專利名稱：一種通過改變化學(xué)發(fā)光方式抑制固相蛋白芯片點(diǎn)拖尾的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種通過改變化學(xué)發(fā)光方式抑制固相蛋白芯片點(diǎn)拖尾的方法。
背景技術(shù)：
蛋白芯片作為一種高通量檢測(cè)系統(tǒng)，需將蛋白質(zhì)固定在固相基質(zhì)的表面形成微陣列，最后通過特定的檢測(cè)方式來分析蛋白之間的相互作用或測(cè)定目標(biāo)分子的含量。蛋白芯片的檢測(cè)方式有放射分析、熒光分析和化學(xué)發(fā)光分析等，與前兩者相比，化學(xué)發(fā)光法隨著其底物的不斷改進(jìn)，具有如下優(yōu)勢(shì)信號(hào)強(qiáng)，靈敏度高，可以檢測(cè)飛克級(jí)的目標(biāo)分析物；穩(wěn)定性好，發(fā)光持續(xù)時(shí)間達(dá)幾個(gè)小時(shí)，有利于檢測(cè)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。無(wú)論采用何種檢測(cè)方式， 點(diǎn)形的均一性對(duì)蛋白芯片檢測(cè)的準(zhǔn)確性來說是至關(guān)重要的。點(diǎn)形的不均一主要是指點(diǎn)的中空和拖尾，前者與基質(zhì)表面的化學(xué)性質(zhì)和點(diǎn)樣緩沖液成分相關(guān)，后者除了這兩個(gè)因素，還與特定的檢測(cè)方式有關(guān)。化學(xué)發(fā)光分析中，如果發(fā)光方式不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致芯片點(diǎn)出現(xiàn)拖尾，不僅削弱本身的信號(hào)強(qiáng)度，也會(huì)對(duì)周圍點(diǎn)的信號(hào)產(chǎn)生干擾。不同檢測(cè)方式下，固相蛋白芯片中出現(xiàn)點(diǎn)拖尾的現(xiàn)象雖有報(bào)道；基質(zhì)表面的化學(xué)性質(zhì)或者點(diǎn)樣緩沖液中的成分對(duì)點(diǎn)形的影響報(bào)道也有不少，但是迄今為止未找到通過改變化學(xué)發(fā)光方式來抑制點(diǎn)拖尾的方法固相蛋白芯片的拖尾現(xiàn)象。如用化學(xué)發(fā)光分析鈣調(diào)蛋白時(shí)，出現(xiàn)信號(hào)漂白的同時(shí)，也出現(xiàn)了點(diǎn)拖尾的現(xiàn)象(參考文獻(xiàn):Schweitzer Barry ；Predki Paul ；SnyderMichael. Preteomics 2003，3，2190—2199)基質(zhì)表面的化學(xué)性質(zhì)對(duì)蛋白芯片點(diǎn)形的影響。如用聚-L-賴氨酸修飾的玻片獲得的點(diǎn)形比用凝膠修飾的玻片獲得的點(diǎn)形更加均一(參考文獻(xiàn)jeurynck-krvoss Shannon L. ；White Amanda Μ. ；Baird Cheryl L, et al. AnalBiochem. 2007，371 (1) :105-115.)點(diǎn)樣緩沖液成分對(duì)蛋白芯片點(diǎn)形的影響。如與含有甘油的點(diǎn)樣緩沖液相比，含有聚乙烯醇的點(diǎn)樣緩沖液產(chǎn)生的點(diǎn)形更規(guī)則，更均一。(參考文獻(xiàn)mi Peng ；Grainger David W. J Proteome Res. 2006,5(11) :2956-2965.)這些文獻(xiàn)報(bào)道中雖然提到了蛋白芯片點(diǎn)的拖尾現(xiàn)象以及部分影響因素，但沒有提及化學(xué)發(fā)光分析中抑制點(diǎn)拖尾的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種通過改變化學(xué)發(fā)光方式抑制固相蛋白芯片點(diǎn)拖尾的方法。作為本發(fā)明的一種通過改變化學(xué)發(fā)光方式抑制固相蛋白芯片點(diǎn)拖尾的方法，是以蛋白芯片酶免化學(xué)發(fā)光產(chǎn)生的點(diǎn)形為研究對(duì)象，在加入一層含表面活性劑的緩沖液的基礎(chǔ)上再加入化學(xué)發(fā)光底物進(jìn)行酶促反應(yīng)，然后捕獲圖像。
該方法具體包括如下步驟(1)配置含表面活性劑的Tris緩沖液，所述表面活性劑為Tween-20或 TritonX-IOO ；濃度為 0. 1% -0. 5% (M/V)；(2)將一定體積的步驟(1)所配置含表面活性劑的Tris緩沖液加到芯片基質(zhì)表面形成溶液層；(3)在步驟⑵所形成的溶液層的基礎(chǔ)上，再添加化學(xué)發(fā)光底物混合溶液；其中含表面活性劑的緩沖液與底物混合溶液的體積比為1 :3-1:9;(4)靜止進(jìn)行酶促反應(yīng)Imin后，用蛋白芯片檢測(cè)儀來捕獲圖像。所述1Tris緩沖液由0. lmol/L Tris,0. 85% (M/V)NaCl組成，以去離子水配制，用鹽酸調(diào)節(jié)PH = 7. 4 士 0.2。本發(fā)明具有如下有益效果和實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)所制蛋白芯片點(diǎn)的均一性強(qiáng)，檢測(cè)的準(zhǔn)確性高，方法成本低廉，操作簡(jiǎn)便。


圖1為本發(fā)明加入化學(xué)發(fā)光底物混合溶液之前先加入含表面活性劑的緩沖液時(shí)的蛋白芯片照片。圖2為加入化學(xué)發(fā)光底物混合溶液之前未加入含表面活性劑的緩沖液時(shí)的蛋白芯片照片。
具體實(shí)施例方式以下對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說明本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和過程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。實(shí)施例應(yīng)用本發(fā)明所述技術(shù)手段與原有技術(shù)的對(duì)比實(shí)驗(yàn)首先配置含Tween-20 的 Tris 緩沖液0. lmol/L Tris,0. 85% (M/V)NaCl，0· 2% Tween-20 (M/V)，以去離子水配制，用鹽酸調(diào)節(jié)pH = 7.4 ；待芯片經(jīng)免疫反應(yīng)、洗滌、晾干后， 分別滴加5微升上述緩沖液于以玻片為基質(zhì)的單個(gè)芯片表面(< Icm2)，輕輕晃動(dòng)使之鋪開形成溶液層；然后再分別滴加20微升按1 1(H202:魯米諾及增強(qiáng)子)混合的底物溶液，送至檢測(cè)儀內(nèi)，辣根過氧化氫酶酶促反應(yīng)Imin后獲取芯片圖片(如圖1所示)；或者在沒有緩沖液層的情況下，直接加底物混合溶液，送至檢測(cè)儀內(nèi)，酶促反應(yīng)Imin后獲取芯片圖片(如圖2所示)。經(jīng)過對(duì)比觀察可以很明顯看出，在完成免疫反應(yīng)，并經(jīng)過洗滌、晾干后的蛋白芯片固相表面直接加入化學(xué)發(fā)光底物混合溶液后，液體在固相表面擴(kuò)散的過程中由于界面張力需要一段時(shí)間，因此一部分光子會(huì)隨著液體的擴(kuò)散而擴(kuò)散，形成“彗星”似的拖尾現(xiàn)象(如圖2所示)；在加入化學(xué)發(fā)光底物混合溶液之前先加入含表面活性劑的緩沖液，形成一個(gè)溶液層，然后再加入化學(xué)發(fā)光底物混合物，由于液體在溶液中的擴(kuò)散速率與酶促反應(yīng)產(chǎn)生光子的速率相當(dāng)，因此產(chǎn)生的點(diǎn)形較為規(guī)整，即是點(diǎn)本身的形狀(如圖1所示)，證明此方法能有效抑制點(diǎn)的拖尾。以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及其等效物界定。
權(quán)利要求
1.一種通過改變化學(xué)發(fā)光方式抑制固相蛋白芯片點(diǎn)拖尾的方法，其特征在于，具體包括如下步驟(1)配置含表面活性劑的Tris緩沖液，所述表面活性劑為Tween-20或TritonX-IOO； 濃度為 0. -0. 5% (M/V)；(2)將一定體積的步驟(1)所配置含表面活性劑的Tris緩沖液加到芯片基質(zhì)表面形成溶液層；(3)在步驟( 所形成的溶液層的基礎(chǔ)上，再添加化學(xué)發(fā)光底物混合溶液；其中含表面活性劑的緩沖液與底物混合溶液的體積比為1 :3-1:9;(4)靜止進(jìn)行酶促反應(yīng)Imin后，用蛋白芯片檢測(cè)儀來捕獲圖像。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述Tris緩沖液由0.lmol/L Tris, 0. 85% (M/V)NaCl組成，以去離子水配制，用鹽酸調(diào)節(jié)pH = 7. 4士0. 2。
全文摘要
本發(fā)明公開的一種通過改變化學(xué)發(fā)光方式抑制固相蛋白芯片點(diǎn)拖尾的方法，它以固相蛋白芯片中酶免化學(xué)發(fā)光產(chǎn)生的點(diǎn)形為研究對(duì)象，在加入一層含表面活性劑的緩沖液的基礎(chǔ)上再加入化學(xué)發(fā)光底物進(jìn)行酶促反應(yīng)，然后捕獲圖像。所制蛋白芯片點(diǎn)的均一性強(qiáng)，檢測(cè)的準(zhǔn)確性高，方法成本低廉，操作簡(jiǎn)便。
文檔編號(hào)G01N21/76GK102175668SQ20111003034
公開日2011年9月7日 申請(qǐng)日期2011年1月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月28日
發(fā)明者姚涌, 徐宏科, 楊小麗, 柳飛舟, 石怡, 范文燕 申請(qǐng)人:上海銘源數(shù)康生物芯片有限公司