專利名稱：用化學(xué)振蕩反應(yīng)同時測定復(fù)合氨基酸中l(wèi)-酪氨酸和l-色氨酸的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種電化學(xué)分析方法，尤其是采用化學(xué)振蕩反應(yīng)方法同時測定復(fù)合氨基酸中的L-酪氨酸和L-色氨酸。
背景技術(shù)：
目前，通常測定L-色氨酸和L-酪氨酸的方法有HPLC法、熒光法、電化學(xué)分析法等，這些方法雖然靈敏度高，但操作繁瑣，且成本高。光譜分析是檢測生物分子常用的方法， 而L-色氨酸、L-酪氨酸在UV區(qū)吸收弱，要進(jìn)行L-色氨酸和L-酪氨酸的同時測定必須通過衍生的方法才能實現(xiàn)，方法復(fù)雜。本發(fā)明根據(jù)不同物質(zhì)對化學(xué)振蕩的影響不同這一特性，提出了一種用化學(xué)振蕩法同時測定L-酪氨酸和L-色氨酸的方法。該方法簡單快捷、重現(xiàn)性好、靈敏度、準(zhǔn)確性高。 L-酪氨酸和L-色氨酸的檢出限可達(dá)5. 74X l(T8mol/L和1. 05 X l(T5mol/L。

發(fā)明內(nèi)容
用化學(xué)振蕩的方法同時測定復(fù)合氨基酸中的L-酪氨酸和L-色氨酸的振蕩反應(yīng)在帶有恒溫夾套和磁力攪拌的玻璃反應(yīng)器(體積50mL)中進(jìn)行。依次向反應(yīng)器中加入 6. 5mL 0. 50mol/LCH2 (COOH)2,1. OmL 0. 04mol/L Ce (SO4)2,6. OmL 0. 70mol/L H2SO4,6. 5mL 0. 20mol/L KBrO3,使反應(yīng)底液總體積為20. OmL，實驗溫度為303 士0. 1K，恒定攪速，以213型鉬電極分別為工作電極和對電極，217型飽和硫酸亞汞電極為參比電極，用CHI-832型電化學(xué)分析儀連接計算機檢測記錄體系電位。當(dāng)振蕩體系穩(wěn)定后，用微量注射器向反應(yīng)器中加入不同濃度的L-色氨酸和L-酪氨酸混合溶液，觀察并記錄體系電位的變化。本發(fā)明的目的可以通過以下措施來實現(xiàn)(1).儀器采用SY-601型超級恒溫水浴(天津市歐諾儀器儀表有限公司)；85-2數(shù)顯恒溫磁力攪拌器(金壇市大地自動化儀器廠)；CHI-832型電化學(xué)分析儀(上海辰華儀器公司)；Lead-I型蠕動泵(寶定蘭格公司)；213型鉬電極；217型飽和硫酸亞汞電極；302型溴離子選擇電極；帶恒溫夾套全玻璃反應(yīng)器(50mL)；微量注射器(上海醫(yī)用激光儀器廠)。(2).實驗試劑所用H2S04、CH2 (COOH) 2、KBrO3和Ce (SO4) 2均為分析純，水為二次去離子水。其中Ce (SO4)2，CH2 (COOH)2, KBrO3用0. 7mol/L H2SO4配制。L-半胱氨酸和L-酪氨酸(純品)用二次去離子水配置成標(biāo)準(zhǔn)溶液后逐級稀釋成一系列工作溶液。(3).實驗方法采用振蕩反應(yīng)在帶有恒溫夾套和磁力攪拌的玻璃反應(yīng)器(體積 50mL)中進(jìn)行。依次向反應(yīng)器中加入 6. 5mL 0. 50mol/L CH2 (COOH) 2,1. OmL 0. 04mol/L Ce(S04)2，6. OmLO. 70mol/L H2S04，6. 5mL 0. 20mol/L KBr03，使反應(yīng)底液總體積為 20. OmL。(4).實驗溫度為303士0. 1K，恒定攪速，以213型鉬電極分別為工作電極和對電極，217型飽和硫酸亞汞電極為參比電極，用CHI-832型電化學(xué)分析儀連接計算機檢測記錄體系電位。
(5).在最優(yōu)實驗條件下，待振蕩體系穩(wěn)定后，分別加入0. 2mL不同濃度的L-色氨酸和L-酪氨酸混合液。結(jié)果表明，當(dāng)所加入的L-色氨酸和L-酪氨酸的濃度分別在 1. 24X IO"3 ~ 1. 35X10、ol/L 和 5. 36Χ1(Γ4 5. 74Χ 10_7mol/L 范圍內(nèi)時，L-色氨酸濃度的負(fù)對數(shù)IogC與振幅的變化量(ΔΑ)和周期變量(ΔΤ)呈良好的線性關(guān)系，L-酪氨酸濃度的負(fù)對數(shù)IogC與振幅的變化量(ΔΑ)呈良好的線性關(guān)系(如圖2所示)，據(jù)復(fù)合氨基酸中L-色氨酸和L-酪氨酸的振幅或周期的變化量大小來確定其含量的一種化學(xué)分析方法。本發(fā)明的優(yōu)點和產(chǎn)生的有益效果是1、用化學(xué)分析方法同時測定兩種以上氨基酸一直是個難題，本文建立的化學(xué)振蕩分析方法具有操作簡單快捷，測定結(jié)果準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性好等優(yōu)點，可用于常規(guī)藥品分析及臨床診斷。2、本方法簡單，操作簡便，特別適于復(fù)合氨基酸中同時測定L-色氨酸和L-酪氨酸含量的測定。


圖IL-色氨酸和L-酪氨酸對B-Z振蕩圖形的影響實驗條件=KBrO3,0.065mol/L ；CH2 (COOH)2, 0. 163mol/L ；Ce (IV)，0. 002mol/L ； H2SO4,0. 7mol/L ；溫度，303KA. L-色氨酸對B-Z振蕩圖形的影響B(tài). L-酪氨酸對B-Z振蕩圖形的影響圖2L-色氨酸和L-酪氨酸混合物對振蕩圖形的影響(實驗條件同圖1)圖3測定L-色氨酸和L-酪氨酸的工作曲線
具體實施例方式下面結(jié)合附圖，再對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述雖然L-色氨酸和L-酪氨酸有相似的結(jié)構(gòu)，但L-酪氨酸和L-色氨酸對振蕩體系的響應(yīng)不同。圖1給出了 L-色氨酸和L-酪氨酸單體分別在振蕩體系中的擾動。當(dāng)L-色氨酸注入振蕩體系后，振蕩體系的周期和振幅同時增加；當(dāng)L-酪氨酸注入振蕩體系后，振蕩體系下一周期的振幅增加，周期變化不大。兩種氨基酸在振蕩體系中響應(yīng)不同，使同時測定成為可能。圖2表明在優(yōu)化條件下，L-色氨酸和L-酪氨酸混合物對振蕩體系的擾動。進(jìn)樣點的選擇和條件都與圖1相同。從圖1和圖2可以看出L-色氨酸和L-酪氨酸對B-Z振蕩體系的影響是獨立的，相互不干擾。在穩(wěn)定的B-Z振蕩體系中加入不同濃度的L-色氨酸和L-酪氨酸混合液，L-色氨酸體系的振幅、周期和L-酪氨酸的振幅顯著變化。假定加入L-色氨酸和L-酪氨酸前后體系的振幅和周期分別為Ac^Ttl和A、T，同時選擇振幅變化量AA(AA = A-Atl)和周期變化量AT(AT = T-Ttl)做為分析檢測的信號。在最優(yōu)實驗條件下，待振蕩體系穩(wěn)定后，分別加入0. 2mL不同濃度的L-色氨酸和L-酪氨酸混合液。結(jié)果表明，當(dāng)所加入的L-色氨酸和 L-酪氨酸的濃度分別在 1. 24X IO"3 1. 35X 10、ol/L 和 5. 36 X IO"4 5. 74X l(T7mol/L 范圍內(nèi)時，L-色氨酸濃度的負(fù)對數(shù)IogC與振幅的變化量(ΔΑ)和周期變量(ΔΤ)呈良好的線性關(guān)系，L-酪氨酸濃度的負(fù)對數(shù)IogC與振幅的變化量(ΔΑ)呈良好的線性關(guān)系(如圖4-3所示)，L-色氨酸的最低檢出限分別為1. 05 X 10_5mOl/L和4. 01 X lO-W/L，相關(guān)系數(shù)為0. 9961和0. 9983 (n = 9)，L-酪氨酸的最低檢出限為5. 74 X lO-W/L，相關(guān)系數(shù)為 0. 9973 (n = 9)，線性回歸方程分別為Δ A (mv) = 15. 027-1. 9031og[L_ 色氨酸](η = 9，r = O. 9961)Δ A (mv) = 15. 079-1. 5831og[L_ 酪氨酸](η = 9，r = 0. 9973)AT(s) = 14. 35-1. 7401og[ [L_ 色氨酸](η = 9，r = 0. 9983)。
權(quán)利要求
1.一種同時檢測復(fù)合氨基酸中L-色氨酸和L-酪氨酸的分析方法，其特征是在硫酸介質(zhì)中以金屬鈰離子(Ce47Ce3+)作催化劑的條件下丙二酸被溴酸氧化的B-Z振蕩體系。在 B-Z化學(xué)振蕩反應(yīng)進(jìn)行的過程中向體系中加入L-色氨酸和L-酪氨酸，振蕩圖形立刻被擾動，振蕩周期和振幅發(fā)生變化，當(dāng)L-色氨酸和L-酪氨酸的濃度在一定范圍內(nèi)時，振幅、周期的增大值與L-色氨酸濃度的負(fù)對數(shù)呈良好的線性關(guān)系。
2.如權(quán)利要求1實驗條件是由丙二酸-Ce(SO4)2-H2SO4-KBrO3組成的B-Z化學(xué)振蕩體系。
3.如權(quán)利要求1或2實驗條件在反應(yīng)器中加入6.5mL0. 50mol/L CH2(COOH)2, 1. OmLO. 04mol/L Ce (SO4)2,6. OmL 0. 70mol/L H2SO4,6. 5mL 0. 20mol/L KBrO3,使反應(yīng)底液總體積為20. OmL,實驗溫度為303 士0. IK條件下，恒定攪速。
4.如權(quán)利要求1或2實驗儀器采用是帶有恒溫夾套和磁力攪拌的玻璃反應(yīng)器(體積 50mL)，213型鉬電極分別為工作電極和對電極，217型飽和硫酸亞汞電極為參比電極，用 CHI-832型電化學(xué)分析儀連接計算機檢測記錄體系電位。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用B-Z化學(xué)振蕩分析技術(shù)對復(fù)合氨基酸中L-色氨酸和L-酪氨酸進(jìn)行同時直接定性、定量檢測。同時，L-色氨酸和L-酪氨酸可使振蕩體系的振幅和周期均增大，當(dāng)L-色氨酸和L-酪氨酸的濃度在一定范圍內(nèi)時，振幅、周期的增大值與L-色氨酸和L-酪氨酸濃度的負(fù)對數(shù)呈良好的線性關(guān)系，據(jù)復(fù)合氨基酸中L-色氨酸和L-酪氨酸的振幅或周期的變化量大小來確定其含量的一種化學(xué)分析方法。
文檔編號G01N27/26GK102323305SQ20111012813
公開日2012年1月18日 申請日期2011年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月18日
發(fā)明者楊武, 王杰, 王紅兵 申請人:北京興有豐科科技發(fā)展有限公司, 西北師范大學(xué)