專利名稱：一種檢測呼吸道合胞病毒抗體膠體金的試紙條及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物檢測領(lǐng)域，更具體地說，本發(fā)明涉及一種呼吸道合胞病毒抗體膠體金的檢測試紙條及其制備方法。
背景技術(shù)：
人類呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus, RSV)是全世界范圍內(nèi)嬰幼兒下呼吸道感染最主要的病原，免疫缺陷病人及老年人也是RSV的易感人群。美國每年約有90000個嬰幼兒因RSV感染住院，其中死亡率為IiI 5%。我國每年約1500萬嬰兒出生，90%以上小于2歲的兒童都感染過呼吸道合胞病毒。呼吸道合胞病毒在任何國家的兒童中都有很高的感染率和發(fā)病率。RSV感染人體經(jīng)過潛伏期后7天左右血清中出現(xiàn)IgA抗體，10 20天達(dá)到高峰， 之后逐漸下降；同時在患者的鼻咽分泌物中也存在大量的分泌型IgA抗體(slgA)，感染后第7天產(chǎn)生，28 42天達(dá)到高峰。因此，可以通過試紙條法快速檢測血液、痰液和咽拭子中呼吸道合胞病毒IgA抗體作為RSV感染早期臨床診斷和RSV感染預(yù)后的初步依據(jù)。然而，目前RSV臨床診斷方法主要是通過病毒分離培養(yǎng)、間接免疫熒光法、RT-PCR 和ELISA法檢測抗原，或者利用ELISA法檢測RSV特異性抗體。但是上述檢測方法均需要特殊的儀器設(shè)備和專業(yè)培訓(xùn)人員，并且在實(shí)驗(yàn)室才能進(jìn)行檢測，費(fèi)用高昂、操作復(fù)雜，耗時長， 不適于臨床篩查，更不適宜于現(xiàn)場即時檢測。因此，急需建立一種快速、簡便、高效，并能廣泛推廣的呼吸道合胞病毒檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種簡便、快捷的檢測呼吸道合胞病毒抗體膠體金的試紙條。本發(fā)明的另一目的是提供一種所述試紙條的制備方法。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)?！畛橇碛姓f明，本發(fā)明中所采用的百分?jǐn)?shù)均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)。A.本發(fā)明提供了一種檢測呼吸道合胞病毒抗體膠體金的試紙條，該試紙條由同時包被抗人IgA、抗呼吸道合胞病毒重組抗原多克隆抗體兩個條帶的硝酸纖維素膜和含有膠體金標(biāo)記的呼吸道合胞病毒特異性重組抗原的玻璃纖維構(gòu)成。其中，所述硝酸纖維素膜上包被抗人IgA為多克隆抗體；所述的硝酸纖維素膜上包被的抗呼吸道合胞病毒重組蛋白抗體是能與呼吸道合胞病毒的兩個亞型反應(yīng)的共同抗體。本發(fā)明所述的試紙條還含有反應(yīng)支持物、吸水紙墊和金標(biāo)抗原保護(hù)膜；其中，所述的反應(yīng)支持物采用PVC膠板；所述吸水紙墊采用濾紙；所述金標(biāo)抗原保護(hù)膜采用玻璃纖維或?yàn)V紙纖維。
B.本發(fā)明提供了所述的檢測試紙條的制備方法，該方法包括下述步驟
(1)采用抗人IgA、抗呼吸道合胞病毒重組抗原多克隆抗體分別固相于硝酸纖維素膜 (NC膜)上；
(2)在PVC膠板上，依次粘貼上硝酸纖維素膜(NC膜)、吸水紙墊、金標(biāo)抗原保護(hù)膜，相互間留有約0. 2mm的重疊，并且用力壓緊，避免留有氣泡影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。用切條機(jī)將硝酸纖維素膜切成每條寬約0. 4 0. 6cm的條帶，置于相對濕度為40、0%，溫度18 25°C的含有干燥劑的鋁箔袋中短期(1周)保存?zhèn)溆?。大批量制備?yīng)該置于4 °C長期(1年)保存。(3)從冰箱取出的試紙條應(yīng)恢復(fù)至室溫后，再開啟密封袋使用。本發(fā)明的檢測樣本為患者的血液/血清、痰液或咽拭子。本發(fā)明的工作原理及有益效果
1.發(fā)明人通過在硝酸纖維素膜(NC膜)上包被抗人IgA (多克隆抗體)、抗呼吸道合胞病毒重組抗原多克隆抗體兩個條帶，并結(jié)合膠體金標(biāo)記的呼吸道合胞病毒重組抗原，實(shí)現(xiàn)了用試紙條檢測呼吸道合胞病毒(IgA)的目的?？朔爽F(xiàn)有技術(shù)檢測成本高、操作復(fù)雜、繁瑣、耗時長、需要特殊儀器、且必需專業(yè)人員才能操作的不足。2.所述的試紙條能檢測呼吸道合胞病毒IgA抗體，該方法簡便、快捷、準(zhǔn)確，不需要特殊儀器設(shè)備，不需專業(yè)培訓(xùn)，結(jié)果清晰易辨，操作簡單，易于推廣，適合大批量檢測，適用于基層篩選和流行病學(xué)調(diào)查，對呼吸道合胞病毒感染的早期及中期都能起到輔助診斷的作用，對檢測兒童是否具備抗RSV的抵抗力具有參考價值。


圖IA為本發(fā)明試紙條的正面圖； 圖IB為本發(fā)明試紙條的側(cè)面吸水紙墊1，硝酸纖維素膜2 ( T一IgA條帶，包被抗人IgA ； C一質(zhì)控條帶，包被抗呼吸道合胞病毒重組抗原的多抗)，玻璃纖維膠體金標(biāo)記的呼吸道合胞病毒特異性重組抗原3，金標(biāo)抗原保護(hù)膜4，反應(yīng)支持物PVC膠板5。圖2.檢測結(jié)果圖。從左到右依次為IgA陽性——T和C線顯色；陰性——C 一條線顯色；無效—— 兩條線均不顯色。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
——呼吸道合胞病毒抗體膠體金檢測試紙條的構(gòu)成
反應(yīng)支持物為6cmX0. 4cm PVC膠板(購自上海金標(biāo)生物技術(shù)有限公司，SM31-40);吸水紙墊為2. 5X0. 4cm的濾紙(購自上海金標(biāo)生物技術(shù)有限公司，CH37K) ；2cmX0. 4cm的硝酸纖維素膜(購自whatman公司)依次包被抗人IgA (購自KPL公司)、抗呼吸道合胞病毒重組蛋白特異性多克隆抗體(購自ABCAM公司)；含有0. 8cmX 0. 4cm膠體金標(biāo)記的呼吸道合胞病毒特異性重組抗原的玻璃纖維(購自上海金標(biāo)生物技術(shù)有限公司，SB03)；金標(biāo)抗原保護(hù)膜 lcmXO. 4cm的聚酯膜(購自上海金標(biāo)生物技術(shù)有限公司)，即形成了呼吸道合胞病毒抗體膠體金檢測試紙條，具體如附圖1所示。
實(shí)施例2
——試紙條的制備方法
將預(yù)先包被有抗人IgA、抗呼吸道合胞病毒重組多克隆抗體兩個條帶的硝酸纖維素膜、 膠體金標(biāo)記的呼吸道合胞病毒重組蛋白抗原的玻璃纖維、吸水紙墊、金標(biāo)抗原保護(hù)膜依次粘貼于PVC膠板上，相互間留有約0. 2mm的重疊，用力壓緊，避免留有氣泡。用切條機(jī)將組裝好的硝酸纖維素膜切成每條寬約0. 4^0. 6cm的條帶，置于相對濕度為40、0%，含有干燥劑的鋁箔袋中4 °C保存?zhèn)溆谩?shí)施例3 ——檢測方法
按臨床常規(guī)取血并分離血清，或留取痰液、咽拭子，如樣品不能于三日內(nèi)檢測，用存放于_20°C。取150-200ul血清或痰液、咽拭子于小瓶中，將實(shí)施例1試紙條“4”處插入瓶內(nèi)， 樣品中的液體上行，如30秒內(nèi)于“2”處未見液體爬行，則應(yīng)于“4”處再加1-2滴生理鹽水或PBS緩沖液。10-15分鐘判讀結(jié)果如樣品中含有呼吸道合胞病毒IgA抗體，則其經(jīng)過膠體金墊時，會與金標(biāo)重組呼吸道合胞病毒抗原結(jié)合，進(jìn)而被T處的抗人IgA捕獲，聚集而形成紅色的檢測線，是為陽性，反之則為陰性，具體參見附圖2。無論樣本中是否含有待檢測的抗體，金標(biāo)重組抗原都會與C線處包被的抗重組抗原多抗形成紅色沉淀線，即質(zhì)控線。如此線不出現(xiàn)，說明試紙條失效。實(shí)施例4
——臨床患者IgA抗體檢測
在流行季節(jié)，檢測疑似病人血清樣本37例、確診病例10份，與傳統(tǒng)常用的IgA抗體檢測ELISA法(Tl)比較，試紙條法(T2)有2例疑似病例IgA抗體未能檢出。其靈敏度為 94. 6%，特異性為100%。表明試紙條與ELISA檢測IgA抗體相似的靈敏度和特異性。檢測結(jié)果如表1所示。表1.
權(quán)利要求
1.一種檢測呼吸道合胞病毒抗體膠體金的試紙條，其特征在于，該試紙條由同時包被抗人IgA、抗呼吸道合胞病毒重組抗原多克隆抗體兩個條帶的硝酸纖維素膜和含有膠體金標(biāo)記的呼吸道合胞病毒特異性重組抗原的玻璃纖維構(gòu)成；其中，所述硝酸纖維素膜上包被抗人IgA為多克隆抗體；所述的硝酸纖維素膜上包被的抗呼吸道合胞病毒重組蛋白抗體是能與呼吸道合胞病毒的兩個亞型反應(yīng)的共同抗體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于，所述的試紙條還含有反應(yīng)支持物、吸水紙墊和金標(biāo)抗原保護(hù)膜；其中，所述的反應(yīng)支持物采用PVC膠板；所述吸水紙墊采用濾紙； 所述金標(biāo)抗原保護(hù)膜采用玻璃纖維或?yàn)V紙纖維。
3.—種權(quán)利要求1所述的試紙條的制備方法，其特征在于，該方法包括下述步驟(1)采用抗人IgA、抗呼吸道合胞病毒重組抗原多克隆抗體分別固相于硝酸纖維素膜上；(2)在PVC膠板上，依次粘貼上硝酸纖維素膜、吸水紙墊、金標(biāo)抗原保護(hù)膜，相互間留有約0. 2mm的重疊，并用力壓緊；(3)用切條機(jī)將硝酸纖維素膜切成每條寬約0.4^0. 6cm的條帶，置于相對濕度為 409Γ80%，溫度18°C 25°C的含有干燥劑的鋁箔袋中保存1周，備用；大批量制備時置于溫度為4 °C冰箱內(nèi)，保存期為1年。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，從冰箱取出的試紙條應(yīng)恢復(fù)至室溫后，再開啟密封袋使用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種能檢測呼吸道合胞病毒(RespiratorySyncytialVirus,RSV)IgA抗體的膠體金試紙條。它是在硝酸纖維素膜(NC膜)上，包被抗人IgA多克隆抗體，結(jié)合膠體金標(biāo)記的呼吸道合胞病毒特異性重組抗原，應(yīng)用免疫層析技術(shù)，檢測呼吸道合胞病毒的IgA抗體。用本發(fā)明所述的試紙條檢測，簡便、快速、準(zhǔn)確,結(jié)果清晰易辨，適合大批量檢測，適用于基層篩查和流行病學(xué)調(diào)查。其對呼吸道合胞病毒感染的早期和中期起到輔助診斷作用，對判斷兒童是否已含有對抗RSV的免疫力具有參考意義。
文檔編號G01N33/569GK102253205SQ20111016247
公開日2011年11月23日 申請日期2011年6月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月16日
發(fā)明者趙軍, 魏海濤 申請人:昆明倍爾遵生科技有限公司