專(zhuān)利名稱(chēng)：同時(shí)測(cè)定2-酮基-l-古龍酸、維生素c 和2-酮基-l-古龍酸甲酯含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化學(xué)分析技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種同時(shí)測(cè)定2-酮基-L-古龍酸、維生素C和2-酮基-L-古龍酸甲酯含量的方法。
背景技術(shù)：
通常維生素C酯化轉(zhuǎn)化工藝過(guò)程包括如下步驟酯化反應(yīng)步驟，將2-酮基-L-古龍酸(又名2-酮基-L-古洛糖酸)在甲醇中用濃硫酸催化酯化生成2-酮基-L-古龍酸甲酯；轉(zhuǎn)化反應(yīng)步驟，用NaHCO3將2-酮基-L-古龍酸甲酯轉(zhuǎn)化為維生素C鈉鹽；酸化反應(yīng)步驟，用維生素C鈉鹽中加入&S04，酸化成維生素C。在上述工藝階段中，有可能生成的產(chǎn)物有維生素C、2_酮基-L-古龍酸甲酯。酯化反應(yīng)是可逆反應(yīng)，而酯化、轉(zhuǎn)化、酸化反應(yīng)為連續(xù)整體單元生產(chǎn)操作。為了提高維生素C 鈉的質(zhì)量和收率，必須對(duì)酯化轉(zhuǎn)化反應(yīng)的操作條件進(jìn)行優(yōu)化，對(duì)酯化轉(zhuǎn)化反應(yīng)的終點(diǎn)進(jìn)行監(jiān)控。必須監(jiān)控的數(shù)據(jù)包括酯化反應(yīng)終點(diǎn)料液中生成的2-酮基-L-古龍酸甲酯的濃度、 副產(chǎn)物維生素C(鈉)的濃度、料液中殘留的2-酮基-L-古龍酸鈉濃度，以及轉(zhuǎn)化反應(yīng)終點(diǎn)母液中2-酮基-L-古龍酸甲酯殘留濃度、維生素C鈉的濃度等。故酯化、轉(zhuǎn)化和酸化程度需要進(jìn)行監(jiān)測(cè)。單獨(dú)測(cè)定2-酮基-L-古龍酸、維生素C的方法和報(bào)道很多，而2-酮基-L-古龍酸甲酯的檢驗(yàn)方法并不多。但這些方法均不能滿足維生素C生產(chǎn)過(guò)程中的酯化轉(zhuǎn)化階段的中間監(jiān)控的需要，即不能針對(duì)酯化轉(zhuǎn)化階段反應(yīng)液，同時(shí)對(duì)上述三者進(jìn)行測(cè)定，并且分析反應(yīng)時(shí)間也較長(zhǎng)。2-酮基-L-古龍酸的單獨(dú)檢驗(yàn)方法主要有碘量法、酸堿滴定法、高效液相色譜法。 一般碘量法為精密稱(chēng)取樣品約5g，于IOOml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密移取anl，于50ml干燥的試管中，用刻度吸管準(zhǔn)確加入7. Omol/L硫酸溶液^iil，搖勻， 在沸水浴中加熱煮沸30分鐘，取出稍冷后用水沖洗轉(zhuǎn)移入250ml錐形瓶中，加淀粉指示液 1 anl，用0.05mol/L碘液滴定至溶液顯藍(lán)色(30秒內(nèi)不退)為終點(diǎn)，根據(jù)消耗碘滴定液的體積計(jì)算2-酮基-L-古龍酸的含量。本方法適用于測(cè)定成品2-酮基-L-古龍酸，作為酯化轉(zhuǎn)化階段反應(yīng)液的測(cè)定方法，則專(zhuān)屬性差，受到酯化轉(zhuǎn)化階段的副產(chǎn)物維生素C、酯化產(chǎn)物2-酮基-L-古龍酸甲酯的嚴(yán)重影響。例如，專(zhuān)利號(hào)為200410020337. 5的專(zhuān)利公開(kāi)了一種2-酮基-L-古龍酸含量的分析方法，就是采用碘量法，同樣存在類(lèi)似問(wèn)題，而且其方法分析時(shí)間長(zhǎng)達(dá)80分鐘以上，完全不能滿足中間控制的及時(shí)性的要求。此外，由于硫酸是催化劑，會(huì)與酯化轉(zhuǎn)化階段的產(chǎn)物產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)，因此，酸堿滴定法也不能用于酯化轉(zhuǎn)化階段反應(yīng)液的監(jiān)控。維生素C的經(jīng)典檢驗(yàn)方法是碘量法，作為酯化轉(zhuǎn)化階段反應(yīng)液的測(cè)定方法，同樣受到酯化轉(zhuǎn)化的副產(chǎn)物的嚴(yán)重影響，不能滿足中間控制的需要。2-酮基-L-古龍酸甲酯的業(yè)內(nèi)檢驗(yàn)方法是首先用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)樣品溶液至弱堿性，加熱使2-酮基-L-古龍酸甲酯水解為2-酮基-L-古龍酸和甲醇，然后再用氫氧化鈉滴定液滴定至中性。此方法也適用于測(cè)定成品，專(zhuān)屬性較差，不能準(zhǔn)確測(cè)定酯化轉(zhuǎn)化階段 2-酮基-L-古龍酸甲酯的含量。上述方法均是針對(duì)單一成品進(jìn)行測(cè)量，不能滿足工藝生產(chǎn)過(guò)程中對(duì)中間監(jiān)控的需要。目前，人們提出了高效液相色譜法(HPLC，High PerformanceLiquid Chromatography), 以應(yīng)用在化學(xué)工藝過(guò)程中的含量測(cè)定。目前公開(kāi)的高效液相色譜法，僅提出了其應(yīng)用于2-酮基-L-古龍酸的測(cè)定。例如，2005年10月出版的《生物技術(shù)》第15卷第5期公開(kāi)了 “2-酮基-L-古龍酸的高效液相色譜分析”，適用于鑒定發(fā)酵液中的產(chǎn)物是2-酮基-L-古龍酸。具體方法是用高效液相色譜法測(cè)定氧化葡萄糖酸桿菌(Gluconobacter)和蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)混合發(fā)酵液中的2-酮基-L-古龍酸。采用AnlinexA27柱46X250mm 流動(dòng)相為十二烷基硫酸鈉(0. Olmol/L)/ 乙腈(3% ) = 2/3，流速 1. OmL/min，柱溫 30°C;用 L-7420uv 檢測(cè)器檢測(cè)。 從該文中可以看出，此方法不適用于維生素C生產(chǎn)過(guò)程中的酯化轉(zhuǎn)化階段反應(yīng)液的2-酮基-L-古龍酸、維生素C、2-酮基-L-古龍酸甲酯含量測(cè)定。根據(jù)《河北化工》第30卷第7期(2007年07月)第70頁(yè)“HPLC-ELSD法測(cè)定維生素C酯化過(guò)程中的古龍酸和古龍酸甲酯”介紹“高效液相色譜法檢測(cè)古龍酸的方法很多，大多是采用紫外檢測(cè)器，由于古龍酸的吸收系數(shù)￡很低(￡= 70)，所以更適合干品檢測(cè)。而實(shí)際生產(chǎn)中酯化反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)時(shí)，料液中的古龍酸含量較低，料液經(jīng)必要的稀釋處理后待檢濃度更低，母液中古龍酸含量極低，用紫外檢測(cè)器無(wú)法準(zhǔn)確檢測(cè)。古龍酸甲酯的液相法檢測(cè)未見(jiàn)報(bào)道。，，并且，該文獻(xiàn)中僅公開(kāi)了利用高效液相色譜法測(cè)定維生素c生產(chǎn)過(guò)程中兩種成分(古龍酸和古龍酸甲酯)的方法?？傊枰绢I(lǐng)域技術(shù)人員迫切解決的一個(gè)技術(shù)問(wèn)題就是如何能夠在維生素C 酯化轉(zhuǎn)化工藝過(guò)程中，同時(shí)測(cè)定2-酮基-L-古龍酸、維生素C和2-酮基-L-古龍酸甲酯這三種物質(zhì)的含量，并且測(cè)量速度較快。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種同時(shí)測(cè)定2-酮基-L-古龍酸、維生素C和 2-酮基-L-古龍酸甲酯含量的方法，能夠在維生素C酯化轉(zhuǎn)化工藝過(guò)程中，以較快的速度同時(shí)測(cè)量上述三種物質(zhì)的含量。為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明公開(kāi)了一種同時(shí)測(cè)定2-酮基-L-古龍酸、維生素C和 2-酮基-L-古龍酸甲酯含量的方法，包括用流動(dòng)相溶解并稀釋2-酮基-L-古龍酸對(duì)照品、維生素C對(duì)照品和2-酮基-L-古龍酸甲酯對(duì)照品，配制對(duì)照品溶液；其中，流動(dòng)相由有機(jī)溶劑與緩沖液組成，有機(jī)溶劑選自甲醇、乙腈或四氫呋喃，緩沖液選自磷酸、磷酸鹽、乙酸或乙酸鹽緩沖液；用所述流動(dòng)相溶解并稀釋酯化液樣品、轉(zhuǎn)化液樣品或酸化液樣品，配制樣品溶液；分別將等量的對(duì)照品溶液和樣品溶液注入色譜柱，利用高效液相色譜法進(jìn)行液相色譜分離和色譜檢測(cè)，生成對(duì)照品溶液和樣品溶液的液相色譜圖；其中，所述色譜柱選自碳八柱、碳十八柱或氨基柱，色譜檢測(cè)的波長(zhǎng)為210nm ；
分別獲取對(duì)照品溶液、樣品溶液的液相色譜圖中被測(cè)成分的響應(yīng)信號(hào)，采用外標(biāo)法分別計(jì)算樣品中被測(cè)成分的含量；其中，所述響應(yīng)信號(hào)為峰面積或峰高；被測(cè)成分為 2-酮基-L-古龍酸、維生素C和2-酮基-L-古龍酸甲酯。優(yōu)選的，所述對(duì)照品溶液為單一的2-酮基-L-古龍酸對(duì)照品溶液、維生素C對(duì)照品溶液和2-酮基-L-古龍酸甲酯對(duì)照品溶液；或者，所述對(duì)照品溶液為2-酮基-L-古龍酸對(duì)照品溶液、維生素C對(duì)照品溶液和2-酮基-L-古龍酸甲酯對(duì)照品溶液的混合溶液。優(yōu)選的，以十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑的色譜柱。優(yōu)選的，所述色譜柱的參數(shù)為內(nèi)徑4. 6mm、柱長(zhǎng)100 250mm、粒徑5 μ m。優(yōu)選的，對(duì)照品溶液和樣品溶液注入色譜柱的流速為0. 1 2. Oml/min。優(yōu)選的，緩沖液為磷酸鹽緩沖液時(shí)，所述磷酸鹽選自磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫銨、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀或磷酸氫二銨；緩沖液為乙酸鹽緩沖液時(shí)，所述乙酸鹽選自乙酸鈉或乙酸銨。優(yōu)選的，所述流動(dòng)相為體積比為50 950的乙腈-0.4%磷酸二氫鉀緩沖液。優(yōu)選的，所述緩沖液還包括四乙基氫氧化銨、四丁基氫氧化銨、正辛銨。優(yōu)選的，采用外標(biāo)法分別計(jì)算樣品中的2-酮基-L-古龍酸、維生素C和2-酮基-L-古龍酸甲酯含量，包括從對(duì)照品溶液和樣品溶液的液相色譜圖中，獲取被測(cè)成分的響應(yīng)信號(hào)的比例關(guān)系；依據(jù)所述比例關(guān)系和對(duì)照品溶液中被測(cè)成分的含量，計(jì)算該被測(cè)成分在樣品中的含量。優(yōu)選的，采用外標(biāo)法分別計(jì)算樣品中的2-酮基-L-古龍酸、維生素C和2-酮基-L-古龍酸甲酯含量，包括從被測(cè)成分含量不同的多個(gè)對(duì)照品溶液的液相色譜圖中獲得該被測(cè)成分的響應(yīng)信號(hào)，并生成響應(yīng)信號(hào)與含量的對(duì)應(yīng)關(guān)系的校正曲線；依據(jù)樣品溶液的液相色譜圖中被測(cè)成分的響應(yīng)信號(hào)，從所述校正曲線上查找對(duì)應(yīng)的含量，作為該被測(cè)成分在樣品中的含量。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明提出的方法適用于在維生素C酯化、轉(zhuǎn)化或酸化階段反應(yīng)液的反應(yīng)程度監(jiān)控，在0. 0005% -100%較大范圍內(nèi)可同時(shí)測(cè)定2-酮基-L-古龍酸、維生素c、2-酮基-L-古龍酸甲酯的含量。具體的，本發(fā)明創(chuàng)造性地提出使用適宜的流動(dòng)相和色譜參數(shù)組合，用于同時(shí)測(cè)定維生素C生產(chǎn)過(guò)程中三種成分的含量，具體包括選用合適組分的流動(dòng)相、選用碳八柱、碳十八柱或氨基柱作為色譜柱，色譜檢測(cè)的波長(zhǎng)為210nm等。上述關(guān)鍵參數(shù)組合在一起，使得本發(fā)明克服了現(xiàn)有的高效液相色譜法檢測(cè)中，2-酮基-L-古龍酸、2-酮基-L-古龍酸甲酯保留時(shí)間較長(zhǎng)(一般在10分鐘以上)的弱點(diǎn)。本發(fā)明提出的含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便，操作方便， 分析時(shí)間短，測(cè)量速度較快，一般測(cè)定一個(gè)樣品僅需IOmin左右，其中，2-酮基-L-古龍酸保留時(shí)間一般不到3分鐘，維生素C和2-酮基-L-古龍酸甲酯保留時(shí)間一般不到4分鐘，而且保證了三個(gè)被測(cè)成分的分離情況良好。


圖1是本發(fā)明一種同時(shí)測(cè)定2-酮基-L-古龍酸、維生素C和2-酮基-L-古龍酸甲酯含量的方法實(shí)施例的流程圖；圖2是本發(fā)明一種優(yōu)選實(shí)施例中，對(duì)照品溶液的液相色譜圖；圖3是本發(fā)明一種優(yōu)選實(shí)施例中，酯化階段反應(yīng)液的液相色譜圖；圖4是本發(fā)明一種優(yōu)選實(shí)施例中，轉(zhuǎn)化階段反應(yīng)液的液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。參照?qǐng)D1，示出了本發(fā)明一種同時(shí)測(cè)定2-酮基-L-古龍酸、維生素C和2-酮基-L-古龍酸甲酯含量的方法實(shí)施例的流程圖，包括步驟101，用流動(dòng)相溶解并稀釋2-酮基-L-古龍酸對(duì)照品、維生素C對(duì)照品和2-酮基-L-古龍酸甲酯對(duì)照品，配制對(duì)照品溶液；精密稱(chēng)定2-酮基-L-古龍酸對(duì)照品、維生素C對(duì)照品、2-酮基-L-古龍酸甲酯對(duì)照品(均為純物質(zhì))各適量分別置于不同的量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋到刻度，配制三份對(duì)照品溶液；或者，還可以將上述三份對(duì)照品共同置于量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋到刻度，配制混合的對(duì)照品溶液。也就是說(shuō)，本發(fā)明實(shí)施例所述對(duì)照品溶液可以是單一的2-酮基-L-古龍酸對(duì)照品溶液、維生素C對(duì)照品溶液和2-酮基-L-古龍酸甲酯對(duì)照品溶液，也可以是2-酮基-L-古龍酸對(duì)照品溶液、維生素C對(duì)照品溶液和2-酮基-L-古龍酸甲酯對(duì)照品溶液的混合溶液。進(jìn)一步，流動(dòng)相由有機(jī)溶劑與緩沖液組成，有機(jī)溶劑選自甲醇、乙腈或四氫呋喃， 緩沖液選自磷酸、磷酸鹽、乙酸或乙酸鹽緩沖液；緩沖液為磷酸鹽緩沖液時(shí)，所述磷酸鹽選自磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫銨、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀或磷酸氫二銨；緩沖液為乙酸鹽緩沖液時(shí)所述乙酸鹽選自乙酸鈉或乙酸銨。通常地，緩沖液中除了包括磷酸、磷酸鹽、乙酸或乙酸鹽，還包括四乙基氫氧化銨、四丁基氫氧化銨、正辛銨中的一種或者幾種。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，所述流動(dòng)相為體積比為50 950的乙腈-0.4%磷
酸二氫鉀緩沖液。步驟102，用所述流動(dòng)相溶解并稀釋酯化液樣品、轉(zhuǎn)化液樣品或酸化液樣品，配制樣品溶液；取酯化液樣品、轉(zhuǎn)化液樣品、酸化液樣品中的其中一種配置樣品溶液，所述酯化液樣品為維生素C制備過(guò)程中酯化反應(yīng)生成2-酮基-L-古龍酸甲酯后所得到的溶液，所述轉(zhuǎn)化液樣品為轉(zhuǎn)化反應(yīng)生成維生素C鈉鹽后所得到的溶液，所述酸化液樣品為酸化反應(yīng)生成維生素C后所得到的溶液。則取上述樣品精密稱(chēng)定其質(zhì)量，置于適宜量瓶中，用步驟101所用的流動(dòng)相溶解并稀釋到刻度，配制樣品溶液。步驟103，分別將等量的對(duì)照品溶液和樣品溶液注入色譜柱，利用高效液相色譜法進(jìn)行液相色譜分離和色譜檢測(cè)，生成對(duì)照品溶液和樣品溶液的液相色譜圖；本發(fā)明通過(guò)高效液相色譜法(HPLC)進(jìn)行含量測(cè)定，采用液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，液相色譜儀主要包括輸液泵、檢測(cè)器和數(shù)據(jù)記錄系統(tǒng)等。高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有填充劑(固定相)的色譜柱，注入的供試品(本發(fā)明為對(duì)照品溶液或樣品溶液)也被流動(dòng)相帶入色譜柱內(nèi)，供試品中的被測(cè)成分(本發(fā)明中為2-酮基-L-古龍酸、維生素C和2-酮基-L-古龍酸甲酯)因極性差異或相對(duì)于固定相的吸附及解吸能力差異，在色譜柱內(nèi)被分離，之后各被測(cè)成分先后進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行色譜檢測(cè)，用記錄儀或數(shù)據(jù)處理裝置記錄色譜圖并進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得到測(cè)定結(jié)果，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品的分析。 其中，本發(fā)明所述色譜柱選自碳八柱、碳十八柱或氨基柱。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中， 以十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑的色譜柱，色譜柱的參數(shù)可選擇內(nèi)徑4. 6mm、柱長(zhǎng) 100 250mm、粒徑 5 μ m。具體的，分別吸取等量的對(duì)照品溶液和樣品溶液注入色譜柱，進(jìn)行液相色譜分離， 其中，注入色譜柱的流速為0. 1 2. Oml/min，優(yōu)選流速為1. Oml/min。之后，利用紫外檢測(cè)器對(duì)分離出的色譜進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)色譜的波長(zhǎng)保證能夠同時(shí)滿足2-酮基-L-古龍酸、維生素C和2-酮基-L-古龍酸甲酯吸光度要求的波長(zhǎng)，在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例中，采用210nm 的波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)。需要說(shuō)明的是，當(dāng)對(duì)照品溶液為單一的2-酮基-L-古龍酸對(duì)照品溶液、維生素C 對(duì)照品溶液和2-酮基-L-古龍酸甲酯對(duì)照品溶液時(shí)，依次選取上述三種對(duì)照品溶液注入三個(gè)色譜柱中，獲得三幅色譜圖，包括2-酮基-L-古龍酸對(duì)照品溶液的液相色譜圖、維生素C 對(duì)照品溶液的液相色譜圖和2-酮基-L-古龍酸甲酯對(duì)照品溶液的液相色譜圖。當(dāng)所述對(duì)照品溶液為2-酮基-L-古龍酸對(duì)照品溶液、維生素C對(duì)照品溶液和2-酮基-L-古龍酸甲酯對(duì)照品溶液的混合溶液時(shí)，注入色譜柱中獲得一幅色譜圖，該色譜圖中同時(shí)示出了 2-酮基-L-古龍酸、維生素C和2-酮基-L-古龍酸甲酯的色譜。步驟104，分別獲取對(duì)照品溶液、樣品溶液的液相色譜圖中被測(cè)成分的響應(yīng)信號(hào)， 采用外標(biāo)法分別計(jì)算樣品中被測(cè)成分的含量。其中，所述響應(yīng)信號(hào)為峰面積或峰高；被測(cè)成分即2-酮基-L-古龍酸、維生素C和 2-酮基-L-古龍酸甲酯。本發(fā)明所述的外標(biāo)法需要在與被測(cè)樣品相同的色譜條件下單獨(dú)測(cè)定，把對(duì)照品溶液得到的響應(yīng)信號(hào)與樣品溶液的響應(yīng)信號(hào)進(jìn)行比較，即可求得被測(cè)成分在樣品中的含量，其可分為校正曲線法和校正因子求解法兩種方法。所述校正曲線法具體包括如下步驟Al，從被測(cè)成分含量不同的多個(gè)對(duì)照品溶液的液相色譜圖中獲得該被測(cè)成分的響應(yīng)信號(hào)，并生成響應(yīng)信號(hào)與含量的對(duì)應(yīng)關(guān)系的校正曲線；A2，依據(jù)樣品溶液的液相色譜圖中被測(cè)成分的響應(yīng)信號(hào)，從所述校正曲線上查找對(duì)應(yīng)的含量，作為該被測(cè)成分在樣品中的含量。需要說(shuō)明的是，校正曲線法需要配制具有不同被測(cè)成分含量的多個(gè)對(duì)照品溶液， 并且需要在相同的色譜檢測(cè)條件下、相同的進(jìn)樣量下，獲得對(duì)照品溶液的液相色譜圖。所述校正因子求解法的基本思想是從對(duì)照品溶液和樣品溶液的液相色譜圖中， 獲取被測(cè)成分的響應(yīng)信號(hào)的比例關(guān)系；依據(jù)所述比例關(guān)系和對(duì)照品溶液中被測(cè)成分的含量，計(jì)算該被測(cè)成分在樣品中的含量。包括如下步驟Bi，將對(duì)照品溶液中被測(cè)成分的質(zhì)量除以其響應(yīng)信號(hào)，獲得被測(cè)成分的校正因子；B2，將所述校正因子乘以樣品溶液中被測(cè)成分的響應(yīng)信號(hào)，之后除以樣品的質(zhì)量獲得該被測(cè)成分在樣品中的含量。本發(fā)明提出的方法可以適用于在維生素C酯化、轉(zhuǎn)化階段反應(yīng)液的反應(yīng)程度監(jiān)控，在質(zhì)量含量為0. 0005% 100%的較大范圍內(nèi)可同時(shí)測(cè)定2-酮基-L-古龍酸、維生素 C、2-酮基-L-古龍酸甲酯的含量。需要說(shuō)明的是，針對(duì)轉(zhuǎn)化反應(yīng)生的維生素C鈉鹽、以及酸化反應(yīng)生成的維生素C的含量測(cè)定，均以溶液中Vc的含量進(jìn)行表示。進(jìn)一步，本發(fā)明創(chuàng)造性地提出使用適宜的流動(dòng)相和色譜參數(shù)組合，用于同時(shí)測(cè)定維生素C生產(chǎn)過(guò)程中三種成分的含量，具體包括選用碳八柱、碳十八柱或氨基柱作為色譜柱，色譜檢測(cè)的波長(zhǎng)為210nm等。上述關(guān)鍵參數(shù)組合在一起，使得本發(fā)明克服了現(xiàn)有的高效液相色譜法檢測(cè)中，2-酮基-L-古龍酸、2-酮基-L-古龍酸甲酯保留時(shí)間(即從進(jìn)樣到出現(xiàn)色譜峰最高值所需的時(shí)間)較長(zhǎng)(一般在10分鐘以上)的弱點(diǎn)。本發(fā)明建立的同時(shí)測(cè)定2-酮基-L-古龍酸、維生素C、2-酮基-L-古龍酸甲酯含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便，操作方便，分析時(shí)間短，一般測(cè)定一個(gè)樣品僅需IOmin左右。通過(guò)本發(fā)明提出的方法，2-酮基-L-古龍酸保留時(shí)間一般不到3分鐘，維生素C和2-酮基-L-古龍酸甲酯保留時(shí)間一般不到4分鐘， 而且保證了三個(gè)被測(cè)成分的分離情況良好。此外，經(jīng)驗(yàn)證，本發(fā)明建立的分析方法測(cè)定維生素C生產(chǎn)過(guò)程中的酯化反應(yīng)液含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差如下2-酮基-L-古龍酸為1.1%，維生素C為0. 2%，2-酮基-L-古龍酸甲酯為0. 4%，分析精密度和準(zhǔn)確度均較高。下面，給出本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行具體說(shuō)明。1、本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施例的工藝環(huán)境如下1. 1采用的設(shè)備與儀器包括由日本島津公司制造的島津LC-10AT型液相色譜儀； CDMC-21色譜工作站(V3.0上海計(jì)算所)；電子分析天平(Sartorius CPA225D)，感量為 0. Olmg01. 2采用的量具包括50mL的量瓶。1.3采用的試劑包括乙腈(HPLC級(jí))；磷酸二氫鉀(AR級(jí))；純化水；2_酮基-L-古龍酸對(duì)照品；2-酮基-L-古龍酸甲酯對(duì)照品；維生素C對(duì)照品；樣品為維生素C生產(chǎn)中的酯化液樣品、轉(zhuǎn)化液樣品。1. 4色譜系統(tǒng)及條件紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm ；色譜柱為T(mén)hermo Aquasil C18 色譜柱，其參數(shù)為 4. 6mmX 250mmX 5 μ m ；流動(dòng)相為體積比為50 950的乙腈-0.4%磷酸二氫鉀緩沖液。輸液泵提供的流速為1. OmL/min ；進(jìn)樣量為20 μ L ；色譜記錄時(shí)間為IOmin。2、被測(cè)成分(2-酮基-L-古龍酸、維生素C和2-酮基-L-古龍酸甲酯)含量的測(cè)定具體如下2.1對(duì)照品溶液的配制用電子分析天平精密稱(chēng)定2-酮基-L-古龍酸對(duì)照品約50mg、維生素C對(duì)照品 IOmg,2-酮基-L-古龍酸甲酯對(duì)照品50mg，將上述對(duì)照品共同置于50mL的量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋到刻度，做為對(duì)照品溶液。平行配制兩份上述對(duì)照品溶液。2. 2樣品(供試品)溶液的配制取酯化液樣品或轉(zhuǎn)化液樣品約0. 25mL，精密稱(chēng)定其質(zhì)量，之后置于50mL的量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋到刻度，作為供試品溶液。平行配制兩份上述樣品溶液。2. 3采用高效液相色譜法進(jìn)行液相色譜分離和色譜檢測(cè)精密量取對(duì)照品溶液和樣品溶液各20 μ 1，通過(guò)輸液泵注入色譜儀，通過(guò)紫外檢測(cè)器進(jìn)行色譜檢測(cè)，生成對(duì)照品溶液和樣品溶液的液相色譜圖。其中，對(duì)照品溶液每份進(jìn)樣2 次，樣品溶液每份進(jìn)樣一次。2. 4采用外標(biāo)法分別計(jì)算樣品中被測(cè)成分的含量2. 4. 1校正因子f的計(jì)算
r mls Pis式中fi為被測(cè)成分i的校正因子；i代表2-酮基-L-古龍酸、維生素C或2-酮基-L-古龍酸甲酯；mis為對(duì)照品溶液中，被測(cè)成分i對(duì)照品的質(zhì)量，單位為g ；Ais為對(duì)照品溶液的液相色譜圖中，與被測(cè)成分i對(duì)應(yīng)的峰面積；Pis為被測(cè)成分i對(duì)照品的質(zhì)量含量，單位為％ ；100為百分含量換算為小數(shù)表示的含量換算因子。需要說(shuō)明的是，此步驟中需要計(jì)算兩份對(duì)照品溶液的校正因子f，保證對(duì)照品溶液各有關(guān)色譜峰各自單位峰面積質(zhì)量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2. 0%。否則，標(biāo)樣無(wú)效。2. 4. 2按外標(biāo)法計(jì)算樣品的含量計(jì)算公式如下A.Xi = ι x^xlOO
m式中Xi為被測(cè)成分i樣品的質(zhì)量含量，單位為％ ；Ai為樣品溶液的液相色譜圖中，與被測(cè)成分i對(duì)應(yīng)的峰面積；&為被測(cè)成分i的校正因子；m為所稱(chēng)取的樣品的質(zhì)量，單位為g ；此步驟中需要分別計(jì)算兩份被測(cè)成分i樣品的含量，保證相對(duì)偏差應(yīng)不大于2%。
0099]本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施例中涉及的色譜圖如圖2 4所示。其中，圖2是對(duì)照品溶液的液相色譜圖，出峰順序依次為2-酮基-L-古龍酸、維生素C(Vc)、2_酮基-L-古龍酸甲酯。
對(duì)照品溶液中，相應(yīng)的參數(shù)如下表所示
權(quán)利要求
1.一種同時(shí)測(cè)定2-酮基-L-古龍酸、維生素C和2-酮基-L-古龍酸甲酯含量的方法， 其特征在于，包括用流動(dòng)相溶解并稀釋2-酮基-L-古龍酸對(duì)照品、維生素C對(duì)照品和2-酮基-L-古龍酸甲酯對(duì)照品，配制對(duì)照品溶液；其中，流動(dòng)相由有機(jī)溶劑與緩沖液組成，有機(jī)溶劑選自甲醇、 乙腈或四氫呋喃，緩沖液選自磷酸、磷酸鹽、乙酸或乙酸鹽緩沖液；用所述流動(dòng)相溶解并稀釋酯化液樣品、轉(zhuǎn)化液樣品或酸化液樣品，配制樣品溶液； 分別將等量的對(duì)照品溶液和樣品溶液注入色譜柱，利用高效液相色譜法進(jìn)行液相色譜分離和色譜檢測(cè)，生成對(duì)照品溶液和樣品溶液的液相色譜圖；其中，所述色譜柱選自碳八柱、碳十八柱或氨基柱，色譜檢測(cè)的波長(zhǎng)為210nm ；分別獲取對(duì)照品溶液、樣品溶液的液相色譜圖中被測(cè)成分的響應(yīng)信號(hào)，采用外標(biāo)法分別計(jì)算樣品中被測(cè)成分的含量；其中，所述響應(yīng)信號(hào)為峰面積或峰高；被測(cè)成分為2-酮基-L-古龍酸、維生素C和2-酮基-L-古龍酸甲酯。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述對(duì)照品溶液為單一的2-酮基-L-古龍酸對(duì)照品溶液、維生素C對(duì)照品溶液和 2-酮基-L-古龍酸甲酯對(duì)照品溶液；或者，所述對(duì)照品溶液為2-酮基-L-古龍酸對(duì)照品溶液、維生素C對(duì)照品溶液和2-酮基-L-古龍酸甲酯對(duì)照品溶液的混合溶液。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于， 以十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑的色譜柱。
4.如權(quán)利要求1或3所述的方法，其特征在于，所述色譜柱的參數(shù)為內(nèi)徑4. 6mm、柱長(zhǎng)100 250mm、粒徑5 μ m。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，對(duì)照品溶液和樣品溶液注入色譜柱的流速為0. 1 2. Oml/min。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，緩沖液為磷酸鹽緩沖液時(shí)，所述磷酸鹽選自磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫銨、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀或磷酸氫二銨；緩沖液為乙酸鹽緩沖液時(shí)，所述乙酸鹽選自乙酸鈉或乙酸銨。
7.如權(quán)利要求1或6所述的方法，其特征在于，所述流動(dòng)相為體積比為50 950的乙腈-0.4%磷酸二氫鉀緩沖液。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述緩沖液還包括四乙基氫氧化銨、四丁基氫氧化銨、正辛銨。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，采用外標(biāo)法分別計(jì)算樣品中的2-酮基-L-古龍酸、維生素C和2-酮基-L-古龍酸甲酯含量，包括從對(duì)照品溶液和樣品溶液的液相色譜圖中，獲取被測(cè)成分的響應(yīng)信號(hào)的比例關(guān)系； 依據(jù)所述比例關(guān)系和對(duì)照品溶液中被測(cè)成分的含量，計(jì)算該被測(cè)成分在樣品中的含量。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，采用外標(biāo)法分別計(jì)算樣品中的2-酮基-L-古龍酸、維生素C和2-酮基-L-古龍酸甲酯含量，包括從被測(cè)成分含量不同的多個(gè)對(duì)照品溶液的液相色譜圖中獲得該被測(cè)成分的響應(yīng)信號(hào)，并生成響應(yīng)信號(hào)與含量的對(duì)應(yīng)關(guān)系的校正曲線；依據(jù)樣品溶液的液相色譜圖中被測(cè)成分的響應(yīng)信號(hào)，從所述校正曲線上查找對(duì)應(yīng)的含量，作為該被測(cè)成分在樣品中的含量。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種同時(shí)測(cè)定2-酮基-L-古龍酸、維生素C和2-酮基-L-古龍酸甲酯含量的方法，包括用流動(dòng)相溶解并稀釋對(duì)照品配制對(duì)照品溶液；流動(dòng)相由有機(jī)溶劑與緩沖液組成，有機(jī)溶劑選自甲醇、乙腈或四氫呋喃，緩沖液選自磷酸、磷酸鹽、乙酸或乙酸鹽緩沖液；用流動(dòng)相溶解并稀釋樣品，配制樣品溶液；將等量的對(duì)照品溶液和樣品溶液注入色譜柱，利用高效液相色譜法進(jìn)行色譜分離和色譜檢測(cè)，生成對(duì)照品溶液和樣品溶液的液相色譜圖；色譜柱選自碳八柱、碳十八柱或氨基柱，檢測(cè)的波長(zhǎng)為210nm；獲取液相色譜圖中被測(cè)成分的響應(yīng)信號(hào)，采用外標(biāo)法分別計(jì)算樣品中被測(cè)成分的含量。本發(fā)明可以同時(shí)測(cè)定上述三種物質(zhì)的含量，并且測(cè)量速度較快。
文檔編號(hào)G01N30/88GK102183612SQ20111006142
公開(kāi)日2011年9月14日 申請(qǐng)日期2011年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月15日
發(fā)明者崔旭東, 米超杰 申請(qǐng)人:山東潤(rùn)鑫精細(xì)化工有限公司