專利名稱：麝香痔瘡栓中麝香酮的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種復(fù)方中藥制劑的檢測方法，具體一種麝香痔瘡栓中麝香酮的檢測方法。
背景技術(shù)：
人工麝香是目前天然麝香的一種替代品，已被廣泛用于各種藥劑配方，如由馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司獨家生產(chǎn)的復(fù)方中藥栓劑-麝香痔瘡栓(專利號02139187)和痔瘡膏(專利號02139188)，該類產(chǎn)品是由牛黃、珍珠、麝香酮、三七、五倍子、冰片、顛茄流浸膏、爐甘石等多種組份制成的栓劑和膏劑，具有清熱解毒，消腫止痛，止血生肌功能。由于麝香屬于貴細(xì)藥材，用量少但藥理作用明顯，因此其成份含量變化會對栓劑的功效帶來重要影響，而栓劑中麝香酮含量的成份在下述情況都可能會發(fā)生變化1、不同批次的產(chǎn)品中麝香酮含量可能會因制劑工藝可接受的微小變化而發(fā)生變化，從而對產(chǎn)品的質(zhì)量控制具有指導(dǎo)意義；2、當(dāng)對產(chǎn)品存放一段時間后，麝香酮的含量也可能會變化，從而對藥品有效期的設(shè)定具有重要影響。由此，為了保證產(chǎn)品功效，對成品栓劑中麝香酮的測定必須進(jìn)行質(zhì)量控制環(huán)節(jié)。而目前為止，僅有文獻(xiàn)報告可以采用氣相色譜法對麝香酮進(jìn)行直接測定，但是對于含有麝香酮的復(fù)方中藥制劑如麝香痔瘡栓而言，由于該栓劑麝香酮含量少，而其它的成份多且復(fù)雜(主要已知成份就達(dá)8種)，一方面難以有效分離栓劑中的麝香酮，測試時供試樣品溶液制備困難，另一方面，控制色譜柱條件困難，這些都會對分析結(jié)果產(chǎn)生各種干擾，最終影響檢測的準(zhǔn)確性。因此，為保證藥品質(zhì)量，有必要建立更先進(jìn)，更有效，更靈敏專屬的方法既可以鑒別含有人工麝香的麝香痔瘡栓中麝香酮含量的有無、又可以準(zhǔn)確反映麝香酮的含量，有效提高麝香痔瘡栓的質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于解決上述問題，提供了一種麝香痔瘡栓中麝香酮的檢測方法， 解決了現(xiàn)有含有人工麝香的麝香痔瘡栓中麝香酮的檢測困難，供試樣品制備困難、檢測準(zhǔn)確性差，無法測定其含量的問題，操作簡單快速，準(zhǔn)確可靠，靈敏度、精密度高，從而對有效的控制麝香痔瘡栓質(zhì)量具有重要的指導(dǎo)意義。本發(fā)明麝香痔瘡栓中麝香酮的檢測方法包括以下步驟a.對照品溶液的制備對照品為麝香酮對照品，精密稱定，加無水乙醇制成對照品溶液；b.供試品溶液的制備供試品為含有人工麝香的麝香痔瘡栓，先用水搖勻溶解，再用石油醚萃取分離出麝香酮后再加入無水乙醇制成供試品溶液；c.分別吸取對照品溶液及樣品供試品溶液利用氣相色譜儀采用外標(biāo)法進(jìn)行氣相色譜法測定麝香酮的含量，控制色譜條件色譜柱采用彈性石英毛細(xì)管柱，固定相為聚乙二醇6000-20000毛細(xì)管柱(型號PEG-20M)的強極性毛細(xì)管柱，柱長為2_30m。步驟a中，對照品溶液的制備的具體方法為使用對照品為麝香酮對照品，精密稱定，加無水乙醇配制的對照品溶液的濃度為0. Ol-lOmg. mL—1，作為對照品溶液。步驟b中，相對于30g麝香痔瘡栓加水160_240ml溶解，將上述溶解液加入石油醚振搖提取1-4次，每次加入石油醚80-120ml進(jìn)行萃取，合并萃取液后自然揮干，干燥后得到干燥殘留物，將干燥殘留物采用無水乙醇溶解，控制溶液中干燥殘留物的濃度為 0. 01-30mg. mL—1即為供試品溶液。步驟b中，所述石油醚的萃取溫度控制在30-60°C。步驟c中，所述柱溫控制方法采用程序升溫起始溫度為100-180°C，保持3-15分鐘，以每分鐘0. I-IO0C的速率升溫至150-240°c，保持1_10分鐘，再以每分鐘5_30°C的速率升溫至200-280°C，保持3-15分鐘；優(yōu)選程序升溫為起始溫度為130°C，保持5分鐘，以每分鐘0. 8°C的速率升溫至180°C，保持2分鐘，再以每分鐘20°C的速率升溫至220°C，保持5 分鐘。進(jìn)一步的，考慮到供試品為復(fù)方中藥栓劑，要檢測其中麝香酮應(yīng)先進(jìn)行萃取，但是這類含有人工麝香中藥栓劑組分復(fù)雜且人工麝香使用量微小，類似結(jié)構(gòu)及性質(zhì)的成分在檢驗過程中會起干擾作用，而萃取時有可能會發(fā)生不僅萃取到麝香酮同時還會萃取到其它物質(zhì)，或者因為萃取過程不當(dāng)或方法不合理造成微量成份無法萃取出來，從而影響最終檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性甚至可行性，發(fā)明人根據(jù)藥物的性質(zhì)及相似相溶的原則問題，在保護(hù)或無破壞被研究的主要成分麝香酮的同時、通過改變不同主要成分的溶解度性質(zhì)和合理保護(hù)有效成份免受破壞(如麝香酮屬于揮發(fā)性物質(zhì)，溫度過高容易造成成分部分或全部丟失)以達(dá)到盡可能分離純化樣品的方法，非常適合復(fù)方中藥制劑的分離。針對麝香痔瘡栓的特點和檢測要求，需要事先提取供試樣品，為了盡可能的避免上述的各種干擾，發(fā)明人利用麝香酮具有極微溶于水的性質(zhì)(極微溶解系指溶質(zhì)lg(ml)能在溶劑1000-不到10000ml中溶解)，先采用一定量的水進(jìn)行溶解搖勻，再根據(jù)藥物的性質(zhì)及相似相溶的原理，采用石油醚振搖提取以保證栓劑中的主要成分麝香酮充分萃取出來，同時又不會萃取到其它成份；針對麝香痔瘡栓本身組份多及麝香中雄留烷衍生物檢驗干擾，麝香酮容易揮發(fā)的問題，石油醚的萃取溫度需要控制在30-60°C，在該溫度下，可以有效純化樣品，排除麝香痔瘡栓及麝香中雄留烷衍生物、膽留醇類、脂肪、蛋白質(zhì)、蠟及無機鹽(銨鹽、鈣鹽)的干擾，從而大大提高麝香酮的分離效果，且降低因成分揮發(fā)帶來的含量檢測的準(zhǔn)確性差的問題。所述萃取方法為，將80-120ml石油醚加入160-240ml溶解有麝香痔瘡栓的溶解液中，振搖后分離萃取液(石油醚層)，或者繼續(xù)再將80-120ml石油醚加入分離后的溶解液中，振搖后分離萃取液 (石油醚層)，以此萃取1-4次，合并萃取液，并采用自然揮干的方式獲得干燥殘留物，以防止干燥過程對主要成份麝香酮的損失或破壞，以達(dá)到純化供試樣品作用，利用不同成份在不同溶劑中的溶解性質(zhì)不一樣同時免受萃取過程中溫度對有效成分的影響，從而使產(chǎn)品純化，萃取出干燥殘留物中麝香酮濃度和純度都很高，損失達(dá)到最小，為下步采用外標(biāo)法進(jìn)行氣相色譜法對麝香酮的測定提供了有效保障。并且，為了保證制備的供試品溶液和對照品溶液的一致性，對于對照品和供試品均采用無水乙醇進(jìn)行溶解。進(jìn)一步的，發(fā)明人通過反復(fù)研究摸索發(fā)現(xiàn)，為保證檢測的準(zhǔn)確性和靈敏性，還需要對色譜柱條件進(jìn)行嚴(yán)格控制色譜柱使用彈性石英毛細(xì)管柱，固定相為聚乙二醇6000-20000毛細(xì)管柱(PEG-20M)的強極性毛細(xì)管柱，柱長為2_30m，特別優(yōu)選柱長為30m，內(nèi)徑為0. 32mm，膜厚度為0. 5um。配合程序化升溫過程，使得樣品分離效果明顯，樣品峰分離度及分離純度大幅度提高，滿足了檢測的準(zhǔn)確性和精確性要求，明顯改善中藥成分繁雜難分離的影響。有益效果1.本發(fā)明填補了含有人工麝香的復(fù)方制劑中麝香酮含量檢測的空白，不僅能夠有效鑒別栓劑中微量成份麝香酮的有無，更可以及時準(zhǔn)確檢測麝香酮的含量。2.通過對色譜條件的控制和選擇，對供試品用一定比例的水進(jìn)行前期初溶解分散處理，利用麝香酮具有極微溶于水的性質(zhì)使麝香酮在合適體積的水中先行溶解以提高麝香酮的萃取純度，最大程度的避免中藥栓劑樣品溶液中復(fù)雜的不溶于水的脂溶性或水難溶性成份在測定過程中的干擾作用。3.利用一定溫度的石油醚進(jìn)行至少1次的萃取以保證麝香酮溶于石油醚并被充分提取，利用自然揮干獲得干燥殘留物避夠過高溫?fù)]干對主要成份麝香酮的損失或破壞。4.采用本發(fā)明氣相色譜法對小分子易揮發(fā)成份檢查準(zhǔn)確，樣品峰純度高，分離度效果及理論板數(shù)均非常高，理論板數(shù)按麝香酮計算高于6000，分離度高于3，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于方法學(xué)研究基本要求理論板數(shù)及分離度要求(理論板數(shù)按麝香酮計算不少于1500，分離度大于 1. 5)，且微細(xì)成分能夠被充分萃取，準(zhǔn)確性好，精確度高，重復(fù)性實驗結(jié)果RSD僅為1.2%。5.通過對不同批次含有人工麝香的中藥栓劑中麝香酮的鑒別或含量的測定，可以反應(yīng)不同批次間麝香酮的含量變化，對調(diào)整工藝、原料配方優(yōu)化等研究具有重要意義；通過對中藥栓劑置放不同時間后麝香酮含量的測定，從而可以對其有效期的確定具有重要參考價值。6.本發(fā)明適合各種含有人工麝香的中藥栓劑中麝香酮含量的測定，也適用于其它含有人工麝香的復(fù)方中藥劑型，如散劑、眼膏、乳劑、軟膏劑等，特別適合于背景技術(shù)中介紹的由馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)的復(fù)方中藥栓劑麝香痔瘡栓(專利號02139187)和痔瘡膏(專利號02139188)。
具體實施例方式實施例1 對照品溶液的制備精密稱量5mg麝香酮對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號 110719-200512))，加無水乙醇50ml制成0. lmg. mL-1的溶液，最終得到的溶液作為對照品溶液。供試品溶液的制備供試品馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司制“麝香痔瘡栓”(批號101005)。配制方法取30g麝香痔瘡栓，研磨混勻，加水200ml，搖勻，用45°C石油醚(分析純，天津博迪化工股份有限公司)進(jìn)行振搖提取2次，每次加入石油醚IOOml，合并兩次石油醚層溶液(萃取液)，自然放置條件揮干得到殘留干燥物，將殘留干燥物用無水乙醇(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)溶解，制得殘留干燥物濃度約為15mg. mL—1的供試品溶液。測定
儀器氣相色譜儀(型號HP6890型，美國安捷倫科技有限公司制)?？刂粕V條件色譜柱采用彈性石英毛細(xì)管柱，固定相為聚乙二醇20000毛細(xì)管柱(型號PEG-20M) 的強極性毛細(xì)管柱，美國安捷倫科技有限公司制。柱長采用30m，內(nèi)徑為0. 32mm，膜厚度為 0. 5um。柱溫按下述程序升溫起始溫度為130°C，保持5分鐘，以每分鐘0. 8°C的速率升溫至180°C，保持2分鐘，再以每分鐘20°C的速率升溫至220°C，保持5分鐘。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1. Oul，注入氣相色譜儀，控制柱溫按程序升溫對其分別進(jìn)行測定。測量的理論板數(shù)按麝香酮峰計算為10879. 230，分離度為6. 9， 主峰與前后峰分離效果好。實驗1.供試品色譜中呈現(xiàn)與對照品色譜峰保留時間相同的色譜峰。因與其他雜質(zhì)峰分離明顯，峰純度高，其他成份對麝香酮的檢測和鑒別干擾非常小，與實際投料量理論計算結(jié)果相仿，完全可以作為麝香酮的鑒別和含量檢測使用。2.精密度試驗取實施例1對照品溶液，吸取IOul注入高效液相色譜儀分析，連續(xù)分析6次，計算各峰面積比的RSD為0. 9%。3.重復(fù)性試驗取實施例1供試品溶液6份，各吸取IOul注入高效液相色譜儀分析，計算麝香酮含量，測定結(jié)果RSD為1. 2 %。實施例2 對照品溶液的制備精密稱量5mg麝香酮對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號 110719-200512))，加無水乙醇制成0. Olmg. ml/1的溶液，最終得到的溶液作為對照品溶液。供試品溶液的制備供試品馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司制“麝香痔瘡栓”(批號101005)。配制方法取30g麝香痔瘡栓，研磨混勻，加水160ml，搖勻，用30°C石油醚(分析純，天津博迪化工股份有限公司)進(jìn)行振搖提取4次，每次加入石油醚80ml，合并4次石油醚層溶液(萃取液)，自然放置條件揮干得到殘留干燥物，將殘留干燥物用無水乙醇(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)溶解，制得殘留干燥物的濃度約為0. lmg. mL—1的供試品溶液。測定儀器氣相色譜儀(型號HP6890型，美國安捷倫科技有限公司制)?？刂粕V條件色譜柱采用彈性石英毛細(xì)管柱，固定相為聚乙二醇20000毛細(xì)管柱的強極性毛細(xì)管柱， 美國安捷倫科技有限公司制。柱長采用20m，內(nèi)徑為0. 32mm，膜厚度為0.5um。柱溫按下述程序升溫起始溫度為180°C，保持3分鐘，以每分鐘0. 1°C的速率升溫至240°C，保持10分鐘，再以每分鐘5°C的速率升溫至280°C，保持3分鐘。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1. Oul，注入氣相色譜儀，控制柱溫按程序升溫對其分別進(jìn)行測定。測量的理論板數(shù)按麝香酮峰計算為觀79. 190，分離度為1. 9，主峰與前后峰分離效果較好。實施例3 對照品溶液的制備精密稱量5mg麝香酮對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號110719-200512))，加無水乙醇制成IOmg. mL—1的溶液，最終得到的溶液作為對照品溶液。供試品溶液的制備供試品馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司制“麝香痔瘡栓”(批號101005)。配制方法取30g麝香痔瘡栓，研磨混勻，加水MOml，搖勻，加入60°C石油醚(分析純，天津博迪化工股份有限公司)120ml振搖提取1次，萃取的石油醚層溶液(萃取液) 自然放置條件揮干得到殘留干燥物，將殘留干燥物用無水乙醇(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)溶解，制得殘留干燥物的濃度約為SOmg.mL—1的供試品溶液。測定儀器氣相色譜儀(型號HP6890型，美國安捷倫科技有限公司制)?？刂粕V條件色譜柱采用彈性石英毛細(xì)管柱，固定相為聚乙二醇20000毛細(xì)管柱的強極性毛細(xì)管柱， 美國安捷倫科技有限公司制。柱長采用2m，內(nèi)徑為0. 32mm，膜厚度為0. 5um。柱溫按下述程序升溫起始溫度為100°C，保持15分鐘，以每分鐘10°C的速率升溫至150°C，保持1分鐘， 再以每分鐘30°C的速率升溫至200°C，保持15分鐘。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1. Oul，注入氣相色譜儀，控制柱溫按程序升溫對其分別進(jìn)行測定。測量的理論板數(shù)按麝香酮峰計算為1631. 630，分離度為1. 6，主峰與前后峰分離效果較好。實施例4 對照品溶液的制備精密稱量5mg麝香酮對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號 110719-200512))，加無水乙醇制成0. lmg. mL—1的溶液，最終得到的溶液作為對照品溶液。供試品溶液的制備供試品馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司制“麝香痔瘡栓”(批號101005)。配制方法取30g麝香痔瘡栓，研磨混勻，加水210ml，搖勻，加入50°C石油醚(分析純，天津博迪化工股份有限公司)90ml振搖提取2次，萃取的石油醚層溶液(萃取液)自然放置條件揮干得到殘留干燥物，將殘留干燥物用無水乙醇(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)溶解，制得殘留干燥物的濃度約為lSmg.mL—1的供試品溶液。測定儀器氣相色譜儀(型號HP6890型，美國安捷倫科技有限公司制)。控制色譜條件同實施例1。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1. Oul，注入氣相色譜儀，控制柱溫按程序升溫對其分別進(jìn)行測定。測量的理論板數(shù)按麝香酮峰計算為3879. 560，分離度為3. 8，主峰與前后峰分離效果良好。比較例(以常規(guī)麝香原料的方法制備對照品及供試品溶液，再利用氣相色譜法測定)對照品溶液的制備精密稱量75mg麝香酮對照品(同上)，加無水乙醇50ml制成0. lmg. mL—1的溶液， 最終得到的溶液作為對照品溶液。供試品溶液的制備供試品馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司制“麝香痔瘡栓”(批號101005)。配制方法取IOg麝香痔瘡栓，研磨混勻，精密加入無水乙醇20ml，密塞，振搖，放置1小時，濾過，取續(xù)濾液為供試品溶液。測定儀器氣相色譜儀(型號HP6890型，美國安捷倫科技有限公司制)?？刂粕V條件以苯基(50%)甲基硅酮(0V-17)中極性為固定相的毛細(xì)管色譜柱，涂布濃度為2%，柱長10m，柱溫為固定檢測溫度200°C 士 10°C。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入氣相色譜儀，測定。測量的理論板數(shù)按麝香酮峰計算為609. 167，分離度為0. 8，主峰與前后峰分離嚴(yán)重干擾。無法進(jìn)行麝香酮的鑒別和含量檢測。
權(quán)利要求
1.一種麝香痔瘡栓中麝香酮的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟a.對照品溶液的制備對照品為麝香酮對照品，精密稱定，加無水乙醇制成對照品溶液；b.供試品溶液的制備供試品為含有人工麝香的麝香痔瘡栓，先用水搖勻溶解，再用石油醚萃取分離出麝香酮后再加入無水乙醇，取上清液制成供試品溶液；c.分別吸取對照品溶液及樣品供試品溶液利用氣相色譜儀采用外標(biāo)法進(jìn)行氣相色譜法測定麝香酮的含量，控制色譜條件色譜柱采用彈性石英毛細(xì)管柱，固定相為聚乙二醇 6000-20000毛細(xì)管柱(型號PEG-20M)的強極性毛細(xì)管柱，柱長為2_30m。
2.如權(quán)利要求1所述的麝香痔瘡栓中麝香酮的檢測方法，其特征在于，步驟a中，對照品溶液的制備的具體方法為使用對照品為麝香酮對照品，精密稱定，加無水乙醇配制的對照品溶液的濃度為0. Ol-lOmg. mL—1，作為對照品溶液。
3.如權(quán)利要求1所述的麝香痔瘡栓中麝香酮的檢測方法，其特征在于，步驟b中，相對于30g麝香痔瘡栓加水160-240ml溶解，將上述溶解液加入石油醚振搖提取1_4次，每次加入石油醚80-120ml進(jìn)行萃取，合并萃取液后自然揮干，干燥后得到干燥殘留物，將干燥殘留物采用無水乙醇溶解，控制溶液中干燥殘留物的濃度為0. l-30mg. ml/1即為供試品溶液。
4.如權(quán)利要求3所述的麝香痔瘡栓中麝香酮的檢測方法，其特征在于，步驟b中，所述石油醚的萃取溫度控制在30-60°C。
5.如權(quán)利要求1所述的麝香痔瘡栓中麝香酮的檢測方法，其特征在于，步驟c中，所述柱溫控制方法采用程序升溫起始溫度為100-180°C，保持3-15分鐘，以每分鐘0. 1_10°C的速率升溫至150-240°C，保持1-10分鐘，再以每分鐘5-30°C的速率升溫至200_280°C，保持 3-15分鐘。
6.如權(quán)利要求1或5所述的麝香痔瘡栓中麝香酮的檢測方法，其特征在于，步驟c中， 所述柱長為30m，內(nèi)徑為0. 32mm，膜厚度為0. 5um。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種麝香痔瘡栓中麝香酮的檢測方法，解決了現(xiàn)有含有人工麝香的麝香痔瘡栓中麝香酮的檢測困難，供試樣品制備困難、檢測準(zhǔn)確性差，無法測定其含量的問題。通過制備對照品及供試品溶液，利用氣相色譜儀采用外標(biāo)法進(jìn)行氣相色譜法測定麝香酮的含量，本發(fā)明方法具有操作簡單快速，準(zhǔn)確可靠，靈敏度、精密度高，從而對有效的控制麝香痔瘡栓質(zhì)量具有重要的指導(dǎo)意義。
文檔編號G01N30/08GK102253160SQ20111009570
公開日2011年11月23日 申請日期2011年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月18日
發(fā)明者陳平 申請人:馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司