、其提取物或制劑中地榆皂苷I的含量的方法，具體地提供一種用高效液相色譜法測定地榆藥材、其提取物或制劑中地榆皂苷I的含量的方法。本發(fā)明所述方法包括I)分別取地榆皂苷I的標(biāo)準(zhǔn)品和含有地榆皂苷I的供試品溶于乙醇水溶液中，分別制成標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品溶液；2)分別取等體積的標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品溶液注入高效液相色譜儀中，然后測量標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液的峰面積并進(jìn)行計(jì)算，即得供試品中的地榆皂苷I的含量；其中，所述高效液相色譜儀的固定相為碳十八烷基鍵合硅膠；流動相為甲醇-水溶液。本發(fā)明方法中，作為優(yōu)選的實(shí)施方案，所述碳十八烷基鍵合硅膠的粒徑為< 5i!m ;進(jìn)一步優(yōu)選所述碳十八燒基鍵合娃膠的粒徑為5 ii m、4 ii m或3. 5 ii m。本發(fā)明所述流動相為甲醇-水的溶液，優(yōu)選為以體積百分比計(jì)，60% 80%甲醇的水溶液的梯度溶液、或?yàn)?0% 80%甲醇的水溶液的等度溶液。本發(fā)明方法中，當(dāng)所述流動相采用60% 80%甲醇的水溶液的梯度溶液時(shí)；優(yōu)選所述梯度溶液組成為以體積百分比計(jì)，O 17min 60%-70%甲醇的水溶液、17 25min70%- 80%甲醇的水溶液、25 35min 80%甲醇的水溶液；或O 7min 60*%—64%甲醇的水溶液、7 12min 64*%—66%甲醇的水溶液、12 17min 66%- 80%甲醇的水溶液，17 25min 80%甲醇的水溶液；或O 7min 60 — 64 甲醇的水溶液、7 15min 64 甲醇的水溶液、15 20min64%- 80%甲醇的水溶液、20 25min 80%甲醇的水溶液；或O 7min 60 — 64 甲醇的水溶液,7 12min 64 甲醇的水溶液，12 、20min64%- 80%甲醇的水溶液，20 27min 80%甲醇的水溶液；或0 7min 60%— 64%甲醇的水溶液，7 13min 64%甲醇的水溶液。作為優(yōu)選的實(shí)施方案，所述等度溶液為以體積百分比計(jì)，64%甲醇的水溶液。作為優(yōu)選的實(shí)施方案，本發(fā)明所述乙醇水溶液的濃度為以體積計(jì)50% -60%乙醇的水溶液。本發(fā)明所述地榆皂苷I的測定方法可以用于醫(yī)藥領(lǐng)域的各個(gè)方面，本發(fā)明包括但不限于地榆藥材中、地榆皂苷提取物中，以及各種藥物制劑，如片劑、膠囊、顆粒劑、注射劑等各種胃腸道或非胃腸道途徑給藥的制劑中的地榆皂苷I的含量及純度的測定。地榆皂苷I標(biāo)準(zhǔn)品可參考現(xiàn)有技術(shù)中的方法制備地榆皂苷I :曹愛民，張東方，沙明等，地榆中皂苷類化合物分離、鑒定及其含量測定.中草藥，2003，5 (34) :397 399進(jìn)行制備。
作為優(yōu)選的實(shí)施方案，所述地榆藥材中地榆阜苷I的含量測定方法包括I)供試品溶液的制備取地榆藥材，粉碎，過四號篩，約0. 4g，精密稱定，置IOOml量瓶中，加入60%乙醇的水溶液80ml，搖勻，超聲15mi n，放至室溫，定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)樣分析或離心取上清液即得；對照品溶液的制備取地榆皂苷I對照品約50mg，精密稱定，置50ml量瓶中，力口60%乙醇的水溶液溶解并定容至刻度，搖勻；分別精密量取5. OOml和25. OOml至50ml量瓶中，加60%乙醇的水溶液稀釋定容至刻度,搖勻，即制成每Iml含0. Img和0. 5mg的對照品溶液；2)含量測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液10 U 1，注入高效液相色譜儀，測定對照品溶液及供試品溶液的峰面積，將峰面積積分值及濃度分別取常用對數(shù)后，按外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算地榆皂苷I的含量；其中，高效液相色譜以碳十八烷基鍵合硅膠為固定相粒徑小于或等于5 Pm，流動相為甲醇與水體積為64% 36%的等度洗脫液或?yàn)榧状俭w積濃度為60-64%的甲醇-水溶液的梯度洗脫液，洗脫程序?yàn)? 7min 60%—64%甲醇的水溶液，7 13min 64%甲醇的水溶液流速0. 8ml/min,柱溫25°C，ELSD漂移管溫度為80°C，氣體流速2. 5L/min,不分流模式，理論塔板數(shù)按地榆皂苷I計(jì)算應(yīng)不低于4X 103。作為優(yōu)選的實(shí)施方案，所述地榆皂苷提取物中地榆皂苷I的含量測定方法包括I)供試品溶液的制備取地榆總皂苷粉末50mg，精密稱定，置IOOml量瓶中，加入60%乙醇的水溶液60ml，搖勻，超聲5min，放至室溫，定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液或離心取上清液進(jìn)樣分析；對照品溶液的制備取地榆皂苷I對照品約50mg，精密稱定，置50ml量瓶中，力口60%乙醇的水溶液溶解并定容至刻度，搖勻；分別精密量取5. OOml和25. OOml至50ml量瓶中，加60%乙醇的水溶液稀釋定容至刻度,搖勻即制成每Iml含0. Img和0. 5mg的對照品溶液；2)含量測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液10 U 1，注入高效液相色譜儀，測定對照品溶液及供試品溶液的峰面積，將峰面積積分值及濃度分別取常用對數(shù)后，按外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算地榆皂苷I的含量；其中，高效液相色譜儀用碳十八烷基鍵合硅膠為固定相粒徑小于或等于5 ym，以甲醇體積濃度為60-64%的甲醇-水混合溶劑梯度洗脫，洗脫程序?yàn)? 7min 60% — 64%甲醇的水溶液，7 13min 64%甲醇的水溶液，流速I. 2ml/min，柱溫25°C，ELSD (AlItech2000ES)漂移管溫度為100°C，氣體流速3. 5L/min,不分流模式，理論塔板數(shù)按地榆皂苷I計(jì)算應(yīng)不低于4X103。作為優(yōu)選的實(shí)施方案，所述地榆片劑中地榆皂苷I的含量測定方法包括I)供試品溶液的制備取地榆升白片20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取相當(dāng)于2mg地榆皂苷I的量，置150ml具塞錐形瓶中，準(zhǔn)確加入50 %乙醇20ml，搖勻，稱重，超聲lOmin，放至室溫，用50%乙醇的水溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心取上清液即得；對照品溶液的制備取在105°C干燥至恒重的地榆皂苷I對照品適量，加50%乙醇的水溶液溶解并定容制成每Iml含0. 05mg和0. 2mg的對照品溶液；
2)含量測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液20iU，注入液相色譜儀，測定對照品溶液及供試品溶液的峰面積，將峰面積積分值及濃度分別取常用對數(shù)后，按外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算地榆皂苷I的含量；其中，高效液相色譜儀，用粒徑小于或等于5 Pm的碳十八烷基鍵合硅膠為固定相，以甲醇-水體積比為64 36的混合溶液為等度洗脫液，或以甲醇體積濃度為60-64%的甲醇-水混合溶劑梯度洗脫，洗脫程序?yàn)镺 7min 60%^ 64%甲醇的水溶液,7 13min64%甲醇的水溶液，流速I. Oml/min，柱溫25°C，ELSD漂移管溫度為85°C，氣體流速2. 8L/min,不分流模式,理論塔板數(shù)按地榆阜苷I計(jì)算應(yīng)不低于4X 103。作為優(yōu)選的實(shí)施方案，所述地榆皂苷I的純度測定方法包括I)樣品溶液的制備取地榆皂苷I適量,加甲醇溶解并稀釋成每Iml含0. 5mg的溶液，即得；2)純度測量精密吸取樣品溶液10 U 1，注入液相色譜儀，測定，按峰面積歸一化法計(jì)算地榆皂苷I的純度；其中，所述高效液相色譜儀用碳十八烷基鍵合硅膠為固定相，粒徑小于或等于5 Pm,以甲醇體積濃度為60-64%的甲醇-水混合溶劑梯度洗脫，洗脫程序?yàn)镺 7min60%—64%甲醇的水溶液，7 12min 64 %甲醇的水溶液，12 20min 64%—80%甲醇的水溶液，20 27min 80%甲醇的水溶液，流速I. Oml/min，柱溫25 °C，ELSD (Al Itech2000ES)漂移管溫度為85°C，氣體(空氣)流速2. 8L/min，不分流模式，理論塔板數(shù)按地榆皂苷I計(jì)算應(yīng)不低于4X IO3 ；與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明為地榆藥材及其提取物或制劑中地榆皂苷I含量的測定提供了快速、準(zhǔn)確的方法，能夠?qū)⒌赜茉碥誌與其前面緊鄰的一色譜峰(結(jié)構(gòu)非常相近的同分異構(gòu)體3 P -O- a -L-吡喃阿拉伯糖-28- ^ -D吡喃葡萄糖酯_19 a -羥基-齊墩果酸)實(shí)現(xiàn)基線分離；且出峰時(shí)間短，僅為lOmin。根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用技術(shù)手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想的前提下，還可以做出其他多種形式的修改、替換和變更。


圖Ia :實(shí)施例 I 等度洗脫，(Synergi Hydro-RP C18 柱(150 X 4. 6mm, 4 ii m),乙腈-水(30 70)，流速I. Oml/min,柱溫25°C，檢測波長210nm,分析時(shí)間30min)；
圖lb:實(shí)施例 I 梯度洗脫，(Synergi Hydro-RP C18 柱(150 X 4. 6mm, 4 U m),乙腈-水梯度洗脫(洗脫程序0 20min，30%乙腈一50%乙腈；20 25min，50%乙腈—80%乙腈)，流速I. Oml/min,柱溫25°C,檢測波長210nm,分析時(shí)間30min)；圖2-1 :實(shí)施例 2 色譜柱選擇(YMC-Pack proC18 柱(150X4. 6mm，3. 5 u m)；圖2_2 :實(shí)施例 2 色譜柱選擇 Synergi Hydro-RP C18 柱(I5O X 4. 6mm, 4 U m)；
圖3-1 :實(shí)施例3地榆藥材62%甲醇水溶液等度洗脫；圖3-2 :實(shí)施例3地榆總苷62%甲醇水溶液等度洗脫；圖3-3 實(shí)施例3地榆藥材80 %甲醇水溶液等度洗脫；圖3-4 :實(shí)施例3地榆總苷80%甲醇水溶液等度洗脫；圖3-5 :實(shí)施例3地榆總苷50%甲醇水溶液等度洗脫；圖3-6 實(shí)施例3地榆藥材50 %甲醇水溶液等度洗脫；圖4-1 :實(shí)施例4乙腈-水系統(tǒng)分離地榆藥材中地榆皂苷I ;圖4-2 :實(shí)施例4甲醇-水系統(tǒng)分離地榆藥材中地榆皂苷I ;圖5-1 :實(shí)施例5藥材專屬性考察(溶劑)；圖5-2 :實(shí)施例5藥材專屬性考察(地榆皂苷I對照溶液)；圖5-3 :實(shí)施例5藥材專屬性考察(藥材提取液)；圖6-1 :實(shí)施例6地榆升白片專屬性考察(空白輔料)；圖6-2 :實(shí)施例6地榆升白片專屬性考察(地榆皂苷I對照溶液)；圖6-3:實(shí)施例6地榆升白片專屬性考察(地榆升白片樣品液)；圖7:實(shí)施例7地榆升白片中地榆皂苷I的含量均勻度測定；圖8 :實(shí)施例8地榆總苷提取物中地榆皂苷I的含量測定；圖9 實(shí)施例9地榆皂苷I對照品純度測定。
具體實(shí)施例方式以下通過實(shí)施例對本發(fā)明再做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明僅限于以下實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。實(shí)施例I高效液相色譜色譜柱、流動相和洗脫程序的選擇地榆皂苷屬于三萜皂苷，極性較大，實(shí)驗(yàn)表明其在C18色譜柱上有保留，因此選用C18分析柱。流動相的選擇地榆皂苷I系中性化合物，流動相中無需添加酸堿附加劑或離子對試劑。因此選擇甲醇-/K、乙腈-水等流動相系統(tǒng)對比篩選，在紫外檢測中乙腈-水系統(tǒng)較甲醇-水系統(tǒng)基線平直，峰形尖銳，但經(jīng)多次調(diào)整分離色譜峰仍然較甲醇-水系統(tǒng)少，且無論采用等度洗脫還是梯度洗脫地榆皂苷I前面緊鄰的雜質(zhì)峰完全無法檢出(見圖Ia和Ib)，而地榆皂苷I峰面積較甲醇-水系統(tǒng)明顯增加，而在甲醇-水系統(tǒng)中兩者能得到一定的分離(R= I. 2)，因此選擇甲醇-水系統(tǒng)。根據(jù)分離度變化趨勢，將流動相調(diào)整為梯度洗脫，詳見表I。表I流動相梯度洗脫程序
權(quán)利要求
1.一種地榆皂苷I的含量測定方法，其特征在于，所述方法包括 1)分別取地榆皂苷I的標(biāo)準(zhǔn)品和含有地榆皂苷I的供試品溶于乙醇水溶液中，分別制成標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品溶液； 2)分別取等體積的標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品溶液注入高效液相色譜儀中，然后測量標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液的峰面積并進(jìn)行計(jì)算，即得供試品中的地榆皂苷I的含量； 其中，所述高效液相色譜儀的固定相為碳十八烷基鍵合硅膠，所述碳十八烷基鍵合硅膠的粒徑為≤5μπι;流動相為甲醇-水溶液，所述甲醇一水的溶液為以體積百分比計(jì)，50-80%甲醇的水溶液的等度溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述的碳十八烷基鍵合硅膠的粒徑為5 μ m、4 μ m $ 3. 5 μ m。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述乙醇的水溶液為以體積計(jì)50%-60%乙醇的水溶液。
4.一種利用權(quán)利要求1-3任一所述的方法測量地榆藥材中地榆皂苷I的含量的方法，其特征在于，所述方法包括 1)供試品溶液的制備取地榆藥材，粉碎，過四號篩，約O.4g，精密稱定，置IOOml量瓶中，加入60%乙醇的水溶液80ml，搖勻，超聲15min，放至室溫，定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)樣分析或離心取上清液即得； 對照品溶液的制備取地榆皂苷I對照品約50mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加60%乙醇的水溶解并定容至刻度，搖勻；分別精密量取5. OOml和25. OOml至50ml量瓶中，加60%乙醇的水溶液稀釋定容至刻度，搖勻即制成每Iml含O. Img和O. 5mg的對照品溶液； 2)含量測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液10μ 1，注入高效液相色譜儀，測定對照品溶液及供試品溶液的峰面積，將峰面積積分值及濃度分別取常用對數(shù)后，按外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算地榆皂苷I的含量； 其中，高效液相色譜以碳十八烷基鍵合硅膠為固定相，粒徑小于或等于5 μ m，流動相為體積濃度為509Γ80%的甲醇水等度洗脫液或甲醇體積濃度為60-64%的甲醇水混合溶液的梯度洗脫液，洗脫程序?yàn)?T7min 60% - 64%甲醇的水溶液，7 13min 64%甲醇的水溶液，流速O. 8 ml/min，柱溫25°C，ELSD漂移管溫度為80°C，氣體流速2. 5L/min，不分流模式，理論塔板數(shù)按地榆皂苷I計(jì)算應(yīng)不低于4X 103。
5.—種利用權(quán)利要求1-3任一所述的方法測量地榆阜苷提取物中地榆阜苷I的含量的方法，其特征在于，所述方法包括 1)供試品溶液的制備取地榆總皂苷粉末50mg，精密稱定，置IOOml量瓶中，加入60%乙醇60ml，搖勻，超聲5min，放至室溫，定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液或離心取上清液進(jìn)樣分析； 對照品溶液的制備取地榆皂苷I對照品約50mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加60%乙醇的水溶液溶解并定容至刻度，搖勻；分別精密量取5. OOml和25. OOml至50ml量瓶中，加60%乙醇的水溶液稀釋定容至刻度，搖勻即制成每Iml含O. Img和O. 5mg的對照品溶液； 2)含量測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液10μ 1，注入高效液相色譜儀，測定對照品溶液及供試品溶液的峰面積，將峰面積積分值及濃度分別取常用對數(shù)后，按外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算地榆皂苷I的含量；其中，高效液相色譜儀用碳十八烷基鍵合硅膠為固定相，粒徑小于或等于5 μ m，流動相為體積濃度為509Γ80%的甲醇水等度洗脫液或以甲醇體積濃度為60-64%的甲醇-水混合溶劑梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?T7min 60% - 64%甲醇的水溶液，7 13min 64%甲醇的水溶液，流速I. 2 ml/min,柱溫25°C，ELSD漂移管溫度為100°C，氣體流速3. 5L/min,不分流模式，理論塔板數(shù)按地榆皂苷I計(jì)算應(yīng)不低于4X 103。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法包括 1)供試品溶液的制備取地榆總皂苷粉末50mg，精密稱定，置IOOml量瓶中，加入60%乙醇60ml，搖勻，超聲5min，放至室溫，定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液或離心取上清液進(jìn)樣分析； 對照品溶液的制備取地榆皂苷I對照品約50mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加60%乙醇的水溶液溶解并定容至刻度，搖勻；分別精密量取5. OOml和25. OOml至50ml量瓶中，加60%乙醇的水溶液稀釋定容至刻度，搖勻即制成每Iml含O. Img和O. 5mg的對照品溶液； 2)含量測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液10μ 1，注入高效液相色譜儀，測定對照品溶液及供試品溶液的峰面積，將峰面積積分值及濃度分別取常用對數(shù)后，按外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算地榆皂苷I的含量； 其中，高效液相色譜儀用碳十八烷基鍵合硅膠為固定相，粒徑小于或等于5μπι，以甲醇-水體積比為64 36的混合溶液為等度洗脫液，或以甲醇體積濃度為60-64%的甲醇-水混合溶劑梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?T7min 60%-64%甲醇的水溶液，7 13min 64%甲醇的水溶液，流速I. 2 ml/min,柱溫25°C，ELSD漂移管溫度為100°C，氣體流速3. 5L/min,不分流模式，理論塔板數(shù)按地榆皂苷I計(jì)算應(yīng)不低于4X 103。
7.一種利用權(quán)利要求1-3任一所述的方法測量地榆片劑中地榆皂苷I的含量的方法，其特征在于，所述方法包括 O供試品溶液的制備取地榆升白片20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取相當(dāng)于2mg地榆皂苷I的量，置150ml具塞錐形瓶中，準(zhǔn)確加入50%乙醇的水溶液20ml，搖勻，稱重，超聲lOmin，放至室溫，用50%乙醇的水溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心取上清液即得； 對照品溶液的制備取在105°C干燥至恒重的地榆皂苷I對照品適量，加50%乙醇的水溶液溶解并定容制成每Iml含O. 05mg和O. 2mg的對照品溶液； 2)含量測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液20 μ 1，注入高校液相色譜儀，測定對照品溶液及供試品溶液的峰面積，將峰面積積分值及濃度分別取常用對數(shù)后，按外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算地榆皂苷I的含量； 其中，高效液相色譜儀，用粒徑小于或等于5 μ m的碳十八烷基鍵合硅膠為固定相，流動相為體積濃度為509Γ80%的甲醇水等度洗脫液或以甲醇體積濃度為60-64%的甲醇-水混合溶劑梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?T7min 60% - 64%甲醇的水溶液，7 13min 64%甲醇的水溶液，流速I. O ml/min，柱溫25°C，ELSD漂移管溫度為85°C，空氣流速2. 8L/min，不分流模式，理論塔板數(shù)按地榆皂苷I計(jì)算應(yīng)不低于4X 103。
8.一種地榆皂苷I的純度測定方法，其特征在于，所述方法包括 1)樣品溶液的制備取地榆皂苷I適量，加甲醇溶解并稀釋成每Iml含O.5mg的溶液，即得；2)純度測量精密吸取樣品溶液10μ 1，注入液相色譜儀，測定，按峰面積歸一化法計(jì)算地榆皂苷I的純度； 其中，所述高效液相色譜儀用碳十八烷基鍵合硅膠為固定相，粒徑小于或等于5 μ m，流動相為體積濃度為509Γ80%的甲醇水等度洗脫液或甲醇體積濃度為60-64%的甲醇-水混合溶劑梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?T7min 60% - 64%甲醇的水溶液，7 12min 64%甲醇的水溶液，12 20min 64% — 80%甲醇的水溶液，2(T27min 80%甲醇的水溶液，流速I. O ml/min，柱溫25V’ ELSD漂移管溫度為85°C，氣體(空氣)流速2. 8L/min，不分流模式，理論塔板數(shù)按地榆皂苷I計(jì)算應(yīng)不低于4X 103。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法包括 1)樣品溶液的制備取地榆皂苷I適量，加甲醇溶解并稀釋成每Iml含O.5mg的溶液，即得； 2)純度測量精密吸取樣品溶液10μ 1，注入液相色譜儀，測定，按峰面積歸一化法計(jì)算地榆皂苷I的純度； 其中，所述高效液相色譜儀用碳十八烷基鍵合硅膠為固定相，粒徑小于或等于5 μ m，以甲醇-水體積比為64 36的混合溶液為等度洗脫液，或甲醇體積濃度為60-64%的甲醇-水 混合溶劑梯度洗脫，洗脫程序?yàn)?T7min 60% — 64%甲醇的水溶液，7 12min 64%甲醇的水溶液，12 20min 64% — 80%甲醇的水溶液，2(T27min 80%甲醇的水溶液，流速I. O ml/min，柱溫25V’ ELSD漂移管溫度為85°C，氣體(空氣)流速2. 8L/min，不分流模式，理論塔板數(shù)按地榆皂苷I計(jì)算應(yīng)不低于4X 103。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種地榆皂苷Ⅰ的含量測定方法，所述方法包括1)分別取地榆皂苷I的標(biāo)準(zhǔn)品和含有地榆皂苷I的供試品溶于乙醇水溶液中，分別制成標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品溶液；2)分別取等體積的標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品溶液注入高效液相色譜儀中，然后測量標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液的峰面積并進(jìn)行計(jì)算，即得供試品中的地榆皂苷I的含量。本發(fā)明為地榆藥材及其提取物或制劑中地榆皂苷Ⅰ含量的測定提供了快速、準(zhǔn)確的方法。
文檔編號G01N30/02GK102721773SQ201110030288
公開日2012年10月10日 申請日期2010年4月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月26日
發(fā)明者劉志勇, 姚華, 姬建新, 王軍, 白紅艷, 鄒文俊, 黎秀麗 申請人:成都地奧制藥集團(tuán)有限公司