專利名稱：一種洋水仙根尖染色體制片的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種洋水仙根尖染色體制片的方法。
背景技術(shù)：
洋水仙又名荷蘭水仙，是從歐洲引入我國的水仙新品種的統(tǒng)稱，為石蒜科水仙屬多年生草本植物。全世界約有40個原種，多數(shù)原產(chǎn)于地中海沿岸及歐洲中部。其花朵碩大， 花莖挺拔，副花冠多變，花色和諧，是世界著名的球根花卉，在世界各地廣泛栽培和應用。染色體是基因的載體，染色體的數(shù)目、形態(tài)和結(jié)構(gòu)，決定著細胞減數(shù)分裂中染色體的配對行為；配對行為的正常與否，決定著植物大小孢子育性的高低。因此，染色體的結(jié)構(gòu)和行為支配著植物的生殖過程和繁育行為，研究染色體的數(shù)目、結(jié)構(gòu)以及細胞學行為，對于了解植物的遺傳背景，進而進行有選擇的雜交育種具有重要的意義。然而，水仙倍性復雜，染色體基數(shù)有7、10、11不等，除二倍體外，還有三倍體和四倍體等。水仙屬染色體數(shù)目變化范圍極大，2η從14-46均有存在，此外還有三倍體和非整倍體等的存在，有的水仙品種可育，有的則表現(xiàn)為高度不育。綜上可見，如果能找到洋水仙根尖染色體制片的最佳技術(shù)方法，對于其細胞遺傳學的理論研究及育種實踐具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，找到一種操作簡單方便的洋水仙根尖染色體的制片方法，使獲得的染色體分散均勻，背景淺，易于觀察。得出的染色體數(shù)目準確度高。本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下Α.取材上午9-10時取生長旺盛的盆栽洋水仙白色新根1-1. 5cm。B.低溫預處理將取下的根尖清洗干凈，放入濃度為lg/L的秋水仙堿溶液中，在 0-5 °C冷藏條件下預處理4h。C.固定將預處理后的新根用蒸餾水漂洗3次，吸干水分，卡諾氏固定液(無水乙醇冰醋酸=3 1)固定20h。D.解離將固定后的新根用蒸餾水漂洗3次，吸干水分，在lmol/L鹽酸60°C水浴中解離lOmin，用加入2-3滴lmol/L氫氧化鈉(NaOH)的500ml蒸餾水漂洗3次。E.染色將解離后的根尖置于載玻片上，取根尖前端1. 5_2mm呈現(xiàn)出乳白色的根尖，用解剖刀將取下的根尖沿縱向切割成兩部分，用吸水紙吸干根尖周圍的水分，滴入1-2 滴卡寶品紅染色劑，染色lOmin，然后用蒸餾水漂洗。F.壓片將材料重新移至載玻片上，吸干材料周圍水分，蓋上蓋玻片，再用拇指輕擠壓蓋玻片(不要使蓋玻片移動)，使組織成為一薄層，輕輕敲擊蓋玻片，使細胞分散。G.鏡檢將壓片置于Motic顯微鏡(德國麥克奧迪公司Motic系列)下觀察，選擇染色體分散、清晰的細胞進行顯微照相，以便進行核型分析。同時可用記號筆在載玻片和蓋玻片上分別做記號，以便再次觀察和照相。本發(fā)明的積極效果是提供了一種適宜洋水仙染色體制片的方法，該制片方法操作簡單方便，染色體分散均勻且背景較淺，染色體數(shù)目易計數(shù)，采用本方法制片得出的染色體數(shù)目準確度高。


圖1是洋水仙‘嘹亮’(fortissimo)的染色體鏡檢結(jié)果和顯微照相示意圖。圖2是洋水仙‘阿克拉’(Arkle)的染色體鏡檢結(jié)果和顯微照相示意圖。
具體實施例方式實施例1成功觀察并統(tǒng)計出了洋水仙‘嘹亮’(i^rtissimo)的染色體數(shù)目。具體實施方法如下A.取材上午9-10時取生長旺盛的盆栽洋水仙‘嘹亮，F(xiàn)ortissimo)根尖 1-1. 5cm。B.低溫預處理將取下的根尖清洗干凈，放入濃度為lg/L的秋水仙堿溶液中，在 0-5 °C冷藏條件下預處理4h。C.固定將預處理后的新根用蒸餾水漂洗3次，吸干水分，采用卡諾氏固定液固定 20h，卡諾氏固定液為無水乙醇冰醋酸=3 1。D.解離將固定后的新根用蒸餾水漂洗3次，吸干水分，在lmol/L鹽酸60°C水浴中解離lOmin，用加入2-3滴lmol/L氫氧化鈉(NaOH)的500ml蒸餾水漂洗3次。E.染色將解離后的根尖置于載玻片上，取根尖前端1. 5_2mm呈現(xiàn)出乳白色的根尖，用解剖刀將取下的根尖沿縱向切割成兩部分，用吸水紙吸干根尖周圍的水分，滴入1-2 滴卡寶品紅染色劑，染色lOmin，然后用蒸餾水漂洗。F.壓片將材料重新移至載玻片上，吸干材料周圍水分，蓋上蓋玻片，再用拇指輕擠壓蓋玻片(不要使蓋玻片移動)，使組織成為一薄層，輕輕敲擊蓋玻片，使細胞分散。G.鏡檢將壓片置于Motic顯微鏡(德國麥克奧迪公司Motic系列)下觀察，選擇染色體分散、清晰的細胞進行顯微照相，以便進行核型分析。同時可用記號筆在載玻片和蓋玻片上分別做記號，以便再次觀察和照相。鏡檢結(jié)果和顯微照相見圖1。實施例2成功觀察并統(tǒng)計出了洋水仙‘阿克拉’(Arkle)的染色體數(shù)目。具體實施方法同實施例1。鏡檢結(jié)果和顯微照相見圖2。以上在兩個代表性洋水仙品種上的實施應用結(jié)果表明，本方法是一種有效的洋水仙染色體制片的方法，并且該制片方法操作簡單方便，染色體分散均勻且背景較淺，染色體數(shù)目易計數(shù)，采用本方法制片得出的染色體數(shù)目準確度高。
權(quán)利要求
1. 一種洋水仙根尖染色體制片的方法，其特征是A.取材上午9-10時取生長旺盛的盆栽洋水仙白色新根1-1.5cm ；B.低溫預處理將取下的根尖清洗干凈，放入濃度為lg/L的秋水仙堿溶液中，在0-5°C 冷藏條件下預處理4h ；C.固定將預處理后的新根用蒸餾水漂洗3次，吸干水分，卡諾氏固定液固定20h；D.解離將固定后的新根用蒸餾水漂洗3次，吸干水分，在lmol/L鹽酸60°C水浴中解離lOmin，用加入2-3滴lmol/L氫氧化鈉的500ml蒸餾水漂洗3次；E.染色將解離后的根尖置于載玻片上，取根尖前端1.5-2mm呈現(xiàn)出乳白色的根尖，用解剖刀將取下的根尖沿縱向切割成兩部分，用吸水紙吸干根尖周圍的水分，滴入1-2滴卡寶品紅染色劑，染色lOmin，然后用蒸餾水漂洗；F.壓片將材料重新移至載玻片上，吸干材料周圍水分，蓋上蓋玻片，再用拇指輕擠壓蓋玻片，使組織成為一薄層，輕輕敲擊蓋玻片，使細胞分散；G.鏡檢將壓片置于Motic顯微鏡下觀察，選擇染色體分散、清晰的細胞進行顯微照相，以便進行核型分析。
全文摘要
本發(fā)明提供一種洋水仙根尖染色體制片的方法，采用1g/L的秋水仙堿溶液進行低溫預處理；卡諾氏固定液固定；1mol/L鹽酸60℃水浴中解離10min，用加入少量NaOH的蒸餾水漂洗；將根尖沿縱向切割成兩部分，卡寶品紅染色劑染色10min，染色后用蒸餾水漂洗；壓片法制片，在Motic顯微鏡下鏡檢和進行顯微照相。本發(fā)明的制片方法操作簡單方便，染色體分散均勻且背景較淺，染色體數(shù)目易計數(shù)，采用本方法制片得出的染色體數(shù)目準確度高。
文檔編號G01N1/28GK102183394SQ20111005432
公開日2011年9月14日 申請日期2011年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月8日
發(fā)明者佟瀟, 孫曉梅, 孫琪, 崔文山, 張麗杰, 楊宏光, 陸秀君 申請人:沈陽農(nóng)業(yè)大學