專利名稱：輔酶q-10及其二電子還原體的分析方法和分析系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及輔酶Q-IO及其二電子還原體的分析方法和分析系統(tǒng)。
背景技術(shù)：
輔酶Q(輔酶Q :CoQ)是苯醌衍生物，由于廣泛存在于生物界，而被命名為泛醌。泛醌被二電子還原后的氫醌為泛醌醇。泛醌，其化合物名稱為2，3_ 二甲氧基-5-甲基-6-聚異戊二烯基-1，4-苯醌，自然界中存在異戊二烯單元為n = 1 12的多種同族體，對(duì)于人等高等動(dòng)物為η = 10。在以下的說明中，只要沒有特別事先說明，將人等的泛醌表示為輔酶Q-10，同時(shí)將人等的泛醌醇表示為輔酶Q-IO的二電子還原體。據(jù)說，輔酶Q-IO的二電子還原體具有強(qiáng)抗氧化作用，具有防老化效果，可防止由活性氧引起的細(xì)胞損傷等。對(duì)于生物體，氧化應(yīng)激是一種不好的狀態(tài)，生物體內(nèi)的氧化和抗氧化的平衡被破壞并傾向于氧化，而輔酶Q-IO及其二電子還原體的比率可以反映該氧化應(yīng)激的程度，所以認(rèn)為該比例能夠形成氧化應(yīng)激的良好標(biāo)識(shí)。這樣，由于獲知輔酶Q-IO及其二電子還原體的舉動(dòng)是非常有用的，所以尋求能準(zhǔn)確地分析這些成分的方法。作為分析方法，傳統(tǒng)的分析方法有紫外吸收法等，但是這些方法容易受到第三物質(zhì)的影響，需要繁雜的前處理。近年來，作為靈敏度高且能正確分析的方法，廣泛使用高速液體色譜法(以下表示為HPLC)。輔酶Q-IO的檢測中，利用275nm的紫外吸收。但是，以往的通過HPLC進(jìn)行分析的方法要檢測血漿中的輔酶Q-10，其靈敏度不充分。因而，提出了將輔酶Q-IO還原為二電子還原體，以還原前后的差作為輔酶Q-10， 進(jìn)行定量的方法。但是，在該分析方法中需要進(jìn)行檢體的前處理，同時(shí)，需要2次向HPLC注入試樣。因而，本申請(qǐng)人首先提出了如下方法(參照例如&itosi Yamasita and YorihiroYamamoto ANALYTICALBI0CHEMISTRY250，66-73 (1997))，如圖 1 所示，在用反相分離柱(7 > 二社生產(chǎn)的LC-8)1分離出輔酶Q-IO和其二電子還原體之后，使用還原柱(資生堂生產(chǎn)的SHISEIDO CQ) 2或者電量檢測電極將輔酶Q-IO還原為二電子還原體，再用電化學(xué)檢測器3進(jìn)行測定。另外，圖1中，參照符號(hào)4表示流動(dòng)相、參照符號(hào)5表示泵、參照符號(hào) 6表示試樣注入器、參照符號(hào)7表示保護(hù)柱、參照符號(hào)8表示紫外吸收檢測器。通過使用上述的分析方法，可以以高靈敏度同時(shí)測定輔酶Q-IO和其二電子還原體。得到的色譜圖的一例示于圖2中。圖2中“1”為輔酶Q-IO的波峰，“2”為輔酶Q-IO的二電子還原體的波峰。此時(shí)，由于檢體中的水溶性抗氧化物質(zhì)例如維生素C和尿酸等影響測定，因而要進(jìn)行前處理，用甲醇/己烷對(duì)檢體進(jìn)行萃取處理，使水溶性抗氧化物質(zhì)分配在甲醇相中，使輔酶Q-IO等分配在己烷中。但是，對(duì)于上述用甲醇/己烷進(jìn)行萃取處理的前處理方法，己烷萃取液中的輔酶 Q-IO化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，前處理后在將處理液注入HPLC進(jìn)行分析之前的這段期間，如圖3所示有相當(dāng)比例的輔酶Q-IO的二電子還原體被氧化，因而檢體萃取后需要快速進(jìn)行分析。由于需要在剛要注入HPLC之前進(jìn)行萃取操作以便正確進(jìn)行分析，所以一起處理大量的檢體是極困難的。另外，圖3中各溫度表示己烷萃取液的保管溫度。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明總的目的是提供可以解決上述現(xiàn)有技術(shù)的問題的輔酶Q-IO及其二電子還原體的分析方法和分析系統(tǒng)。本發(fā)明的更具體的目的是實(shí)現(xiàn)可以正確地對(duì)檢體中的輔酶Q-IO及其二電子還原體的含量進(jìn)行定量的分析方法和分析系統(tǒng)。為了實(shí)現(xiàn)該目的，本申請(qǐng)人進(jìn)行了刻苦研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用異丙醇代替甲醇/己烷作為前處理中使用的萃取溶劑是更加適宜的，基于該認(rèn)識(shí)完成以下發(fā)明。本發(fā)明涉及的輔酶Q-IO及其二電子還原體的分析方法，其特征在于，檢體含有該輔酶Q-IO及其二電子還原體的至少之一，作為前處理，用水溶性有機(jī)溶劑萃取該檢體，并將萃取液作為分析試樣進(jìn)行分析。此處，如前所述，輔酶Q-IO是指泛醌，輔酶Q-IO的二電子還原體是指泛醌醇。水溶性有機(jī)溶劑優(yōu)選異丙醇，但是并不限于此，可以使用具有和異丙醇同等極性的溶劑，可以使用例如通過混合甲醇、乙醇、丁醇和正丙醇而調(diào)整了極性的混合溶劑等。另外，對(duì)前處理后的分析試樣進(jìn)行分析的方法，并不限于以下所說明的本發(fā)明的分析方法，也可以采用上述以往的分析方法等適宜的方法。根據(jù)本發(fā)明的上述構(gòu)成，通過抑制在分析之前這段期間分析試樣的的成分的變化，可以正確地進(jìn)行分析。并且，不需要在萃取檢體后立刻進(jìn)行分析。此時(shí)，在分析上述萃取液之前這段期間，如果在該萃取液的熔點(diǎn)至室溫范圍內(nèi)的溫度、更優(yōu)選在4°C前后的溫度保管該萃取液，則可以更確實(shí)地抑制成分的變化，所以是優(yōu)選的。此處，萃取液的熔點(diǎn)和用于萃取的水溶性有機(jī)溶劑的熔點(diǎn)實(shí)質(zhì)上相同。此時(shí)，如果通過柱切換法濃縮該分析試樣(萃取液)進(jìn)行預(yù)處理，則即使在分析試樣中輔酶Q-IO及其二電子還原體的濃度低的情況下，也可以正確地且以高靈敏度進(jìn)行分析，所以是優(yōu)選的。此時(shí)，如果將由含有該輔酶Q-IO及其二電子還原體兩者的檢體得到的萃取液作為分析試樣，柱分離該輔酶Q-IO及其二電子還原體，進(jìn)而進(jìn)行還原處理，然后通過檢測器進(jìn)行檢測，則不需要像以往那樣向HPLC中2次注入分析試樣，可以有效地進(jìn)行分析，所以是優(yōu)選的。另外，為了適宜地實(shí)現(xiàn)上述本發(fā)明的分析方法，本發(fā)明涉及的輔酶Q-IO及其二電子還原體的分析系統(tǒng)是在輔酶Q-IO及其二電子還原體的分析方法中使用的分析系統(tǒng)，其特征在于，其具有輸液機(jī)構(gòu)，其包括同時(shí)輸送第1流動(dòng)相和分析試樣的第1系列以及僅輸送第2流動(dòng)相的第2系列；切換機(jī)構(gòu)，其對(duì)該輸液機(jī)構(gòu)2個(gè)系列的流動(dòng)相的輸液路徑進(jìn)行切換；濃縮柱，其在接受該第1系列的流動(dòng)相并濃縮該分析試樣后，接受該第2流動(dòng)相；分離柱，其接受從該濃縮柱送出的液體并進(jìn)行分離；還原柱，其接受從該分離柱送出的液體并進(jìn)行還原；電化學(xué)檢測器，其對(duì)從該還原柱送出的液體進(jìn)行檢測處理。此時(shí)，如果還具有紫外吸收檢測器作為檢測器，則可以同時(shí)分析檢體中的膽固醇等用電化學(xué)檢測不能以高靈敏度檢出的成分，所以是優(yōu)選的。


本發(fā)明的其他目的、特征及優(yōu)點(diǎn)，在參照附圖的同時(shí)閱讀以下的詳細(xì)說明會(huì)更清林疋。圖1是表示輔酶Q-IO及其二電子還原體的以往分析系統(tǒng)的簡要構(gòu)成的圖；圖2是用圖1的分析系統(tǒng)得到的色譜圖的一例；圖3A是針對(duì)輔酶Q-IO的二電子還原體，表示保管圖1分析系統(tǒng)的供試試樣時(shí)成分隨時(shí)間變化的曲線圖；圖:3B是針對(duì)輔酶Q-10，表示保管圖1分析系統(tǒng)的供試試樣時(shí)成分隨時(shí)間變化的曲線圖；圖4是用于說明輔酶Q-IO及其二電子還原體的分析方法中的前處理工序的圖；圖5A是針對(duì)輔酶Q-IO及其二電子還原體的量，表示本實(shí)施例涉及的分析方法中對(duì)前處理后的萃取液進(jìn)行保管時(shí)成分隨時(shí)間變化的曲線圖；圖5B是針對(duì)輔酶Q-IO的摩爾分率，表示本實(shí)施例涉及的分析方法中對(duì)前處理后的萃取液保管時(shí)成分隨時(shí)間變化的曲線圖；圖6是表示輔酶Q-IO及其二電子還原體的分析系統(tǒng)的簡要構(gòu)成圖；圖7是作為檢體使用血漿時(shí)用圖6的分析系統(tǒng)得到的光譜圖的一例；圖8是作為檢體使用唾液時(shí)用圖6的分析系統(tǒng)得到的光譜圖的一例。
具體實(shí)施例方式接著，針對(duì)本發(fā)明涉及的輔酶Q-IO及其二電子還原體的分析方法和分析系統(tǒng)的優(yōu)選的實(shí)施方式(以下稱為方式例)參照附圖進(jìn)行說明。在以下說明的第1方式例中，使用人的血漿作為含有輔酶Q-IO及其二電子還原體的檢體。另外，在第2方式例中，使用人的唾液作為含有輔酶Q-IO及其二電子還原體的檢體。首先，針對(duì)第1方式例涉及的輔酶Q-IO及其二電子還原體的分析方法中的前處理，參照?qǐng)D4進(jìn)行說明。取50 μ 1作為檢體的人的血漿(圖4中、S-1)，向其中加入950 μ 1異丙醇(圖4 中、S-2)，并使其充分混合。接著，在離心機(jī)中于4°C的溫度下、以12000rpm的旋轉(zhuǎn)速度處理3分鐘。由此，輔酶Q-IO及其二電子還原體被從檢體萃取到異丙醇相(圖4中、S-3)。隨后，萃取輔酶Q-IO等而得到的萃取液，通過在4°C前后的溫度進(jìn)行保管(圖4中、S-4)，如圖5所示即使在至少11小時(shí)后輔酶Q-IO的二電子還原體也幾乎沒有受到氧化，可以防止保管中的分析試樣的變質(zhì)。另外，圖5(b)中縱軸的輔酶Q-IO表示輔酶Q-IO 在輔酶Q-IO及其二電子還原體的總量中所占的比率(摩爾比)。根據(jù)以上說明的本實(shí)施方式涉及的第1方式例的前處理方法，能夠在長期穩(wěn)定的狀態(tài)保管從檢體中萃取輔酶Q-IO及其二電子還原體而得到的分析試樣。并且，通過以該萃取液作為分析試樣，可以正確地進(jìn)行分析。另外，正因?yàn)槿绱?，例如通過以萃取液作為分析試樣放置到溫度控制在4°C的自動(dòng)取樣器中，可以連續(xù)自動(dòng)處理大量的檢體。另外，4°C這樣的溫度是以生物體試樣作為檢體時(shí)通常的處理溫度，通過將生物體試樣保持在該溫度，也可以避免其他成分變質(zhì)。如果在遠(yuǎn)超過該溫度的溫度處理生物體試樣，則不能避免以輔酶Q-IO的二電子還原體為代表的成分的變質(zhì)，另一方面，冷凍保管生物體試樣時(shí)，在分析時(shí)需要解凍生物體試樣的工序，并且，也不能容易地實(shí)現(xiàn)應(yīng)用了上述自動(dòng)取樣器等的連續(xù)自動(dòng)處理。但是，本發(fā)明中所說的4°C前后這樣的溫度的意思是，只要該溫度可以進(jìn)行上述的生物體試樣的處理，該溫度包括高于4°C的溫度和低于4°C的溫度兩種情況。即，萃取液的保管溫度可以是萃取用的水溶性有機(jī)溶劑的熔點(diǎn)至常溫的范圍的溫度。在第1方式例中，由于作為萃取用的水溶性有機(jī)溶劑使用異丙醇，因而保管溫度的下限值為異丙醇的熔 ；89. 5 O 。接下來，針對(duì)以實(shí)施了上述前處理、保管了所需時(shí)間后的萃取液作為分析試樣并用HPLC進(jìn)行分析的方法，如下進(jìn)行說明。首先，參照?qǐng)D6針對(duì)本實(shí)施方式涉及的分析方法中所使用的分析系統(tǒng)進(jìn)行說明。 本實(shí)施方式涉及的分析系統(tǒng)10具有輸液機(jī)構(gòu)12、切換機(jī)構(gòu)14、濃縮柱16、分離柱18、還原柱20、電化學(xué)檢測器22和紫外吸收檢測器24。輸液機(jī)構(gòu)12由第1和第2兩個(gè)系列構(gòu)成，各系列分別具有流動(dòng)相的貯留容器25a， 25b、輸送貯留容器25a，2 內(nèi)的流動(dòng)相的泵^a J6b。在第1系列中還具有試樣注入器觀。在第1系列的貯留容器25a中貯留含有50mM高氯酸鈉的甲醇和水的混合溶液 (95%甲醇水溶液)作為流動(dòng)相。另一方面，在第2系列的貯留容器25b中貯留含有50mM 高氯酸鈉的甲醇和異丙醇的混合溶液(90%甲醇溶液)作為流動(dòng)相。泵26a，26b均可以使用例如資生堂生產(chǎn)的惰性(4 f 一卜)泵3001。該惰性泵 3001是通過脈沖電動(dòng)機(jī)控制的定流量、定壓方式的雙活塞泵，流量為1 μ 1/min 3000 μ 1/ min、輸出壓力上限為!35MPa。在第1系列中設(shè)置的試樣注入器28是用于使第1系列的流動(dòng)相同時(shí)攜帶分析試樣的裝置，其可以使用適宜的裝置，但是優(yōu)選使用自動(dòng)取樣器。在使用自動(dòng)取樣器作為試樣注入器觀時(shí)，可以使用例如資生堂生產(chǎn)的自動(dòng)取樣器3023。對(duì)于自動(dòng)取樣器3023，其試樣注入量為0. 1μ 1 400μ 1 (可以0. 1μ 1單位進(jìn)行控制)、試樣處理數(shù)為100 200個(gè)，通過電子冷卻可以將溫度控制在4°C 20°C的范圍內(nèi)。切換機(jī)構(gòu)14是用于切換輸液機(jī)構(gòu)12的2個(gè)系列的流動(dòng)相的輸液路徑的裝置。圖 6中處于箭頭Al的模式(以下稱為模式Al)下，第1系列的流動(dòng)相被輸送到濃縮柱16，并且從濃縮柱16送出的已除去輔酶Q-IO等的液體被排出。另一方面，第2系列的流動(dòng)相繞過濃縮柱16直接被輸送到分離柱18。與之相對(duì)，處于箭頭A2的模式(以下稱為模式A2)下，第1系列的流動(dòng)相被排出體系外不再向濃縮柱 16輸液，同時(shí)，第2系列的流動(dòng)相被輸送到濃縮柱16，并且攜帶了被濃縮的分析試樣的液體 (以第2流動(dòng)相為主體的液體)從濃縮柱16被輸送到分離柱18。這樣，被濃縮的分析試樣伴隨著第2系列的流動(dòng)相同時(shí)被輸送到分離柱18。切換機(jī)構(gòu)14例如由切換閥構(gòu)成，作為這樣的切換閥，可以使用例如資生堂生產(chǎn)的高壓切換六方閥3011。高壓切換六方閥3011為SUS6 口 2位閥，耐壓為35MPa。另外，以該切換機(jī)構(gòu)14中使用的配管為代表，在分析系統(tǒng)10中使用的配管的連接關(guān)系由圖6可清楚獲知，并且，為了防止吸附輔酶Q-IO及其二電子還原體，對(duì)于配管材料使用SUS。如已經(jīng)說明的，濃縮柱16是利用例如填充劑的吸附作用等，用于濃縮分析試樣的裝置，可以使用例如^《> 二社生產(chǎn)的LC-8。分離柱18是用于分離從濃縮柱16輸出的液體的裝置，可以使用例如7《> -社生產(chǎn)的LC-8。還原柱20是用于還原從分離柱輸出的液體的裝置，具體來說，其是以將分析試樣中的輔酶Q-IO轉(zhuǎn)換成其二電子還原體為目的的柱。還原柱20例如可以使用資生堂生產(chǎn)的 SHISEIDO CQ0電化學(xué)檢測器22是可以以電化學(xué)方式、高靈敏度地進(jìn)行檢測并用于分析輔酶 Q-IO的二電子還原體的裝置，可以使用例如資生堂生產(chǎn)的電化學(xué)檢測器3005。電化學(xué)檢測器3005是三極恒電位電解裝置的方式，能夠以IOmV單位在士 1990mV的范圍內(nèi)數(shù)字設(shè)定加電壓。紫外吸收檢測器M是用于根據(jù)需要分析在作為分析試樣的血漿中所包含的膽固醇等紫外線吸收靈敏度高的成分的裝置。紫外線吸收檢測器M可以使用例如資生堂生產(chǎn)的UV-VIS檢測器3002。UV-VIS檢測器3002是雙束單一單元方式，波長范圍是195nm 700nm。接著，對(duì)第1方式例所涉及的分析方法進(jìn)行說明，該第1方式例使用了以上說明的本實(shí)施方式涉及的分析系統(tǒng)10。準(zhǔn)備40 μ 1上述的前處理后的萃取液作為分析試樣。在該40 μ 1分析試樣中含有 20 μ 1的人的血漿。首先，使切換機(jī)構(gòu)14處于模式Α2，用泵26b使貯留在貯留容器25b中的第2系列的流動(dòng)相(90%甲醇溶液)流入濃縮柱16、分離柱18和還原柱20，使各柱穩(wěn)定化。此時(shí)，根據(jù)需要也可以用模式Al向分離柱18和還原柱20輸液。該柱的穩(wěn)定化操作基本上進(jìn)行1次就可以，隨后，即使依次分析多個(gè)分析試樣時(shí)也不需要每次都重復(fù)上述穩(wěn)定化操作。但是，在柱切換法中，切換機(jī)構(gòu)14的切換前后可以穩(wěn)定地向各柱輸送第2系列的流動(dòng)相，從而以更穩(wěn)定的狀態(tài)進(jìn)行處理。接著，用泵26a將貯留在貯留容器25a中的第1系列的流動(dòng)相(95%甲醇水溶液) 輸送至濃縮柱16，在途中要通過試樣注入器觀使其同時(shí)攜帶上述的分析試樣。此時(shí)的流速為400μ1/π η，泵輸出壓力為IMPa。分析試樣中的輔酶Q-IO及其二電子還原體等主要成分保留在濃縮柱16中。其他的液體排出到體系外。接著，向保留有上述主要成分的濃縮柱16中，用泵^b向濃縮柱16輸送貯留在貯留容器25b中的第2系列的流動(dòng)相(90%甲醇溶液)。此時(shí)的流速為800μ1/π η，泵輸出壓力為 10. IMPa0另外，這些操作如上所述那樣通過切換機(jī)構(gòu)14進(jìn)行。在此，使用自動(dòng)取樣器作為試樣注入器觀，對(duì)保持在4°C的溫度的分析試樣連續(xù)地進(jìn)行自動(dòng)處理時(shí)，在沒有向分離柱18以后的柱輸送被濃縮的分析試樣的期間，更為優(yōu)選始終通過切換機(jī)構(gòu)14向分離柱18以后的柱輸送第2系列的流動(dòng)相。此時(shí)的流速為800 μ 1/ min，泵輸出壓力為7. 6MPa。由此，同時(shí)攜帶有主要成分被濃縮的分析試樣的液體依次被輸送到分離柱18、還原柱20，以輔酶Q-IO及其二電子還原體為主體(分析對(duì)象成分)的分析試樣中的主要成分被分離，進(jìn)而以輔酶Q-IO為主的可被還原的成分被還原。在還原柱20中被處理的液體依次被輸送到電化學(xué)檢測器22和紫外吸收檢測器對(duì)，進(jìn)行檢測處理。圖7中表示使用人的血漿作為檢體通過電化學(xué)檢測器22得到的光譜圖的一例。電化學(xué)檢測器22的設(shè)定加電壓為600mV。圖7中箭頭Ia表示輔酶Q-IO的二電子還原體(泛醌醇)的波峰，箭頭加表示輔酶Q-IO (泛醌)的波峰。接著，針對(duì)第2方式例涉及的輔酶Q-IO及其二電子還原體的分析方法中的前處理進(jìn)行說明。由于和上述的第1方式例僅檢體不同(第1方式例中為人的血漿)，因而和第1 方式例的說明同樣地使用圖4進(jìn)行說明。首先，取40 μ 1作為檢體的人的唾液(圖4中、S-1)，向其中加入950 μ 1異丙醇 (圖4中、S-2)，并使其充分混合。接著，在離心機(jī)中于4°C的溫度下、以12000rpm的旋轉(zhuǎn)速度處理3分鐘。由此，輔酶Q-IO及其二電子還原體被從檢體萃取到異丙醇相(圖4中、 S-3)。隨后，在4°C前后的溫度保管通過萃取輔酶Q-IO等而得到的萃取液(圖4中、 S-4)。在該第2方式例中也和第1方式例同樣可以防止保管中的分析試樣的變質(zhì)。因而， 通過本實(shí)施方式涉及的第2方式例，也能夠以長期穩(wěn)定的狀態(tài)保管從檢體中萃取輔酶Q-IO 及其二電子還原體而得到的分析試樣。并且，通過以該萃取液作為分析試樣，可以正確地進(jìn)行分析。另外，對(duì)于其他條件等，由于和先前說明的第1方式例同樣，因而省略其說明。接下來，針對(duì)以實(shí)施了上述前處理、保管了所需時(shí)間后的萃取液作為分析試樣并用HPLC進(jìn)行分析的方法，如下進(jìn)行說明。本實(shí)施方式涉及的第2方式例中的分析方法也基本上和上述的第1方式例中的分析方法相同。因而，針對(duì)第2方式例中的分析方法簡要地進(jìn)行說明。另外，用于分析的HPLC和分析系統(tǒng)由于直接使用先前通過圖6所說明的HPLC 和分析系統(tǒng)，因而省略其說明。準(zhǔn)備40 μ 1上述的前處理后的萃取液作為分析試樣。在該40 μ 1分析試樣中含有 20 μ 1的人的唾液。首先，使切換機(jī)構(gòu)14處于模式Α2，用泵26b使貯留在貯留容器25b中的第2系列的流動(dòng)相(90%甲醇溶液)流入濃縮柱16、分離柱18和還原柱20，使各柱穩(wěn)定化。此時(shí)，作為濃縮柱16可以使用直徑2. OmmX長度35mm的Capcel Pack C18 AQ S5(商品名)。并且，作為分離柱18可以使用直徑2. OmmX長度250mm的Capcel Pack C18 AQS5(商品名)。 進(jìn)而，作為還原柱20可以使用直徑2. OmmX長度20mm的SHISEID0CQ(商品名)。接著，用泵26a將貯留在貯留容器25a中的第1系列的流動(dòng)相(95%甲醇水溶液)輸送至濃縮柱16，在途中要通過試樣注入器觀使其同時(shí)攜帶上述的分析試樣。此時(shí)的流速例如為200μ Ι/min。分析試樣中的輔酶Q-IO及其二電子還原體等主要成分保留在濃縮柱 16中。其他的液體排出到體系外。接著，向保留有上述主要成分的濃縮柱16中，用泵^b向濃縮柱16輸送貯留在貯留容器25b中的第2系列的流動(dòng)相(90%甲醇溶液)。在此，使用自動(dòng)取樣器作為試樣注入器觀連續(xù)地向分離柱18供給保持在4°C的分析試樣。由此，同時(shí)攜帶有主要成分被濃縮的分析試樣的液體依次被輸送到分離柱18、還原柱20，以輔酶Q-IO及其二電子還原體為主體(分析對(duì)象成分)的分析試樣中的主要成分被分離，進(jìn)而以輔酶Q-IO為主的可被還原的成分被還原。此時(shí)的流速例如為400μ 1/min。 在還原柱20中被處理的液體依次被輸送到電化學(xué)檢測器22和紫外吸收檢測器M，進(jìn)行檢測處理。圖8中表示使用人的唾液作為檢體通過電化學(xué)檢測器22得到的光譜圖的一例。圖 8中箭頭3a表示輔酶Q-IO的波峰。根據(jù)以上說明的第1和第2方式例涉及的輔酶Q-IO及其二電子還原體的分析方法和分析系統(tǒng)，由于以從檢體中萃取輔酶Q-IO及其二電子還原體而得到的萃取液作為分析試樣，并對(duì)該分析試樣濃縮后的物質(zhì)進(jìn)行分析，因而可以以高靈敏度正確地進(jìn)行分析。并且，根據(jù)第1和第2方式例涉及的輔酶Q-IO及其二電子還原體的分析方法和分析系統(tǒng)，由于對(duì)輔酶Q-IO及其二電子還原體同時(shí)進(jìn)行分析，而且理想地是連續(xù)且自動(dòng)地處理大量的檢體，因而可以有效地進(jìn)行分析。進(jìn)而，根據(jù)第2方式例涉及的輔酶Q-IO及其二電子還原體的分析方法和分析系統(tǒng)，使用唾液作為檢體。由于唾液的采取和血液(血漿)的采取不同，是非侵襲式的，因而可以自己采取，可以容易地檢測出體內(nèi)輔酶Q-IO及其二電子還原體的量。如上所述，根據(jù)本發(fā)明涉及的輔酶Q-IO及其二電子還原體的分析方法，由于用水溶性有機(jī)溶劑萃取含有輔酶Q-IO及其二電子還原體的至少之一的檢體作為前處理，并將萃取液作為分析試樣進(jìn)行分析，因而可以正確地進(jìn)行分析。并且，不需要在采取了檢體后立刻進(jìn)行分析。根據(jù)本發(fā)明涉及的輔酶Q-IO及其二電子還原體的分析方法，由于通過柱切換法濃縮分析試樣，進(jìn)行預(yù)處理，因而即使分析試樣的輔酶Q-IO及其二電子還原體的濃度低的情況下，也可以正確且高靈敏度地進(jìn)行分析。根據(jù)本發(fā)明涉及的輔酶Q-IO及其二電子還原體的分析方法，由于將由含有該輔酶Q-IO及其二電子還原體兩者的檢體得到的萃取液作為分析試樣，柱分離該輔酶Q-IO及其二電子還原體，進(jìn)而進(jìn)行還原處理，然后通過檢測器進(jìn)行檢測，因而可以有效地進(jìn)行分析。另外，根據(jù)本發(fā)明涉及的輔酶Q-IO及其二電子還原體的分析系統(tǒng)，由于其具有 輸液機(jī)構(gòu)，其包括同時(shí)輸送第1流動(dòng)相和分析試樣的第1系列以及僅輸送第2流動(dòng)相的第 2系列；切換機(jī)構(gòu)，其對(duì)輸液機(jī)構(gòu)2個(gè)系列的流動(dòng)相的輸液路徑進(jìn)行切換；濃縮柱，其在接受第1系列的流動(dòng)相并濃縮分析試樣后，接受第2流動(dòng)相；分離柱，其接受從濃縮柱送出的液體并進(jìn)行分離；還原柱，其接受從分離柱送出的液體并進(jìn)行還原；電化學(xué)檢測器，其對(duì)從還原柱送出的液體進(jìn)行檢測處理。因而可以適宜地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的分析方法。
權(quán)利要求
1.使用分析裝置對(duì)包含在檢體中的輔酶Q-IO及其二電子還原體進(jìn)行定量的分析方法，其特征在于，作為前處理，將含有該輔酶Q-IO及其二電子還原體兩者的檢體用水溶性有機(jī)溶劑萃取，并將萃取液作為分析試樣進(jìn)行分析，其中，所述水溶性有機(jī)溶劑是異丙醇， 在分析所述萃取液之前的這段期間，在4°C前后的溫度保管該萃取液， 所述分析裝置是對(duì)輔酶Q-IO及其二電子還原體進(jìn)行分析的分析裝置，其具有 輸液機(jī)構(gòu)，其包括同時(shí)輸送第1流動(dòng)相和分析試樣的第1系列以及僅輸送第2流動(dòng)相的第2系列，所述第1流動(dòng)相是含有甲醇及水的溶液，所述第2流動(dòng)相是含有甲醇及異丙醇的溶液；切換機(jī)構(gòu)，其對(duì)所述輸液機(jī)構(gòu)輸送的2個(gè)系列的流動(dòng)相的輸液路徑進(jìn)行切換； 濃縮柱，其在接受第1系列的流動(dòng)相并濃縮該分析試樣后，接受第2流動(dòng)相； 分離柱，其接受從所述濃縮柱送出的液體并進(jìn)行分離； 還原柱，其接受從所述分離柱送出的液體并進(jìn)行還原； 電化學(xué)檢測器，其對(duì)從所述還原柱送出的液體進(jìn)行檢測處理； 并且還具有SUS的配管。
2.如權(quán)利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述分析裝置作為檢測器還有紫外吸收檢測器。
全文摘要
本發(fā)明涉及可以正確地對(duì)檢體中的輔酶Q-10及其二電子還原體的含量進(jìn)行分析的分析方法和分析系統(tǒng)。作為前處理，將作為檢體的人的血漿和異丙醇混合，使輔酶Q-10及其二電子還原體萃取到異丙醇中。分析之前的這段期間在4℃的溫度保管萃取液。將萃取液作為分析試樣，用具有輸液機(jī)構(gòu)、切換機(jī)構(gòu)、濃縮柱、分離柱、還原柱、紫外吸收檢測器和電化學(xué)檢測器的分析系統(tǒng)進(jìn)行分析。
文檔編號(hào)G01N30/64GK102183598SQ201110038298
公開日2011年9月14日 申請(qǐng)日期2003年12月3日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月3日
發(fā)明者三田真史, 山本順寬 申請(qǐng)人:株式會(huì)社資生堂