專利名稱：亞硝酸鈉氧化法測定直接膽紅素的試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種測定血清、血漿或尿液中直接膽紅素的試劑，特別是一種亞硝酸鈉氧化法測定直接膽紅素的試劑。
背景技術(shù)：
膽紅素是臨床上判定黃疸的重要依據(jù)，也是肝功能的重要指標(biāo)。膽紅素是人體內(nèi)結(jié)合(直接)膽紅素與非結(jié)合(間接)膽紅素的總和。膽紅素總量增高、間接膽紅素增高表明溶血性貧血，血型不合輸血，惡性疾病，新生兒黃疸等。膽紅素總量增高、直接與間接膽紅素均增高表明急性黃疸型肝炎，慢性活動性肝炎，膽硬變，中毒性肝炎等。膽紅素總量增高、直接膽紅素增高表明肝內(nèi)及肝外阻塞性黃疸，胰頭癌，毛細膽管型肝炎及其他膽汁瘀滯綜合征等。因此，對人體的血清、血漿或尿液中直接膽紅素的測定，是醫(yī)學(xué)檢驗最常規(guī)的項目之一。測定直接膽紅素的試劑目前主要有以下三種重氮法測定直接膽紅素的試劑、酶法測定直接膽紅素的試劑和化學(xué)氧化法測定直接膽紅素的試劑。重氮法測定直接膽紅素的試劑歷史悠久，測值較準(zhǔn)，其主要缺點即試劑穩(wěn)定性差、反應(yīng)特異性差等，雖經(jīng)過了無數(shù)次的改良，至今仍無滿意結(jié)果。酶法測定直接膽紅素的試劑采用該試劑測定直接膽紅素具有簡單、特異的特點。 但由于酶法測定直接膽紅素的試劑酶熱穩(wěn)定性差，保存時間短，價格過高，不利于推廣應(yīng)用。所以，目前雖然已能進入臨床應(yīng)用，但遠非完善，還需繼續(xù)研究?；瘜W(xué)氧化法測定直接膽紅素的試劑從上世紀(jì)九十年代起，化學(xué)氧化法中的釩酸氧化法測定直接膽紅素的試劑開始在國外實際應(yīng)用，從1998年起釩酸氧化法測定直接膽紅素的試劑開始進入我國。與重氮法測定直接膽紅素的試劑和酶法測定直接膽紅素的試劑相比，釩酸氧化法測定直接膽紅素的試劑逐步顯示出測定直接膽紅素時其操作簡單方便、 試劑穩(wěn)定、保存時間長(如雙試劑型在室溫下可以穩(wěn)定一年，置于儀器的試劑倉中可以穩(wěn)定一個月以上)以及價格低廉等優(yōu)點。但該試劑測低值樣本時，副反應(yīng)較明顯而影響結(jié)果； 在自動生化儀上測定時可嚴(yán)重干擾其它項目測定；有一定毒性，尤其是廢棄物可能被還原成劇毒的偏釩酸鹽而污染環(huán)境。因此，膽紅素的測定試劑有待改進和創(chuàng)新。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，本發(fā)明目的在于提供一種亞硝酸鈉氧化法測定直接膽紅素的試劑，可有效解決線性范圍寬、抗干擾性強、反應(yīng)曲線規(guī)范、能迅速達到終點且測定的準(zhǔn)確度和精密度高且能實際應(yīng)用無污染環(huán)境的亞硝酸鈉氧化法測定直接膽紅素的試劑的問題。本發(fā)明的解決技術(shù)方案是，該亞硝酸鈉氧化法測定直接膽紅素的試劑是由試劑1 和試劑2組成，其中試劑1是，每IOOOml的試劑1，由鄰苯二甲酸鉀鈉10. 2 30. 6g、氫氧化鈉1. 8 2. 6g、聚乙二醇辛基苯基醚(Triton Χ_100)0· 10 1. 0ml、鹽酸羥胺0. 5 1. 5g和余量為水組成，其中，先將鄰苯二甲酸鉀鈉、氫氧化鈉、聚乙二醇辛基苯基醚和鹽酸羥胺混合在一起，加水至IOOOml溶解拌勻，PH值為4. 5 5. 5 ；試劑2是，每IOOOml的試劑2，由亞硝酸鈉0. 32 0. 96g、氫氧化鈉0. 05 0. 15g、碳酸鈉0. 10 0. 30g和余量為水組成， 其中，先將亞硝酸鈉、氫氧化鈉和碳酸鈉混合在一起，加水至IOOOml溶解拌勻，PH值為11 13。在以上組分中，鄰苯二甲酸鉀鈉與氫氧化鈉在PH為4. 5 5. 5形成穩(wěn)定的緩沖液，利于試劑中各種成分的分散穩(wěn)定性。Triton X-100表面活性劑，是非水溶性間接膽紅素的增溶劑，是反應(yīng)的促進劑、潤滑劑，它提高檢測的靈敏度，促進樣本中各種物質(zhì)溶解，減少樣本脂濁等對測定的影響。鹽酸羥胺為抑制劑，可抑制間接膽紅素被氧化，亞硝酸鈉主要起氧化性的作用。用本發(fā)明的亞硝酸鈉氧化法測定直接膽紅素的試劑盒基于下列原理測定直接膽紅素直接膽紅素被亞硝酸鈉氧化成膽綠素，而間接膽紅素在抑制劑作用下不被氧化，直接膽紅素(DBil)的減少引起在波長450nm處吸光度的下降，吸光度的減少和血清中的膽紅素成正比，測定450nm下的吸光度的減少來計算血清中直接膽紅素的含量。本發(fā)明組方科學(xué)，新穎獨特，易生產(chǎn)，性能穩(wěn)定，保存期長，成本低，無環(huán)境污染，是測定膽紅素試劑上的創(chuàng)新。
具體實施例方式以下結(jié)合具體情況和實施例對本發(fā)明的具體實施方式
作詳細說明。實施例1本發(fā)明在具體實施中，由試劑1和試劑2組成，其中試劑1是，由鄰苯二甲酸鉀鈉 20. 4g、氫氧化鈉2. 2g、聚乙二醇辛基苯基醚0. 25ml、鹽酸羥胺1. 0g，加蒸餾水至IOOOml混勻組成，PH值為5. 0 ；試劑2是，由亞硝酸鈉0. 51g、氫氧化鈉0. lg、碳酸鈉0. 2g，加蒸餾水至IOOOml混勻組成，PH值為12。用本實施例的亞硝酸鈉氧化法測定直接膽紅素的試劑基于下列原理測定直接膽紅素直接膽紅素被亞硝酸鈉氧化成膽綠素，而間接膽紅素在抑制劑作用下不被氧化，DBil 的減少引起在波長450nm處吸光度的下降，吸光度的減少和血清中的膽紅素成正比，測定 450nm下的吸光度的減少來計算血清中直接膽紅素的含量。溫度37 °C ；比色杯光徑1. Ocm波長450nm樣品和標(biāo)準(zhǔn)品各10 μ 1 ；所說的樣品為被測品，即血清、血漿或尿液，所說的標(biāo)準(zhǔn)品為具有溯源性的定值血清，以下同；試劑1(簡稱R1,以下同)240 μ 1 ；試劑2 (簡稱R2,以下同)60 μ 1樣品加札混勻，370C孵育5min后讀取吸光度A1 ；加入&混勻，37°C孵育5min后讀取吸光度A2,前后吸光度差ΔΑ = A2-A10計算
ΔΑ樣品
直接膽紅素濃度(_ol/L)=標(biāo)準(zhǔn)品濃度X -
ΔΑ標(biāo)準(zhǔn)
所說的樣品加入試劑1與加入試劑2后兩次吸光度的差；ΔΑβ ι為標(biāo)準(zhǔn)品加入試劑1與加入試劑2后兩次吸光度的差(以下同)。實施例2本發(fā)明還可是由試劑1和試劑2組成，其中試劑1是，由鄰苯二甲酸鉀鈉10. 2g、氫氧化鈉1. 8g、聚乙二醇辛基苯基醚0. 10ml、鹽酸羥胺0. 5g，加蒸餾水至IOOOml混勻組成，PH 值為4. 5 ；試劑2是，由亞硝酸鈉0. 32g、氫氧化鈉0. 05g、碳酸鈉0. 10g，加蒸餾水至IOOOml 混勻組成，PH值為11。本實施例2的試劑測定直接膽紅素的方法同實施例1，不再重述。實施例3本發(fā)明由試劑1和試劑2組成，其中試劑1是，由鄰苯二甲酸鉀鈉30. 6g、氫氧化鈉2. 6g、聚乙二醇辛基苯基醚1. 0ml、鹽酸羥胺1. 5g，加蒸餾水至IOOOml混勻組成，PH值為 5. 5 ；試劑2是，由亞硝酸鈉0. 96g、氫氧化鈉0. 15g、碳酸鈉0. 30g，加蒸餾水至IOOOml混勻組成，PH值為13。本實施例3的試劑測定直接膽紅素的方法同實施例1，不再重述。本發(fā)明試劑進行了性能檢測，并與現(xiàn)有的釩酸氧化法測定直接膽紅素的試劑進行臨床樣品對比試驗，結(jié)果如下儀器HITICH7060全自動生化分析儀準(zhǔn)確度試驗取RANDOX質(zhì)控品正常值和異常值，用本發(fā)明試劑進行測試，每個濃度樣品重復(fù)測試3次。
權(quán)利要求
1.一種亞硝酸鈉氧化法測定直接膽紅素的試劑，其特征在于，由試劑1和試劑2組成， 其中試劑1是，每IOOOml的試劑1，由鄰苯二甲酸鉀鈉10. 2 30. 6g、氫氧化鈉1. 8 2. 6g、 聚乙二醇辛基苯基醚0. 10 1. 0ml、鹽酸羥胺0. 5 1. 5g和余量為水組成，其中，先將鄰苯二甲酸鉀鈉、氫氧化鈉、聚乙二醇辛基苯基醚和鹽酸羥胺混合在一起，加水至IOOOml溶解拌勻，PH值為4. 5 5. 5 ；試劑2是，每IOOOml的試劑2，由亞硝酸鈉0. 32 0. 96g、氫氧化鈉0. 05 0. 15g、碳酸鈉0. 10 0. 30g和余量為水組成，其中，先將亞硝酸鈉、氫氧化鈉和碳酸鈉混合在一起，加水至IOOOml溶解拌勻，PH值為11 13。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亞硝酸鈉氧化法測定直接膽紅素的試劑，其特征在于，所說的試劑1是，由鄰苯二甲酸鉀鈉20. 4g、氫氧化鈉2. 2g、聚乙二醇辛基苯基醚0. 25ml、鹽酸羥胺1. 0g，加蒸餾水至IOOOml混勻組成，PH值為5. 0 ；試劑2是，由亞硝酸鈉0. 51g、氫氧化鈉 0. lg、碳酸鈉0. 2g，加蒸餾水至IOOOml混勻組成，PH值為12。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亞硝酸鈉氧化法測定直接膽紅素的試劑，其特征在于，所說的試劑1是，由鄰苯二甲酸鉀鈉10. 2g、氫氧化鈉1. Sg、聚乙二醇辛基苯基醚0. 10ml、鹽酸羥胺0. 5g，加蒸餾水至IOOOml混勻組成，PH值為4. 5 ；試劑2是，由亞硝酸鈉0. 32g、氫氧化鈉 0. 05g、碳酸鈉0. 10g，加蒸餾水至IOOOml混勻組成，PH值為11。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亞硝酸鈉氧化法測定直接膽紅素的試劑，其特征在于，所說的試劑1是，由鄰苯二甲酸鉀鈉30. 6g、氫氧化鈉2. 6g、聚乙二醇辛基苯基醚1. 0ml、鹽酸羥胺1. 5g，加蒸餾水至IOOOml混勻組成，PH值為5. 5 ；試劑2是，由亞硝酸鈉0. 96g、氫氧化鈉 0. 15g、碳酸鈉0. 30g，加蒸餾水至IOOOml混勻組成，PH值為13。
全文摘要
本發(fā)明涉及亞硝酸鈉氧化法測定直接膽紅素的試劑，可有效解決線性范圍寬、抗干擾性強、反應(yīng)曲線規(guī)范、能迅速達到終點且測定的準(zhǔn)確度和精密度高且能實際應(yīng)用無污染環(huán)境的問題，方法是，試劑1是，將鄰苯二甲酸鉀鈉10.2～30.6g、氫氧化鈉1.8～2.6g、聚乙二醇辛基苯基醚0.10～1.0ml和鹽酸羥胺0.5～1.5g混合在一起，加水至1000ml溶解拌勻，pH值為4.5～5.5；試劑2是，由亞硝酸鈉0.32～0.96g、氫氧化鈉0.05～0.15g、碳酸鈉0.10～0.30g混合在一起，加水至1000ml溶解拌勻，pH值為11～13，本發(fā)明組方科學(xué)，易生產(chǎn)，性能穩(wěn)定，成本低，無環(huán)境污染。
文檔編號G01N21/75GK102226769SQ201110064380
公開日2011年10月26日 申請日期2011年3月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月17日
發(fā)明者李瑾, 牛好偉, 王玉珠, 王玉金, 邊倩茹 申請人:鄭州蘭森生物技術(shù)有限公司