專利名稱：一種抗原包被板保護(hù)劑及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗原包被板保護(hù)劑，具體說涉及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)技術(shù)中抗原包被板保護(hù)劑，同時(shí)還涉及一種抗原包被板保護(hù)劑的制備方法。該保護(hù)劑適用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)技術(shù)中抗原(或抗體)包被板的處理，可延長(zhǎng)包被板的保存期限。
背景技術(shù)：
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ELISA)是免疫學(xué)診斷中的一項(xiàng)常用技術(shù)。自該技術(shù)問世以來，因其所需儀器化程度低、操作簡(jiǎn)便、敏感度高、特異性強(qiáng)、特別適合于對(duì)大量樣本的篩檢工作等優(yōu)點(diǎn)被廣泛使用。ELISA法不僅可以用于檢測(cè)抗體，也可用于檢測(cè)抗原，因此在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法的原理之一是利用抗原或抗體可以物理性的吸附于固相載體表面，并保持其免疫學(xué)活性，再通過抗原與抗體免疫學(xué)反應(yīng)發(fā)揮檢測(cè)作用。用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法的固相載體通常為聚苯乙烯制成的酶標(biāo)板。將抗原或抗體吸附于酶標(biāo)板上的過程稱為包被。目前用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的抗原(或抗體)包被板通常只用含白蛋白的緩沖溶液封閉，然后在低溫干燥的條件下保存。這樣簡(jiǎn)單處理的抗原(或抗體)包被板，在 2 8°C低溫條件下通常只能保存6個(gè)月左右。實(shí)際情況下，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法的檢測(cè)產(chǎn)品在運(yùn)輸和使用的過程中，經(jīng)常會(huì)遇到低溫到室溫的反復(fù)轉(zhuǎn)變，使抗原(或抗體)包被板的使用期進(jìn)一步縮短。如果用含糖、大分子物質(zhì)等的保護(hù)劑處理包被了抗原或抗體的酶標(biāo)板， 則可對(duì)所吸附的蛋白分子起到保護(hù)作用，延長(zhǎng)抗原(或抗體)包被板的使用期限，避免因抗原或抗體過早失去活性而影響檢測(cè)技術(shù)的商業(yè)價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種抗原包被板保護(hù)劑的配方，該配方合理，保護(hù)效果明顯，可以用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中抗原(或抗體)包被板的處理，延長(zhǎng)包被板的使用期限。本發(fā)明的另一個(gè)目的是在于提供了一種抗原包被板保護(hù)劑的制備方法，該方法易行，操作簡(jiǎn)便，對(duì)操作人員和儀器設(shè)備的要求均不高，易于推廣。為了實(shí)現(xiàn)上述的目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案—種抗原包被板保護(hù)劑，它由以下原料按重量百分比配制而成
原料重量百分比％
低聚糖5% 20%大分子物質(zhì)0.05% 3%
多元醇2% 5%
硫柳萊鈉0.01% 0.04O/O
吐溫-200.03O/O 0.2O/O
tris-鹽酸緩沖溶液補(bǔ)足至100%。所述的低聚糖為海藻糖或蔴糖；所述的大分子物質(zhì)為牛血清白蛋白(BSA)或水解明膠；所述的多元醇為山梨醇或甘露醇。一種抗原包被板保護(hù)劑，它由以下原料按重量百分比配制而成(較好范圍)
原料重量百分比％
低聚糖5% 15%
大分子物質(zhì)0.5% 2.5%
多元醇2% 5%
硫柳萊鈉0.01% 0.04O/O
吐溫-200.03% 0.150/0
tris-鹽酸緩沖溶液補(bǔ)足至100%。一種抗原包被板保護(hù)劑，它由以下原料按重量百分比配制而成(最佳范圍)
原料重量百分比％
低聚糖5% 10%
大分子物質(zhì)0.5% 2%
多元醇2% 4%
硫柳萊鈉0.01% 0.02O/O
吐溫-200.04% O.P/o
tris-鹽酸緩沖溶液補(bǔ)足至100%。一種抗原包被板保護(hù)劑，它由以下原料按重量百分比配制而成(最佳值)
原料重量百分比％
低聚糖6%
大分子物質(zhì)1%
多元醇3%
硫柳萊鈉0.01%
吐溫-200.05%
tris-鹽酸緩沖溶液補(bǔ)足至100%。一種抗原包被板保護(hù)劑的制備方法，其步驟是A、配制濃度為0. 0 %的tris水溶液，用鹽酸調(diào)PH值為7. 2 7. 6，即為tris-鹽酸緩沖溶液。B、將tris-鹽酸緩沖溶液置磁力攪拌器上室溫(20 25°C，以下相同)攪拌，向溶液中依次加入低聚糖、大分子物質(zhì)、多元醇、吐溫-20、硫柳汞鈉。C、攪拌均勻后，置2 8°C冷藏保存。短期內(nèi)不用，可分裝置_20°C凍存。上述抗原包被板保護(hù)劑的使用方法，包括以下步驟a)向吸附了抗原或抗體的的酶標(biāo)板孔中各加120 150uL抗原包被板保護(hù)劑，置 2 8°C環(huán)境下孵育10 14小時(shí)。b)倒掉孔中的抗原包被板保護(hù)劑，在干凈毛巾或吸水紙上拍干。c)將抗原包被板冷凍干燥或室溫吹干，放入錫箔袋中密封保存。本發(fā)明中的低聚糖和多元醇成分能與蛋白分子形成氫鍵而代替了原有水的位置， 起到低溫保護(hù)功能和脫水保護(hù)作用。吐溫-20作為表面活性劑在凍結(jié)和脫水過程中既能降低界面張力所引起的凍結(jié)和脫水變形，又能在復(fù)水過程中對(duì)活性組分起到潤濕劑的作用。 大分子物質(zhì)能起到封閉效果，與糖類保護(hù)劑聯(lián)合使用也能起到保護(hù)目標(biāo)蛋白的作用。硫柳汞鈉能起到抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的作用，防止保護(hù)劑因污染而變質(zhì)。該抗原包被板保護(hù)劑有一定的粘稠度，會(huì)黏附在板孔中，干燥后起到保護(hù)抗原或抗體的作用。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)和效果本發(fā)明的保護(hù)劑原料易于獲得，配制成本低，使用方法簡(jiǎn)便，性狀穩(wěn)定。實(shí)踐表明， 用該抗原包被板保護(hù)劑處理的抗原或抗體包被板，保存期可明顯延長(zhǎng)，提高了酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)技術(shù)的商業(yè)價(jià)值。此外，該抗原包被板保護(hù)劑同時(shí)可以起到封閉效果，無需再用其它封閉液處理和洗滌，簡(jiǎn)化了抗原或抗體包被板的生產(chǎn)工藝。


圖1為一種抗原包被板保護(hù)劑與常用的3種封閉液處理抗原包被板效果的比較示意圖；圖1數(shù)據(jù)是用4種溶液處理的抗原包被板在不同保存時(shí)間內(nèi)檢測(cè)同樣的陽性對(duì)照品所得的數(shù)據(jù)，當(dāng)樣品吸光值降低到0. 8時(shí)，檢測(cè)方法失效；圖2為一種抗原包被板保護(hù)劑與常用的3種封閉液封閉效果的比較示意圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的抗原包被板保護(hù)劑含低聚糖、多元醇和大分子物質(zhì)等保護(hù)劑成分，并對(duì)保護(hù)劑成分所占比例進(jìn)行了優(yōu)化。針對(duì)不同的反應(yīng)體系，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可根據(jù)使用效果選用不同的配方。其中的大分子物質(zhì)有封閉效果，本領(lǐng)域的技術(shù)人員也可根據(jù)需要選擇其他的大分子物質(zhì)。配方中的山梨醇和甘露醇為同分異構(gòu)體，效果相當(dāng)，可互換。下面通過以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明詳細(xì)說明。實(shí)施例1一種抗原包被板保護(hù)劑，它由以下原料按重量百分比配制而成
原料重量百分比％海藻糖6%
牛血清白蛋白2%
山梨醇3%
硫柳萊鈉0.01%
吐溫-200.05%
tris-鹽酸緩沖溶液補(bǔ)足至100%。一種抗原包被板保護(hù)劑的制備方法，其步驟是首先配制濃度為0. 0 %的tris
水溶液，用鹽酸調(diào)PH值為7. 2 7. 6，即為tris-鹽酸緩沖溶液。將tris-鹽酸緩沖溶液置
磁力攪拌器上室溫?cái)嚢瑁来渭尤牒Ｔ逄?、牛血清白蛋白、山梨醇、硫柳萊鈉、吐溫-20。攪拌
均勻后，置2 8冷藏保存。短期內(nèi)不用，可分裝置-2(rc凍存。一種抗原包被板保護(hù)劑，它由以下原料按重量百分比配制而成
權(quán)利要求
1.一種抗原包被板保護(hù)劑，它由以下原料按重量百分比配制而成 原料重量百分比％低聚糖5% 20%大分子物質(zhì)0. 5% 3%多元醇2% 5o/o硫柳萊鈉0.01% 0.04%吐溫-200. 03% 0. 2%tris-鹽酸緩沖溶液補(bǔ)至100% ；所述的低聚糖為海藻糖或蔴糖； 所述的大分子物質(zhì)為牛血清白蛋白或水解明膠； 所述的多元醇為山梨醇或甘露醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗原包被板保護(hù)劑，其特征在于 原料重量百分比％低聚糖5 % 15%大分子物質(zhì)0. 5% 2. 5%多元醇2% 5%硫柳萊鈉0.01% 0.04%吐溫-200. 03% 0. 15%tris-鹽酸緩沖溶液補(bǔ)至100%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗原包被板保護(hù)劑，其特征在于 原料重量百分比％低聚糖5 % 10%大分子物質(zhì)0.5% m多元醇2% 4%硫柳萊鈉0.01% 0.02%吐溫-200. 04 % 0. 1%tris-鹽酸緩沖溶液補(bǔ)至100%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗原包被板保護(hù)劑，其特征在于 原料重量百分比％低聚糖6%大分子物質(zhì)1%多元醇3%硫柳萊鈉0. 01%吐溫-200. 05%tris-鹽酸緩沖溶液補(bǔ)至100%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗原包被板保護(hù)劑，其特征在于 原料重量百分比％低聚糖10%牛血清白蛋白0.5%多元醇3%硫柳汞鈉0. 01%吐溫-200. 05%tris-鹽酸緩沖溶液
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的-原料低聚糖牛血清白蛋白甘露醇硫柳汞鈉吐溫-20tris-鹽酸緩沖溶液
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的-原料蔗糖水解明膠山梨醇硫柳汞鈉吐溫-20tris-鹽酸緩沖溶液補(bǔ)至100%。補(bǔ)至100%。 -種抗原包被板保護(hù)劑，其特征在于重量百分比％ 6% 2% 3% 0. 01% 0. 05% 補(bǔ)至100%。 -種抗原包被板保護(hù)劑，其特征在于重量百分比％ 10%1% 4% 0. 01% 0. 05%
8.權(quán)利要求1所述的一種抗原包被板保護(hù)劑的制備方法，其步驟是A、配制濃度為0.024%的tris水溶液，用鹽酸調(diào)PH值為7. 2 7. 6，即為tris-鹽酸緩沖溶液；B、將tris-鹽酸緩沖溶液置磁力攪拌器上室溫?cái)嚢?，向溶液中依次加入低聚糖、大分子物質(zhì)、多元醇、硫柳汞鈉、吐溫-20 ；C、攪拌均勻后，置2 8°C冷藏保存。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抗原包被板保護(hù)劑及制備方法，它由低聚糖、大分子物質(zhì)、多元醇、硫柳汞鈉、吐溫-20、tris-鹽酸緩沖溶液按質(zhì)量濃度比配制而成。其步驟是首先配制濃度為0.024%的tris水溶液，用鹽酸調(diào)pH值為7.2～7.6，即為tris-鹽酸緩沖溶液。將tris-鹽酸緩沖溶液置磁力攪拌器上室溫?cái)嚢瑁来渭尤氲途厶?、大分子物質(zhì)、多元醇、硫柳汞鈉、吐溫-20。攪拌均勻后，置2～8℃冷藏保存。本發(fā)明方法簡(jiǎn)便，性狀穩(wěn)定。實(shí)踐表明，用該抗原包被板保護(hù)劑處理的抗原或抗體包被板，保存期可明顯延長(zhǎng)，提高了酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)技術(shù)的商業(yè)價(jià)值。該抗原包被板保護(hù)劑同時(shí)可以起到封閉效果，無需再用其它封閉液處理和洗滌。
文檔編號(hào)G01N33/544GK102323403SQ20111020680
公開日2012年1月18日 申請(qǐng)日期2011年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月22日
發(fā)明者盧順, 徐高原, 董曉輝, 陳煥春 申請(qǐng)人:武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司