專(zhuān)利名稱(chēng)：測(cè)定含朱砂的藥物中可溶性汞和價(jià)態(tài)汞含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種采用仿生提取-ICP-MS法測(cè)定含朱砂的藥物中可溶性汞含量的方法，本發(fā)明也涉及ー種采用仿生提取-HPLC-ICP-MS法測(cè)定含朱砂的藥物中可溶性?xún)r(jià)態(tài)汞含量的方法。
背景技術(shù)：
朱砂為我國(guó)常用的礦物類(lèi)中藥，臨床應(yīng)用的歷史已有幾千年，最早入藥的記載為《神農(nóng)本草經(jīng)》，可內(nèi)服外用且用途廣泛。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為朱砂具有清心鎮(zhèn)驚、安神解毒等功能，被某些中醫(yī)列為鎮(zhèn)靜安神藥之首。自20世紀(jì)50年代以來(lái)，朱砂的鎮(zhèn)靜安神作用經(jīng)現(xiàn)代 藥理證實(shí)，效果顯著。據(jù)初步統(tǒng)計(jì)，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中收載的含有朱砂的中成藥約400個(gè)。說(shuō)明朱砂對(duì)于中藥來(lái)說(shuō)，有著極其重要的作用。朱砂中所含大量汞具有有效性和有毒性雙重作用，但由于其用法用量缺乏科學(xué)依據(jù)，含其制劑中缺乏相關(guān)質(zhì)控方法，導(dǎo)致了用藥的安全性隱患和國(guó)際化認(rèn)可的阻礙。I、朱砂所含的汞具有有效性和有毒性?xún)芍刈饔?，安全性限量的缺乏影響其用藥安全。它作為?fù)方藥物的組成部分，既是藥物的有效成分，也是有毒成分。由于缺乏用法用量的科學(xué)依據(jù)，其安全劑量難以合理評(píng)價(jià)，用藥安全問(wèn)題一直困擾著我國(guó)中藥行業(yè)。2、朱砂藥效、毒性的物質(zhì)基礎(chǔ)不明嚴(yán)重阻礙了其獲得國(guó)際認(rèn)可國(guó)際上難以認(rèn)可高含量的汞中藥。朱砂及其制劑若以總汞為標(biāo)準(zhǔn)，該類(lèi)中藥的含量將大大高于國(guó)際限度標(biāo)準(zhǔn)，使其應(yīng)用受到限制，從而長(zhǎng)期以來(lái)一直被國(guó)際上認(rèn)為有毒而限制銷(xiāo)售和進(jìn)ロ。以汞總量作為控制標(biāo)準(zhǔn)缺乏合理性。研究表明，汞存在多種不同價(jià)態(tài)，其毒性存在較大的差異。朱砂現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅對(duì)總量汞進(jìn)行控制，對(duì)可溶性汞及價(jià)態(tài)汞的含量未進(jìn)行控制，不能反映朱砂在人體實(shí)際應(yīng)用的情況，以元素的總量衡量是否安全是不合理的，也是不科學(xué)的。3、朱砂的現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)無(wú)法體現(xiàn)有效性和安全性，用法用量缺乏依據(jù)我國(guó)的2010年版《中國(guó)藥典》朱砂項(xiàng)下僅收載了的氧化還原滴定法的含量測(cè)定方法；缺乏有效性成分的科學(xué)質(zhì)控方法及有毒性成分的限量控制方法；并且其用法用量缺乏科學(xué)依據(jù)，急需進(jìn)一歩提高完善。4、大量含朱砂的制劑缺乏相關(guān)研究和質(zhì)控方法，導(dǎo)致實(shí)際應(yīng)用的安全性問(wèn)題現(xiàn)有的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中收載了含朱砂的成方制劑約460種；目前中國(guó)藥典2010年版一部中收錄含朱砂品種有34種、含雄黃和朱砂的品種有23個(gè)，未收載到中國(guó)藥典2010年版一部的品種中，含朱砂的為227種，含雄黃和朱砂的有94種。其中小兒用藥品種就有66種之多。如何做到對(duì)上述制劑的嚴(yán)格質(zhì)控和安全使用，急需借鑒朱砂的質(zhì)控方法。根據(jù)《中國(guó)藥典》2010年版一部，朱砂的主要成分為硫化汞(HgS)計(jì)，還含有少量游離汞和可溶性汞鹽，硫化汞為典型的的共價(jià)化合物，溶解度很小(容積度Ksp = 10_52)，不溶于熱鹽酸和硝酸，但可溶于混合酸；溶于堿金屬硫化物溶液中，遇高熱可分解成汞?，F(xiàn)有研究證明，朱砂在人工胃液中有可溶性汞鹽溶出，在人工腸液中溶解較少。隨著人們對(duì)朱砂及含朱砂制劑的日益重視，現(xiàn)通常認(rèn)為朱砂的藥效及毒性主要來(lái)自其所含的少量可溶性汞，故對(duì)朱砂中的可溶性汞的研究近來(lái)呈上升趨勢(shì)。為更好評(píng)價(jià)朱砂的藥效及毒性作用，有必要對(duì)其的可溶性汞進(jìn)行研究。通過(guò)文獻(xiàn)查閱，發(fā)現(xiàn)每篇文獻(xiàn)報(bào)道的朱砂中可溶性汞方法基本相似，均采用人工胃液或人工腸液作為提取溶剤，但得到的可溶性汞含量相差較大。另朱砂飲片與復(fù)方制劑中的可溶性汞含量也不匹配，各文獻(xiàn)結(jié)果也不全一致。分析原因，主要與樣品處理方法有夫，為能較好提取出朱砂中可溶性汞，有必要對(duì)供試品前處理方法進(jìn)行詳細(xì)的研究。自然界的汞主要以金屬汞 、無(wú)機(jī)汞(Hg2+，Hg+)和有機(jī)汞(甲基萊，こ基汞)形式存在，其毒性大小為甲基汞>こ基汞> Hg2+ > Hg+ο可溶性汞具有藥效及毒性?xún)煞矫孀饔?，其汞存在的形式?duì)朱砂的毒性存在一定意義，因此需要對(duì)朱砂中所含的可溶性汞進(jìn)行價(jià)態(tài)研究，以便控制朱砂的毒性。因此對(duì)含朱砂的藥物中可溶性汞和價(jià)態(tài)汞含量的測(cè)定方法進(jìn)行深入的研究，對(duì)保障用藥安全和促進(jìn)國(guó)際認(rèn)可有極為重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，本發(fā)明在明確了朱砂的基源及品種的基礎(chǔ)上，對(duì)具相關(guān)性的藥材、飲片和制劑進(jìn)行研究，同時(shí)對(duì)朱砂藥材及飲片建立了體現(xiàn)有效性和安全性的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)代表性制劑建立了科學(xué)的質(zhì)控方法。在朱砂及含其制劑的質(zhì)量控制方法和安全性研究方面取得了突破性的進(jìn)展，為人民用藥安全提供了保障。本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種測(cè)定含朱砂的藥物中可溶性汞的含量的方法，其特征在于該方法包括步驟(I)用仿生溶劑-超聲處理和/或磁力攪拌提取含朱砂的藥物中的可溶性汞；(3) ICP-MS法測(cè)定含朱砂的藥物中可溶性汞的含量。本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“含朱砂的藥物”是指含有朱砂成分的藥物。本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“ICP-MS法，，是指電感耦合等離子體質(zhì)譜法。根據(jù)本發(fā)明的ー個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，所述含朱砂的藥物選自朱砂藥材、朱砂飲片和含朱砂的制劑。根據(jù)本發(fā)明的ー個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，所述步驟(I)中的仿生溶劑選自人工胃液(胃蛋白酶活力大于等于I : 27000)、人工腸液或其組合。從模擬人體環(huán)境的角度而言，朱砂經(jīng)胃腸進(jìn)行吸收，人工胃液與人工腸液是與人體胃液與腸液相當(dāng)?shù)娜芤?，因此朱砂?yīng)先用人工胃液提取，再用人工腸液提取，兩者結(jié)果相加才能體現(xiàn)朱砂在人體內(nèi)的吸收情況。但具體實(shí)驗(yàn)吋，因?yàn)榉蛛x朱砂顆粒有困難，因此操作性不強(qiáng)。如果分別用人工胃液和人工腸液提取的結(jié)果之和，與先用人工胃液提取，分離殘?jiān)儆萌斯つc液提取的結(jié)果之和相比，結(jié)果相當(dāng)或較大，則可用前者代替后者，以保證試驗(yàn)的簡(jiǎn)便性及可操作性。本發(fā)明人分別進(jìn)行了這兩種提取方法的比較，結(jié)果人工胃液(先)+人エ腸液(后)與人工胃液+人工腸液的含量基本相當(dāng)，但后者含量普遍較前者高，主要由于經(jīng)人工胃液提取后的殘?jiān)赡艽嬖谝欢ǖ膿p失。因此，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，當(dāng)測(cè)定朱砂藥材和飲片時(shí)，可以先用人工胃液提取，再用人エ腸液提取經(jīng)人工胃液提取后的殘?jiān)灰部梢苑謩e用人工胃液與人工腸液提取，然后采用兩者之和。當(dāng)測(cè)定朱砂制劑時(shí)，僅采用人工腸液提取。制劑中人工胃液(先)+人工腸液(后)與人工腸液的含量基本相當(dāng)，說(shuō)明制劑中朱砂主要經(jīng)胃吸收，到腸后吸收較少，因此可用人工腸液直接提取發(fā)明人對(duì)分別采用超聲6小時(shí)、振搖24小時(shí)，不同轉(zhuǎn)速溶出24小時(shí)的方法提取朱砂藥材和飲片溶液，結(jié)果表明，超聲提取的方法得到的可溶性汞含量最高，說(shuō)明該方法可有效提取出可溶性汞。溶出是模擬人體環(huán)境最佳的方式，但由于朱砂密度較大，一直沉于瓶底，無(wú)法有效混懸，影響了溶出了效果。從結(jié)果可顯示，每分鐘250轉(zhuǎn)的結(jié)果高于每分鐘100轉(zhuǎn)的結(jié)果。振搖提取出的可溶性汞含量較少，主要原因也是由于朱砂密度較大，振搖不完全。上述的溶出度方法和振搖的方法均無(wú)法有效代表朱砂在體內(nèi)的吸收情況，超聲的方法雖遠(yuǎn)較體內(nèi)實(shí)際吸收方式劇烈，但其所測(cè)得的可溶性汞含量是朱砂在機(jī)體所能吸收的最大可溶性汞量，能科學(xué)的反映出朱砂中實(shí)際存在的可溶性汞含量，從而排除了因?yàn)椴±?、生理、人種、年齡、性別等各種因素帶來(lái)的誤差，使朱砂能在同一條件下進(jìn)行質(zhì)量比較，最大限度體現(xiàn)了朱砂產(chǎn)生可溶性汞的含量，對(duì)朱砂的藥效及毒性能從根本上進(jìn)行認(rèn)識(shí)。因此，本發(fā)明優(yōu)選采用超聲的提取方式。37°C超聲時(shí)間為2小時(shí)后，可溶性汞的含量基本趨于穩(wěn)定，從簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)操作考慮，超聲2小時(shí)可以滿(mǎn)足目前提取效率的要求。但需注 意超聲時(shí)應(yīng)每隔10-15分鐘振搖I次，以避免細(xì)小朱砂顆粒粘附于瓶壁，無(wú)法完全超聲。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，也可以采用磁力攪拌的方法，經(jīng)試驗(yàn)，與超聲處理結(jié)果一致。因此，根據(jù)本發(fā)明的ー個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，所述步驟(2)中的超聲處理/磁力攪拌為大于或等于2小吋。朱砂樣品經(jīng)超聲/磁力攪拌2小時(shí)后，混懸液體處于顆粒高度運(yùn)動(dòng)狀態(tài)，若此時(shí)取樣，溶液中充滿(mǎn)未溶解的朱砂細(xì)小顆粒，測(cè)得的可溶性汞含量會(huì)偏高，不能準(zhǔn)確代表實(shí)際溶劑中的可溶性汞。只有待混懸液中未溶解的朱砂細(xì)小顆粒全部沉降下來(lái)后，此時(shí)測(cè)得的可溶性汞含量才是實(shí)際溶出的量，因此優(yōu)選地，超聲/磁力攪拌后的朱砂提取溶液進(jìn)ー步進(jìn)行凈化處理。因此，根據(jù)本發(fā)明的ー個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，所述方法還包括步驟(2)對(duì)步驟(I)提取得到的溶液進(jìn)行凈化。發(fā)明人推測(cè)經(jīng)過(guò)仿生溶剤-超聲處理和/或磁力攪拌提取的朱砂溶液中汞可能有部分大分子化合物存在，浄化方式不恰當(dāng)會(huì)造成大分子汞化合物除去。因此，根據(jù)本發(fā)明的ー個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，所述步驟(2)中采用(a)先靜置，再用濾膜進(jìn)行浄化；或(b)采用靜置進(jìn)行凈化。所述(a)中的靜置時(shí)間為大于5小時(shí)，優(yōu)選6-8小時(shí)；所述步驟(b)中的靜置時(shí)間為大于18小時(shí)，優(yōu)選20-24小時(shí)。本發(fā)明人選擇顯微鏡法進(jìn)行朱砂樣品溶液粒徑的考察。采用OLYMPUS CHA顯微鏡進(jìn)行測(cè)定，倍數(shù)為40X10倍。根據(jù)測(cè)得的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)溶液中大多數(shù)粒子均在Iym左右，有個(gè)別大于I μ m但均小于3 μ m,隨著靜置時(shí)間的増加，大粒子有減少的趨勢(shì)，但趨勢(shì)不甚明顯。由此可判斷，可溶性汞在溶液中以Iym左右的粒子形式存在，因此如果浄化方式不當(dāng)，即會(huì)造成含量數(shù)據(jù)的不準(zhǔn)確和平行性較差。根據(jù)本發(fā)明的ー個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，在靜置一段時(shí)間后，選擇孔徑大小約為10 15 μ m+2 3 μ m的雙層濾膜進(jìn)行過(guò)濾,例如10 μ m+3 μ m和10 μ m+2 μ m孔徑的濾膜，能兼顧浄化和含量。為避免相互污染，濾膜應(yīng)選用一次性的針頭濾器。
根據(jù)本發(fā)明的ー個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，當(dāng)采用靜置方式對(duì)朱砂提取溶液進(jìn)行凈化吋，靜置時(shí)間為大于18小時(shí),優(yōu)選20-24小時(shí)。根據(jù)本發(fā)明的ー個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，所述步驟(I)提取得到的溶液中存在小粒徑懸浮顆粒、絡(luò)合物和離子態(tài)三種狀態(tài)。因采用人工胃液或人工腸液提出的溶液中可溶性汞含量較高，因此最好進(jìn)ー步稀釋?zhuān)员ＷC稀釋溶液中可溶性汞的含量穩(wěn)定。根據(jù)本發(fā)明的ー個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，用稀釋溶劑稀釋所述步驟(2)浄化得到的溶液。進(jìn)ー步地，為了使大分子汞化合物完全解離，以便于ICP-MS能更加準(zhǔn)確地測(cè)定，稀釋后的溶液可進(jìn)行消解處理。根據(jù)本發(fā)明ー個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方式，將稀釋后的溶液置頂空進(jìn)樣瓶中，加硝酸1.0 5. 0ml、鹽酸O 2ml，加蓋密封，70°C 100°C水浴水解I 3小時(shí)，置量瓶中，用水稀釋至刻度備用。 朱砂藥材和飲片在人工胃液和人工腸液中，使用不同的稀釋溶劑，結(jié)果趨勢(shì)基本一致，其中鹽酸濃度越高，測(cè)得值越大，估計(jì)高濃度鹽酸可能會(huì)加強(qiáng)儀器信號(hào)，導(dǎo)致含量增加的假象，應(yīng)該避免使用。鹽酸溶液濃度在O. 25mol/L以下，結(jié)果與其他溶劑基本一致，由于可溶性汞在酸溶液中較穩(wěn)定，鹽酸系統(tǒng)溶液與硝酸系統(tǒng)溶液相比，數(shù)據(jù)重現(xiàn)性更好，可能與硝酸具一定氧化性有夫。本發(fā)明所用人工胃液配制時(shí)采用了鹽酸，因此優(yōu)選鹽酸系統(tǒng)溶液作為稀釋溶剤。根據(jù)本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，選擇O. 125mol/L鹽酸溶液作為稀釋溶齊 。朱砂中可溶性汞的含量較小，因此采用靈敏度較高的電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)進(jìn)行測(cè)定，因此，根據(jù)本發(fā)明的ー個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，所述步驟(3)中ICP-MS的質(zhì)譜條件為采用同軸霧化器或其他霧化器；以高純液態(tài)氬氣為工作氣體和載氣；以氦氣或氫氣作為反應(yīng)氣。本發(fā)明還研究了高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定朱砂及朱砂粉中可溶性汞價(jià)態(tài)的含量測(cè)定方法。自然界的汞主要以金屬汞、無(wú)機(jī)汞(Hg2+，Hg+)和有機(jī)汞(甲基萊，こ基汞)形式存在，其毒性大小為甲基汞>こ基汞> Hg2+ > Hg+ο可溶性汞具有藥效及毒性?xún)煞矫孀饔?，其汞存在的形式?duì)朱砂的毒性存在一定意義，因此需要對(duì)朱砂中所含的可溶性汞進(jìn)行價(jià)態(tài)研究，以便控制朱砂的毒性。因此，本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種測(cè)定含朱砂的藥物中可溶性?xún)r(jià)態(tài)汞含量的方法，其特征在于該方法包括以下步驟(I)用仿生溶剤-超聲處理和/或磁力攪拌提取含朱砂的藥物中的可溶性?xún)r(jià)態(tài)汞；(2)可選的對(duì)步驟⑴提取得到的溶液進(jìn)行凈化；(3)HPLC-ICP-MS法測(cè)定含朱砂的藥物中可溶性?xún)r(jià)態(tài)汞的含量。本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“HPLC-ICP-MS法”是指高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜法。本發(fā)明測(cè)定含朱砂的藥物中可溶性?xún)r(jià)態(tài)汞含量的方法中的步驟(I)和(2)與本發(fā)明測(cè)定含朱砂的藥物中可溶性汞含量的方法中的步驟(I)和(2)完全一致；即，對(duì)按照上述(I)提取得到的溶液，任選經(jīng)過(guò)靜置和稀釋溶劑稀釋后，再用HPLC-ICP-MS法測(cè)定其中可溶性?xún)r(jià)態(tài)汞的含量。根據(jù)本發(fā)明的ー個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，所述可溶性?xún)r(jià)態(tài)汞選自ー價(jià)汞、ニ價(jià)汞、甲基汞或こ基萊。根據(jù)本發(fā)明的ー個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，所述步驟(3)中HPLC-ICP-MS法的色譜條件為色譜柱為C18柱；流動(dòng)相由こ酸銨(含O. 12% L-半胱氨酸，調(diào)節(jié)pH值至7. 5)和甲醇組成。根據(jù)本發(fā)明的ー個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，所述色譜柱為ZORBAX XDB-C18柱；所述流動(dòng)相的流速為I. Oml/min ;所述こ酸銨溶液的濃度為O. Olmol/L ;所述こ酸銨(含O. 12% L-半胱氨酸，調(diào)節(jié)pH值至7. 5)甲醇=92 8。根據(jù)本發(fā)明的ー個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，所述步驟(3)中HPLC-ICP-MS法的質(zhì)譜條件為采用同軸霧化器或其他霧化器；以高純液氬為工作氣體和載氣；以氦氣或氫氣作為反應(yīng)氣。
本發(fā)明測(cè)定含朱砂的藥物中可溶性汞和價(jià)態(tài)汞含量的方法的優(yōu)點(diǎn)如下I、采用模擬體內(nèi)的提取方式，創(chuàng)建了可溶性汞與價(jià)態(tài)汞的通用提取方法，有效代表朱砂藥效和毒性主要成分體內(nèi)吸收量，為準(zhǔn)確測(cè)定可溶性汞及價(jià)態(tài)汞提供可靠方法；2、采用ICP-MS和HPLC_ICP_MS建立了朱砂藥效和毒性主要成分的測(cè)定方法，方法靈敏、準(zhǔn)確，填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)空白。


圖I為實(shí)施例I “朱砂藥材中可溶性?xún)r(jià)態(tài)汞的含量測(cè)定”項(xiàng)下對(duì)照品(上圖)和供試品(下圖)的高效液相色譜圖，其中Hg(I)、Hg(II) ,MeHg,EtHg分別代表ー價(jià)汞、ニ價(jià)
汞、甲基汞、こ基汞。圖2為實(shí)施例I測(cè)得的各批朱砂藥材中可溶性汞的含量圖；圖3為實(shí)施例2測(cè)得的各批朱砂飲片中可溶性汞的含量圖；圖4為實(shí)施例I測(cè)得的各批朱砂藥材中可溶性?xún)r(jià)態(tài)汞的含量圖；圖5為實(shí)施例2測(cè)得的各批朱砂飲片中可溶性?xún)r(jià)態(tài)汞的含量圖；圖6為實(shí)施例3測(cè)得的各批朱砂制劑中可溶性汞的含量圖；圖7為實(shí)施例3測(cè)得的各批朱砂制劑中可溶性?xún)r(jià)態(tài)汞的含量圖。
具體實(shí)施例方式以下通過(guò)具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)ー步闡述本發(fā)明，但以下具體實(shí)施例不對(duì)本發(fā)明構(gòu)成任何形式的限制。實(shí)施例I朱砂藥材中可溶性汞的含量測(cè)定按照電感耦合等離子體質(zhì)譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄XI D)測(cè)定。試藥和儀器美國(guó)Agilent公司7700ce型電感稱(chēng)合等離子體質(zhì)譜儀；必能信超聲(上海)有限公司B9500S-DTH型超聲波清洗機(jī)(功率300W，頻率45kHz);美國(guó)Millipore公司Milli-Q超純水機(jī)。汞標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000mg/L，批號(hào)HC931554)，購(gòu)自Merk公司。硝酸、鹽酸均為優(yōu)級(jí)純(Merck公司)；胃蛋白酶為生化試劑，酶活力為I : 27000，批號(hào)為100710，購(gòu)自上?；菖d生化試劑有限公司；胰酶為生化試劑，酪蛋白轉(zhuǎn)化カ彡25.0，批號(hào)為F20100714，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；水為經(jīng)Milli-Q處理的去離子水。高純液態(tài)氬氣(純度> 99. 99% )和氦氣(純度為99. 999% )由上海成功氣體エ業(yè)有限公司提供。ICP-MS 工作條件Agilent Micromist Nebulizer同軸霧化器；石英一體化炬管，2. 5mm中心通道；石英雙通道型霧化室；八級(jí)桿碰撞反應(yīng)池；piltier半導(dǎo)體控溫于約2°C ;鎳采樣錐和截取錐；以高純液氬為工作氣體和載氣；以氦氣作為反應(yīng)氣。7700ce型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀具體操作條件和采集參數(shù)見(jiàn)表I。表I、Agilent 7700Ce ICP-MS 儀器工作參數(shù)
權(quán)利要求
1.測(cè)定含朱砂的藥物中可溶性汞含量的方法，其特征在于該方法包括步驟 (1)用仿生溶劑-超聲處理和/或磁力攪拌提取含朱砂的藥物中的可溶性汞； (3) ICP-MS法測(cè)定含朱砂的藥物中可溶性汞的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述含朱砂的藥物選自朱砂藥材、朱砂飲片和含朱砂的制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)中的仿生溶劑選自人工胃液、人工腸液或其組合。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)中的超聲處理或磁力攪拌時(shí)間為大于或等于2小吋。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述方法還包括步驟 (2)對(duì)步驟(I)提取得到的溶液進(jìn)行凈化。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟⑵中采用(a)先靜置，再用濾膜進(jìn)行凈化；或(b)采用靜置進(jìn)行凈化。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述濾膜為雙層濾膜。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述雙層濾膜孔徑大小約為10 15 μ m+2 3 μ m。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述(a)中的靜置時(shí)間為大于5小時(shí)，優(yōu)選6-8小時(shí)。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述步驟(b)中的靜置時(shí)間為大于18小時(shí)，優(yōu)選20-24小時(shí)。
11.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)提取得到的溶液中存在小粒徑懸浮顆粒、絡(luò)合物和離子態(tài)三種狀態(tài)。
12.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，用稀釋溶劑稀釋所述步驟(2)浄化得到的溶液并進(jìn)行消解。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述稀釋溶劑為鹽酸溶液。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，所述鹽酸的濃度為O.0125 O.250mol/L，優(yōu)選 O. 125mol/L。
15.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中ICP-MS的質(zhì)譜條件為采用同軸霧化器或其他霧化器；以高純液態(tài)氬氣為工作氣體和載氣；以氦氣或氫氣作為反應(yīng)氣。
16.測(cè)定含朱砂的藥物中可溶性?xún)r(jià)態(tài)汞的含量的方法，其特征在于該方法包括以下步驟 (I)用仿生溶劑-超聲處理和/或磁力攪拌提取含朱砂的藥物中的可溶性?xún)r(jià)態(tài)汞； (3)HPLC-ICP-MS法測(cè)定含朱砂的藥物中可溶性?xún)r(jià)態(tài)汞的含量。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，所述含朱砂的藥物選自朱砂藥材、朱砂飲片和含朱砂的制劑。
18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，所述可溶性?xún)r(jià)態(tài)汞選自ー價(jià)汞、ニ價(jià)汞、甲基汞或こ基汞。
19.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)中的仿生溶劑選自人工胃液、人工腸液或其組合。
20.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)中的超聲處理或磁力攪拌時(shí)間為大于或等于2小吋。
21.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，所述方法還包括步驟 (2)對(duì)步驟(I)提取得到的溶液進(jìn)行凈化。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中采用(a)先靜置，再用濾膜進(jìn)行浄化；或(b)采用靜置進(jìn)行凈化。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于，所述濾膜為雙層濾膜。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其特征在于，所述雙層濾膜孔徑大小約為10 15 μ m+2 3 μ m。
25.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于，所述(a)中的靜置時(shí)間為大于5小吋，優(yōu)選6-8小時(shí)。
26.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于，所述步驟(b)中的靜置時(shí)間為大于18小時(shí)，優(yōu)選20-24小時(shí)。
27.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)提取得到的溶液中存在小粒徑懸浮顆粒、絡(luò)合物和離子態(tài)三種狀態(tài)。
28.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其特征在于，用稀釋溶劑稀釋所述步驟(2)浄化得到的溶液。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其特征在于，所述稀釋溶劑為鹽酸溶液。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其特征在干，所述鹽酸的濃度為0.0125 O.250mol/L，優(yōu)選 O. 125mol/L。
31.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中HPLC-ICP-MS法的色譜條件為色譜柱為C18柱；流動(dòng)相由こ酸銨和甲醇組成。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述色譜柱為ZORBAXXDB-C18柱。
33.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述流動(dòng)相的流速為O.7 I. 5ml/min,優(yōu)選 I. Oml/min。
34.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述こ酸銨含有O.05 O. 25% L的半胱氨酸，優(yōu)選所述こ酸銨含有O. 12% L的半胱氨酸；其pH值為6 8，優(yōu)選7. 5。
35.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其特征在干，所述こ酸銨溶液的濃度為O.05 O.02mol/L，優(yōu)選 O. 01mol/L。
36.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其特征在于，所述こ酸銨甲醇=85 95 15 5，優(yōu)選 92 8。
37.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中HPLC-ICP-MS法的質(zhì)譜條件為采用同軸霧化器或其他霧化器；以高純液氬為工作氣體和載氣；以氦氣或氫氣作為反應(yīng)氣。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)測(cè)定含朱砂的藥物中可溶性汞含量的方法，其特征在于該方法包括步驟(1)用仿生溶劑-超聲處理和/或磁力攪拌提取含朱砂的藥物中的可溶性汞；(2)可選的對(duì)步驟(1)提取得到的溶液進(jìn)行凈化；(3)ICP-MS法測(cè)定含朱砂的藥物中可溶性汞的含量。本發(fā)明還公開(kāi)一種測(cè)定含朱砂的藥物中可溶性?xún)r(jià)態(tài)汞的含量的方法。本發(fā)明通過(guò)采用模擬體內(nèi)的提取方式以及采用ICP-MS和HPLC-ICP-MS建立了朱砂藥效和毒性主要成分的測(cè)定方法，該方法靈敏、準(zhǔn)確。
文檔編號(hào)G01N30/72GK102692446SQ20111006768
公開(kāi)日2012年9月26日 申請(qǐng)日期2011年3月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月21日
發(fā)明者于建, 吳趙云, 夏晶, 孫健, 孟茜, 季申, 張甦, 張道廣, 李麗敏, 毛丹, 毛秀紅, 王少敏, 王枚博, 王柯, 王欣美, 簡(jiǎn)龍海, 胡青, 苗水, 許勇, 郟征偉, 鄭榮, 鐘吉強(qiáng), 陸繼偉, 陳銘, 陳靜 申請(qǐng)人:上海市食品藥品檢驗(yàn)所