專利名稱：抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物化學(xué)領(lǐng)域，主要用于血型不規(guī)則抗體的篩查。
背景技術(shù)：
抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒用于血型不規(guī)則抗體的篩查。所謂不規(guī)則抗體是指抗A和抗B以外的抗體。臨床上，對(duì)有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需要接收多次輸血者；以及配血過(guò)程中發(fā)生交叉配血不合時(shí)，須進(jìn)行抗體篩查試驗(yàn)。對(duì)于某些健康獻(xiàn)血員，在發(fā)生血型定型有異議或懷疑有不規(guī)則抗體時(shí)，也可進(jìn)行抗體篩查試驗(yàn)。本產(chǎn)品不用于血源篩查，僅用于臨床檢驗(yàn)。根據(jù)被研究者的不同和試驗(yàn)方法靈敏度的差異，人群中大約有0. 3% -2%的個(gè)體具有同種抗體。免疫的途徑可能是懷孕，輸血，移植，或者是注射了免疫原性的物質(zhì)。不規(guī)則抗體常會(huì)導(dǎo)致新生兒溶血病的發(fā)生、溶血性輸血反應(yīng)、或者是輸注紅細(xì)胞的迅速損耗等病癥。不同特性的抗體所具有臨床意義也是不同的。有些抗體會(huì)在數(shù)小時(shí)甚至數(shù)分鐘內(nèi)就將不配合的輸注紅細(xì)胞完全破壞，有些抗體則可能需要數(shù)天或者根本不會(huì)對(duì)輸注紅細(xì)胞產(chǎn)生顯著性破壞。為了預(yù)防各類輸血反應(yīng)或新生兒溶血病的發(fā)生，對(duì)相關(guān)獻(xiàn)血員和病患進(jìn)行不規(guī)則抗體的篩查是非常必要的。衛(wèi)生部《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》第十七條規(guī)定凡遇有下列情況必須按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》有關(guān)規(guī)定作抗體篩選試驗(yàn)交叉配血不合時(shí)；對(duì)有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需要接收多次輸血者。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒，為臨床不規(guī)則抗體的篩查提供有效支持。本發(fā)明的這種抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒，由試劑和盒體組成，每盒內(nèi)裝有I號(hào)篩選細(xì)胞、II號(hào)篩選細(xì)胞、III號(hào)篩選細(xì)胞試劑各一支。其主要成分是由3個(gè)已知抗原表現(xiàn)型的 0型紅細(xì)胞，葡萄糖，枸櫞酸，抗生素等組成。本發(fā)明的產(chǎn)品性能指標(biāo)如下外觀1，II，III號(hào)抗體篩選紅細(xì)胞應(yīng)為鮮紅色無(wú)凝塊的紅細(xì)胞懸液。靜置分層后，上清液呈透明液體，無(wú)溶血。溶血率應(yīng)彡3.0%。特異性1，II，III號(hào)抗體篩選細(xì)胞所表達(dá)的抗原與隨試劑提供的紅細(xì)胞抗原格局表所標(biāo)示的抗原一致?？贵w篩選紅細(xì)胞試劑盒的研究和生產(chǎn)工作要求隨著臨床工作的需要不斷提高。近兩年間，本公司主要致力于篩查中國(guó)人群特有的，人群所占比例較低且具有臨床意義的血型抗原作為抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒的原料。并優(yōu)化抗體篩選細(xì)胞試劑盒中3支細(xì)胞的抗原格局，便于臨床使用者判斷抗體篩選的檢測(cè)結(jié)果。經(jīng)過(guò)不斷的努力，我們的產(chǎn)品能夠確保在 3支紅細(xì)胞中，包含有15種常規(guī)血型抗原，同時(shí)還盡量含有3種中國(guó)人群特有的稀有血型抗原。2010年，本公司將生產(chǎn)的抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒與市場(chǎng)上口碑較好的進(jìn)口試劑送往本市3家醫(yī)療單位進(jìn)行臨床樣品的檢測(cè)和比較。在總計(jì)1100例試驗(yàn)標(biāo)本中，共檢測(cè)到抗體陽(yáng)性標(biāo)本105例，陰性標(biāo)本995例。經(jīng)抗體鑒定試驗(yàn)，確認(rèn)18種抗體類型，其中稀有抗體類型的臨床標(biāo)本共8例。與抗體鑒定結(jié)果相比，本公司試劑的敏感性為100%，特異性為 99. 90%，準(zhǔn)確性為99. 91%。而且，在檢測(cè)稀有抗體的方面更勝于進(jìn)口試劑。本發(fā)明的工作原理是用抗體篩選紅細(xì)胞表達(dá)下列抗原D，C，Ε, c, e, Jka, Jkb, Μ, N， S，s, Mur, Fya, Dia, Lea, Leb, Pp抗體篩選試驗(yàn)是讓受檢的血清或血漿與抗體篩選紅細(xì)胞起反應(yīng)，以發(fā)現(xiàn)血型不規(guī)則抗體。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相對(duì)照，其技術(shù)具有一定的領(lǐng)先性。本發(fā)明抗原類型豐富，含有中國(guó)人群特有的稀有抗原，其3支試劑紅細(xì)胞的抗原格局進(jìn)行優(yōu)化，更有助于臨床檢測(cè)人員對(duì)結(jié)果的判讀。其細(xì)胞保存液經(jīng)過(guò)多年研究和使用，能有效保持細(xì)胞活力，維持抗原活性。本發(fā)明主要關(guān)鍵技術(shù)如下稀有抗原的篩查和確認(rèn)工作，稀有血型抗原獻(xiàn)血員的招募工作成為抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒大規(guī)模生產(chǎn)并維持市場(chǎng)供應(yīng)的關(guān)鍵。由于稀有抗原的篩查需要使用較多進(jìn)口抗體試劑，價(jià)格昂貴，用量較大。進(jìn)行相關(guān)工作須耗費(fèi)較多資源和成本。同時(shí)，稀有血型鮮血員的招募更加成為該試劑不斷供應(yīng)臨床的關(guān)鍵點(diǎn)。只有擁有了龐大的，年輕的獻(xiàn)血員隊(duì)伍，才能保證臨床的試劑供應(yīng)。本發(fā)明主要技術(shù)特點(diǎn)和相關(guān)指標(biāo)如下稀有血型抗原的大規(guī)模篩查在0型血獻(xiàn)血員中，對(duì)Mur抗原，Dia抗原和S抗原進(jìn)行篩查，同時(shí)確保其他抗原的純合性配比。根據(jù)各種紅細(xì)胞抗原的頻率，在3個(gè)0型血中， 要配比出符合條件，并且經(jīng)過(guò)優(yōu)化的一套篩選紅細(xì)胞試劑盒，其比例約為4%。
具體實(shí)施例方式樣本要求如下按照臨床輸血技術(shù)規(guī)范中的血液樣本采集步驟，采集患者或供血者、受血者的血液，分離得到血漿或血清。待檢標(biāo)本2-8°C保存。血清和血漿均可使用，血清更優(yōu)于血漿。 溶血和嚴(yán)重脂血或污染的血樣標(biāo)本不得用于抗體篩選試驗(yàn)。檢驗(yàn)方法如下本試劑盒對(duì)檢測(cè)用方法無(wú)特殊要求，如鹽水試驗(yàn)法、凝聚胺法、抗球蛋白法等均可采用，可按抗體的血清學(xué)行為和實(shí)驗(yàn)室的條件選擇。但是某些檢驗(yàn)方法會(huì)破壞(或減弱) 某些抗原，請(qǐng)按照各試劑說(shuō)明書(shū)提示或按照免疫血液學(xué)操作規(guī)程，謹(jǐn)慎選擇檢驗(yàn)方法，以免漏檢抗體。1.鹽水法1. 1取小試管3支，分別加入被檢者血清或血漿2滴(100 μ 1)；1.2然后分別加入I、II、III號(hào)抗體篩選紅細(xì)胞試劑各1滴(50 μ 1)；
1. 3混勻，以IOOOgCMOOrpm)離心15秒，肉眼觀察凝集情況。2.凝聚胺法2. 1取小試管3支，分別加入被檢者血清或血漿2滴(100 μ 1)；2. 2然后分別加入I、II、III號(hào)抗體篩選紅細(xì)胞試劑各1滴(50 μ 1)；2. 3混勻，按所用凝聚胺廠家提供的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。2. 4最終加入重懸液后輕搖觀察凝集情況。3.抗球蛋白法3. 1取小試管3支，分別加入被檢者血清或血漿2滴(100 μ 1)；3. 2然后分別加入I、II、III號(hào)篩選紅細(xì)胞試劑各1滴(50 μ 1)；3. 3混勻后置37°C水浴30分鐘，用生理鹽水洗滌3次，IOOOg(3400rpm)離心1分
鐘，最后一次扣干；加入抗人球蛋白試劑1滴(50 μ 1)，以IOOOg(3400rpm)離心15秒，立即肉眼觀察
凝集情況。本發(fā)明檢驗(yàn)結(jié)果的解釋如下陽(yáng)性反應(yīng)1、II、III號(hào)抗體篩選細(xì)胞在抗原抗體反應(yīng)的任意時(shí)刻發(fā)生凝集，或者是鹽水及增強(qiáng)介質(zhì)反應(yīng)階段發(fā)生溶血反應(yīng)，即可認(rèn)為是陽(yáng)性結(jié)果。陰性反應(yīng)在整個(gè)檢測(cè)過(guò)程中未發(fā)生溶血或凝集反應(yīng)，可以認(rèn)為被檢血清/血漿標(biāo)本不含有與抗體篩選細(xì)胞表達(dá)抗原相應(yīng)的可檢測(cè)到的抗體。本發(fā)明檢驗(yàn)方法的局限性如下1.下列情況可能造成檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性或假陰性a)待檢標(biāo)本有細(xì)菌污染或者患者用某些化學(xué)藥劑治療之后，對(duì)檢測(cè)有影響；b)孵育時(shí)間、溫度不夠，離心力不足，細(xì)胞洗滌不完全；c)待檢標(biāo)本儲(chǔ)存不當(dāng)；d)待檢標(biāo)本含有自身抗體或冷抗體。(建議同時(shí)做自身對(duì)照)e)某些紅細(xì)胞抗原的抗原性會(huì)隨時(shí)間減弱，如果待檢標(biāo)本的不規(guī)則抗體效價(jià)較低，有可能檢測(cè)不到。建議用新鮮的抗體篩選細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。f)某些檢驗(yàn)方法會(huì)破壞(或減弱)某些抗原，請(qǐng)按照各試劑說(shuō)明書(shū)提示或按照血庫(kù)操作規(guī)程，謹(jǐn)慎選擇檢驗(yàn)方法，以免漏檢抗體。2.抗體篩選試驗(yàn)不一定能檢出所有有臨床意義的抗體，一些低頻率抗原的抗體或者劑量效應(yīng)的抗體，可能被漏檢，這時(shí)需選擇抗原性更完全和特異性更敏感的抗體篩選細(xì)胞作試驗(yàn)，或用更高敏感度的技術(shù)作檢查。3.使用微柱凝膠法進(jìn)行抗體篩選試驗(yàn)，應(yīng)根據(jù)所使用的微柱凝膠說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行細(xì)胞濃度或其他試驗(yàn)條件的調(diào)整。本抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒不對(duì)使用微柱凝膠法進(jìn)行說(shuō)明。冷凍復(fù)融血清或血漿樣本，其抗體效價(jià)和抗體特性可能受到影響，與本篩選細(xì)胞反應(yīng)可能會(huì)產(chǎn)生不正確的結(jié)果，應(yīng)謹(jǐn)慎使用。
權(quán)利要求
1.抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒由盒體和試劑組成，試劑設(shè)置在盒體中，試劑由I型試劑、II型試劑和III型試劑組成，所述的I型試劑由紅細(xì)胞保存液和I型壓積紅細(xì)胞組成、所述的II型試劑由紅細(xì)胞保存液和II型壓積紅細(xì)胞組成，所述的III型試劑由紅細(xì)胞保存液和III型壓積紅細(xì)胞組成，其特征在于所述的紅細(xì)胞報(bào)訊液由葡萄糖、枸櫞酸三鈉、枸櫞酸、磷酸二氫鈉、乙二胺四乙酸二鈉、核苷酸和抗生素組成，其中，所述的葡萄糖占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比偉1. 7-2. 1%，所述的枸櫞酸三鈉占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為2. 0-2.2%，所述的枸櫞酸占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為 0. 030-0. 040%，所述的磷酸二氫鈉占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0. 20-0. 30%, 所述的乙二胺四乙酸二鈉占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0. 08-0. 12%，所述的抗生素占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0. 040-0. 045%，所述的抗生素占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0. 001-0. 002%，余量為蒸餾水，所述的I型壓積紅細(xì)胞通過(guò)如下方法制備首先將至少三人份的I型血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細(xì)胞至少兩次，再分別用適量紅細(xì)胞保存液洗滌紅細(xì)胞至少一次，在3-5攝氏度洗滌離心，3000-4000轉(zhuǎn)/分10-20分鐘，最后一次離心后，3000-4000轉(zhuǎn)/分15-25分鐘，棄血清，沉淀即為I壓積紅細(xì)胞，所述的II型壓積紅細(xì)胞的制備方法同所述的I型壓積紅細(xì)胞的制備方法，所述的II型壓積紅細(xì)胞的制備方法同所述的I型壓積紅細(xì)胞的制備方法， 所述的III型壓積紅細(xì)胞的制備方法同所述的I型壓積紅細(xì)胞的制備方法，在所述的I型試劑中，所述的I型壓積紅細(xì)胞占所述的I型試劑的濃度為2-5%，余量為所述的紅細(xì)胞保存液，在所述的II型試劑中，所述的II型壓積紅細(xì)胞占所述的I型試劑的濃度為2-5%，余量為所述的紅細(xì)胞保存液，在所述的III型試劑中，所述的III型壓積紅細(xì)胞占所述的I型試劑的濃度為2-5%，余量為所述的紅細(xì)胞保存液。
2.如權(quán)利要求1所述的抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒，其特征在于所述的葡萄糖所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為1.9%，所述的枸櫞酸三鈉占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為2. 1 %，所述的枸櫞酸占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0. 035%，所述的磷酸二氫鈉占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0. 25%，所述的乙二胺四乙酸二鈉占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0. 1%，所述的核苷酸占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為 0. 0043%，所述的抗生素占所述的紅細(xì)胞保存液的質(zhì)量百分比為0. 0015%,余量為蒸餾水。
3.如權(quán)利要求1所述的抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒，其特征在于所述的I型壓積紅細(xì)胞通過(guò)如下方法制備，首先將至少三人份的I型血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細(xì)胞三次，再分別用適量紅細(xì)胞保存液洗滌紅細(xì)胞一次，在4攝氏度洗滌離心，3500轉(zhuǎn)/分15分鐘，最后一次離心后，3500轉(zhuǎn)/分20分鐘，棄血清，沉淀即為壓積紅細(xì)胞。
4.如權(quán)利要求1所述的抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒，其特征在于所述的II型壓積紅細(xì)胞通過(guò)如下方法制備，首先將至少三人份的II型血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細(xì)胞三次，再分別用適量紅細(xì)胞保存液洗滌紅細(xì)胞一次，在4攝氏度洗滌離心，3500轉(zhuǎn)/分20分鐘，棄血清，沉淀即為壓積紅細(xì)胞。
5.如權(quán)利要求1所述的抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒，其特征在于所述的III型壓積紅細(xì)胞通過(guò)如下方法制備，首先將至少三人份的III型血液去血漿，然后混合，然后用適量的生理氯化鈉溶液洗滌紅細(xì)胞三次，再分別用適量紅細(xì)胞保存液洗滌紅細(xì)胞一次，在4攝氏度洗滌離心，3500轉(zhuǎn)/分15分鐘，最后一次離心后，3500轉(zhuǎn)/分20分鐘，棄血清，沉淀即為壓積紅細(xì)胞。
全文摘要
抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒，由試劑和盒體組成，所述試劑有包括I號(hào)篩選細(xì)胞、II號(hào)篩選細(xì)胞、III號(hào)篩選細(xì)胞試劑各一支。其主要成分是由3個(gè)已知抗原表現(xiàn)型的O型紅細(xì)胞，葡萄糖，枸櫞酸，抗生素等組成。本發(fā)明的抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒，可以為臨床不規(guī)則抗體的篩查提供有效支持，以減少輸血風(fēng)險(xiǎn)，提高輸血的安全性。
文檔編號(hào)G01N33/53GK102338800SQ201110136059
公開(kāi)日2012年2月1日 申請(qǐng)日期2011年5月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月25日
發(fā)明者丁蘇鄂, 劉劍榮, 包于勤, 沈軼明, 王玲玲, 詹申宏, 趙桐茂, 顧桂玲 申請(qǐng)人:上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司