專利名稱：亞硝酸鈉氧化法測定總膽紅素試劑的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及測定血清、血漿或尿液中總膽紅素的試劑，具體講是一種亞硝酸鈉氧化法測定總膽紅素試劑。
背景技術(shù)：
總膽紅素(TBil)是人體內(nèi)結(jié)合(直接)膽紅素與非結(jié)合(間接)膽紅素的總和。 總膽紅素增加，通常是由于膽道阻塞、肝炎、肝硬化、溶血性綜合癥和某些遺傳性酶缺乏。近年來一些研究表明血液中膽紅素低于正常值常與冠心病有關(guān)，因此，對人體的血清、血漿或尿液中總膽紅素的測定，是醫(yī)學檢驗最常規(guī)的項目之一。測定總膽紅素的試劑目前主要有以下三種重氮法測定總膽紅素的試劑、酶法測定總膽紅素的試劑和化學氧化法測定總膽紅素的試劑。重氮法測定總膽紅素的試劑歷史最久，在嚴格控制操作環(huán)境溫度、時間、步驟下， 采用該試劑對總膽紅素水平偏高的樣本檢出率較高，且試劑價格低廉，所以目前仍廣泛應用。但采用該試劑對總膽紅素的檢測操作復雜、試劑不穩(wěn)定、反應不專一等問題一直是困擾醫(yī)學工作者的難題，雖然100多年來人們做過無數(shù)次的改良，但至今仍無滿意的結(jié)果。酶法測定總膽紅素的試劑采用該試劑測定總膽紅素具有簡單、特異的特點。但由于酶催化膽紅素反應速度慢，尤其是難以催化δ膽紅素反應，因此實際測得為葡萄糖醛酸結(jié)合膽紅素與非結(jié)合膽紅素的值，而不能真實反映總膽紅素。且某些特殊病人樣本如光照療法后產(chǎn)生的光膽紅素(不屬于膽紅素)亦可參與反應，導致測值不準確，這些缺點大大限制了其應用。另外酶法測定總膽紅素的試劑酶熱穩(wěn)定性差，保存時間短，價格過高，不利于推廣應用。所以，目前雖然已能進入臨床應用，但遠非完善，還需繼續(xù)研究?；瘜W氧化法測定總膽紅素的試劑從上世紀九十年代起，化學氧化法中的釩酸氧化法測定總膽紅素的試劑開始在國外實際應用，從1998年起釩酸氧化法測定總膽紅素的試劑開始進入我國。與重氮法測定總膽紅素的試劑和酶法測定總膽紅素的試劑相比，釩酸氧化法測定總膽紅素的試劑逐步顯示出測定總膽紅素時其操作簡單方便、試劑穩(wěn)定、保存時間長(如雙試劑型在室溫下可以穩(wěn)定一年，置于儀器的試劑倉中可以穩(wěn)定一個月以上) 以及價格低廉等優(yōu)點。但該試劑測低值樣本時，副反應較明顯而影響結(jié)果，且有一定毒性， 尤其是廢棄物可能被還原成劇毒的偏釩酸鹽而污染環(huán)境，因此測定總膽紅素的試劑有待改進或創(chuàng)新。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，本發(fā)明目的在于提供一種亞硝酸鈉氧化法測定總膽紅素試劑，可有效解決線性范圍寬、抗干擾性強、反應曲線規(guī)范、能迅速達到終點且測定的準確度和精密度高且能實際應用無污染環(huán)境的問題。本發(fā)明的技術(shù)方案是，該試劑由試劑1和試劑2組成，其中試劑1是，由檸檬酸三鈉2. 25 5. ^g、檸檬酸16. 40 19. 80g、聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)0. 10 1.0ml、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na2) 0. 20 0. 65g，加水至IOOOml混勻組成，PH值2. 2 3. 6 ；試劑2是，由亞硝酸鈉0. 14 0. 56g、氫氧化鈉0. 05 0. 15g、碳酸鈉0. 10 0. 30g， 加水至IOOOml混勻組成，PH值11 13。在以上組分中，檸檬酸三鈉與檸檬酸形成穩(wěn)定的緩沖液，利于試劑中各種成分的分散穩(wěn)定性。Triton X-100表面活性劑，是非水溶性間接膽紅素的增溶劑，是反應的促進劑、潤滑劑，它提高檢測的靈敏度，促進樣本中各種物質(zhì)溶解，減少樣本脂濁等對測定的影響，亞硝酸鈉主要起氧化性的作用。用本發(fā)明的亞硝酸鈉氧化法測定總膽紅素的試劑基于下列原理測定總膽紅素亞硝酸鈉可以氧化直接膽紅素和間接膽紅素，此時吸光度的減少和血清中的膽紅素成正比， 測定450nm下的吸光度的減少來計算血清中總膽紅素的含量，本發(fā)明組份科學，新穎獨特， 易生產(chǎn)，成本低，性能穩(wěn)定，保質(zhì)期長，測試準確，無環(huán)境污染。
具體實施例方式實施例1本發(fā)明在具體實施中，所述的試劑1是，由檸檬酸三鈉4. 41g、檸檬酸17. 85g、聚乙二醇辛基苯基醚0. 25ml、乙二胺四乙酸二鈉0. 37g，加蒸餾水至1000ml，混勻組成，PH值為
2.9 ；所述的試劑2是，由亞硝酸鈉0. 32g、氫氧化鈉0. lg、碳酸鈉0. 2g，加蒸餾水至1000ml, 混勻組成，PH值為12。用本實施例的亞硝酸鈉氧化法測定總膽紅素的試劑基于下列原理測定總膽紅素 亞硝酸鈉可以氧化直接膽紅素和間接膽紅素，此時吸光度的減少和血清中的膽紅素成正比，測定450nm下的吸光度的減少來計算血清中總膽紅素的含量。溫度37 °C ；比色杯光徑1. Ocm波長450nm樣品和標準品各10 μ 1 ；所說的樣品為被測品，即血清、血漿或尿液，所說的標準品為具有溯源性的定值血清，以下同試劑1 (簡稱R1,以下同)240 μ 1 ；試劑2 (簡稱R2,以下同)60 μ 1樣品(標準品)加隊混勻，37°C孵育5min后讀取吸光度A1 ；加入&混勻，37°C孵育5mm后讀取吸光度A2, Δ A = A2-A10計算
ΔΑ樣品
總膽紅素濃度(rtnol/L)=標準品濃度X ------------------------ ·--
ΔΑ標準所說的樣品加入試劑1與加入試劑2后兩次吸光度的差；ΔΑβ ι為標準品加入試劑1與加入試劑2后兩次吸光度的差(以下同)。實施例2本發(fā)明在具體實施中，還可以是，試劑1由檸檬酸三鈉2. 25g、檸檬酸19. 80g、聚乙二醇辛基苯基醚0. 10ml、乙二胺四乙酸二鈉0. 20g，加蒸餾水至1000ml，PH值為2. 2 ；試劑 2由亞硝酸鈉0. 14g、氫氧化鈉0. 05g、碳酸鈉0. 10g，加蒸餾水至1000ml, PH值為11。本實施例2的試劑測定總膽紅素的方法同實施例1，不再重述。實施例3
本發(fā)明在具體實施中，還可以是，所述的試劑1由檸檬酸三鈉5J6g、檸檬酸 16. 40g、聚乙二醇辛基苯基醚1. 0ml、乙二胺四乙酸二鈉0. 65g，加蒸餾水至1000ml，PH值為 3. 6 ；試劑2由亞硝酸鈉0. 56g、氫氧化鈉0. 15g、碳酸鈉0. 30g，加蒸餾水至1000ml，PH值為 13。本實施例3的試劑測定總膽紅素的方法同實施例1，不再重述。本發(fā)明試劑進行了性能檢測，并與現(xiàn)有的釩酸氧化法測定總膽紅素的試劑進行臨床樣品對比試驗，結(jié)果如下儀器HITICH7060全自動生化分析伩準確度試驗取RANDOX質(zhì)控品正常值(批號561UN)、異常值(批號384UE)，用本發(fā)明試劑進行
測試，每個濃度樣品重復測試3次。
權(quán)利要求
1.一種亞硝酸鈉氧化法測定總膽紅素試劑，其特征在于，該試劑由試劑1和試劑2組成，其中試劑1是，由檸檬酸三鈉2. 25 5. ^g、檸檬酸16. 40 19. 80g、聚乙二醇辛基苯基醚0. 10 1. 0ml、乙二胺四乙酸二鈉0. 20 0. 65g，加水至IOOOml混勻組成，PH值2. 2 3. 6 ；試劑2是，由亞硝酸鈉0. 14 0. 56g、氫氧化鈉0. 05 0. 15g、碳酸鈉0. 10 0. 30g， 加水至IOOOml混勻組成，PH值11 13。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亞硝酸鈉氧化法測定總膽紅素試劑，其特征在于，所述的試劑1是，由檸檬酸三鈉4. 41g、檸檬酸17. 85g、聚乙二醇辛基苯基醚0. 25ml、乙二胺四乙酸二鈉0. 37g，加蒸餾水至1000ml，混勻組成，PH值為2. 9 ；所述的試劑2是，由亞硝酸鈉0. 32g、 氫氧化鈉0. lg、碳酸鈉0. 2g，加蒸餾水至1000ml，混勻組成，PH值為12。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亞硝酸鈉氧化法測定總膽紅素試劑，其特征在于，試劑1由檸檬酸三鈉2. 25g、檸檬酸19. 80g、聚乙二醇辛基苯基醚0. 10ml、乙二胺四乙酸二鈉0. 20g，加蒸餾水至1000ml，PH值為2. 2 ；試劑2由亞硝酸鈉0. 14g、氫氧化鈉0. 05g、碳酸鈉0. 10g，加蒸餾水至1000ml, PH值為11。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亞硝酸鈉氧化法測定總膽紅素試劑，其特征在于，所述的試劑1由檸檬酸三鈉5. ^g、檸檬酸16. 40g、聚乙二醇辛基苯基醚1. 0ml、乙二胺四乙酸二鈉 0. 65g，加蒸餾水至1000ml，PH值為3. 6 ；試劑2由亞硝酸鈉0. 56g、氫氧化鈉0. 15g、碳酸鈉 0. 30g，加蒸餾水至1000ml，PH值為13。
全文摘要
本發(fā)明涉及亞硝酸鈉氧化法測定總膽紅素試劑，可有效解決線性范圍寬、抗干擾性強、反應曲線規(guī)范、能迅速達到終點且測定的準確度和精密度高且能實際應用無污染環(huán)境的問題，方法是，其中試劑1是，由檸檬酸三鈉2.25～5.26g、檸檬酸16.40～19.80g、聚乙二醇辛基苯基醚0.10～1.0ml、乙二胺四乙酸二鈉0.20～0.65g，加水至1000ml混勻組成，pH值2.2～3.6；試劑2是，由亞硝酸鈉0.14～0.56g、氫氧化鈉0.05～0.15g、碳酸鈉0.10～0.30g，加水至1000ml混勻組成，pH值11～13，本發(fā)明組份科學，易生產(chǎn)，成本低，性能穩(wěn)定，保質(zhì)期長，測試準確，無環(huán)境污染。
文檔編號G01N21/75GK102226768SQ201110064379
公開日2011年10月26日 申請日期2011年3月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月17日
發(fā)明者李瑾, 牛好偉, 王玉珠, 王玉金, 邊倩茹 申請人:鄭州蘭森生物技術(shù)有限公司