專利名稱：一種心可舒制劑指紋圖譜的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及以天然植物藥材原料制成的心可舒制劑HPLC指紋圖譜的構(gòu)建方法， 以及由此法所得到的心可舒制劑HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
背景技術(shù)：
心可舒制劑是由多種天然中藥材經(jīng)精工制作而成的中藥復(fù)方制劑，現(xiàn)已證明其含有多種生物活性物質(zhì)。主要成分包括丹參、葛根、三七、木香、山楂。藥理及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)心可舒制劑具有活血化瘀，行氣止痛之功能，達(dá)到增加冠脈流量，改善心肌的供血、供氧，改善左室做功，使心臟的“泵”功能加強(qiáng)而起到顯著的治療作用。冠心病心絞痛的基本病理過程是在冠狀動(dòng)脈痙攣，粥樣硬化的基礎(chǔ)上發(fā)生心肌氧代謝供需失調(diào)，供血不足，耗氧量增加是缺血性心臟病的主要因素。理想而有效的治療藥物是以增加冠狀動(dòng)脈血流量的同時(shí)又降低心肌耗氧量，在某些狀態(tài)下降低心肌耗氧尤為重要。而心可舒制劑不但具有以上治療特性，并對(duì)改善心肌的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)，增強(qiáng)心肌抗缺血能力，以及對(duì)由垂體后葉素引起的心肌缺血有明顯的保護(hù)作用。通過臨床觀察治療結(jié)果證實(shí)，心可舒制劑治療冠心病療效顯著，對(duì)冠心病心絞痛縮短療效時(shí)間，迅速緩解癥狀、病情，減輕患者痛苦和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，提高生活質(zhì)量起到其他抗冠心病心絞痛類藥物無法比擬和替代的良好作用。心可舒制劑對(duì)心血管病具有標(biāo)本兼治的獨(dú)特作用，重在治本，因此遠(yuǎn)期療效尤為突出，隨用藥持續(xù)時(shí)間的延長(zhǎng)，療效越加顯著，無明顯不良反應(yīng)。對(duì)老年慢性病，如糖尿病， 高血脂、哮喘及外周血管病變患者無禁忌。心可舒制劑比β受體阻滯劑更適宜冠心病患者長(zhǎng)期治療，克服β受體阻滯劑用藥過程中需慎重調(diào)整劑量的麻煩，所以是慢性患者長(zhǎng)期治療的新一代廣譜高效的血管類藥物。自心可舒制劑上市以來，因其治療效果好，見效快，價(jià)格便宜，受到了廣大患者的好評(píng)。隨著科技不斷創(chuàng)新和發(fā)展，發(fā)明人又對(duì)心可舒制劑做了更加深入的研究，為提高測(cè)定心可舒制劑的有效成分及其含量的準(zhǔn)確性，本發(fā)明提供一種檢測(cè)更加準(zhǔn)確、操作更加便捷、快速的心可舒制劑HPLC指紋圖譜的測(cè)定方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種心可舒制劑HPLC指紋圖譜的測(cè)定方法，通過此測(cè)定方法，可控制心可舒制劑質(zhì)量；本發(fā)明所述的心可舒制劑可以為片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑等所有口服制劑。指紋圖譜是將供試品和對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)圖譜相對(duì)照的技術(shù)，包括標(biāo)準(zhǔn)圖譜的建立和供試品實(shí)際測(cè)定技術(shù)。本發(fā)明的心可舒制劑HPLC指紋圖譜的比較測(cè)定方法如下(1)心可舒制劑供試品溶液的制備稱取本品研燥細(xì)粉(液體制劑真空干燥后研細(xì)粉)，精密稱取0. Ig置IOml量瓶中，精密加入70% (ν/ν)的甲醇5ml，密塞，稱定重量， 超聲處理20分鐘，靜置放冷，稱重，70 %甲醇補(bǔ)足減失的重量，離心lOmin，取上清液，過 0. 45 μ m濾膜，即得。(2)對(duì)照品溶液的制備精密稱取原兒茶醛、葛根素、大豆苷、大豆苷元、丹酚酸B 適量，加甲醇使溶解，精密稱取丹參素鈉適量，加30 %甲醇使溶解，分別制成對(duì)照品溶液； 原兒茶醛、葛根素、大豆苷、大豆苷元、丹酚酸B、丹參素鈉分別為原兒茶醛為21yg/ml，葛根素為79 μ g/ml，大豆苷為50 μ g/ml，大豆苷元為50 μ g/ml，丹酚酸B為130 μ g/ml，丹參素鈉為70yg/ml。(3)心可舒制劑中成分的定性定量測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μ 1，進(jìn)樣，用高效液相色譜儀測(cè)定，得到色譜圖，以對(duì)照品的色譜峰相對(duì)保留時(shí)間和峰面積為1，計(jì)算供試品的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積；以定性定量，同時(shí)比較供試品的指紋圖譜，對(duì)照品的指紋圖譜和標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；其中所述高效液相色譜儀中的色譜柱，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相乙腈磷酸水。磷酸水(％ )92 10 乙腈(％ )8 90 ；線性梯度洗脫；T(min) 0 120 ；柱溫10 50 0C ；檢測(cè)波長(zhǎng)278nm ；其中所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜用以下方法建立，取10批心可舒制劑的，分別按上述供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，根據(jù)檢測(cè)所得的10批檢測(cè)數(shù)據(jù)，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004A》進(jìn)行評(píng)價(jià)，在278nm檢測(cè)波長(zhǎng)下的相似度大于0. 9的圖譜為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；其中所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜在278nm檢測(cè)波長(zhǎng)下的指紋圖譜具有14個(gè)特征峰，其中歸屬山楂的有2個(gè)特征峰；歸屬丹參的有3個(gè)特征峰；歸屬葛根的有7個(gè)特征峰；4號(hào)峰為丹參素，5號(hào)峰為原兒茶醛，7號(hào)峰為葛根素，11號(hào)峰為大豆苷，12號(hào)峰為丹酚酸B，13號(hào)峰為大豆苷元；一般來說，標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜和對(duì)照品的指紋圖譜應(yīng)重合，該圖譜對(duì)于同一產(chǎn)品具有唯一性，可以用來判斷被測(cè)樣品中是否含有對(duì)照品成分及其含量。本發(fā)明的測(cè)定方法，采用高效液相色譜法，其色譜條件優(yōu)選為色譜柱為Phenomenex Luna C-18 (4. 6 X 250mm ；5 μ m)；Agilent Hypersil C-18 (4. 6X 250mm ；5 μ m)；Diamonsil C-18 (4. 6 X 250mm ；5 μ m)；Elite Lichrosorb Rp-18e (4.6X250mm ；5 μ m)；Merck Lichrospher Rp_18e (4. 6X 250mm ；5 μ m)柱溫30°C，流動(dòng)相A為乙腈，B為磷酸水，洗脫方式梯度洗脫，流動(dòng)相流速1.Oml/min,進(jìn)樣量10μ 1。其中，所述流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0. 05%磷酸水溶液。其中，所述梯度洗脫時(shí)間為50-100分鐘，優(yōu)選為70-80分鐘，進(jìn)一步優(yōu)選為75分鐘。優(yōu)選的，本發(fā)明的色譜條件為色譜柱:Phenomenex Luna C-18 (4. 6X 250mm ；5 μ m)，流動(dòng)相乙腈-0. 05 %磷酸水，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0. 05 %磷酸水溶液，洗脫方式梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)278nm，柱溫30°C，流速 l.Oml/min，進(jìn)樣量 10 μ 1，理論塔板數(shù)按葛根素峰計(jì)算不低于50000，與其它峰的分離度均大于1. 0，所有組分均在60min內(nèi)被檢測(cè)完。其中，梯度洗脫過程如下
權(quán)利要求
1.一種心可舒制劑指紋圖譜的測(cè)定方法，其特征包括以下步驟(1)心可舒制劑供試品溶液的制備稱取本品研燥細(xì)粉(液體制劑真空干燥后研細(xì)粉)，精密稱取0. Ig置IOml量瓶中，精密加入70% (ν/ν)的甲醇5ml，密塞，稱定重量，超聲處理20分鐘，靜置放冷，稱重，70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，離心lOmin，取上清液，過0. 45 μ m 濾膜，即得；(2)對(duì)照品溶液的制備精密稱取原兒茶醛、葛根素、大豆苷、大豆苷元、丹酚酸B適量， 加甲醇使溶解，精密稱取丹參素鈉適量，加30%甲醇使溶解，分別制成對(duì)照品溶液；原兒茶醛、葛根素、大豆苷、大豆苷元、丹酚酸B、丹參素鈉分別為原兒茶醛為21 μ g/ml，葛根素為 79 μ g/ml，大豆苷為50 μ g/ml，大豆苷元為50 μ g/ml，丹酚酸B為130 μ g/ml，丹參素鈉為 70 μ g/ml ；(3)心可舒制劑中成分的定性定量測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各 ομ 1，進(jìn)樣，用高效液相色譜儀測(cè)定，得到色譜圖，以對(duì)照品的色譜峰相對(duì)保留時(shí)間和峰面積為1，計(jì)算供試品的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積；同時(shí)比較供試品的指紋圖譜，對(duì)照品的指紋圖譜和標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；其中所述高效液相色譜儀中的色譜柱，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相 乙腈磷酸水，磷酸水(％ )92 10 乙腈(％ )8 90 ；線性梯度洗脫；T(min) 0 120 ； 柱溫10 50°C ；檢測(cè)波長(zhǎng)278nm ；其中所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜用以下方法建立，取10批心可舒制劑的，分別按上述供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，根據(jù)檢測(cè)所得的10批檢測(cè)數(shù)據(jù)，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004A》進(jìn)行評(píng)價(jià)，在278nm檢測(cè)波長(zhǎng)下的相似度大于0. 9的圖譜為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；其中所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜在278nm檢測(cè)波長(zhǎng)下的指紋圖譜具有14個(gè)特征峰，其中歸屬山楂的有2個(gè)特征峰；歸屬丹參的有3個(gè)特征峰；歸屬葛根的有7個(gè)特征峰；4號(hào)峰為丹參素， 5號(hào)峰為原兒茶醛，7號(hào)峰為葛根素，11號(hào)峰為大豆苷，12號(hào)峰為丹酚酸B，13號(hào)峰為大豆苷兀。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于，高效液相色譜法的色譜條件為色譜柱為:Phenomenex Luna C-18 柱，(250X4. 6mm, 5 μ m),柱溫30°C，流動(dòng)相A為乙腈，B為磷酸水，洗脫方式梯度洗脫，流動(dòng)相流速1.0ml/min，進(jìn)樣量10μ1。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為 0. 05%磷酸水溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述梯度洗脫時(shí)間為50-100分鐘。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述梯度洗脫時(shí)間為70-80分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述梯度洗脫過程為時(shí)間(分鐘)流動(dòng)相A流動(dòng)相B0-218 12%92% 88%21-3112% 17%88% 83%31-5517 38%83% 62%55-6538% 90%62% 10%65-7590%10%
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于，高效液相色譜法的色譜條件為 色譜柱為 Phenomenex Luna C-18 柱，Q50X4. 6mm，5 μ m)；流動(dòng)相乙腈 _0· 05%磷酸水，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0. 05 %磷酸水溶液，洗脫方式梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)278nm， 柱溫30°C，流速1. Oml/min,進(jìn)樣量10 μ 1，理論塔板數(shù)按葛根素峰計(jì)算不低于50000，與其它峰的分離度均大于1. 0，所有組分均在60min內(nèi)被檢測(cè)完， 其中，梯度洗脫過程如下時(shí)間(分鐘)流動(dòng)相A流動(dòng)相B0-218 12%92% 88%21-3112% 17%88% 83%31-5517 38%83% 62%55-6538% 90%62% 10%65-7590%10%
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于，包括以下步驟(1)制備供試品溶液，(2)制備對(duì)照品溶液，(3)取上述溶液，分別注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，得到色譜圖，(4)比較上述溶液的色譜圖，即可， 其中，步驟1)供試品溶液的制備取心可舒片粉碎至細(xì)粉約0. lg，精密稱定，置IOml量瓶中，精密加入70%甲醇5ml， 密塞，稱定重量，超聲處理20min，放冷，再稱定重量，用70 %甲醇補(bǔ)足減失的重量，離心 IOmin,取上清液，過O. 45 μ m微孔濾膜，即得， 其中，步驟2、對(duì)照品溶液的制備精密稱取原兒茶醛、葛根素、大豆苷、大豆苷元、丹酚酸B適量，加甲醇使溶解，精密稱取丹參素鈉適量，加30%甲醇使溶解，分別制成對(duì)照品溶液原兒茶醛、葛根素、大豆苷、大豆苷元、丹酚酸B、丹參素鈉分別為21 μ g/ml，葛根素為79μ g/ml，大豆苷為50μ g/ml，大豆苷元為50 μ g/ml，丹酚酸B為130 μ g/ml，丹參素鈉為70 μ g/ml， 其中，步驟幻高效液相色譜條件色譜條件色譜柱為Phenomenex Luna C-18柱Q50 X 4. 6mm, 5 μ m)；流動(dòng)相乙腈-0. 05%磷酸水，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0. 05%磷酸水溶液，洗脫方式梯度洗脫， 檢測(cè)波長(zhǎng)278nm，柱溫30°C，流速1. Oml/min，進(jìn)樣量10 μ 1，理論塔板數(shù)按葛根素峰計(jì)算不低于2000，與其它峰的分離度均大于1. 0，所有組分均在60min內(nèi)被檢測(cè)完，其中，梯度洗脫過程如下
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于，選擇75min作為圖譜的分析時(shí)間。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于，其中心可舒制劑可以為片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑等所有口服制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種藥用制劑的檢測(cè)方法，具體涉及一種中藥制劑心可舒指紋圖譜的測(cè)定方法。本發(fā)明主要采用高效液相色譜法檢測(cè)，色譜柱為PHENOMENEX LUNAC-18柱；流動(dòng)相乙腈-0.05％磷酸水，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.05％磷酸水溶液，檢測(cè)波長(zhǎng)278nm，柱溫30℃，流速1.0ml/min，進(jìn)樣量10μl，理論塔板數(shù)按葛根素峰計(jì)算不低于2000，與其它峰的分離度均大于1.0，所有組分均在60min內(nèi)被檢測(cè)完。
文檔編號(hào)G01N30/74GK102183590SQ20111003306
公開日2011年9月14日 申請(qǐng)日期2011年1月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月31日
發(fā)明者曾英姿, 王培 , 臧恒昌 申請(qǐng)人:山東沃華醫(yī)藥科技股份有限公司