專利名稱：牛布魯氏菌病陽性血清國家標(biāo)準(zhǔn)品及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及牛布魯氏菌病陽性血清國家標(biāo)準(zhǔn)品及其制備方法，屬于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)和獸用生物制品技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
牛布魯氏菌病通常由牛型布魯氏菌(前稱流產(chǎn)布魯氏菌)引起，其感染呈全球趨勢，給世界上很多國家和地區(qū)帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。世界動物衛(wèi)生組織 (OIE)將其列為三類動物傳染病。目前，血清學(xué)檢查是牛布魯氏菌病診斷的常用方法，為了促進(jìn)牛布魯氏菌病診斷試驗的國際一體化和抗原標(biāo)準(zhǔn)化，OIE已經(jīng)研制出國際標(biāo)準(zhǔn)血清 (可從OIE的布魯氏菌參考實驗室即英國衛(wèi)橋VLA獲得)，也稱之為基準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品，各國實驗室用國際標(biāo)準(zhǔn)品溯源制備各自的國家標(biāo)準(zhǔn)品，用于標(biāo)定牛布魯氏菌病補體結(jié)合試驗、試管凝集試驗和虎紅平板凝集試驗。目前，可從VLA獲得的牛布魯氏菌病陽性血清國際標(biāo)準(zhǔn)品是通過實驗室免疫一頭牛6年后制備完成的(The Second International Standard for Anti-Brucella abortus Serum. IanDavidson, C. Nancy Hebert & W. J. Brinley Morgan. Bull. Org. mond. Sante，Bull. Wld HIthiOrg. 1969，40，129-140)。本發(fā)明是通過采集田間自然感染牛布魯氏菌病的陽性血清制備完成的，使得制備周期縮短，節(jié)約了成本。而且，標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量要求高，制備方法和檢驗或標(biāo)定方法嚴(yán)格，有關(guān)的制備程序和標(biāo)定方法至今未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是建立國家級牛布魯氏菌病陽性血清標(biāo)準(zhǔn)品，用于標(biāo)定我國的牛布魯氏菌病補體結(jié)合試驗、試管凝集試驗和虎紅平板凝集試驗。本發(fā)明是通過以下技術(shù)路線來實現(xiàn)的，即是通過采集田間自然感染牛布魯氏菌病的陽性血清作為候選物，通過效價篩選、分裝、凍干等工藝過程制備牛布魯氏菌病陽性血清，以補體結(jié)合試驗、試管凝集試驗和虎紅平板凝集試驗測定其效價，經(jīng)過均一性檢驗、穩(wěn)定性試驗和協(xié)作標(biāo)定定值以制備出牛布魯氏菌病陽性血清國家標(biāo)準(zhǔn)品。本發(fā)明的詳細(xì)描沭一、牛布魯氏菌病陽性血清國家標(biāo)準(zhǔn)品候選物的制備田間自然感染牛布魯氏菌病的牛數(shù)頭，分別按常規(guī)方法無菌采取血液并收集到經(jīng)過滅菌的量筒中，置20°C左右室溫4小時，待血液凝固后每個盛血量筒無菌操作加壓銅。靜置，待血清析出后，取上清，4000r/min離心20min分離血清。二、牛布魯氏菌病陽性血清國家標(biāo)準(zhǔn)品候選物的鑒定1、無菌檢驗按《中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程》(中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程二〇〇〇年版.化學(xué)工業(yè)出版社，2001，本發(fā)明以下簡稱《規(guī)程》)規(guī)定方法進(jìn)行。2、效價測定按以下“附錄A”、“附錄B”、“附錄C”的方法分別進(jìn)行補體結(jié)合試驗、試管凝集試驗和虎紅平板凝集試驗進(jìn)行效價測定。在2次以上重復(fù)測定效價均相同的基礎(chǔ)上，根據(jù)效價測定試驗結(jié)果確定該陽性血清的補體結(jié)合試驗效價、試管凝集試驗效價和虎紅平板凝集試驗效價。附錄A 牛布魯氏菌病補體結(jié)合試驗(Complement Fixation Test，CFT)血清效價測定1工作液制備1. 12個單位溶血素稀釋按溶血素使用說明進(jìn)行稀釋。1.22個單位補體稀釋。1. 2. 1補體滴度測定(每次試驗當(dāng)天都要測定補體滴度)。1)1 10 補體稀釋。2)制備致敏紅細(xì)胞在燒杯中加20mL 2. 5%綿羊紅細(xì)胞懸液，在磁力攪拌下將 20mL 2個單位溶血素慢慢加入，為了充分致敏，混合后在室溫下用磁力攪拌器攪拌15分鐘。3)按表1進(jìn)行補體滴度程序。表1補體滴度程序
權(quán)利要求
1.一種牛布魯氏菌病陽性血清國家標(biāo)準(zhǔn)品，其特征在于本發(fā)明所涉及的牛布魯氏菌病陽性血清國家標(biāo)準(zhǔn)品其牛布魯氏菌病補體結(jié)合試驗效價為1 800 “++”、試管凝集試驗效價為1 MOO “++”和虎紅平板凝集試驗效價為1 160 “ + ”，根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)，按其試管凝集試驗計算其國際單位含量為4800IU/安瓿。
2.一種牛布魯氏菌病陽性血清國家標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法，其特征在于是通過采集田間自然感染牛布魯氏菌病的陽性血清作為候選物，通過效價篩選、分裝、凍干等工藝過程制備牛布魯氏菌病陽性血清，以經(jīng)過均一性檢驗、穩(wěn)定性試驗和協(xié)作標(biāo)定定值以制備出牛布魯氏菌病陽性血清國家標(biāo)準(zhǔn)品。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種牛布魯氏菌病陽性血清國家標(biāo)準(zhǔn)品及其制備方法。本發(fā)明所涉及的牛布魯氏菌病陽性血清國家標(biāo)準(zhǔn)品是利用由我國田間自然感染牛布魯氏菌病的陽性血清作為候選物，通過效價篩選、分裝、凍干等工藝過程制備牛布魯氏菌病陽性血清，并以VLA獲得的牛布魯氏菌病陽性血清國際標(biāo)準(zhǔn)品為參比進(jìn)行補體結(jié)合試驗、試管凝集試驗和虎紅平板凝集試驗測定其效價，經(jīng)過均一性檢驗、穩(wěn)定性試驗、協(xié)作標(biāo)定和數(shù)據(jù)統(tǒng)計，保證效價定值準(zhǔn)確而制備出牛布魯氏菌病陽性血清國家標(biāo)準(zhǔn)品。
文檔編號G01N33/96GK102288771SQ20111011963
公開日2011年12月21日 申請日期2011年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月10日
發(fā)明者關(guān)孚時, 張秀英, 戴志紅, 李翠, 溫芳, 王在時, 蔣卉, 陸連壽 申請人:中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所