專利名稱：一種銀鯧仔稚幼魚性腺切片方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬生物組 織學(xué)研究技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種銀鯧仔稚幼魚性腺切片方法。
背景技術(shù)：
組織切片在生物的組織學(xué)研究中具有十分重要的作用。通過組織切片技術(shù)可以從顯微層次研究生物器官與組織中的細(xì)胞學(xué)特征及其變化。魚類的性腺是生殖系統(tǒng)中的重要器官，其中的性細(xì)胞具有周期性的變化特征，通過組織切片觀察其細(xì)胞學(xué)變化弄清其發(fā)生、 發(fā)育和成熟的過程及規(guī)律在魚類繁殖生物學(xué)中具有重要的意義。因而，魚類性腺的組織學(xué)被廣泛應(yīng)用于多種魚類中。對(duì)于銀鯧成魚來說，由于其性腺較大且容易取得與固定，因而切片過程較容易。然而，對(duì)于銀鯧仔稚幼魚等較小的個(gè)體來說，其性腺組織較小，甚至不能用肉眼找到。目前，仔稚幼魚性腺組織學(xué)研究多采用連續(xù)切片，但由于該時(shí)期的性腺組織較小，有時(shí)候甚至僅含有少數(shù)幾個(gè)性細(xì)胞，并且臘塊中包含難以切片的魚骨組織，這均給切片工作帶來了一定的難度。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種流程簡單且操作簡單的銀鯧仔稚幼魚性腺切片方法。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是提供一種銀鯧仔稚幼魚性腺切片方法，包括下列步驟，(1)取新鮮仔稚幼魚尸體，對(duì)其進(jìn)行生物學(xué)數(shù)據(jù)測定并編號(hào)；(2)將測定后的新鮮仔稚幼魚尸體置于戴維森(Davidson’ s AFA)固定液中進(jìn)行固定24h，然后轉(zhuǎn)入70%乙醇中保存；對(duì)于全長< 3cm的仔稚魚，采用全魚固定的方式，而對(duì)于全長> 3cm的幼魚，將其頭部、尾部、背部肌肉及其前半腹部切除，將其后腹部進(jìn)行固定；(3)取出固定的新鮮仔稚幼魚尸體進(jìn)行常規(guī)脫水、透明、浸蠟和包埋處理，包埋時(shí)新鮮仔稚幼魚尸體水平放置，以方便對(duì)其進(jìn)行橫向切片；(4)將包埋好的臘塊置于切片機(jī)上進(jìn)行切片，對(duì)于全長< 3cm的仔稚魚，保留所有的蠟帶；對(duì)于全長> 3cm的幼魚，先快速切除其表皮層，然后開始進(jìn)行正式切片，切片厚度為4-6 μ m，待新鮮仔稚幼魚尸體切至腹腔的后壁后停止切片；(5)收集蠟帶，在貼片烤片后，做常規(guī)HE染色與觀察。所述的戴維森固定液配方為95%乙醇330ml、甲醛220ml、冰醋酸115ml和單蒸水 335ml ο有益效果本發(fā)明根據(jù)固定液的性質(zhì)與銀鯧仔稚幼魚性腺組織的分布情況設(shè)計(jì)一套簡單有效的銀鯧仔稚幼魚性腺組織切片方法。本發(fā)明流程簡單，操作簡單，以Davidson’ s AFA固定液代替常規(guī)的波恩氏固定液以增加固定液的穿透力并軟化魚骨組織，有助于提高固定與切片的效果；同時(shí)，對(duì)于較大的銀鯧仔稚幼魚尸體切除不包含性腺的部分組織以減少整個(gè)操作過程的費(fèi)時(shí)；性腺切出率高，無須特殊或昂貴的儀器。本發(fā)明可以用于銀鯧仔稚幼魚性腺組織學(xué)切片，也適用于其它鯧屬魚類及鲆鰈類水產(chǎn)生物性腺分化與性別決定研究，具有廣泛的適用性。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。實(shí)施例11)取新鮮的銀鯧仔魚尸體(全長1. 1cm)，測定其生物學(xué)數(shù)據(jù)并編號(hào)；2)將測定后的新鮮仔稚幼魚尸體置于Davidson’ s AFA固定液中進(jìn)行固定24h，然后轉(zhuǎn)入70%乙醇中保存；3)取出固定的新鮮仔稚幼魚尸體進(jìn)行常規(guī)脫水、透明、浸蠟和包埋處理，包埋時(shí)新鮮仔稚幼魚尸體水平放置，以方便對(duì)其進(jìn)行橫向切片；4)將包埋好的臘塊置于切片機(jī)上進(jìn)行切片，保留所有蠟帶，至石蠟塊中的新鮮仔稚幼魚尸體切凈后停止切片；5)收集蠟帶，在貼片與烤片后，做常規(guī)HE染色與觀察。實(shí)施例21)取新鮮的銀鯧仔魚尸體(全長3. 5cm)，測定其生物學(xué)數(shù)據(jù)并編號(hào)；2)將測定后的新鮮仔稚幼魚尸體置于操作臺(tái)上，用解剖刀切出其頭部、尾部、背部肌肉及前半腹部組織，將剩余的后半腹部置于Davidson’ s AFA固定液中進(jìn)行固定24h，然后轉(zhuǎn)入70%乙醇中保存；3)取出固定的新鮮仔稚幼魚尸體進(jìn)行常規(guī)脫水、透明、浸蠟和包埋處理，包埋時(shí)新鮮仔稚幼魚尸體水平放置，以方便對(duì)新鮮仔稚幼魚尸體進(jìn)行橫向切片；4)將包埋好的臘塊置于切片機(jī)上進(jìn)行切片，首先快速切除銀鯧的表皮組織，然后開始調(diào)整切片厚度至4-6 μ m開始正常切片，待到新鮮仔稚幼魚尸體切至一半后露出腹腔的后側(cè)內(nèi)壁時(shí)停止切片；5)收集蠟帶，在貼片與烤片后，做常規(guī)HE染色與觀察。
權(quán)利要求
1.一種銀鯧仔稚幼魚性腺切片方法，其特征在于包括下列步驟，(1)取新鮮仔稚幼魚尸體，對(duì)其進(jìn)行生物學(xué)數(shù)據(jù)測定并編號(hào)；(2)將測定后的新鮮仔稚幼魚尸體置于戴維森固定液中進(jìn)行固定24h，然后轉(zhuǎn)入70% 乙醇中保存；對(duì)于全長< 3cm的仔稚魚，采用全魚固定的方式，而對(duì)于全長> 3cm的幼魚，將其頭部、尾部、背部肌肉及其前半腹部切除，將其后腹部進(jìn)行固定；(3)取出固定的新鮮仔稚幼魚尸體進(jìn)行常規(guī)脫水、透明、浸蠟和包埋處理，包埋時(shí)新鮮仔稚幼魚尸體水平放置，以方便對(duì)其進(jìn)行橫向切片；(4)將包埋好的臘塊置于切片機(jī)上進(jìn)行切片，對(duì)于全長<3cm的仔稚魚，保留所有的蠟帶；對(duì)于全長> 3cm的幼魚，先快速切除其表皮層，然后開始進(jìn)行正式切片，切片厚度為 4-6 μ m，待新鮮仔稚幼魚尸體切至腹腔的后壁后停止切片；(5)收集蠟帶，在貼片與烤片后，做常規(guī)HE染色與觀察。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種銀鯧仔稚幼魚性腺切片方法，其特征在于所述的戴維森固定液配方為95%乙醇330ml、甲醛220ml、冰醋酸115ml和單蒸水335ml。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種銀鯧仔稚幼魚性腺切片方法，首先將新鮮的銀鯧仔稚幼魚尸體測定并采用Davidson’s AFA固定液中進(jìn)行固定，并切除不含性腺的部分組織與器官，然后對(duì)其余部分做常規(guī)石蠟切片、HE染色與觀察。本發(fā)明可以用于銀鯧仔稚幼魚性腺組織學(xué)切片，也適用于其它鯧屬魚類及鲆鰈類水產(chǎn)生物性腺分化與性別決定研究，具有廣泛的適用性。
文檔編號(hào)G01N1/06GK102221484SQ20111010117
公開日2011年10月19日 申請(qǐng)日期2011年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月21日
發(fā)明者孫鵬, 尹飛, 彭士明, 施兆鴻 申請(qǐng)人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所